調(diào)更益精湯對(duì)IVF-ET中腎虛血瘀型卵巢低反應(yīng)患者的影響

調(diào)更益精湯對(duì)IVF-ET中腎虛血瘀型卵巢低反應(yīng)患者的影響卵巢低反應(yīng)(poorovarianresponse,POR)是卵巢對(duì)促性腺激素(gonadotropin,Gn)刺激反應(yīng)不良的病理狀態(tài),主要表現(xiàn)為卵巢刺激周期發(fā)育的卵泡少、血雌激素的峰值低、Gn用量多、獲卵數(shù)少、周期取消率高和臨床妊娠率低,目前臨床上缺乏有效逆轉(zhuǎn)POR的合理治療策略,是生殖領(lǐng)域亟待解決的難點(diǎn)問題。祖國(guó)醫(yī)學(xué)治療不孕不育歷史悠久,能較好改善生殖內(nèi)分泌功能,與現(xiàn)代輔助生殖技術(shù)相結(jié)合,為POR患者營(yíng)造出可積極助孕的環(huán)境基礎(chǔ)。故本課題在前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)一步探討中藥“調(diào)更益精湯”對(duì)體外受精-胚胎移植技術(shù)(invitrofertilizationandembryotransfer,IVF-ET)中腎虛血瘀型卵巢低反應(yīng)患者的影響。細(xì)胞因子與生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)有著極其密切的關(guān)系,許多細(xì)胞因子存在于人類的卵泡液中,調(diào)節(jié)卵子的發(fā)育、成熟和排卵等過程;同時(shí)充當(dāng)中介信號(hào)系統(tǒng),調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜容受性的形成。本課題即選取目前比較公認(rèn)的與卵子質(zhì)量及子宮內(nèi)膜容受性相關(guān)的細(xì)胞因子:轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1),白血病抑制因子(LIF),粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF),血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)作為觀察指標(biāo),為驗(yàn)證中藥的有效性,選取與卵子質(zhì)量相關(guān)的公認(rèn)的生長(zhǎng)分化因子-9(GDP-9),與子宮內(nèi)膜容受性相關(guān)的整合素avβ3作為觀察指標(biāo),研究分析調(diào)更益精湯改善卵巢儲(chǔ)備及子宮內(nèi)膜容受性的作用,初步探討其改善妊娠結(jié)局的機(jī)制。第一部分調(diào)更益精湯對(duì)IVF-ET中腎虛血瘀型卵巢低反應(yīng)患者卵巢儲(chǔ)備和中醫(yī)證候的影響研究目的:探討中藥調(diào)更益精湯對(duì)IVF-ET中腎虛血瘀型卵巢低反應(yīng)患者卵巢儲(chǔ)備的影響及對(duì)腎虛血瘀中醫(yī)證候的改善,從基礎(chǔ)狀態(tài)性激素、卵泡液相關(guān)細(xì)胞因子、獲卵數(shù)、受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率等方面探討調(diào)更益精湯對(duì)低反應(yīng)患者卵巢儲(chǔ)備功能的影響,從而為中醫(yī)藥參與輔助生殖技術(shù)中卵巢低反應(yīng)的治療提供有效的依據(jù)。研究方法:將上周期行微刺激方案促排卵后體外受精-胚胎移植失敗的卵巢低反應(yīng)患者共40例,隨機(jī)分為治療組及對(duì)照組,每組20例。兩組患者均采用枸櫞酸氯米氛(CC)+尿促性素(HMG)微刺激方案促排卵,治療組從上周期胚胎移植失敗月經(jīng)來(lái)潮第7天即口服中藥調(diào)更益精湯,共服用14天,連續(xù)治療3個(gè)月經(jīng)周期后,進(jìn)入下次微刺激促排卵周期,對(duì)照組則休息3個(gè)月后進(jìn)入下次微刺激促排卵周期。觀察治療組治療前后及治療組與對(duì)照組基礎(chǔ)狀態(tài)性激素水平、抗苗勒管激素(AMH)、竇卵泡數(shù)(AFC)、卵巢體積的變化;Elisa法檢測(cè)兩組患者取卵日卵泡液中GDP-9、TGF-β1、LIF、G-CSF、VEGF的表達(dá);治療組與對(duì)照組腎虛血瘀中醫(yī)證候的變化;治療組與對(duì)照組Gn用量、Gn天數(shù)、取卵日雌二醇(E2)、獲卵數(shù)、受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率比較。結(jié)果:1、兩組患者一般資料比較兩組患者年齡、不孕年限、體重指數(shù)、基礎(chǔ)狀態(tài)性激素比較,無(wú)顯著性差異(P>0.05),具有可比性。2、兩組患者基礎(chǔ)狀態(tài)性激素、竇卵泡數(shù)、卵巢體積的比較治療組治療前后及治療組與對(duì)照組基礎(chǔ)狀態(tài)促卵泡素(FSH)、促卵泡素/黃體生成素(FSH/LH)較前下降、AMH較治療前上升(P<0.01),E2水平下降,竇卵泡數(shù)較前增多,治療前后有顯著性差異(P<0.05),LH、卵巢體積治療組與對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。