鎖陽干燥黃酮類化合物提取工藝的優(yōu)化

鎖陽干燥黃酮類化合物提取工藝的優(yōu)化

又名鎖陽、不老藥、鐵錘、銹鐵棒、地毛球、烏蘭科、鎖牙和慈濟。它是鎖陽科的一種獨特植物，主要屬于白楊科。它是所有寄生蟲的后代。主要產(chǎn)于甘肅、新疆、青海、內(nèi)蒙古等干旱沙漠地帶。鎖陽富含鞣制,可提煉烤膠,含淀粉高達32%,可用于釀酒及飼料制作。而且至今未發(fā)現(xiàn)鎖陽含有有毒或有害物質。因此,鎖陽不僅可以藥用,而且具有廣泛的開發(fā)價值。過去鎖陽主要用作藥材或鮮食,隨著對鎖陽的化學成分及生物活性認識的深入,以及人們保健意識的加強,鎖陽的開發(fā)利用不再限于它的藥用價值,而更多地著眼于鎖陽廣泛的生物活性。目前,大量研究證明鎖陽黃酮類化合物主要為兒茶素(Catechin)、柑桔素4′-O-吡喃葡萄糖及一種以柑桔素為苷元的配糖體。近幾年研究表明,作為天然來源的黃酮類化合物有明顯的抗?jié)?、抗菌、抗炎、降血脂等藥用保健功?有防止動脈硬化或栓塞等效果,可作血管保護劑;對胸悶、心悸及早搏均有一定作用;對眩暈綜合癥、急性耳鳴、口臭等癥狀有防治功能。目前對鎖陽中黃酮類化合物提取工藝及生理活性報道不多。為此,文章以總黃酮含量為考察指標,采用正交試驗法優(yōu)選新疆鎖陽的醇提工藝,確定最佳提取條件,為今后新疆鎖陽的合理開發(fā)和充分利用提供科學依據(jù)。1實驗設備和材料1.1超聲清洗器、溫度干燥箱S54紫外可見分光光度計(上海棱光技術有限公司);KQ3200型超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);SZ202型電熱溫度干燥箱(浙江諸暨縣馬劍電熱儀器廠);HH-S恒溫水浴鍋(江蘇金壇縣醫(yī)療儀器廠)。1.2乙醇、亞硝酸鈉、堿蘆丁對照品(中藥固體制劑制造技術國家工程研究中心,1097-050103);乙醇(A.R);亞硝酸鈉(A.R);氫氧化鈉(A.R);硝酸鋁(A.R)1.3生藥來源實驗所用藥材采于2007年烏拉泊地區(qū)鎖陽全草,由新疆醫(yī)科大學生藥教研室邢文斌老師鑒定。2實驗方法和結果2.1供試品儲備液制備精密稱取蘆丁對照品2mg,置于10mL容量瓶中,加入50%乙醇適量,超聲處理使之溶解,放冷,加50%乙醇水溶液至刻度,搖勻,為供試品儲備液。2.2絡合物波長的確定取蘆丁對照品適量,在0.30mL5%亞硝酸鈉溶液存在的堿性條件下,經(jīng)硝酸鋁顯色后,以試劑為空白參比液在420～700nm波長范圍測定絡合物的吸光度,絡合物于510nm波長處有最大吸收,故測定時選用此波長。2.3硝酸鹽總反應時間精密吸取0.5mL,1.0mL,1.5mL,2.0mL,2.5mL蘆丁儲備液,分別置于10mL容量瓶中,先加入0.3mL5%亞硝酸鈉溶液,放置6分鐘后再加0.3mL10%硝酸鋁,再放置6分鐘后加4mL4%氫氧化鈉溶液,最后用50%的乙醇定容至10mL,放置15分鐘后以試劑做空白在510nm處測吸光度。其吸光度做線性回歸,得蘆丁含量與吸光度的回歸方程為Y=12.88x-0.0032,R2=0.9996。2.4提取工藝優(yōu)化2.4.1線性關系法分別對回流法,超聲法,煎煮法三種不同提取方法進行比較,具體操作如下:回流法:稱定鎖陽粉末約1.0000g,以50%乙醇為溶劑50mL回流提取1.5h,濾過,定容至50mL容量瓶中,備用。超聲法:稱定鎖陽粉末約1.0000g,以50%乙醇為溶劑50mL,在室溫下超聲提取1.5h,濾過,定容至50mL容量瓶中,備用。煎煮法:稱定鎖陽粉末約1.0000g,以水為溶劑,加50mL水煎煮1.5h,濾過,定容至50mL容量瓶中,備用。準確吸取各樣品溶液1mL,置于10mL容量瓶中,用50%乙醇定容,再精密吸取溶液1mL,照2.3項下的方法,依法顯色,測定吸光度,由線性回歸方程計算樣品中總黃酮的含量(n=5)。結果顯示:超聲法提取的總黃酮含量較高,故確定以超聲法作為提取方法。2.4.2正交試驗2.4.2.超聲時間的確定根據(jù)文獻報道,選擇乙醇濃度,超聲時間和固液比為考察對象,進行單因素分析:乙醇濃度的選擇:取鎖陽粉末1.0000g,分別取30%、50%、75%、85%、95%乙醇50mL,在功率150W,室溫下進行超聲提取30min,測定,計算總黃酮的含量,結果顯示:乙醇濃度為75%時總黃酮的含量最高。超聲時間的選擇:取鎖陽粉末1.0000g,50%乙醇50mL,在功率150W,時間分別取10min、30min、60min、90min、120min進行超聲提取,測定,計算總黃酮的含量,結果顯示:超聲時間為60min時提取效率最高。料液比的選擇:取鎖陽粉末1.0000g,按料液比分別為1:20、1:30、1:40、1:50、1:60(g/ml)加入50%的乙醇,在微波功率為150w的條件下作用30min,處理后計算黃酮含量,結果顯示:料液比為1:40時總黃酮含量最高。2.4.2.最佳提取工藝的確定由單因素考察的結果設置因素水平表,見表5。采用L9(34)正交表進行試驗,見表6。從表6和表7可知,A、B、C三個因素對鎖陽中黃酮類化合物提取率的影響次序為A>B>C。料液比和超聲時間對黃酮類化合物的提取效率有顯著影響,所以料液比選擇A3,超聲時間選擇B3。乙醇濃度對提取效率無顯著性影響,從節(jié)約溶劑的角度來考慮,選擇乙醇濃度為C1,提取的最佳工藝為A3B3C1。即乙醇濃度60%,料液比1∶60,超聲1.5h。2.5測試測試取同一鎖陽粉末三份,各約1.0000g,用最佳工藝提取,采用2.1項下方法測定,實驗結果與正交試驗基本一致,說明工藝穩(wěn)定可行。3超聲法與其他提取方法比較文章比較回流法、超聲法、煎煮法三種提取方法對新疆鎖陽中總黃酮的提取效率,以總黃酮效率為指標,結果顯示