課時跟蹤檢測（三十八） 基因工程

PAGE第9頁共9頁課時跟蹤檢測（三十八）基因工程一、對點練小題，落實主干知識1．為了增加牡丹花色類型，研究者從其他植物中克隆出花色基因C(圖1)，擬將其與質(zhì)粒(圖2)重組，再借助農(nóng)桿菌導(dǎo)入菊花中。下列操作與實驗?zāi)康牟环氖?)A．用限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ和DNA連接酶構(gòu)建重組質(zhì)粒B．用含C基因的農(nóng)桿菌侵染牡丹愈傷組織，將C基因?qū)爰?xì)胞C．在培養(yǎng)基中添加卡那霉素，篩選被轉(zhuǎn)化的菊花細(xì)胞D．用分子雜交方法檢測C基因是否整合到菊花染色體上解析：選C目的基因C和質(zhì)粒都有可被EcoRⅠ切割的酶切位點，另外需要DNA連接酶將切好的目的基因和質(zhì)粒連接起來；愈傷組織細(xì)胞的全能性較高，是理想的植物受體細(xì)胞，將目的基因?qū)胫参锸荏w細(xì)胞的方法通常為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；質(zhì)粒中含有潮霉素抗性基因，因此選擇培養(yǎng)基中應(yīng)該加入潮霉素；使用分子雜交方法可檢測目的基因是否整合到受體染色體上。2．限制酶MunⅠ和限制酶EcoRⅠ的識別序列及其切割位點分別如下：—C↓AATTG—和—G↓AATTC—如圖表示某一目的基因片段與質(zhì)粒拼接形成重組質(zhì)粒的過程，相關(guān)敘述錯誤的是()A．用限制酶EcoRⅠ切割目的基因，同時用限制酶MunⅠ切割質(zhì)粒B．兩種限制酶切割后形成的黏性末端的堿基可以互補配對C．限制酶能使特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開D．將重組質(zhì)粒同時用2種限制酶切割則會形成2種DNA片段解析：選D由圖可知，目的基因兩側(cè)都是限制酶EcoRⅠ的切割位點，因此應(yīng)選用限制酶EcoRⅠ切割含有目的基因的外源DNA分子；質(zhì)粒中含有限制酶MunⅠ和EcoRⅠ的切割位點，但EcoRⅠ的切割位點位于標(biāo)記基因中，用其切割會破壞標(biāo)記基因，因此為保證重組質(zhì)粒表達(dá)載體的準(zhǔn)確構(gòu)建，應(yīng)選用限制酶MunⅠ切割質(zhì)粒。圖中兩種限制酶切割后形成的黏性末端的堿基可以互補配對。限制酶的作用是使DNA分子中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。將重組質(zhì)粒同時用2種限制酶切割，則會形成3種DNA片段。3．(2021·南通模擬)下列關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實驗的敘述，錯誤的是()A．雞的紅細(xì)胞和菜花均可作為提取DNA的材料，但處理方法有所不同B．在切碎的菜花中加入一定量的洗滌劑和食鹽，充分研磨，過濾收集濾液C．將NaCl溶液濃度調(diào)至2mol/L，用單層濾紙過濾獲取析出物D．利用某些蛋白質(zhì)在酒精中的溶解度大于DNA在酒精中的溶解度的原理，可以提純DNA解析：選C雞的紅細(xì)胞和菜花均可作為提取DNA的材料，處理方法有所不同，動物細(xì)胞只要加蒸餾水使細(xì)胞吸水破裂，植物細(xì)胞需要加洗滌劑和食鹽研磨；在切碎的菜花中加入一定量的洗滌劑和食鹽，充分研磨，過濾收集濾液；將NaCl溶液濃度調(diào)至2mol/L，用多層紗布過濾獲取濾液；利用某些蛋白質(zhì)在酒精中的溶解度大于DNA在酒精中的溶解度的原理，可以提純DNA。4．如圖為科學(xué)家利用耐鹽堿植物中的耐鹽基因培育耐鹽水稻新品系的過程。下列相關(guān)說法錯誤的是()A．階段Ⅰ、Ⅱ應(yīng)用的技術(shù)分別是DNA重組技術(shù)、植物組織培養(yǎng)技術(shù)B．對耐鹽基因表達(dá)產(chǎn)物的檢測可采用抗原抗體雜交技術(shù)C．可用抗生素抗性基因作為探針來檢測受體細(xì)胞中是否進入了目的基因D．可用分子雜交技術(shù)檢測受體細(xì)胞中的耐鹽基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA解析：選C階段Ⅰ將目的基因?qū)胨炯?xì)胞需要采用DNA重組技術(shù)，階段Ⅱ?qū)⑺炯?xì)胞培養(yǎng)成完整植株需要采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，A正確；耐鹽基因表達(dá)的產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，可用抗原抗體雜交技術(shù)檢測，B正確；可以用含有耐鹽基因的DNA探針檢測細(xì)胞中是否插入了目的基因，而不是用抗生素抗性基因作為探針來檢測，C錯誤；可用分子雜交技術(shù)檢測受體細(xì)胞中的耐鹽基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA，D正確。