液相色譜常見問題及其對策

液相色譜常見問題及其對策液相色譜常見問題類型

A.壓力異常（偏高、波動）

B.漏液

C.保留時間漂移

D.基線問題（漂移、噪聲）

E.峰形異常

一、壓力異?，F(xiàn)象：無壓力，流動相不流動可能原因1、保險絲斷或電源問題2、柱塞桿折斷3、泵頭內(nèi)有空氣或流動相不足4、單向閥損壞5、漏液6、壓力傳感器損壞(流動相流動正常，但無壓力)

一、壓力異?，F(xiàn)象：壓力持續(xù)偏高或不斷上升1、流速設(shè)定過高2、保護(hù)柱或柱子篩板堵塞3、流動相使用不當(dāng)或有緩沖鹽出4、色譜柱選擇不當(dāng)5、進(jìn)樣閥損壞一、壓力異?，F(xiàn)象：壓力持續(xù)偏低1、流速設(shè)定過低2、色譜柱選擇不當(dāng)3、柱溫過高4、系統(tǒng)漏液一、壓力異?，F(xiàn)象：壓力波動可能原因1、泵頭中有氣泡2、單向閥損壞3、柱塞密封圈損壞4、脫氣不充分5、系統(tǒng)漏液6、使用了梯度洗脫二、漏液接頭處漏液1、接頭處松動2、接頭磨損3、接頭被污染二、漏液泵漏液1、單向閥松動2、泵密封損壞3、接頭松動（不要擰的太緊）二、漏液進(jìn)樣閥漏液可能原因1、轉(zhuǎn)子密封損壞2、定量環(huán)堵塞3、進(jìn)樣口密封松動4、進(jìn)樣針尺寸不合適5、廢液管產(chǎn)生虹吸6、廢液管堵塞二、漏液檢測器漏液可能原因1、流通池墊片損壞2、流通池透鏡破碎3、手緊接頭處漏液4、廢液管堵塞5、流通池堵塞三、保留時間漂移保留時間漂移可能原因1、柱溫變化2、流動相組分變化3、色譜柱沒有平衡4、流速變化5、泵中有氣泡6、流動相選擇不當(dāng)7、緩沖容量不夠四、基線問題基線漂移可能原因1、溫度波動2、流動相不均勻(脫氣，使用純度更高的溶劑)3、流通池被污染或有氣泡4、流動相配比不當(dāng)或流速變化5、柱子平衡（約30－60min）6、流動相污染，變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成7、樣品中有強保留的物質(zhì)以饅頭樣峰被洗出8、檢測器沒有設(shè)定在最大吸收波長處四、基線問題基線噪聲（規(guī)則的）可能原因1、流動相、泵、檢測器中有氣泡2、有地方漏液3、流動相混和不均勻4、溫度影響（檢測器和柱溫差別太大）5、其他電子設(shè)備的影響四、基線問題基線噪聲（不規(guī)則的）可能原因1、流動相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成2、有地方漏液3、流動相各溶劑不相溶或混和不均勻4、檢測池能量不足5、系統(tǒng)內(nèi)有氣泡五、峰形異常前沿峰、拖尾峰可能原因1、柱塞板堵塞2、色譜柱塌陷3、干擾峰4、柱溫過低5、緩沖不足或不合適6、重金屬污染7、樣品溶劑選擇不當(dāng)8、樣品過載五、峰形異常分叉峰可能原因1、保護(hù)柱或分析柱污染2、樣品溶劑不溶于流動相五、峰形異常峰展寬1.進(jìn)樣體積過大2.流動相粘度過高3.檢測池體積過大4.保留時間過長5.