分析化學(xué)課件 第一學(xué)期 第10章

沉淀滴定法滴定劑莫爾法法揚(yáng)司法佛爾哈德法終點(diǎn)顏色變化指示劑

AgNO3K2CrO4白色－磚紅色NH4SCN鐵銨礬NH4Fe(SO4)2白色－紅色吸附指示劑如熒光黃

AgNO3黃綠色－白色－紅色1分析化學(xué)化學(xué)分析儀器分析酸堿滴定配位滴定氧化還原滴定沉淀滴定光化學(xué)分析重量分析滴定分析第六章吸光光度法2本次課主要內(nèi)容：§6.1吸光光度法概述吸光光度法的特點(diǎn)光吸收的基本定律比色法和吸光光度法及其儀器重點(diǎn)與難點(diǎn)：朗伯—比爾定律；摩爾吸光系數(shù)及桑德爾靈敏度的概念及計(jì)算；分光光度計(jì)3第六章吸光光度法吸光光度法（分光光度法）：基于物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收而建立起來的方法§6.1概述一、吸光光度法特點(diǎn)1.光的基本性質(zhì)光是一種電磁波，不同波長(zhǎng)的光具有不同的能量當(dāng)用不同波長(zhǎng)的光照射物質(zhì)時(shí)，引起物質(zhì)內(nèi)部不同能量能級(jí)的躍遷4電磁波譜范圍表5光學(xué)光譜區(qū)遠(yuǎn)紫外近紫外可見近紅外中紅外遠(yuǎn)紅外（真空紫外）10nm~200nm200nm

~400nm400nm

~750nm750nm~2.5

m2.5

m

~50

m50

m

~300

m6圖6-1分子中電子能級(jí)、振動(dòng)能級(jí)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)示意圖2、吸收光譜產(chǎn)生的原理1）分子吸收光譜

分子具有三種不同的能級(jí)：電子能級(jí)、轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)、振動(dòng)能級(jí)<0.05eV1-20eV0.05-1eV7原子光譜：吸收、發(fā)射、熒光線狀光譜

分子光譜：紫外、可見、紅外等吸收光譜帶狀光譜

I在電子能級(jí)躍遷的同時(shí)伴隨振動(dòng)能級(jí)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)的躍遷分子光譜呈帶狀光譜82）單色光、復(fù)合光、互補(bǔ)色光單色光復(fù)合光互補(bǔ)色光單一波長(zhǎng)的光由不同波長(zhǎng)的光組合而成的光（可見光）若兩種不同顏色的單色光按一定的強(qiáng)度比例混合得到白光，那么就稱這兩種單色光為互補(bǔ)色光，這種現(xiàn)象稱為光的互補(bǔ)。9物質(zhì)的顏色與光的關(guān)系完全吸收無(wú)吸收吸收黃色光光譜示意表觀現(xiàn)象示意復(fù)合光3）物質(zhì)對(duì)光的吸收物質(zhì)的顏色是因物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光具有選擇性的吸收作用互補(bǔ)色10/nm顏色互補(bǔ)光400～450紫黃綠450～480藍(lán)黃480～490綠藍(lán)橙490～500藍(lán)綠紅500～560綠紅紫560～580黃綠紫580～610黃藍(lán)610～650橙綠藍(lán)650～760紅不同顏色的可見光波長(zhǎng)及其互補(bǔ)光藍(lán)綠114）吸收曲線：測(cè)量某種物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)單色光的吸收程度，以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，得到的一條吸收光譜曲線。光吸收程度最大處的波長(zhǎng)稱為最大吸收波長(zhǎng)λmax