5．Bar基因存在于青麻、黑麥草等生物體內(nèi)，其編碼的酶可使除草劑草丁膦失去毒害作用。培育轉(zhuǎn)Bar基因大豆，對于控制豆田雜草有重要意義。為了把Bar基因?qū)氪蠖辜?xì)胞，需將Bar基因插入pUcl8質(zhì)粒中構(gòu)建中間表達(dá)載體，然后與Ti質(zhì)粒重組為重組表達(dá)載體系統(tǒng)。如圖為pUcl8質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)示意圖，回答下列問題：(1)不能利用黑麥草與大豆進行有性雜交的方法讓大豆獲得Bar基因，原因是________________________________________________________________________。(2)構(gòu)建中間表達(dá)載體時，為了便于篩選出含有Bar基因的重組質(zhì)粒，需將Bar基因插入到pUcl8質(zhì)粒的________中形成重組質(zhì)粒并導(dǎo)入大腸桿菌，然后在添加________________的培養(yǎng)基上培養(yǎng)大腸桿菌，菌落呈白色的即為含中間表達(dá)載體的大腸桿菌。(3)中間表達(dá)載體需插入到Ti質(zhì)粒的________中才能將Bar基因整合到植物細(xì)胞的染色體DNA上，原因是___________________________________________________________________________________________________________________________________。(4)可通過____________法直接將重組表達(dá)載體導(dǎo)入大豆細(xì)胞的原生質(zhì)體。導(dǎo)入Bar基因的原生質(zhì)體需________________，經(jīng)脫分化形成____________，再進一步分化才能獲得轉(zhuǎn)Bar基因大豆植株。解析：(1)由于黑麥草與大豆之間存在生殖隔離，因此不能利用黑麥草與大豆進行有性雜交的方法讓大豆獲得Bar基因。(2)根據(jù)圖中信息可知，lacZ基因編碼β-半乳糖苷酶，β-半乳糖苷酶可以將培養(yǎng)基中的X-gal水解，使菌落呈藍(lán)色，否則菌落呈白色。因此，構(gòu)建中間表達(dá)載體時，為了便于篩選出含有Bar基因的重組質(zhì)粒，需將Bar基因插入到pUcl8質(zhì)粒的lacZ中形成重組質(zhì)粒并導(dǎo)入大腸桿菌，然后在添加氨芐青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上培養(yǎng)大腸桿菌，菌落呈白色的即為含中間表達(dá)載體的大腸桿菌。(3)Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上。根據(jù)這一特點，如果將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以把目的基因整合到植物細(xì)胞中染色體的DNA上。(4)可通過顯微注射法直接將重組表達(dá)載體導(dǎo)入大豆細(xì)胞的原生質(zhì)體。導(dǎo)入Bar基因的原生質(zhì)體需再生出細(xì)胞壁，經(jīng)脫分化形成愈傷組織，再進一步分化才能獲得轉(zhuǎn)Bar基因大豆植株。答案：(1)黑麥草與大豆之間存在生殖隔離(2)lacZ氨芐青霉素和X-gal(3)T-DNAT-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上(4)顯微注射再生出細(xì)胞壁愈傷組織6．如圖1所示為用PvuⅠ限制酶切下的某目的基因及其上DNA片段示意圖；圖2所示為三種質(zhì)粒示意圖，圖中AmpR為氨芐青霉素抗性基因，Tetr為四環(huán)素抗性基因，EcoRⅠ、PvuⅠ等為限制酶及其切割的位點。復(fù)制原點是在基因組上復(fù)制起始的一段序列，是指質(zhì)粒在受體細(xì)胞中復(fù)制時的起點。請回答：(1)組成片段D的基本骨架與細(xì)胞膜的基本骨架相同的元素是____________。