第十章甾體激素類藥物的分析課件

PPT文檔演模板第十章甾體激素類藥物的分析2023/10/8第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板激素（Hormone，荷爾蒙）是人體內(nèi)各種內(nèi)分泌腺所分泌的一種生物活性物質(zhì)。激素作用于特定的稱為靶器官的組織、細(xì)胞上而發(fā)揮作用。如果激素分泌出現(xiàn)平衡失調(diào)，可使人體發(fā)生病變，如甲亢、糖尿病等。第十章甾體激素類藥物的分析?A第十章甾體激素類藥物的分析?B?1?2?3?4?5?6?9101112?C?8

?14?7?D151618?13

?1719基本結(jié)構(gòu)概述甾體激素類藥物均具有環(huán)戊烷駢多

氫菲母核。甾體激素分類腎上腺皮質(zhì)激素性激素雌激素雄性激素蛋白同化激素孕激素第十章甾體激素類藥物的分析（一）腎上腺皮質(zhì)激素天然皮質(zhì)激素：氫化可的松母核有21個碳原子△4–3–酮基（紫外吸收）C17–醇酮基（還原性）第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板醋酸地塞米松結(jié)構(gòu)修飾曲安息龍地塞米松磷酸鈉第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板提高結(jié)構(gòu)穩(wěn)定 性增強(qiáng)抗炎作用△4–3–酮基（二）雄性激素和蛋白同化激素4位引入鹵素或19位去甲基或?qū)環(huán)結(jié)構(gòu)改造均明顯降低雄性作用，增加蛋白同化作用

天然雄性激素：睪酮母核有19個碳原子A環(huán)中有△4–3–酮基結(jié)構(gòu)第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板結(jié)構(gòu)修飾丙酸睪酮增加脂溶性，制成油注射劑可口服、延效第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板甲睪酮增加位阻，難代謝氧化，穩(wěn)定性增強(qiáng)可口服蛋白同化激素苯丙酸諾龍4-氯醋酸睪丸素母核有18或19個碳原子第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板（三）孕激素C17-α-甲酮基天然孕激素：黃體酮母核有21個碳原子口服被迅速破壞失效，只能肌注△4–3–酮基第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板結(jié)構(gòu)修飾醋酸甲地孕酮（孕酮類孕激素）炔諾酮（睪酮類孕激素）

?炔諾孕酮（睪酮類孕激素）口服、長效口服、長效，17-OH作成庚酸酯，注射一次可維持3個月第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板（四）雌激素天然的雌性激素：雌二醇母核有18個碳原子A環(huán)為苯環(huán)，C3位上有酚羥基，C17位上有β-羥基結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，口服無效第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板結(jié)構(gòu)修飾苯甲酸雌二醇乙炔基引入，使仲醇變叔醇，增加空間位阻，阻礙酶對藥物的氧化代謝，可口服炔雌醇17位羥基酯化，酯在體內(nèi)緩慢水解，延效戊酸雌二醇3位羥基酯化，酯在體內(nèi)緩慢

水解，延效可口服高效長效第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板人工合成代用品：非甾體化合物己烯雌二酚高效、長效第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板△4–3–酮C17–α–醇酮基C17–β–羥基C17–甲酮基A環(huán)為3–

OH苯環(huán)腎上腺皮質(zhì)激素++雄性與蛋白同化激素++雌性激素++孕激素++鑒別反應(yīng)UV、羰基試劑、氨基脲反應(yīng)還原性（堿性酒石酸酮、氨制AgNO3）可成酯與亞硝基鐵氰化鈉、間二硝基苯反應(yīng)UV、與重氮苯磺酸鹽反應(yīng)二、特殊官能團(tuán)與分析方法第二節(jié) 鑒別試驗一、物理常數(shù)的測定二、化學(xué)鑒別法三、制備衍生物測定熔點四、紫外分光光度法五、紅外分光光度六、薄層色譜法七、高效液相色譜法第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板第二節(jié) 鑒別試驗二、化學(xué)鑒別法（一）呈色反應(yīng)（1）與強(qiáng)酸的呈色反應(yīng)強(qiáng)酸：

