球孢白僵菌殺線蟲活性物質(zhì)分離純化研究的中期報(bào)告

球孢白僵菌殺線蟲活性物質(zhì)分離純化研究的中期報(bào)告【摘要】筆者對(duì)球孢白僵菌分離得到的殺線蟲活性物質(zhì)進(jìn)行了中期研究。首先采用溶劑萃取法對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行初步分離，得到了水相和有機(jī)相兩種提取物。然后利用層析技術(shù)對(duì)有機(jī)相提取物進(jìn)行進(jìn)一步純化，得到了三個(gè)主要組分，經(jīng)質(zhì)譜分析證實(shí)為殺線蟲活性物質(zhì)。此外，還對(duì)純化后的樣品進(jìn)行了理化性質(zhì)和殺線蟲活性的測(cè)定，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行了分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，球孢白僵菌分離得到的殺線蟲活性物質(zhì)具有很高的殺線蟲活性和穩(wěn)定性，具有良好的應(yīng)用前景?！娟P(guān)鍵詞】球孢白僵菌；殺線蟲活性物質(zhì)；溶劑萃取法；層析技術(shù)；純化；理化性質(zhì)；殺線蟲活性1.研究背景球孢白僵菌是一種廣泛存在于自然界中的土壤真菌，常被用作生物殺蟲劑的有效成分。近年來(lái)，研究人員發(fā)現(xiàn)球孢白僵菌可以分泌出具有殺線蟲活性的物質(zhì)，具有廣泛的殺線蟲應(yīng)用前景。因此，本研究旨在分離純化球孢白僵菌殺線蟲活性物質(zhì)，并對(duì)其進(jìn)行理化性質(zhì)和殺線蟲活性的測(cè)定與研究。2.實(shí)驗(yàn)材料與方法2.1實(shí)驗(yàn)菌株本研究采用球孢白僵菌作為實(shí)驗(yàn)菌株。2.2培養(yǎng)條件球孢白僵菌在PotatoDextroseAgar（PDA）平板培養(yǎng)基上進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，然后接種進(jìn)LiPDA培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，培養(yǎng)條件為28℃，pH為6.5，培養(yǎng)時(shí)間為7d。2.3提取與分離收獲平板培養(yǎng)的轉(zhuǎn)化液，采用1：2（體積比）的甲醇-乙酸乙酯混合液溶解，搖勻（200r/min，4℃），靜置分層?；瘜W(xué)藥品超純級(jí)甲醇、鹽酸、氫氧化鈉、乙酸乙酯、醋酸。2.4高效液相色譜-質(zhì)譜分析（HPLC-MS）通過HPLC-MS對(duì)分離得到的殺線蟲活性物質(zhì)進(jìn)行組分分析。3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1溶劑萃取法初步分離采用溶劑萃取法對(duì)發(fā)酵液進(jìn)行初步提取，得到了水相和有機(jī)相兩種提取物。水相提取物未見殺線蟲活性，有機(jī)相提取物顯示出強(qiáng)烈的殺線蟲活性。3.2層析技術(shù)進(jìn)一步純化對(duì)有機(jī)相提取物進(jìn)行層析技術(shù)進(jìn)一步分離純化，得到了三個(gè)主要組分，并經(jīng)質(zhì)譜分析確定為殺線蟲活性物質(zhì)。3.3理化性質(zhì)測(cè)定對(duì)純化得到的殺線蟲活性物質(zhì)進(jìn)行理化性質(zhì)測(cè)定，包括熔點(diǎn)、溶解度、分子量等。結(jié)果表明，該物質(zhì)具有較好的熱穩(wěn)定性和溶解性，并具有一定的分子量。3.4殺線蟲活性測(cè)定采用不同濃度的殺線蟲活性物質(zhì)對(duì)線蟲進(jìn)行處理，測(cè)定不同濃度下線蟲的死亡率和生長(zhǎng)指數(shù)。結(jié)果表明，殺線蟲活性物質(zhì)對(duì)線蟲有較強(qiáng)的毒性效果，并且對(duì)線蟲生長(zhǎng)也有一定的抑制作用。4.結(jié)論與展望通過對(duì)球孢白僵菌分離得到的殺線蟲活性物質(zhì)進(jìn)行中期研究，成功地對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行了初步的分離、純化和理化性質(zhì)及殺線蟲活性的測(cè)定與分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該物質(zhì)具有較高的殺線蟲活性和穩(wěn)定性，具有