(2)圖2中質(zhì)粒A、質(zhì)粒C能否作為目的基因載體最理想的質(zhì)粒？________(填“能”或“否”)，請說明理由。_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)重組質(zhì)粒成功導(dǎo)入受體細(xì)胞的概率一般僅為10－7。用質(zhì)粒B構(gòu)建重組質(zhì)粒，為了篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，在導(dǎo)入完成后，將所有大腸桿菌分別在含有四環(huán)素和氨芐青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，大腸桿菌在兩種培養(yǎng)基的生長狀況不可能的是_________________，可能性最大的是________________________________________________。(4)若想在山羊的乳汁中收獲上述目的基因的表達(dá)產(chǎn)物，則需要將重組質(zhì)粒導(dǎo)入至山羊的________(細(xì)胞)中。解析：(1)脫氧核糖和磷酸交替連接，構(gòu)成DNA片段(D)的基本骨架，脫氧核糖由C、H、O三種元素組成，組成磷酸的元素是H、P、O；磷脂雙分子層構(gòu)成細(xì)胞膜的基本骨架，磷脂分子是由C、H、O、N、P組成，可見組成片段D的基本骨架與細(xì)胞膜的基本骨架相同的元素是C、H、O、P。(2)分析圖2可知，質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因，質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時，復(fù)制原點會被限制酶切割，進而影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制，所以質(zhì)粒A、質(zhì)粒C均不能作為目的基因載體最理想的質(zhì)粒。(3)用質(zhì)粒B構(gòu)建重組質(zhì)粒，當(dāng)用和目的基因相同的限制酶(PvuⅠ)切割時，Tetr(四環(huán)素抗性基因)遭到破壞，而AmpR(氨芐青霉素抗性基因)結(jié)構(gòu)完好，因此在重組質(zhì)粒導(dǎo)入完成后，將所有大腸桿菌分別在含有四環(huán)素和氨芐青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，大腸桿菌在兩種培養(yǎng)基的生長狀況不可能的是在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上能正常生長，在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上不能正常生長。因重組質(zhì)粒成功導(dǎo)入受體細(xì)胞的概率一般僅為10－7，所以可能性最大的是在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基和含四環(huán)素的培養(yǎng)基上都不能正常生長。(4)若想在山羊的乳汁中收獲上述目的基因的表達(dá)產(chǎn)物，則需要將重組質(zhì)粒導(dǎo)入山羊的受精卵中。答案：(1)C、H、O、P(2)否質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因，質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時，復(fù)制原點會被限制酶切割，會影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制(3)在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上能正常生長，在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上不能正常生長在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基和含四環(huán)素的培養(yǎng)基上都不能正常生長(4)受精卵二、仿真練高考，注重答題規(guī)范7．已知鐮刀型細(xì)胞貧血癥是一種單基因遺傳病，患者的血紅蛋白分子β肽鏈第6位氨基酸谷氨酸被纈氨酸代替，導(dǎo)致功能異常；而人類是乙型肝炎病毒的唯一宿主，接種乙肝疫苗是預(yù)防乙肝病毒感染的最有效方法。乙型肝炎疫苗的研制先后經(jīng)歷了血源性疫苗和基因工程疫苗階段?