樣品過載五、峰形異常鬼峰1、進(jìn)樣閥殘余峰2、柱未平衡3、水污染4、柱未平衡重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑(尤其是離子對色譜)液相色譜容易出問題的部件維護(hù)流程圖吸濾頭單向閥柱塞密封圈線路過濾器手動進(jìn)樣器檢測器液相色譜容易出問題的部件吸濾頭材料：不銹鋼燒結(jié)，孔徑10um故障：堵塞表現(xiàn)：管路中不斷有氣泡生成措施：用5％～20％的稀硝酸，超聲波清洗，再用蒸餾水清洗注意點：吸濾頭拆下時不必將塑料管剪斷液相色譜容易出問題的部件單向閥故障1：寶石球粘附于墊片表現(xiàn)：泵無法吸液或排液，流路不通措施：1）用針筒抽出口單向閥以產(chǎn)生壓，使寶石球與墊片分開2）拆下單向閥，放入異丙醇或水中，用超聲波清洗故障2：寶石球或塑料墊片受污導(dǎo)致密封不好表現(xiàn)：系統(tǒng)壓力波動大措施：拆下單向閥，放入異丙醇或水中，用超聲波清洗液相色譜容易出問題的部件故障：密封圈磨損而導(dǎo)致密封不良現(xiàn)象：系統(tǒng)壓力波動大或漏液措施：更換密封圈注意點：更換密封圈拆卸泵頭前，柱塞桿復(fù)位液相色譜容易出問題的部件手動進(jìn)樣閥故障：轉(zhuǎn)子密封損壞現(xiàn)象：漏液原因：a擰的太緊b樣品太臟c針頭損壞或不使用液相專用針解決措施：更換轉(zhuǎn)子密封，并在使用時注意保養(yǎng)液相色譜容易出問題的部件手動進(jìn)樣閥故障：載樣困難原因：a定量環(huán)堵塞b進(jìn)樣器污染解決措施：清洗或更換定量環(huán)、進(jìn)樣器液相色譜容易出問題的部件柱子故障：系統(tǒng)高壓、峰型變差（拖尾峰、前沿峰、分叉峰），保留時間的改變解決措施：清洗正相柱，正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇反相柱，甲醇、乙腈、氯仿、異丙醇、0.05M稀硫酸液相色譜容易出問題的部件峰產(chǎn)生有肩或分叉的原因1.柱子劣化（進(jìn)口處產(chǎn)生不均勻的空隙）2.樣品劣化（生成氧化物、分解物等）判斷標(biāo)準(zhǔn)所有的峰都產(chǎn)生有肩峰或分叉時則為柱子劣化液相色譜容易出問題的部件延長柱壽命方法：倒沖柱換過濾片修補柱頭液相色譜容易出問題的部件分析柱的維護(hù)1、在使用新柱之前，最好用強溶劑在低流量下(0.2-0.3ml/min)沖洗30mins，長時間未用的分析柱也要同樣處理2、定期使用強溶劑沖洗柱子3、使用緩沖鹽時，要先用水沖洗，再用有機(jī)溶劑沖洗4、凈化樣品5、分離條件6、不使用時，要蓋上蓋子，避免固定相干枯7、使用預(yù)柱8、避免流動相組成及極性的劇烈變化9、避免壓力脈沖的劇烈變化液相色譜容易出問題的部件更換氘燈（紫外檢測器）判斷氘燈能量：設(shè)定220nm波長，檢查參比池能量，如能量低于800，需更換氘燈。操作注意點：不要用手直接接觸氘燈表面液相色譜注意幾個問題一、脫氣除去流動相中溶解或因混合而產(chǎn)生的氣泡氣泡對測定的影響：1）泵中氣泡使液流波動，改變保留時間和峰面積2）柱中氣泡使流動相繞流，峰變形3）檢測器中的氣泡產(chǎn)生基線波動液相色譜注意幾個問題脫氣的目的1.防止由氣泡的產(chǎn)生引起的故障2.防止由溶解（在液體中的）氣體量的變動引起的檢測不穩(wěn)定程度1）示差折射率檢測器*使折射率變化2）UV檢測器（200nm以下）*溶解氧氣有吸收液相色譜注意幾個問題二、緩沖液選擇緩沖液