又稱特征波長(zhǎng)，與物質(zhì)種類有關(guān)，與濃度無(wú)關(guān)。12AA

A

C增大定性分析基礎(chǔ)定量分析基礎(chǔ)?不同物質(zhì)吸收光譜的形狀以及

max不同定性分析與定量分析的基礎(chǔ)同一物質(zhì)，濃度c不同時(shí)，吸收光譜的形狀相同，即

max相同，Amax不同，且隨濃度c增加而增大13二、光吸收的基本定律1、透光率和吸光度當(dāng)一束平行單色光通過任何均勻、非散射的固體、液體或氣體介質(zhì)時(shí)，一部分被器皿表面反射，一部分被吸收，一部分透過介質(zhì)當(dāng)測(cè)定中使用垂直平行光照射同樣質(zhì)地和厚度的吸收池時(shí)，反射光強(qiáng)度基本不變，其影響可以忽略圖6-3光通過溶液的情況141.00.50ACA100500T%T=0.0%A=∞T=100.0%A=0.0A=0.434T=36.8%T

T為透光率，透射比或透光度，T越大，溶液對(duì)光的吸收越小15朗伯定律:(1760)A=lg(I0/It)=k1b

當(dāng)入射光的

，吸光物質(zhì)的c一定時(shí)，溶液的吸光度A與液層厚度b成正比.比爾定律(1852)A=lg(I0/It)=k2c

當(dāng)入射光的

，液層厚度b

一定時(shí)，溶液的吸光度A與吸光物質(zhì)的c成正比.2、朗伯一比爾定律：16

A=

lg（I0/It）=lg（I0/I）=Kbc

－朗伯－比爾定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式

A：吸光度；b:液層厚度；

c：溶液的濃度；K：比例常數(shù)朗伯－比爾定律的意義：當(dāng)一束單色光通過含有吸光物質(zhì)的溶液后，溶液的吸光度與吸光物質(zhì)濃度及吸收層厚度成正比－定量分析的理論基礎(chǔ)173、吸光度的加合性含有多種吸光物質(zhì)的溶液中，如果各組分之間無(wú)相互作用，當(dāng)某一波長(zhǎng)的單色光照射時(shí)，溶液的總吸光度等于各吸光物質(zhì)在此波長(zhǎng)的吸光度之和。A=A1+A2+……An

利用這一性質(zhì)，可進(jìn)行多組分的測(cè)定184、摩爾吸收系數(shù)b吸光液層的厚度，光程，cmK

比例常數(shù)入射光波長(zhǎng)物質(zhì)的性質(zhì)溫度c：mol/LK

摩爾吸收系數(shù)，L·mol–1·cm-1c：g/LK吸收系數(shù)，L·g–1·cm-1

MolarAbsorptivityAbsorptivityε的意義：物質(zhì)的量濃度為1.0mol/L，液層厚度為1cm時(shí)，溶液的吸光度。19ε反映吸光物質(zhì)對(duì)某一波長(zhǎng)光的吸收能力ε反映用吸光光度法測(cè)定該物質(zhì)的靈敏度,ε越大，靈敏度越高。低靈敏度ε〈104

，中靈敏度ε在104-5×104

，高靈敏度ε在6×104～105，超高靈敏度ε>105同一物質(zhì)與不同顯色劑生成不同有色化合物，具有不同的ε值，ε值是選擇顯色反應(yīng)的重要依據(jù)ε在一定條件下為一常數(shù)。205、桑德爾靈敏度，用S表示1）S的定義：S是指當(dāng)儀器的檢測(cè)極限為A=0.001時(shí),單位截面積光程內(nèi)所能檢出吸光物質(zhì)的最低含量（截面積為1cm2的液層，在一定波長(zhǎng)處測(cè)得的吸光度A為0.001時(shí)，所含待測(cè)物質(zhì)的質(zhì)量）,S越小越靈敏（μg·cm-2）