；卮鹣铝袉栴}：(1)將正常的血紅蛋白基因?qū)牖颊叩墓撬柙煅杉?xì)胞中，可以合成正常的血紅蛋白達(dá)到治療的目的。此操作________(填“屬于”或“不屬于”)蛋白質(zhì)工程，理由是該操作________________________________。(2)用基因工程方法制備血紅蛋白時，可先提取早期紅細(xì)胞中的______，以其作為模板，在____酶的作用下反(逆)轉(zhuǎn)錄合成cDNA。cDNA與載體需在限制酶和__________酶的作用下，構(gòu)建基因表達(dá)載體，導(dǎo)入受體菌后進行表達(dá)。(3)如圖為“乙肝基因工程疫苗”的生產(chǎn)和使用過程，質(zhì)粒中l(wèi)acZ基因可使細(xì)菌利用加入培養(yǎng)基的物質(zhì)X-gal，從而使菌落顯現(xiàn)出藍(lán)色，若無該基因，菌落則成白色。圖中過程①有兩種限制酶選擇方案，它們分別是____________________或______________________。(4)獲取目的基因的方法除了圖中用酶切的方法從細(xì)胞中分離以外，還可以通過______________________________來獲得。據(jù)圖可知，該目的基因的具體功能是_________________________________。(5)為了篩選含目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌，可在培養(yǎng)大腸桿菌的通用培養(yǎng)基中加入___________________，培養(yǎng)一段時間挑選出________色的菌落進一步培養(yǎng)獲得大量目的菌。(6)用基因工程疫苗接種比血源性疫苗更安全，試從疫苗的結(jié)構(gòu)特點解釋原因：________________________________________________________________________________________________________________________________________________。解析：(1)蛋白質(zhì)工程通過基因修飾或基因合成，實現(xiàn)對現(xiàn)有蛋白質(zhì)的改造或制造新蛋白質(zhì)，由于該操作中沒有對蛋白質(zhì)進行改造或基因進行修飾，因此不屬于蛋白質(zhì)工程。(2)因為血紅蛋白基因只在早期紅細(xì)胞中表達(dá)，所以可從其中提取mRNA，以mRNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下反(逆)轉(zhuǎn)錄合成cDNA。構(gòu)建基因表達(dá)載體需要限制酶和DNA連接酶協(xié)助。(3)根據(jù)圖解可知，含有目的基因的外源DNA和載體上都有限制酶BamHⅠ、EcoRⅠ和EcoRV的識別序列和切割位點，用EcoRV切割會破壞目的基因，因此圖中過程①有兩種限制酶選擇方案，它們分別是只用BamHⅠ或同時用EcoRⅠ和BamHⅠ。(4)獲取目的基因的方法有：從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。根據(jù)圖中④目的基因最終產(chǎn)生乙肝病毒外殼進行接種，說明該目的基因具體功能是指導(dǎo)合成乙肝病毒蛋白。(5)用限制酶BamHⅠ切割時破壞了lacZ基因，但沒有破壞青霉素抗性基因，因此為了篩選含目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌，可在培養(yǎng)大腸桿菌的通用培養(yǎng)基中加入青霉素和X-gal，根據(jù)題干信息“質(zhì)粒中l(wèi)acZ基因可使細(xì)菌利用加入培養(yǎng)基的物質(zhì)X-gal，從而使菌落顯現(xiàn)出藍(lán)色，若無該基因，菌落則成白色”可知，培養(yǎng)一段時間挑選出白色的菌落進一步培養(yǎng)獲得大量目的菌。(6)用基因工程疫苗接種比血源性疫苗更安全，原因是血源性疫苗需滅活，滅活不成功則會導(dǎo)致接種者患乙肝，而基因工程不需要。答案：(1)不屬于沒有對現(xiàn)有的蛋白質(zhì)進行改造(或沒有對基因進行修飾)(2)mRNA(或RNA)逆轉(zhuǎn)錄DNA連接(3)只用BamHⅠ或同時用EcoRⅠ和BamHⅠ(4)人工合成(或PCR技術(shù)擴增)指導(dǎo)乙肝病毒蛋白質(zhì)外殼的合成(5)青霉素和X-gal白(6)血源性疫苗需滅活，滅活不成功，則會導(dǎo)致接種者患乙肝，而基因工程不需要(或基因工程疫苗不會出現(xiàn)病毒增殖和感染)8．