脂代謝檢驗級課件

脂代謝紊亂檢驗第十章異常？正常？血脂機體脂類代謝動脈粥樣硬化冠心病急性事件血脂：是血漿中脂類的總稱第一節(jié)概述甘油三酯(TG)

游離膽固醇(FC)膽固醇酯（CE)總膽固醇(TC)磷脂(PL)

游離脂肪酸(FFA)血脂(血漿脂類)

血漿脂蛋白〔Lp〕：血脂+載脂蛋白脂蛋白結(jié)構(gòu)示意圖載脂蛋白載脂蛋白載脂蛋白磷脂游離膽固醇非極性脂內(nèi)核膽固醇酯甘油三酯此種結(jié)構(gòu)形式可使脂蛋白顆粒穩(wěn)定、均勻地分散于血漿。并可與酶及細(xì)胞外表的受體接觸，在脂蛋白代謝中起關(guān)鍵作用。離心法電泳法血漿脂蛋白的分類1、超速離心法乳糜微粒〔CM〕極低密度脂蛋白〔VLDL〕中間密度脂蛋白〔IDL〕低密度脂蛋白〔LDL〕高密度脂蛋白〔HDL〕脂蛋白〔a〕〔Lp(a)〕依據(jù)血漿脂蛋白分子中蛋白質(zhì)外表電荷多少的不同而別離。通常可分成：

2、電泳分別相當(dāng)于CM、LDL、VLDL、HDL，IDL也有β移動度，在IDL異常時可顯現(xiàn)寬β帶。CM、β-LP、pre-β-LP、α-LP四條區(qū)帶人血漿脂蛋白主要特征

CMVLDLIDLLDLHDLLp(a)電泳位置原點前

-和前之間

-

-前

-主要脂質(zhì)外源性TG內(nèi)源性TG內(nèi)源性TG、CECEPLCE、PL主要載脂蛋白B48B100/CⅡ/EB100/EB100AI/AⅡ(a)，B100合成部位小腸粘膜細(xì)胞肝細(xì)胞血漿血漿肝、腸、血漿肝細(xì)胞功能轉(zhuǎn)運外源性TG轉(zhuǎn)運內(nèi)源性TG轉(zhuǎn)運內(nèi)源性TG、CE轉(zhuǎn)運內(nèi)源性CE逆向轉(zhuǎn)運CELp(a)的核心局部由TG、PL、chol、CE等脂質(zhì)和ApoB100組成，結(jié)構(gòu)類似LDL。且含有特異性抗原成分——Apo(a)。Lp(a)中1分子ApoB通過二硫鍵與1分子Apo(a)共價結(jié)合。Apo(a)與PLG〔纖溶酶原〕具有高度同源性。肝臟是Apo(a)合成的主要場所。Lp(a)是動脈粥樣硬化的獨立危險因素，且與血栓形成密切相關(guān)。脂蛋白(a)[Lp(a)]10載脂蛋白定義：脂蛋白的蛋白局部稱為載脂蛋白(Apo)。種類：按1972年Alaupovic建議的命名方法，用英文字母順序編碼，分為ApoA、B、C、D、E、F、G、H、J等。由于氨基酸組成的差異，每一型又可分假設(shè)干亞型。ApoAApoBApoCApoE分類載體、運輸聯(lián)系、配體激活功能合成部位肝小腸受體LDL受體殘粒受體清道夫受體CMVLDLIDLLDLHDLLp(a)電泳位置原點前

-和前之間

-

-前

-主要脂質(zhì)外源性TG內(nèi)源性TG內(nèi)源性TG、CECEPLCE、PL主要載脂蛋白B48B100/CⅡ/EB100/EB100AI/AⅡ(a)，B100合成部位小腸粘膜細(xì)胞肝細(xì)胞血漿血漿肝、腸、血漿肝細(xì)胞功能轉(zhuǎn)運外源性TG轉(zhuǎn)運內(nèi)源性TG轉(zhuǎn)運內(nèi)源性TG、CE轉(zhuǎn)運內(nèi)源性CE逆向轉(zhuǎn)運CE載脂蛋白分子量合成場所脂蛋白中分布染色體定位生理功能ApoAI28KD肝臟、小腸HDL、CM1LCAT激活劑，識別HDL受體ApoAⅡ17KD肝臟、小腸HDL、CM1LCAT抑制；參可脂質(zhì)轉(zhuǎn)運ApoAIV26KD肝臟、小腸HDL、CM11參與膽固醇逆向轉(zhuǎn)運；輔助激活LPLApoB100550KD肝臟VLDL、IDL、LDL2參與VLDL合成與分解；識別LDL受體ApoB48275KD小腸CM2參與CM合成與分解；輸運外源性TGApoCI7KD肝臟CM、VLDL、HDL19激活LCAT及LPLApoCⅡ9KD肝臟CM、VLDL、HDL19激活LPLApoCⅢ9KD肝臟CM、VLDL、HDL11抑制與肝細(xì)胞受體結(jié)合ApoD33KD肝臟HDL3參與膽固醇逆向轉(zhuǎn)運ApoE34KD肝臟CM、VLDL、IDL、HDL19識別LDL受體及肝ApoE受體