3、兩組患者腎虛血瘀證侯比較治療組療后腎虛血瘀證候較前明顯減輕(P<0.05),且證候積分差值治療組與對(duì)照組有顯著性差異(P<0.05)。4、兩組患者取卵日卵泡液中相關(guān)細(xì)胞因子水平比較卵泡液中GDF-9、TGF-β1、VEGF水平,治療組明顯高于對(duì)照組,有顯著性差異(P<0.01),卵泡液中G-CSF,LIF水平,治療組與對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。5、兩組患者Gn用量、Gn用藥天數(shù)、取卵日E2水平、獲卵數(shù)、受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率的比較治療組與對(duì)照組在Gn用藥天數(shù)上無(wú)顯著性差異(P>0.05),Gn用量治療組明顯低于對(duì)照組(P<0.05),取卵日E2水平、獲卵數(shù)、受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率治療組明顯高于對(duì)照組(P<0.01)。結(jié)論:調(diào)更益精湯可以改善卵巢低反應(yīng)患者基礎(chǔ)狀態(tài)性激素水平,降低基礎(chǔ)狀態(tài)FSH、FSH/LH,E2水平,使AMH上升,竇卵泡數(shù)增多;同時(shí)可以提高卵巢低反應(yīng)患者取卵日卵泡液中GDF-9、TGF-β1、VEGF的水平,改善腎虛血瘀證候,從而提高獲卵數(shù)、受精率和優(yōu)質(zhì)胚胎率。第二部分調(diào)更益精湯對(duì)IVF-ET中腎虛血瘀型卵巢低反應(yīng)患者子宮內(nèi)膜容受性和妊娠結(jié)局的影響研究目的:探討調(diào)更益精湯對(duì)IVF-ET中腎虛血瘀型卵巢低反應(yīng)患者子宮內(nèi)膜容受性和妊娠結(jié)局的影響,從種植窗期子宮內(nèi)膜相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)、子宮內(nèi)膜厚度、血流指數(shù)等方面探討調(diào)更益精湯對(duì)子宮內(nèi)膜容受性的影響,從種植率、妊娠率等方面探討調(diào)更益精湯對(duì)妊娠結(jié)局的影響,并初步探討其可能作用機(jī)制。研究方法:將上周期行微刺激方案促排卵后體外受精-胚胎移植失敗的卵巢低反應(yīng)患者共40例,隨機(jī)分為治療組及對(duì)照組,每組20例。兩組患者均采用枸櫞酸氯米氛(CC)+尿促性素(HMG)微刺激促排卵方案,治療組從上周期胚胎移植失敗月經(jīng)來(lái)潮第7天即口服中藥調(diào)更益精湯,共服用14天,連續(xù)治療3個(gè)月經(jīng)周期后,進(jìn)入下次微刺激促排卵周期,對(duì)照組則休息3個(gè)月后進(jìn)入下次微刺激促排卵周期。于微刺激方案取卵后5天,取少許子宮內(nèi)膜組織,采用Westernblot法檢測(cè)兩組患者種植窗期子宮內(nèi)膜整合素avβ3、TGF-β1、LIF、G-CSF、VEGF蛋白的表達(dá)。比較治療組與對(duì)照組人絨毛膜促性腺激素(HCG)注射日子宮內(nèi)膜厚度、A型子宮內(nèi)膜比例、血流阻力和搏動(dòng)指數(shù)、種植率、妊娠率的不同。結(jié)果:1、兩組患者一般資料比較兩組患者年齡、不孕年限、體重指數(shù)、基礎(chǔ)狀態(tài)性激素比較,無(wú)顯著性差異(P>0.05),具有可比性。2、兩組患者種植窗期子宮內(nèi)膜相對(duì)值灰度值比較治療組與對(duì)照組種植窗期子宮內(nèi)膜相對(duì)值灰度值,整合素avβ3、TGF-β1、VEGF蛋白表達(dá),治療組明顯高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),LIF、G-CSF蛋白表達(dá),治療組與對(duì)照組則無(wú)顯著性差異(P>0.05)。3、兩組患者HCG日A型子宮內(nèi)膜比例、子宮內(nèi)膜厚度、子宮內(nèi)膜血流指數(shù)的比較治療組與對(duì)照組HCG日A型子宮內(nèi)膜比例,治療組明顯高于對(duì)照組(P<0.05),內(nèi)膜血流阻力指數(shù)(RI)、搏動(dòng)指數(shù)(PI)治療組明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。兩組患者HCG日子宮內(nèi)膜厚度,差異無(wú)顯著性(P>0.05)。4、兩組患者妊娠率的比較治療組臨床妊娠率明顯高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),種植率兩組患者差異無(wú)顯著性。(P>0.05)。結(jié)論:1、調(diào)更益精湯可以改善卵巢低反應(yīng)患者的子宮內(nèi)膜容受性,提高種植窗期子宮內(nèi)膜整合素avβ3、TGF-β1、VEGF蛋白的表達(dá),改善卵巢低反應(yīng)患者子宮內(nèi)膜形態(tài),降低子宮內(nèi)膜的血流阻力指數(shù)和搏動(dòng)指數(shù),改善