2）ε與S的關(guān)系：

A=εbc=0.001，則cb=0.001/ε；c的單位為mol/L，可變?yōu)閙ol/1000cm3；b單位為cm，cb/1000為mol/cm2;21式中M的單位為g·mol-1，ε的單位為L(zhǎng)·mol-1·cm-1例1：鐵（Ⅱ）濃度為5.0×10-4

g·L-1

的溶液，與1，10-鄰二氮菲反應(yīng)，生成橙紅色絡(luò)合物。該絡(luò)合物在波長(zhǎng)508nm，比色皿厚度為2cm時(shí)，測(cè)得A=0.19。計(jì)算1，10-鄰二氮菲鐵的ε及S需要知兩個(gè)公式A=εbc以及S=M/ε,解：已知M(Fe)=55.85C=5.0×10-4/55.85=8.95×10-6mol/Lε=A/bc

=0.19/2×8.95×10-6=1.1×104L·mol-1·cm-122例2比較用以下兩種方法測(cè)Fe的靈敏度.B.用4,7-二苯基鄰二氮菲光度法測(cè)定鐵ε533＝2.2×104L·mol-1·cm-1B方法比A方法的靈敏度高.A.用鄰二氮菲光度法測(cè)定鐵時(shí)，ε508＝1.1×104L·mol-1·cm-1S=55.85/(1.1×104)＝0.0051(

g·cm-2)S=55.85/(2.2×104)＝0.0025(

g·cm-2)23三、比色法和吸光光度法及其儀器1、目視比色法和吸光光度法的特點(diǎn)：1）靈敏度：質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%-10-5的微量組分，甚至10-6~10-8痕量組分2）準(zhǔn)確度：目視比色分析，相對(duì)誤差5～10%，分光光度法，2～5%3）應(yīng)用廣泛：可測(cè)定幾乎所有無(wú)機(jī)離子和許多有機(jī)物4）儀器簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便、快速242、目視比色法1)定義：用眼睛比較溶液顏色深淺以確定物質(zhì)含量的方法。2)

優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便，適宜于大批試樣分析；靈敏度高，不要求嚴(yán)格遵守比爾定律。3)

用途:用在要求不高的常規(guī)分析中。4)

缺點(diǎn)：準(zhǔn)確度不高，標(biāo)準(zhǔn)系列不能久存。標(biāo)準(zhǔn)系列未知樣品253、吸光光度法借助于分光光度計(jì)來測(cè)量一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)被測(cè)試液的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得被測(cè)物質(zhì)的濃度或含量A＝

bc工作曲線法(校準(zhǔn)曲線)01.02.03.04.0c(mg/mL)A。。。。*0.800.600.400.200.00Axcx26特點(diǎn)：①測(cè)定吸光度

②入射光為較純單色光，準(zhǔn)確度高

③利用吸光度加合性，可測(cè)定兩種以上物質(zhì)④在紫外或紅外區(qū)域也可測(cè)定目視比色法和吸光光度法的區(qū)別：吸光光度法比較有色溶液對(duì)某一波長(zhǎng)光的吸收情況，目視比色法是比較透過光的強(qiáng)度274、分光光度計(jì)及其基本部件0.575光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示28紫外-可見分光光度計(jì)組件光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示裝置氫燈，氘燈，185~350nm；鎢燈，360~800nm.基本要求：光源強(qiáng)，能量分布均勻，穩(wěn)定作用：將復(fù)合光色散成單色光棱鏡：玻璃，石英光柵：平面透射光柵，反射光柵可見光區(qū)用玻璃，紫外光區(qū)用石英作用：將光信號(hào)轉(zhuǎn)換為電信號(hào)，并放大光電管，光電倍增管，光電二極管，光導(dǎo)攝像管檢流計(jì)、微安表、數(shù)字顯示等盛放試液（比色皿）29

/nm鎢燈（熱輻射光源）4006008001000氙燈（氣體放電光源）氫燈強(qiáng)度30棱鏡：根據(jù)光的折射原理將復(fù)合光色散為不同波長(zhǎng)的單色光玻璃棱鏡適用于可見光石英棱鏡在可見光和紫外都可用入射狹縫準(zhǔn)直透鏡棱鏡聚焦透鏡出射狹縫白光紅紫λ1λ280060050040031光柵：根據(jù)光的干涉和衍射原理，將復(fù)合光分解為不同波長(zhǎng)的單色光光柵的分辨率比棱鏡大，可用的波長(zhǎng)范圍也較寬。M1M2出射狹縫光屏透鏡平面透射光柵32h