Apo(a)280-800KD肝臟LDL、HDL6抑制纖溶酶原活性脂蛋白受體糖蛋白調(diào)節(jié)細(xì)胞外脂蛋白的水平LDL受體殘粒受體清道夫受體運送及去除LDL受體：識別ApoB100〔ApoE〕對維持細(xì)胞和全身膽固醇平衡起重要作用識別ApoE，去除血液循環(huán)中CM殘粒和β-VLDL殘粒巨噬細(xì)胞外表,介導(dǎo)修飾LDL從血液循環(huán)中去除膽固醇酯轉(zhuǎn)運蛋白〔CETP〕磷脂轉(zhuǎn)運蛋白〔PTP〕微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運蛋白〔MTP〕脂質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白------LTP血漿脂蛋白代謝

脂蛋白代謝以肝臟為中心

HDL代謝：膽固醇逆轉(zhuǎn)運(RCT)

VLDL-IDL-LDL代謝：由肝合成VLDL,再轉(zhuǎn)變?yōu)镮DL和LDL,并被肝或其它器官代謝的過程CM代謝：飲食攝入的Ch和TG在小腸中合成CM及其代謝過程LP代謝外源性代謝內(nèi)源性代謝血漿脂蛋白代謝總圖CMVLDLIDLLDLHDL電泳位置原點前

-和前之間

-

-主要脂質(zhì)外源性TG內(nèi)源性TG內(nèi)源性TG、CECEPL主要載脂蛋白B48B100/CⅡ/EB100/EB100AI/AⅡ合成部位小腸粘膜細(xì)胞肝細(xì)胞血漿血漿肝、腸、血漿功能轉(zhuǎn)運外源性TG轉(zhuǎn)運內(nèi)源性TG轉(zhuǎn)運內(nèi)源性TG、CE轉(zhuǎn)運內(nèi)源性CE逆向轉(zhuǎn)運CELp(a)是一類獨立的由肝臟合成的脂蛋白高脂血癥:TC或/和TG

高脂蛋白血癥:CM、VLDL、LDL、HDL

血漿脂蛋白代謝紊亂脂質(zhì)異常血癥高脂血癥的分類臨床表型是否繼發(fā)其他基因分型法Fredrickson血清(血漿)外觀：在4℃冰箱放置16-24h

后的血清外觀

(2)血脂濃度：血清TG、TC含量

(3)各種血漿脂蛋白升高程度依據(jù)表型血漿4℃過夜外觀TCTGCMVLDLLDL備注Ⅰ奶油上層,下層清↑→↑↑↑↑↑↑↓→易發(fā)胰腺炎Ⅱa透明↑↑→→→↑↑易發(fā)冠心?、騜透明↑↑↑↑→↑↑易發(fā)冠心?、竽逃蜕蠈?下層混濁↑↑↑↑↑↑↓易發(fā)冠心病Ⅳ混濁↑→↑↑→↑↑→易發(fā)冠心?、跄逃蜕蠈?下層混濁↑↑↑↑↑↑↓→易發(fā)胰腺炎1967年Fredrickson等首先提出高脂蛋白血癥的分類法〔5型〕。1970年WHO進行局部修改，將其中Ⅱ型分為Ⅱa和Ⅱb兩型。Ⅰ型高脂蛋白血癥Ⅱa型高脂蛋白血癥Ⅱb型高脂蛋白血癥Ⅲ型高脂蛋白血癥Ⅳ型高脂蛋白血癥Ⅴ型高脂蛋白血癥①4℃靜置過夜，外表奶油狀，下層澄清②血清TG↑↑，血清TC正?；蜉p度↑③血清脂蛋白電泳，CM↑↑Ⅰ型高脂蛋白血癥家族性高乳糜微粒血癥脂蛋白酶缺乏癥生化特征基因突變LPLCMⅡa高脂蛋白血癥高β-脂蛋白血癥高膽固醇血癥生化特征①4℃冷置試驗血漿外觀澄清②血清TC↑↑尤其LDL↑↑TG正常③血清脂蛋白電泳β-LP↑↑LDLR缺乏或異常此型臨床常見Ⅱb型高脂蛋白血癥生化特征①4℃冷置試驗血清外觀澄清或微混②血清TC↑，TG↑VLDL和LDL均↑

