丙泊酚與鹽酸法舒地爾聯(lián)合應(yīng)用對(duì)腦發(fā)育期大鼠海馬神經(jīng)元的影響

丙泊酚與鹽酸法舒地爾聯(lián)合應(yīng)用對(duì)腦發(fā)育期大鼠海馬神經(jīng)元的影響目的:探討反復(fù)腹腔注射丙泊酚對(duì)腦發(fā)育期SD大鼠海馬神經(jīng)元的毒性作用及遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)記憶功能的影響;鹽酸法舒地爾是否能減輕丙泊酚誘導(dǎo)的海馬神經(jīng)元的凋亡。方法:1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及模型制備健康七日齡SD大鼠65只,雌雄各半,12-19g,按照隨機(jī)數(shù)字表法分為五組(n=13):空白對(duì)照組(B組),溶劑對(duì)照組(S組),丙泊酚組(P組),丙泊酚+法舒地爾組(PF組)和法舒地爾組(F組)。B組不做任何處理;S組腹腔注射脂肪乳7.5ml/(kg·d),連續(xù)7天;P組腹腔注射丙泊酚75ml/(kg·d),連續(xù)7天;PF組腹腔注射法舒地爾10ml/(kg·d)+丙泊酚75ml/(kg·d),連續(xù)7天;F組腹腔注射法舒地爾10ml/(kg·d),連續(xù)7天。除空白組外所有組注藥容量均用脂肪乳定容至10ml/kg。麻醉后待翻正反射消失,將幼鼠放入持續(xù)低流量供氧(2L/min)的暖箱中,翻正反射恢復(fù)后放回母鼠身邊(與母鼠分離時(shí)間不超過5h)。2標(biāo)本采集及檢測(cè)方法2.1末次注藥后15min各組隨機(jī)抽取5只檢測(cè)血糖及血氧。2.2Westernblot法檢測(cè)海馬組織相關(guān)蛋白的表達(dá)情況末次腹腔注射24h后各組隨機(jī)選取3只SD幼鼠1%戊巴比妥鈉(0.003ml/g)麻醉,斷頭取腦,冰上分離海馬組織。然后將海馬剪碎放入加有裂解液和蛋白磷酸酶抑制劑的混合液中,電動(dòng)勻漿器勻漿,離心機(jī)中4℃10000r/min離心5min,取上清,用Western-blot法檢測(cè)海馬組織中Bcl-2的表達(dá)情況。2.3caspase3活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)海馬組織caspase3的活性表達(dá)。末次注藥后24h隨機(jī)另取5只SD幼鼠,1%戊巴比妥鈉(0.003ml/g)麻醉后斷頭取腦,冰上分離取出海馬,勻漿提蛋白后加入試劑盒中反應(yīng)底物,與組織中caspase3酶孵育反應(yīng),通過測(cè)定黃色產(chǎn)物的吸光度值檢測(cè)組織中caspase3的活性表達(dá)。2.4Morris水迷宮測(cè)試各組SD大鼠遠(yuǎn)期空間學(xué)習(xí)記憶能力各組隨機(jī)選取的5只SD大鼠飼養(yǎng)至60天時(shí)進(jìn)行Morris水迷宮測(cè)試。大鼠訓(xùn)練5天,每天2次,從下水開始到找到平臺(tái)的時(shí)間記錄為逃逸潛伏期。第6天,大鼠面壁輕放入撤去平臺(tái)的水迷宮中游120s,記錄穿越平臺(tái)的次數(shù)。結(jié)果:1五組大鼠血氧飽和度及血糖值均在正常范圍內(nèi),組間無明顯差異(P>0.05)。2Westernblot結(jié)果顯示:各組與B組相比Bcl-2的表達(dá)均減少,有顯著差異(P<0.05)。P組與S組、PF組相比,Bcl-2的表達(dá)顯著降低(P<0.05)。PF組與F組相比Bcl-2表達(dá)量降低(P<0.05)。3各組caspase3活性蛋白表達(dá)量均高于B組(P<0.05)。P組顯著高于其他各組(P<0.01)。PF組與F組相比caspase3表達(dá)量也有顯著差異(P<0.05)。4Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)5天的訓(xùn)練中,第3天開始P組、PF組逃逸潛伏期較其他各組延長,有顯著差異(P<0.01)。與P組比較,PF組逃逸潛伏期縮短(P<0.05)。第4、5天,P組和PF組逃逸潛伏期與其他組比較有顯著差異(P<0.01,P<0.05)。PF組逃逸潛伏期長于F組(P<0.05)。P組、PF組穿越平臺(tái)次數(shù)明顯少于其他組(P<0.01);與P組比較,PF組穿越平臺(tái)次數(shù)多于P組(P<0.05);PF組穿越平臺(tái)次數(shù)少于F組(P<0.05)。B組、S組和F組之間逃逸潛伏期和穿越平臺(tái)次數(shù)均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)論:7日齡SD大鼠反復(fù)腹腔注射大劑量丙泊酚后,誘導(dǎo)海馬組織細(xì)胞大量凋亡,對(duì)大鼠成年后的空間學(xué)習(xí)記