H2SO4、H3PO4、HClO4、HCl原理：酮基先質(zhì)子化，形成正碳離子，再與

HSO4-作用呈色。第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板顯

色熒光加水稀釋氫化可的松棕黃色至紅色綠色黃色至橙黃色炔雌醇橙紅黃綠玫紅絮狀↓炔雌醚橙紅黃綠紅色↓潑尼松黃→橙—黃色漸變藍(lán)綠色潑尼松龍深紅—灰色絮狀↓地塞米松淡紅棕色—顏色消失苯甲酸雌二醇黃綠色藍(lán)色淡橙色第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板與硫酸顯色反應(yīng)(2)官能團(tuán)的呈色反應(yīng)1、C3–酮基和C20–酮基（1）與羰基試劑2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼反應(yīng)生成腙。（2）與羥胺或氨基脲分別生成具有一定熔點的肟或縮氨脲。第十章甾體激素類藥物的分析?+HCl黃色3，20-雙腙室溫下長時間加熱第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板結(jié)論：成腙反應(yīng)中C20–酮基受C18甲基的空間位阻影響，反應(yīng)較慢，需加熱或較長時間放置，才完成反應(yīng)。C11–酮基受C18、C19位甲基甲基的阻礙，不發(fā)生反應(yīng)。C3–酮基空間位阻最小，最易起反應(yīng)，室溫下先生成單腙。第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板2、C17–α–醇酮基的呈色反應(yīng)（還原性）適用：腎上腺皮質(zhì)激素。能與堿性酒石酸銅試液（斐林試液）、氨制

AgNO3試液（多倫試液）、四氮唑鹽反應(yīng)呈色。其中以四氮唑鹽的顯色反應(yīng)最為常用，不但可用作層析法的顯色劑，還可用于含量測定.第十章甾體激素類藥物的分析＋

2Cu2++

4OH-?+

Cu2O +

H2O橙紅色＋

2Ag++

2OH-+2Ag

+

CH3COOH黑色醋酸去氧皮質(zhì)酮第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板H2O?+

CH3COOH第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板?+?+?+OH-醋酸潑尼松深紅色的三苯甲鐕四氮唑鹽結(jié)論：反應(yīng)在堿性條件下（水解）進(jìn)行。三苯甲鐕于490nm處顯示最大吸收，可用比色法測含量。四氮唑鹽反應(yīng)還用于腎上腺皮質(zhì)激素類藥物中雜質(zhì)“有關(guān)物質(zhì)”檢查的顯色劑。第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板物。3.甲酮基的呈色反應(yīng)適用：具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類藥孕激素能與亞硝基鐵氰化鈉、間二硝基酚、芳香醛反應(yīng)呈色。（1）甲酮基：黃體酮其他甾體?黃體酮專屬性反應(yīng)。亞硝基鐵氰化鈉藍(lán)紫色淡橙色或不顯色第十章甾體激素類藥物的分析結(jié)論：與亞硝基鐵氰化鈉反應(yīng)稱為堿性硝普鈉反應(yīng)。在堿性條件下進(jìn)行。（2）亞甲基的反應(yīng)：硫酸普拉睪酮乙醇間二硝基苯氫氧化鈉紫紅色第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板4.酚羥基的呈色反應(yīng)適用：雌激素類藥物。能與重氮苯磺酸發(fā)生偶合反應(yīng)，生成紅色偶氮染料。苯甲酸雌二醇H+?+紅色第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板有機(jī)氟有機(jī)破壞有機(jī)氯硝酸—硝酸銀5、鹵元素的呈色反應(yīng)呈藍(lán)紫色茜素氟藍(lán)—硝酸亞鈰FˉClˉAgCl氯原子結(jié)合在母核環(huán)上第十章甾體激素類藥物的分析6、沉淀反應(yīng)（1）與堿性酒石酸銅（斐林試液）的沉淀反應(yīng)（2）氨制AgNO3（多倫試液）的沉淀反應(yīng)（3）與AgNO3的沉淀反應(yīng)適用：含炔基的甾體激素類藥物（炔雌醇、炔諾酮）。機(jī)理：?+?↓?+?HNO3NaOH滴定，電位法指示終點第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板（4）與HNO3-AgNO3的沉淀反應(yīng)適用：甾體激素類藥物C21位上有氯原子取代，如丙酸氯倍他索。機(jī)理：有機(jī)氯原子?水解加熱無機(jī)氯原子環(huán)上的氯原子?破壞結(jié)合在母核

?

氧瓶燃燒法

?