（片）紅敏管625-1000nm藍(lán)敏管200-625nm

光電管(Phototube)33光電倍增管(PhotomultiplierTube,PMT)1個(gè)光子可產(chǎn)生106～107個(gè)電子160-700nm34351、人眼能感覺到的光稱為可見光，其波長(zhǎng)范圍是A.400~750nmB.200~320nmC.200~750nmD.200~1000nm答案：A2、符合比爾定律的一有色溶液，當(dāng)其濃度增大時(shí)，最大吸收波長(zhǎng)和吸光度分別是A.不變，增加B.不變，減少C.增加，不變D.減少，不變答案：A

363、下列表述不正確的是：A.吸收光譜曲線，表明了吸光度隨波長(zhǎng)的變化關(guān)系B.吸收光譜曲線中,最大吸收處的波長(zhǎng)為最大吸收波長(zhǎng)C.吸收光譜曲線，以波長(zhǎng)為縱坐標(biāo),以吸光度為橫坐標(biāo)D.吸收光譜曲線，表明了吸光物質(zhì)的吸收特性答案：C4、影響有色物質(zhì)摩爾吸收系數(shù)的因素是A.吸收池厚度B.入射光波長(zhǎng)C.有色物質(zhì)溶液的濃度D.入射光的強(qiáng)度答案：B375、某有色物質(zhì)溶液，遵守比爾定律，當(dāng)其濃度為c時(shí)，用1.00cm比色皿測(cè)得其透光度為T，當(dāng)濃度減小為0.50c時(shí)，，在同樣條件下測(cè)定，其透光率應(yīng)為A.T2B.2TC.T1/2D.T/2答案：C

lg1/T=εbc6、紫外可見分光光度計(jì)在可見區(qū)測(cè)量時(shí)所用光源是A.氫燈B.鎢燈C.空心陰極燈D.紅外燈答案：B38同學(xué)們好！上課了！大家安靜！39定性分析基礎(chǔ)定量分析基礎(chǔ)不同物質(zhì)吸收光譜的形狀以及

max不同朗伯比爾定律§6.1概述吸光光度法借助于分光光度計(jì)來測(cè)量一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)被測(cè)試液的吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得被測(cè)物質(zhì)的濃度或含量40§6.2光度分析法的設(shè)計(jì)6.2.1

顯色反應(yīng)6.2.2

顯色條件的選擇6.2.3

測(cè)量波長(zhǎng)和吸光度范圍的選擇6.2.4

參比溶液的選擇6.2.5

標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作416.2.1顯色反應(yīng)1.定義：將待測(cè)組分轉(zhuǎn)化成有色化合物的的反應(yīng)。

M＋R＝MR（絡(luò)合反應(yīng)為主）2.要求:

（1）選擇性好；

（2）靈敏度高，ε>104；

（3）有色化合物MR要穩(wěn)定，不分解；

（4）MR的組成要恒定；

（5）MR與R顏色差別大42：：：：助色團(tuán)－NH，－OH，－X（孤對(duì)電子）neO生色團(tuán)：－N＝N－，－C＝O，OC=S,－N（共軛雙鍵）πe3、顯色劑與待測(cè)組分形成有色化合物的試劑①無(wú)機(jī)顯色劑（不常用）②有機(jī)顯色劑43常用有機(jī)顯色劑的類型NNOHCOOHSO3HOO型：NNNOH

OHON型：PARNHNHNSNS型：雙硫腙NN型：鄰二氮菲磺基水楊酸44Cu2+,Pb2+，Zn2+,Cd2+,Hg2+45主要用于測(cè)定稀土離子464、多元絡(luò)合物a、三元混配絡(luò)合物用于釩的測(cè)定，靈敏度高，選擇性好b、離子締合物金屬離子首先與絡(luò)合劑生成絡(luò)陰離子或絡(luò)陽(yáng)離子，然后再與帶相反電荷的離子生成離子締合物c、金屬離子—絡(luò)合劑—表面活性劑體系

