4種藥用植物乙醇提取物對(duì)糖尿病小鼠降血糖作用的研究

4種藥用植物乙醇提取物對(duì)糖尿病小鼠降血糖作用的研究

黑莓枝（枝葉）和黑莓白皮（根皮）常用。根和黑莓皮（黑莓果汁）和黑莓（桑南）也可用于醫(yī)藥。桑屬植物主要含黃酮類(lèi)化合物、生物堿、苯并呋喃衍生物、甾體、香豆素、有機(jī)酸和揮發(fā)油等多種藥用成分。桑葉一般都以霜桑葉(10～11月霜后采集)入藥,具有祛風(fēng)清熱、涼血明目之功效?！侗静菥V目》記載:“桑葉乃手足陽(yáng)明之藥,汁煎代茶,能止消渴?！鄙Ｈ~中的MoranA和1-脫氧野尻霉素(1-deoxynojiri-mycin,DNJ)可預(yù)防和緩解糖尿病的病情。國(guó)內(nèi)陳福君等報(bào)道,桑葉多糖對(duì)四氧嘧啶糖尿病大鼠有顯著的降血糖作用;Lemus等報(bào)道,桑葉對(duì)鏈脲佐菌素(srreptozotocin,STZ)誘導(dǎo)的糖尿病大鼠有降血糖活性。日本藥物研發(fā)人員廣泛開(kāi)展了桑葉的系列藥理試驗(yàn),發(fā)現(xiàn)桑葉特別適用于糖尿病的預(yù)防。桑白皮是桑除去栓皮的干燥根皮,《本草綱目》記載:“桑白皮主治消渴尿多。”。滕德義等等研究發(fā)現(xiàn),復(fù)方桑白皮濃縮液(由桑白皮、桑枝、人參等浸提液濃縮而成)對(duì)四氧嘧啶糖尿病小鼠有明顯降血糖作用,對(duì)葡萄糖性高血糖有一定的降糖作用;鐘國(guó)連等研究認(rèn)為,桑白皮水提取液對(duì)STZ糖尿病大鼠具有降血糖作用。桑枝的降血糖藥用也早有記載,《本草圖經(jīng)》記載:“桑枝療遍體風(fēng)癢干燥,兼療口干”。有文獻(xiàn)報(bào)道,中醫(yī)臨床上常選用桑枝治療糖尿病關(guān)節(jié)病變和周?chē)窠?jīng)病變,可顯著降血糖而緩解癥狀,其療效確切。葉菲等給四氧嘧啶高血糖大鼠連續(xù)口服桑枝水提物15d,發(fā)現(xiàn)高血糖大鼠空腹和非禁食血糖均明顯降低,糖尿病腎病得到改善。為了比較桑樹(shù)不同藥用部位的降血糖效果,本實(shí)驗(yàn)研究了桑葉、桑枝(嫩枝)、桑白皮和桑皮4種中藥材的乙醇提取物對(duì)STZ所致糖尿病小鼠血糖水平的影響。1材料和方法1.1多株桑桑種桑葉、桑白皮、桑枝(嫩枝)和桑皮均在2004年6月中旬采自蘇州吳江天源蠶種有限公司桑園,同一塊桑田多株桑樹(shù)采取。桑品種為湖桑32號(hào)。將桑葉、桑白皮、桑枝、桑皮洗凈并晾曬干(或60℃烘干)后用植物粉碎機(jī)粉碎,過(guò)40目篩。以上4種中藥材均用75%乙醇加熱回流提取(90℃微沸,每次1h,共3次),過(guò)濾,合并濾液,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(60℃)減壓濃縮,配成相當(dāng)于1.0g/mL生藥,置冰箱中冷藏備用。1.2天津太平洋制劑有限公司STZ為Sigma公司產(chǎn)品;優(yōu)降糖(格列本脲)(天津太平洋制藥有限公司,批號(hào)040107);無(wú)水乙醇(AR);葡萄糖測(cè)定試劑盒(上海科欣生物技術(shù)研究所,批號(hào)20040401)。1.3shnghasencipo不同調(diào)溫電熱器(上海電理儀器廠);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(ShanghaiSENCOTechnologyCo.);722N型可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。1.4開(kāi)發(fā)中國(guó)動(dòng)物,使用許可號(hào)昆明種小白鼠,SPF級(jí),體重22～25g,雌雄各半,蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心提供(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)XCYK蘇:2002-008,使用許可號(hào)SYXK蘇:2002-0037)。飼喂標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料,實(shí)驗(yàn)期間自由飲水。1.5不同濃度stz的制備稱(chēng)取檸檬酸2.1g,配成0.1mmol/L檸檬酸溶液100mL;Na2HPO47.16g,配成0.1mmol/LNa2HPO4溶液100mL,分別量取以上2種溶液61.4、38.4mL,混勻,配成檸檬酸鈉緩沖液(0.1mmol/L,pH4.5,置冰箱中冷凍備用)。