甜蛋白是一種高甜度的特殊蛋白質(zhì)。為了改善黃瓜的品質(zhì)，科學(xué)家采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將一種甜蛋白基因成功導(dǎo)入黃瓜細(xì)胞，得到了轉(zhuǎn)基因植株?；卮鹣铝袉栴}：(1)通常，基因工程操作主要有4個步驟，即目的基因獲取、重組表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測與鑒定。因此，基因工程的含義可概括為________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)若在轉(zhuǎn)基因黃瓜中檢測到這種甜蛋白，則表明該重組質(zhì)粒中____________已轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞中且能夠表達(dá)；用該轉(zhuǎn)基因黃瓜的某一植株與一株非轉(zhuǎn)基因植株雜交，發(fā)現(xiàn)子代中含甜蛋白個體數(shù)與不含甜蛋白個體數(shù)之比為1∶1，則說明甜蛋白基因已經(jīng)整合到________________(填“核基因組”“線粒體基因組”或“葉綠體基因組”)中。(3)用農(nóng)桿菌感染時，應(yīng)優(yōu)先選用黃瓜________(填“受傷的”或“完好的”)葉片與含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌共同培養(yǎng)，選用這種葉片的理由是__________________________________。(4)基因工程中可以通過PCR技術(shù)擴增目的基因。生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是______。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是______________。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的________。目前在PCR反應(yīng)中使用Taq酶而不使用大腸桿菌DNA聚合酶的主要原因是_________________________________________________________________________________________________________________________________________。解析：(1)通常，基因工程操作主要有4個步驟，即目的基因獲取、重組表達(dá)載體的構(gòu)建、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測與鑒定。因此，基因工程的含義可概括為按照人們的愿望進行嚴(yán)格的設(shè)計，并通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，從而創(chuàng)造出符合人們需要的新生物類型和生物產(chǎn)品。(2)若在轉(zhuǎn)基因黃瓜中檢測到這種甜蛋白，則表明該重組質(zhì)粒中甜蛋白基因已轉(zhuǎn)移到植物細(xì)胞中且能夠表達(dá)；用該轉(zhuǎn)基因黃瓜的某一植株與一株非轉(zhuǎn)基因植株雜交，發(fā)現(xiàn)子代中含甜蛋白個體數(shù)與不含甜蛋白個體數(shù)之比為1∶1，則說明甜蛋白基因已經(jīng)整合到核基因組中。(3)用農(nóng)桿菌感染時，應(yīng)優(yōu)先選用黃瓜受傷的葉片與含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌共同培養(yǎng)，理由是葉片傷口處的細(xì)胞釋放出大量酚類物質(zhì)，可吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞。(4)細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，通過解旋酶解開DNA雙鏈。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，通過高溫(90～95℃)使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的氫鍵。大腸桿菌DNA聚合酶不耐高溫，在高溫下會失活，而PCR反應(yīng)體系中加入的DNA聚合酶需耐高溫，故在PCR反應(yīng)中要用能耐高溫的Taq酶。