形成膠束化合物，吸收峰向長(zhǎng)波方向移動(dòng)，靈敏度顯著提高d、雜多酸47顯色條件溶液的酸度顯色劑的用量顯色時(shí)間顯色溫度溶劑共存離子的干擾二、顯色條件的選擇48金屬離子和顯色劑的存在狀態(tài)顯色劑的顏色生成不同配比的絡(luò)合物1、溶液的酸度M+nR=MRnOH-H+M(OH)nHRRH=R-

+H+

1

2例，PARH2R＝HR=RpH<6紅色pH=7~12橙色pH>13黃色例，磺基水楊酸–Fe3+pH=2~3FeR紫紅色pH=4~7FeR2橙色pH=8~10FeR3黃色49適宜酸度通過實(shí)驗(yàn)確定，作A-pH曲線確定最佳pH（c(M)、c(R)一定）50實(shí)際工作中，作A~CR

曲線，尋找適宜CR范圍2、顯色劑的用量：

M+nR=MRn平臺(tái)處用量51如SCN-與Mo(Ⅴ)MoR32＋

MoR5

MoR6－淺紅

橙紅

淺紅需嚴(yán)格控制用量如SCN-與Fe3+配位數(shù)越高，顏色越深需嚴(yán)格控制用量523、溫度的選擇實(shí)際工作中，作A~T

曲線，尋找適宜反應(yīng)溫度。4、反應(yīng)時(shí)間的選擇實(shí)際工作中，作A~t

曲線，尋找適宜反應(yīng)時(shí)間。25℃50℃t/minA535、溶劑：1）降低有色化合物離解度，增加靈敏度如在Fe(SCN)3的溶液中加入與水混溶的有機(jī)試劑（如丙酮），由于降低了Fe(SCN)3的解離度而使顏色加深，提高了測(cè)定靈敏度。2）提高顯色反應(yīng)的速率，影響有色絡(luò)合物的溶解度和組成如用氯代磺酚S法測(cè)定鈮（V），水中需幾個(gè)小時(shí)，加入丙酮后只需30min546、干擾及其消除：（1）控制溶液酸度；（2）加入掩蔽劑；（3）利用氧化還原反應(yīng)改變離子的狀態(tài)；（4）選擇適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)，要求吸收大，干擾?。唬?）選擇合適的參比溶液；（6）采用適當(dāng)?shù)念A(yù)先分離的方法。55選520nm進(jìn)行測(cè)定三、測(cè)量波長(zhǎng)和吸光度范圍的選擇1、測(cè)量波長(zhǎng)“最大吸收原則”無(wú)干擾，選λmax

”吸收最大，干擾最小”：有干擾時(shí)56

2、吸光度范圍

A在0.2-0.8之間（誤差最小）

A過大,稀釋或選厚度小的比色皿

A小,選厚度大的比色皿57I0It參比樣品四、參比溶液的選擇原則：扣除非待測(cè)組分的吸收A(樣)=A(待測(cè)吸光物質(zhì))

+

A（干擾）+A（池）A（參比）

=

A（干擾）+A（池）58以顯色反應(yīng)為例進(jìn)行討論M+R=M-R無(wú)色無(wú)吸收溶劑蒸餾水有色無(wú)吸收吸收不加顯色劑的試液無(wú)色吸收吸收不加試樣溶液的試劑空白有色吸收吸收吸收顯色劑+試液+待測(cè)組分的掩蔽劑試液顯色劑吸光物質(zhì)參比液59五、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作1、制作依據(jù)：比爾定律A=Kbc