精確稱(chēng)取STZ溶于上述緩沖液中,配成9.25mg/mL濃度的STZ溶液。進(jìn)行小鼠造模預(yù)試驗(yàn)后,確定STZ用藥量為185mg/kg。1.6stz分次注射糖尿病模型按文獻(xiàn)的方法制作,取昆明種小鼠,正常飼養(yǎng)1～2d,進(jìn)入平穩(wěn)狀態(tài)后,分別腹腔注射STZ溶液,72h后于眼底靜脈叢采血20μL,離心制備血清(10000r/min,共5min),采用葡萄糖氧化酶法測(cè)定血糖,選取血糖值在11.1mmol/L以上的為入選高血糖小鼠。1.7模型建立及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理糖尿病模型小鼠60只,隨機(jī)分為6組,每組10只,分為桑葉、桑枝、桑白皮和桑皮的乙醇提取液各1組、陽(yáng)性藥物組(優(yōu)降糖)和模型對(duì)照組;另取正常小鼠10只為正常組,按每10g體重灌胃給藥0.2mL,每天1次,模型對(duì)照組和正常組給予同體積0.9%生理鹽水,給藥15d后,禁食12h,眼底靜脈叢采血,離心分離血清,采用葡萄糖氧化酶法測(cè)定血糖。各組血糖值用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,與模型對(duì)照組進(jìn)行比較。組間t檢驗(yàn)、算術(shù)平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)偏差分別采用MicrosoftExcel中TEST、AVERAGE、STDEV函數(shù)計(jì)算,血糖值數(shù)據(jù)用xˉ±sxˉ±s表示。按下式計(jì)算并比較各組的血糖值下降百分率:血糖值下降百分率=(a-b)/a×100%,式中a為給藥前血糖值,b為給藥后血糖值。2結(jié)果2.1不同藥材的降血糖作用由表1可見(jiàn),與模型組相比,優(yōu)降糖具有極顯著的降糖作用(p<0.001);桑葉、桑白皮、桑枝和桑皮4種中藥材的乙醇提取物都有降血糖作用,其中桑白皮僅有一定的降血糖效果(p<0.05),而桑葉、桑枝和桑皮具有顯著的降血糖作用(p<0.01),其中桑枝的效果更為明顯。桑皮提取物的降血糖作用略遜于桑葉提取物。2.2桑枝乙醇提取物降血糖效果比較桑葉、桑白皮、桑枝和桑皮4種中藥材的乙醇提取物給藥前后使小鼠的血糖值下降百分率,以桑枝乙醇提取物的降血糖效果最理想,其下降百分率為64.09%,接近陽(yáng)性對(duì)照組(優(yōu)降糖)69.88%的水平。桑白皮、桑皮和桑葉的乙醇提取物使小鼠血糖下降百分率分別為42.19%、49.13%及53.61%。3桑枝的乙醇提取物對(duì)stz的影響糖尿病是胰島功能受損、胰島素分泌不足而引起的糖代謝紊亂的一種內(nèi)分泌疾病,STZ能選擇性地?fù)p傷動(dòng)物的胰島β細(xì)胞,失去合成分泌胰島素的功能,引起實(shí)驗(yàn)性糖尿病,因而大劑量一次性注射STZ可誘發(fā)糖尿病模型。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,給藥15d后各組小鼠均正常生存,無(wú)一死亡,桑葉、桑白皮、桑皮和桑枝提取物對(duì)STZ所致的血糖升高有明顯的抑制作用,推測(cè)桑樹(shù)不同藥用部位的乙醇提取物均可減弱STZ對(duì)胰島β細(xì)胞的損傷,或改善受損傷的β細(xì)胞的功能。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還發(fā)現(xiàn),給予桑枝提取物的糖尿病小鼠生存力最強(qiáng),明顯改善多飲、多尿、體重減輕等癥狀,降糖作用顯著,用藥2周達(dá)高峰,部分小鼠恢復(fù)或接近正常,提示桑枝的乙醇提取物具有較好的輔助降低血糖的功效。經(jīng)檢索,尚未發(fā)現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道桑皮乙醇提取物的降血糖作用,本文為首次報(bào)道。在桑樹(shù)的降血糖藥理和藥物開(kāi)發(fā)研究方面,目前主要集中在桑葉上,而對(duì)桑白皮與桑枝的降血糖活性成分和作用機(jī)理的研究相對(duì)滯后。本文僅對(duì)桑品種湖桑32號(hào)作了研究,而桑樹(shù)品種繁多,亟待深入探討。