無機(jī)氯原子硝酸—硝酸銀AgCl第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板7、水解產(chǎn)物的反應(yīng)適用：本類藥物C3、C17或C21位上羥基的酯原理：一些甾體激素類藥物具有醋酸酯、戊酸酯及已酸酯的結(jié)構(gòu)，可先行水解，根據(jù)水解產(chǎn)物來鑒別。結(jié)果：醋酸酯水解后生成的醋酸可與乙醇反應(yīng)，生成有香氣醋酸乙酯。戊酸或己酸酯類水解后可生成有特臭的戊酸或己酸，進(jìn)行鑒別。第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板（二）酯的水解醇制KOH水解三、制備衍生物測熔點（一）酯的生成?+KOH丙酸睪丸素睪丸素m.p.為150℃~

156℃m.p.為201℃?+第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板（三）縮氨基脲的生成苯丙酸諾龍縮氨脲m.p.約182℃（分解）H2NCONHNH2炔諾酮HONH2炔諾酮肟m.p.約195℃（分解）醋酸潑尼?松苯丙酸諾龍（四）酮肟的生成第十章甾體激素類藥物的分析PPT文檔演模板（五）UV-ViS分光光度法240nm左右280nm左右?△４-3-酮

?苯環(huán)其他共軛結(jié)構(gòu)原理200-760nm有特征吸收。方法可規(guī)定最大吸收波長、A、吸收系數(shù)、A大/A小。第十章甾體激素類藥物的分析示例第十章甾體激素類藥物的分析曲安息龍丙酸倍氯米松?溶劑甲醇乙醇濃度20μg/ml20μg/ml結(jié)果判斷在238nm處有最大吸收在239nm處有最大吸收，A為0.57～0.60，在239nm與263nm

處的吸收度比值為2.25～2.45結(jié)構(gòu)特征：酚羥基C17

–OHC17

–乙炔基eg1:炔雌醇（六）IR法原料藥第十章甾體激素類藥物的分析-13300cm-1?ν1590cm-13610cm-1酚羥基3505cm醇羥基1615cm-第十章甾體激素類藥物的分析11505cm-1苯環(huán)的骨架振動eg2：黃體酮結(jié)構(gòu)特征：△４-3-酮C17-酮基第十章甾體激素類藥物的分析1700cm-1νC=O20位酮基1665cm-13位酮基1615cm-1870cm-第十章甾體激素類藥物的分析δ1C-H雙鍵七、TLC法八、HPLC應(yīng)用甾體激素類藥物原料與制劑的鑒別甾體激素類藥物原料與制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏）方法對照品法對照品法結(jié)果判斷要求供試品溶液所顯主斑點的顏色和位置與對照品溶液的主斑點相同要求在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對照品峰的tR一致第十章甾體激素類藥物的分析第三節(jié)第十章甾體激素類藥物的分析特殊雜質(zhì)檢查一、有關(guān)物質(zhì)的檢查雜質(zhì)來源：原料、中間體、異構(gòu)體、降解產(chǎn)物以及試劑和溶劑。其他甾體：有些雜質(zhì)與該甾體激素藥物結(jié)構(gòu)類似，也具有一定的藥理作用而又互不相同，因此在甾體激素類藥物的質(zhì)量控制中，“其他甾體”的限度檢查顯得很重要。檢查方法：（具有一定分離能力）1、TLC法（自身對照法）判定方法：規(guī)定雜質(zhì)斑點數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)斑點顏色eg：氫化可的松中其他甾體的檢查供試液：本品+氯仿-甲醇（9：1） 濃度：3.0mg/ml對照液：供試液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1）

60μg/ml層析：供試液對照液點樣、展開、斑點檢出。判斷：供試液如顯雜質(zhì)斑點，不得多于3個，其顏色與對照液的主斑點比較，不得更深。第十章甾體激素類藥物的分析≤圖A中峰1面積的四分之三2、HPLC法（自身對照法）判定方法：規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目規(guī)定雜質(zhì)峰面積第十章甾體激素類藥物的分析二、游離磷酸鹽的檢查雜質(zhì)來源：地塞米松磷酸鈉生產(chǎn)過程中，由磷酸酯化時殘存的過量磷酸鹽。方法：對照品比色法第十章甾體激素類藥物的分析