③血清脂蛋白電泳β-LP↑，preβ-LP↑

多基因突變LPLLCAT此型臨床很常見Ⅲ型高脂蛋白血癥寬β-脂蛋白血癥①4℃冷置試驗，血清外觀混濁可見一模糊奶油樣薄膜。②血清TC，TG。③血清脂蛋白電泳，β-LP↑，preβ-LP↑融合形成寬β區(qū)帶。生化特征ApoE異常VLDL轉(zhuǎn)化和去除缺陷Ⅳ型高脂蛋白血癥①4℃冷置試驗，血清外觀可以是澄清也可呈混濁。②血清TG↑↑

，TC正常或稍↑，VLDL↑

③血清脂蛋白電泳，preβ-LP↑

內(nèi)源性高三脂酰甘油血癥生化特征臨床表現(xiàn)，多見于中青年，較常見Ⅴ型高脂蛋白血癥混合性高三酰甘油血癥①4℃冷置試驗，血清上層為奶油狀，下層混濁。②血漿中TG，TC↑，VLDL。③血清脂蛋白電泳，CM，preβ-LP↑。內(nèi)源性和外源性TG去除功能缺陷生化特征動脈粥樣硬化(AS)是指動脈內(nèi)膜因脂質(zhì)、血液成分的沉積、平滑肌細(xì)胞及膠原纖維增生，并伴有不同程度壞死及鈣化等一類慢性進行性的病理改變。最終導(dǎo)致血管壁呈增厚、狹窄，使某些臟器(尤其是心、腦)供血缺乏而損傷，甚至危及生命。高血壓年齡冠心病家族史血脂紊亂吸煙糖尿病不可改變的可改變的NCEP

Circulation1994;89:1329–1445.EurHeartJ1994;15:1300–1331.WoodDetal.

EurHeartJ1998;19:1434–1503.冠心病冠心病的主要危險因素AS主要的危險因素①高脂血癥〔高脂蛋白血癥〕②高血壓③吸煙④性別⑤遺傳因素⑥內(nèi)分泌因素高膽固醇血癥引起動脈粥樣硬化的脂蛋白CM顆粒大，一般不致AS,但易誘發(fā)胰腺炎LDL相對較小,是首要的致AS性脂蛋白VLDL升高已被確認(rèn)為CHD的危險因子。IDL具有致AS作用LP〔a)As的獨立危險因子。動脈粥樣硬化HDL降低第二節(jié)血脂、脂蛋白及載脂蛋白測定常規(guī)測定工程：TC、TG、HDL-C、LDL-C

分析前的準(zhǔn)備：受試者的準(zhǔn)備標(biāo)本采集合格的試劑校準(zhǔn)物的選用檢測方法選擇是否空腹采血體位血液濃縮抗凝劑標(biāo)本處理存儲條件生物學(xué)波動總膽固醇〔totalcholesterol，TC〕甘油三酯〔triglyceride，TG〕高密度脂蛋白-膽固醇〔highdenselipoproteincholesterol，HDL-C〕低密度脂蛋白-膽固醇〔lowdenselipoproteincholesterol，LDL-C〕載脂蛋白AⅠ〔apolipoproteinAⅠ，ApoAⅠ〕載脂蛋白B〔apolipoproteinB，ApoB〕Apo〔a〕臨床血脂分析工程TC升高：Ⅱb型、Ⅲ型空腹血清清澈（TG正常）（TG升高）測定TCTC正常:血脂正常TC升高：Ⅱa混濁上層有“奶油”層（CM升高）下層清澈：Ⅰ型下層混濁：Ⅴ型均勻混濁（VLDL升高）TC正常：Ⅳ型測定TC4℃過夜（VLDL↑）（VLDL正常）一、血清〔漿〕靜置試驗二、血清〔漿〕總膽固醇測定★COD-PAP法CHECODPOD膽固醇酯+H2O膽固醇＋游離脂肪酸膽固醇＋O2△4-膽甾烯酮＋H2O22H2O2＋4-AAP＋酚醌亞胺〔紅色化合物〕＋4H2O方法學(xué)評價簡便,快速,無腐蝕性,高，好，寬CE水解不全，CHE活性受影響，易受干擾常規(guī)方法三、血清〔漿〕三酰甘油測定檢測方法同位素稀釋-質(zhì)譜法化學(xué)法★酶法〔GPO-PAP〕＊磷酸甘油氧化酶法乳酸脫氫酶法甘油氧化酶法化學(xué)法1.抽提2.皂化3.氧化4.顯色變色酸顯色法乙酰丙酮顯色法1、磷酸甘油氧化酶法GPO-PAPLPL三酰甘油+H2O甘油＋3-脂肪酸甘油＋ATP

