分離及影響因素

色譜分析丁黎中國藥科大學色譜分析課程第二章色譜法的基本術(shù)語及理論主要內(nèi)容第一節(jié)

色譜分離與保留作用第二節(jié)

有關色譜保留的基本術(shù)語及參數(shù)第三節(jié)

塔板理論第四節(jié)

速率理論第五節(jié)

色譜峰展寬的柱外因素丁黎中國藥科大學色譜分析課程主要內(nèi)容第六節(jié)

分離度及影響因素第七節(jié)

系統(tǒng)適應性試驗第八節(jié)

測定法第九節(jié)

色譜吸附或分配等溫線丁黎中國藥科大學色譜分析課程第六節(jié)分離度及影響因素分離度的定義1影響分離度的因素2改善分離的一般原則3一、分離度的定義分離度丁黎中國藥科大學色譜分析課程分離度（resolution，縮寫為R）又稱作分辨率，用以衡量相鄰峰的分離情況，是把柱效率和溶劑效率綜合到一起的參數(shù)。一、分離度的定義丁黎中國藥科大學色譜分析課程分離度由下式計算：對于兩個等面積峰R

=1：分離程度98%（又稱4σ分離）R

=1.25：達99.2%的分離R

=1.5：達99.7%（又稱6σ分離）丁黎中國藥科大學色譜分析課程

《中華人民共和國藥典》要求“除另有規(guī)定，分離度應大于1.5”。

在實際工作中，有時R

=1.25時也被認可，因為GC與HPLC的誤差為1％。丁黎中國藥科大學色譜分析課程二、影響分離度的因素

分離度不僅取決于兩組分的保留時間，也取決于其對應色譜峰的寬度。相同的分離度在高效或低效色譜系統(tǒng)中均可達到，因為影響分離度

R大小的因素可以用下式表示：丁黎中國藥科大學色譜分析課程稱為分離度方程。n

為色譜柱的理論塔板數(shù)；

α為相對保留值比（即分配系數(shù)比或容量因子比），即α

=k2

/k1，k1、k2

分別為兩待分離組分的容量因子；α﹥1，即k2

﹥k1；

k

為相鄰兩組分中保留時間長的組分的容量因子，即k2。丁黎中國藥科大學色譜分析課程丁黎柱效項主要與理論塔板數(shù)相關，柱選擇項與柱容量項相互關聯(lián)。在氣相色譜中，柱選擇項和柱容量項雖然都與色譜柱的性質(zhì)相關，但柱選擇項主要受色譜柱性質(zhì)影響，柱容量項主要受柱溫左右。在液相色譜中柱選擇項和柱容量項也都與色譜柱及流動相的性質(zhì)相關，但柱選擇項主要取決于流動相的種類。柱效項柱選擇項柱容量項

k

變小，譜帶流出較早，分離度變差；k變大，分離度增加。但是當k

=5～6時，對分離度的貢獻已基本上達到最大，再增加對分離度已無多大貢獻。丁黎中國藥科大學色譜分析課程

在填充柱氣相色譜中，柱效低，因而為了達到預期的分離度，選擇性是最重要的因素，因此，在填充柱氣相色譜中，需提供許多種性質(zhì)不同

的固定相供選擇。

在高效毛細管氣相色譜中，只需使用幾種固定相就可分離復雜的混合物。丁黎中國藥科大學色譜分析課程三、改善分離的一般原則增加△t

R，即相鄰組分保留時間的差值減小譜帶寬度（峰寬）W丁黎中國藥科大學色譜分析課程三、改善分離的一般原則1、增加增加柱長增加固定相的量選擇分離因子較大的色譜條件①

降低柱溫②

選擇不同的固定相（填充柱GC中常用）③

選擇不同的流動相（HPLC中常用）丁黎中國藥科大學色譜分析課程（1）增加色譜柱長對于長度不同的同一種色譜柱：

式中，L1、L2分別為兩根色譜柱的長度。可見，增加色譜柱的長度，理論塔板數(shù)將會增加，從而可提高分離度。丁黎中國藥科大學色譜分析課程（2）增加固定相的量丁黎中國藥科大學色譜分析課程

增加固定相的量，則k

增加，柱容量項增加，分離度增加。（3）選擇分離因子較大的色譜條件①

降低柱溫（氣相色譜中常用在GC中）：在GC中，對分離因子α而言:式中，Tc為柱溫，Tb1

和Tb2

分別為組分1、2的沸點，c為常數(shù)，R

為熱力學常數(shù)?？梢?，柱溫降低，分離因子增加，柱選擇項增加，分離度增加。丁黎中國藥科大學色譜分析課程（3）選擇分離因子較大的色譜條件丁黎中國藥科大學色譜分析課程②選擇不同的固定相：填充柱氣相色譜中常用。③選擇不同的流動相：高效液相色譜中常用。丁黎三、改善分離的一般原則丁黎中國藥科大學色譜分析課程2、減小譜帶寬度（峰寬）W①

提高柱效，減小塔板高度：使用顆粒更細的填料，更小心、均勻的填充色譜柱。②

減小色譜系統(tǒng)的死體積：如在填充經(jīng)典的制備柱時，經(jīng)常采用濕法裝柱。柱子裝好后一般要在流動相流動的情況下給出足夠的時間讓固定相沉降，等固定相不再沉降后才能上樣品。③

減小進樣量：防止色譜柱超載。主要內(nèi)容第一節(jié)

色譜分離與保留作用第二節(jié)

有關色譜保留的基本術(shù)語及參數(shù)第三節(jié)

塔板理論第四節(jié)

速率理論第五節(jié)