結(jié)果判斷：供試品溶液的吸光度不得大于對照溶液的吸光度。原理：供試液+鉬酸銨+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸鉬藍(lán)740nm三、有機(jī)溶劑殘留量的檢查eg：地塞米松磷酸鈉雜質(zhì)來源：地塞米松磷酸鈉生產(chǎn)中，使用大量甲醇和丙酮。方法：GC色譜法結(jié)果判斷：不得出現(xiàn)甲醇峰，甲醇含量≤0.3％丙酮規(guī)定不得過≤5.0%第十章甾體激素類藥物的分析氧瓶燃燒第十章甾體激素類藥物的分析四、硒的檢查雜質(zhì)來源：地塞米松、氟輕松和曲安奈得等甾體激素類藥物，在生產(chǎn)中使用二氧化硒(SeO2)脫氫工藝，藥物可能引入雜質(zhì)硒。方法：藥物二氨基萘比色法測定378nm結(jié)果判斷：供試品溶液的吸光度不得大于硒對照溶液的吸光度（0.005％～0.01％）

。五、雌酮六、乙炔基PPT文檔演模板第四節(jié)含量測定常用方法容量法比色法熒光法紫外分光光度法氣相色譜法高效液相色譜四氮唑鹽比色法異煙肼比色法鐵-酚試劑比色法第十章甾體激素類藥物的分析一、HPLC法

?USP、BP、JP均采用測定對象：甾體激素類藥物的原料和制劑。

方法：RP－HPLC（內(nèi)標(biāo)法）eg：黃體酮的含量測定第十章甾體激素類藥物的分析色譜條件：固定相??ODS，檢測波長254nm

流動相 甲醇-水（65:35）內(nèi)標(biāo)物 己烯雌酚系統(tǒng)適用性試驗：n>1000，R符合規(guī)定。測定樣品：黃體酮原料、注射液。定量方法：內(nèi)標(biāo)法 內(nèi)標(biāo)-1第十章甾體激素類藥物的分析二、UV-ViS分光光度法（一）UV分光光度法1、△４-3-酮

240nm（±）腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素2、苯環(huán)

280nm（±） 雌激素缺點：專屬性不強(qiáng)第十章甾體激素類藥物的分析示例：醋酸地塞米松片的含量均勻度檢查（1）配制供試液，取10片分別進(jìn)行測定測定：240nm計算第十章甾體激素類藥物的分析有色甲瓚四氮唑鹽?C?1?7

???α??醇酮基OH

-（二）比色法1、四氮唑鹽比色法（1）原理：腎上腺皮質(zhì)激素類C17-α－醇酮基強(qiáng)還原性。[H]氯化三苯四氮唑（TTC）三苯甲瓚↓深紅第十章甾體激素類藥物的分析藍(lán)四氮唑（BT）525nm第十章甾體激素類藥物的分析氫氧化四甲基銨供試液對照液?ATTC?2?5℃40～45′?暗（2）方法：對照品法第十章甾體激素類藥物的分析（3）影響因素A.

基團(tuán)對反應(yīng)速度的影響C11=

O＞C11－OHC21－OH未酯化＞C21-OH酯化B、溶劑和水分的影響以無水乙醇為溶劑，水含量大時，呈色減慢，不超過5％對結(jié)果沒有影響。C、O2與光線的影響避光、隔絕空氣、快速、充N2D、堿的種類及加入順序以氫氧化四甲基銨的結(jié)果最佳加入順序：皮質(zhì)激素溶液

?四氮唑鹽堿試液第十章甾體激素類藥物的分析E.

溫度與時間室溫（25℃）反應(yīng)40～45

minF.

干擾物的影響油膏、冷霜等制劑含聚乙二醇、丙二醇、羊毛脂對BT的顯色反應(yīng)有干擾，要先分離后

測定。第十章甾體激素類藥物的分析異煙腙（黃）HCl420nm2、異煙肼比色法（1）

原理C3-酮基+異煙肼2H

O腎上腺皮質(zhì)激素雄性激素蛋白同化激素孕激素第十章甾體激素類藥物的分析（2）方法：對照品法異煙肼無水甲醇供試液對照液?A?60?℃暗60′第十章甾體激素類藥物的分析（3）影響因素A.反應(yīng)速度（反應(yīng)專屬性）

C3=O＞C17=O

、C20=O

C11=O

不反應(yīng)B.溶劑的選擇異煙肼鹽酸鹽→受溶解度的影響無水甲醇無水乙醇對試劑的穩(wěn)定性好呈色強(qiáng)度較無水乙醇中高對植物油的溶解度小第十章甾體激素類藥物的分析C.水分、溫度、O2與光線的影響

含水量↑→腙水解↑