3-磷酸甘油＋ADP3-磷酸甘油＋O2+2H2O磷酸二羥丙酮+2H2O2H2O2＋4-AAP＋4-氯酚苯醌亞胺＋2H2O+HCLGK,Mg2+PODGPO甘油＋ATP

3-磷酸甘油＋ADP3-磷酸甘油＋O2

磷酸二羥丙酮+H2O2H2O2＋氧受體氧化的受體（不顯色）＋2H2OGKPODGPO第一步反響第二步反響本法酶試劑比較穩(wěn)定，靈敏度高，線性范圍較寬兩步法為中華醫(yī)學(xué)會檢驗分會推薦方法三酰甘油+H2O甘油＋3-脂肪酸甘油＋ATP

3-磷酸甘油＋ADP3-磷酸甘油＋O2+2H2O磷酸二羥丙酮+2H2O2H2O2＋4-AAP＋4-氯酚苯醌亞胺＋2H2O+HCLGK,Mg2+PODGPOLPL2．乳酸脫氫酶法【原理】LPL三酰甘油+H2O甘油＋3-脂肪酸甘油＋ATP

3-磷酸甘油＋ADPADP＋磷酸烯醇式丙酮酸

丙酮酸+ATP丙酮酸+NADHNAD+＋乳酸GK,Mg2+LDH丙酮酸激酶3．甘油氧化酶法第一步：FG+O2甘油醛+H2O2H2O2+EMAE無色物質(zhì)消除游離甘油的影響，3-5min后進行第二步反響：TG+3H2O甘油+3RCOOH甘油+O2甘油醛+H2O2H2O2+4-AAP+EMAE有色物質(zhì)EMAE作用與酚相似，是復(fù)原劑，但靈敏度比酚高。甘油氧化酶PODPODLPL甘油氧化酶血清甘油三酯一般隨年齡增加而升高，體重超過標(biāo)準(zhǔn)者往往偏高。適宜范圍：≤1.70mmol/L(150mg/dl)，升高：＞1.70mmol/L(150mg/dl)。升高：〔1〕原發(fā)性高TG血癥，包括家族性高TG血癥與家族性高脂〔蛋白〕血癥等。〔2〕繼發(fā)性高TG見于糖尿病糖原貯積癥、甲狀腺功能減退、腎病綜合征、妊娠、口服避孕藥等降低:甲亢、腎上腺皮質(zhì)功能減退和肝功能嚴(yán)重?fù)p傷。【參考區(qū)間】【臨床意義】四、血清〔漿〕脂蛋白測定高密度脂蛋白膽固醇測定參考方法:超速離心別離HDL，然后用化學(xué)法〔ALKB法〕或酶法測定其膽固醇含量，此法需特殊設(shè)備，而且不易常握。沉淀劑：肝素-錳、硫酸葡聚糖-鎂、聚乙二醇、磷鎢酸-鎂常規(guī)方法:HDL直接測定法抗體包裹法、酶修飾法、選擇性抑制法HDL-C適宜范圍：≥1.04mmol/L(40mg/dl),＜0.91mmol/L(35mg/dl)為減低。流行病學(xué)與臨床研究證明，HDL-C與冠心病發(fā)病呈負(fù)相關(guān)，HDL-C低于0.9mmol/L是冠心病危險因素。HDL-C大于1.55mmol/L被認(rèn)為是冠心病的“負(fù)〞危險因素。HDL-C下降還多見于腦血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高TG血癥往往伴以低HDL-C，肥胖者的HDL-C也多偏低。吸煙可使HDL-C下降，適量飲酒、長期體力勞動和運動會使HDL-C升高?！緟⒖贾怠俊九R床意義】低密度脂蛋白測定

1．Friedewald公式法LDL-C＝TC－HDL-C－TG/2.2〔以mmol/L為單位時〕〔血清中存在CM、TG>4.56時不適用〕2．聚乙烯硫酸鹽沉淀法本法并非對LDL-C作直接測定，而是用聚乙烯硫酸〔PVS〕選擇性沉淀血清中LDL，再以血清TC減去上清液〔含HDL與VLDL〕膽固醇即得LDL-C值。3．直接測定法:目前各類方法測定的LDL-C值都包括IDL和LP(a)的chol在內(nèi)≤3.12mmol/L,升高：≥3.64mmol/L【參考值】【臨床意義】LDL-C增高是動脈粥樣硬化發(fā)生開展的主要脂類危險因素。由于TC水平同時也受HDL-C水平的影響，所以最好以LDL-C代替TC作為冠心病危險因素指標(biāo)。脂蛋白(α)測定Lp(α)測定有兩類方法一