吸光度與吸光物質(zhì)的含量呈正比關(guān)系2、制作方法：1）在選擇的實(shí)驗(yàn)條件下，從低濃度到高濃度分別測(cè)量一系列（不少于5）不同含量的標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度2）以標(biāo)準(zhǔn)溶液中待測(cè)組分的含量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)作圖，得到一條通過原點(diǎn)的直線，稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線（或工作曲線）。3）再測(cè)量待測(cè)溶液的吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上就可以查到與之相對(duì)應(yīng)的被測(cè)物質(zhì)的含量。6001.02.03.04.0c(mg/mL)A。。。。*0.800.600.400.200.00Axcx61

6.3光度分析法的誤差6.3.1對(duì)朗伯－比耳定律的偏離6.3.2吸光度測(cè)量的誤差626.3光度分析法的誤差一、對(duì)朗伯一比爾定律的偏離63對(duì)吸收光譜而言，b和c固定，反映了

隨波長(zhǎng)變化的情況，單一波長(zhǎng)，

固定；不同波長(zhǎng)，

不同。因此，非單色光將導(dǎo)致對(duì)吸光定律的偏離。A或

12在實(shí)際工作中，入射光通常具有一定的帶通。為了避免非單色光帶來的影響，一般選用峰值波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定。1對(duì)應(yīng)的

1較小2對(duì)應(yīng)的

2較大1、非單色光引起的偏離（單色光不純）641、非單色光引起的偏離A提高單色器的精度－某一波段的復(fù)合光B使用最大吸收波長(zhǎng)測(cè)定，提高靈敏度，減少對(duì)朗伯一比爾定律的偏離。C選擇適當(dāng)?shù)臐舛确秶?、介質(zhì)不均勻引起的偏離在分析中避免溶液產(chǎn)生膠體和渾濁，發(fā)生散射損失，使透射比減少653、由于溶液本身的化學(xué)反應(yīng)引起的偏離解離絡(luò)合締合控制溶液條件，使被測(cè)組分以一種形式存在66100806040200T/%

c1

c2

c3

T

T

T-透光率讀數(shù)誤差

c

c1c1

c2c2

c3c3><由于T與濃度c不是線性關(guān)系，故不同濃度時(shí)的儀器讀數(shù)誤差

T

引起的測(cè)量誤差

c/c不同。二、吸光度測(cè)量誤差67儀器測(cè)量誤差公式推導(dǎo)吸光定律根據(jù)誤差傳遞公式，有又得濃度測(cè)量的相對(duì)偏差得T=0.368=36.8%A=0.434此時(shí)，儀器測(cè)量誤差最小為了減少測(cè)量誤差，控制溶液的吸光度A=0.2~0.8T=65~15%令6869練習(xí)題1、以M表示被測(cè)物質(zhì)的摩爾質(zhì)量，則摩爾吸收系數(shù)

與吸光系數(shù)K之間的關(guān)系為A。

=K/MB。

=KMC。

=KM/1000D。

=(K/M)×1000答案：B2、在光度分析中，選擇參比溶液的原則是A。一般選蒸餾水B。一般選試劑溶液C。根據(jù)加入試劑和被測(cè)試液的顏色性質(zhì)選擇D。一般選褪色溶液答案：C703、下列幾組吸光度范圍，測(cè)量相對(duì)誤差較小的是A。0.2~0.8B。0.1~0.8C。0.3~0.6D。0.2~0.6答案：C4、下列表述中錯(cuò)誤的是A。吸收峰隨濃度增加而增高，但最大吸收波長(zhǎng)不變B。透射光與吸收光互為補(bǔ)色光，黃色和蘭色互補(bǔ)C。比色法又稱分光光度法D。在公式A=κbc

中，κ稱摩爾吸收系數(shù)，其數(shù)值越大，反應(yīng)越靈敏答案：C715、某有色物質(zhì)溶液的吸光度值較小時(shí)，則表明A。該物質(zhì)的濃度較小B。該物質(zhì)摩爾吸收系數(shù)較小C。所用比色皿較薄D。上述三者都可能答案：D6、一有色溶液在一定波長(zhǎng)下，測(cè)定其吸光度為0.740，如果溶液及比色皿都減小一半，則其吸光度為A。2.96B。0.740C。0.370D。0.185答案：D72獻(xiàn)給勤奮學(xué)習(xí)的同學(xué)們！73