答案：(1)按照人們的愿望進行嚴(yán)格的設(shè)計，并通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，從而創(chuàng)造出符合人們需要的新生物類型和生物產(chǎn)品(2)甜蛋白基因核基因組(3)受傷的葉片傷口處的細(xì)胞釋放出大量酚類物質(zhì)，可吸引農(nóng)桿菌移向這些細(xì)胞(4)解旋酶加熱至90～95℃氫鍵Taq酶熱穩(wěn)定性高，而大腸桿菌DNA聚合酶在高溫下會失活9．(2021·濱州一模)基因工程的第一步是篩選獲取目的基因，利用PCR技術(shù)獲取目的基因是一種常用的手段。圖示某DNA分子經(jīng)酶切后，DNA片段自身環(huán)化并利用PCR技術(shù)擴增的部分過程。請回答下列問題：(1)PCR與生物體內(nèi)DNA復(fù)制過程不同，解旋時不需要________催化，而是通過______________實現(xiàn)的，因此PCR技術(shù)使用的DNA聚合酶必須是________________的。(2)如果在某基因組中定位了一個目的基因X，其堿基序列未知，但已知X臨近區(qū)域的一段DNA序列，此時可利用圖示方法進行目的基因的篩選和擴增。作用于圖示多個酶切點的限制酶種類應(yīng)________(填“相同”或“不同”)。操作時根據(jù)圖中的________設(shè)計引物，將含有目的基因的DNA片段克隆出來。為便于目的基因與載體結(jié)合，可在________添加特定的限制酶識別序列。(3)實踐中也常用RT-PCR技術(shù)擴增目的基因，這種技術(shù)是以RNA為模板。若利用RT-PCR技術(shù)擴增胰島素基因，應(yīng)選擇________細(xì)胞提取RNA。解析：(1)PCR與體內(nèi)DNA復(fù)制的不同之處主要表現(xiàn)在溫度環(huán)境的不同，在PCR中先用90～95℃高溫處理的目的是使DNA變性(使DNA的兩條鏈解開)，而這一過程中在細(xì)胞內(nèi)是通過解旋酶的催化實現(xiàn)的。所以PCR技術(shù)解旋不需要解旋酶，通過90～95℃高溫處理來實現(xiàn)。PCR反應(yīng)包含多次循環(huán)，每次循環(huán)包括變性、復(fù)性和延伸，PCR技術(shù)在較高溫度下進行，因此需要耐高溫(耐熱或熱穩(wěn)定)的DNA聚合酶。(2)根據(jù)圖示，用PCR技術(shù)擴增X基因時，酶切后有自身環(huán)化現(xiàn)象，說明酶切后形成的末端堿基序列相同，所以作用于圖示多個酶切點的限制酶種類應(yīng)該相同。利用PCR技術(shù)擴增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物。題中目的基因X堿基序列未知，X臨近區(qū)域的一段DNA序列已知。操作時需要根據(jù)圖中已知序列的一段DNA序列設(shè)計引物。為了便于擴增后的X基因與質(zhì)粒連接，常在兩條引物上設(shè)計加入特定的限制酶識別序列，主要目的是使X基因能定向插入表達(dá)載體。(3)RTPCR是以mRNA作為模板擴增得到DNA的技術(shù)。若利用RT-PCR技術(shù)擴增胰島素基因，需要在胰島B細(xì)胞中提取mRNA，因為胰島素基因只在胰島B細(xì)胞中表達(dá)。答案：(1)解旋酶90～95℃高溫處理耐高溫(耐熱或熱穩(wěn)定)(2)相同已知序列兩條引物(3)胰島B10．(2021·汕頭校級模擬)人體內(nèi)的t-PA蛋白能高效降解由纖維蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和腦血栓的急救藥。然而，為心?；颊咦⑸浯髣┝康幕蚬こ蘴-PA會誘發(fā)顱內(nèi)出血，其原因在于t-PA與纖維蛋白結(jié)合的特異性不高。研究證實，將t-PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸，能顯著降低出血副作用。據(jù)此，先對天然的t-PA基因進行序列改造，然后再采取傳統(tǒng)的基因工程方法表達(dá)該改造后的基因，可制造出性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白(注：如圖表示相關(guān)的目的基因、載體、限制酶識別序列和切割位點，pCLY11為質(zhì)粒，新霉素為抗生素)。請回答下列問題：(1)以上制造出性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白的過程被稱為____________工程。(2)已知人t-PA基因序列已測出