6.4其他吸光光度法和光度

分析法的應(yīng)用6.4.1示差吸光光度法6.4.2雙波長(zhǎng)吸光光度法6.4.3弱酸和弱堿解離常數(shù)的測(cè)定6.4.4絡(luò)合物組成的測(cè)定返回746.4其它吸光光度法和光度分析法應(yīng)用普通光度法是采用空白溶液作為參比溶液，調(diào)吸光度為零。示差法是采用比待測(cè)溶液濃度稍低的標(biāo)準(zhǔn)溶液顯色后作參比液，調(diào)吸光度為零，那么測(cè)得的試液吸光度A，實(shí)際是兩者吸光度之差△A，它與兩者的濃度之差△C

成正比。設(shè)由普通法測(cè)得：濃度稍低標(biāo)準(zhǔn)溶液1、方法原理（以高濃度示差法為例）一、示差吸光光度法75調(diào)A0為零后實(shí)測(cè)：配標(biāo)準(zhǔn)系列：

以C0為參比測(cè)得△A1,△A2,△A3,△A4，作△A

-△C

標(biāo)準(zhǔn)曲線，設(shè)待測(cè)液為△Ax

，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查得濃度為△C

，則待測(cè)液濃度為C0+△C762、示差吸光光度法誤差示差法測(cè)定時(shí)，讀數(shù)落在測(cè)量誤差較小的區(qū)域，因此提高了測(cè)量的準(zhǔn)確度。

普通法測(cè)得參比溶液透射比為10%，待測(cè)液是7%，在示差法中將參比溶液透射比從10%調(diào)至100%（即A=0），就意味著將儀器透射比擴(kuò)展了10倍，那么此時(shí)待測(cè)液透射比將是70%。

77[例]稱鋼樣0.500g，溶解→MnO4-→50mL容量瓶，搖勻，從中取5.00mL→50mL容量瓶定溶，用2cm比色皿在λ525nm，ε=2235，測(cè)A=0.124，計(jì)算Mn%=？(Mn=54.94)

[解]

A0.124

c2=——=————=2.77×10-5mol/L

εb2235×2

Mn

c2

·50·——

1000

Mn%=——————×100=0.152

5.00

0.500·——

5078光源單色器單色器檢測(cè)器切光器狹縫吸收池二、雙波長(zhǎng)吸光光度法1、方法原理：使兩束不同波長(zhǎng)的單色光交替的照射同一吸收池，測(cè)量并記錄兩者吸光度的差值△A，根據(jù)△A與吸光物質(zhì)濃度c成正比進(jìn)行定量分析，可以消除試液與參比液及兩個(gè)吸收池之間的差異所引起的測(cè)量誤差，消除干擾792、雙波長(zhǎng)吸光光度的應(yīng)用①混濁試液中組成的測(cè)定。②單組分測(cè)定③兩組分共存時(shí)的分別測(cè)定∵∴

2A

1XYY

的存在不干擾

X

的測(cè)定80三、弱酸弱堿解離常數(shù)的測(cè)定設(shè)在某波長(zhǎng)下，HB和B-均有吸收，液層厚度b=1cm。根據(jù)吸光度的加和性

在高酸度時(shí)，主要以HB形式存在81在強(qiáng)堿性時(shí)，主要以B-型體存在，這時(shí)代入上式并取負(fù)對(duì)數(shù)得：

A為某一確定pH時(shí)溶液的吸光度，可由n個(gè)pH不同的溶液求得n個(gè)pKa，取其平均值。82原式變換為：

以為縱坐標(biāo)，以為橫坐標(biāo)作圖，曲線與橫軸的交點(diǎn)即為解離常數(shù)也可由圖解法求出83四多組分分析：以兩組分為例1、吸收光譜不