抗原抗體反應

姓名：張瑞玲

學號：20219147

專業(yè)：藥物化學

課程：免疫根底原理

第七章抗原與抗體相互作用整理課件第一節(jié)：抗原抗體反響特點階段性整理課件第一節(jié)抗原與抗體反響的特點一、特異性抗原與抗體相互結合只局限于一些大分子外表的特定部位，即抗原決定簇和抗體結合位點之間，且以親和力的作用方式結合在一起?？乖贵w的結合并沒有共價鍵形成，而是由這些特定部位之間的短程分子力相互作用的結果。這些吸引力只有在極短的距離內才有效。因此抗原決定簇與抗體結合位點在空間上必須處于緊密接觸狀態(tài)，才能產生足夠的結合力。這種分子間的互補結構決定了抗原抗體結合的專一性。整理課件抗原抗體分子間的作用力.整理課件整理課件抗原抗體交叉反響抗原抗體專一性反響交叉反響無反響整理課件二、抗原與抗體結合的可逆性

抗原抗體的結合反響是一個可逆的反響Ab+AgAb:Ag可逆性指復合物在一定條件下可發(fā)生解離，恢復抗原抗體的游離狀態(tài)?？乖贵w結合是分子外表的結合。影響因素：a.抗體對相應抗原的親合力－親合力越高，結合越牢固，越不易解離b.環(huán)境因素對復合物的影響:－pH、離子強度應用：由于抗原抗體結合的可逆性，可利用親和層析法別離純化抗原或抗體；利用待測抗原和標準抗原與抗體的競爭結合，進行抗原或抗體的定量測定，如放免檢測法、酶聯免疫吸附法等整理課件三、抗原與抗體反響中量的關系—eg沉淀反響抗體過量平衡點抗原過量抗體抗原前帶后帶抗原抗體沉淀量抗體一定抗原增加前帶(prezone)：抗體過量后帶(postzone)：抗原過量等價帶(equivalencezone)：抗原抗體比例適宜整理課件抗原與抗體反響中量的關系比例性〔proportionality〕是指抗原與抗體發(fā)生可見反響需要一定的量比關系，只有當二者濃度比例適當時，才形成較大的抗原抗體結合物。以沉淀反響為例，在參加固定量抗體的一排試管中，再依次參加一定量的遞增濃度的抗原進行反響，結果發(fā)現隨著抗原濃度的增加，沉淀很快出現，但抗原超過一定范圍之后，沉淀速度和沉淀量隨抗原濃度增加反而降低，甚至到最后不出現沉淀，

沉淀反響的速度反映了參加反響的抗原和抗體濃度的適合程度，適合程度高反響快，反之那么慢。通常把最迅速出現可見反響時的抗原抗體的濃度比或量比稱為抗原抗體反響的最適比〔optimalratio〕或稱等價點〔equivalencepoint〕?？乖c抗體比例最適宜的范圍稱等價帶〔equivalencezone〕。在最適比反響條件下，抗原抗體幾乎全部結合成復合物，上清液中根本無游離的抗原和抗體。當抗原和抗體濃度比超過此范圍時，可見反響的速度和復合物的量都會迅速降低，甚至不可見，上清液中可測出游離的抗原或抗體。因抗原抗體比例不適宜而不出現可見反響，稱帶現象〔zonephenomenon〕。如果抗體過量時，稱為前帶〔prozone〕；抗原過量時，稱為后帶〔postzone〕。在同一抗原抗體反響系統(tǒng)中，不管抗原和抗體濃度如何變化，其沉淀反響的最適比始終恒定不變，

Marrack提出的網格學說解釋了抗原抗體反響比例性的機制。天然抗原大多是多價的，抗體至少為兩價，當抗原與抗體在等價帶結合時，相互交叉連接成具有立體結構的網格狀復合體，形成肉眼可見的沉淀物。當抗原或抗體過剩時，由于過剩方的結合價得不到飽和，只能形成較小復合物，并存在有較多游離的抗原或抗體，不能出現可見反響。但是，當抗原或抗體為單價，不管抗原與抗體的量比關系是否適宜，均不能出現可見反響現象。

整理課件三、抗原與抗體反響的階段性整理課件當抗體與抗原結合時，如果是顆粒抗原，那么出現凝集現象；如果是可溶性抗原，那么產生沉淀作用，是抗原抗體反響的繼發(fā)過程。當抗原與同型抗體相遇時，在適宜條件下，不管彼此量的多少，都立即發(fā)生特異性的結合形成抗原抗體復合物，這一過程通常只需要幾秒的時間便可完成，稱為反響的一級階段。三、抗原與抗體反響的階段性整理課件在一級階段之后，繼發(fā)出現抗原與抗體間進一步交聯而形成網絡狀凝集物，進而出現可見的凝集和沉淀，稱為反響的二級階段。二級階段是抗原抗體網格生長的階段，速率要慢的多。影響因素：很大程度上依賴于溫度、離子強度等外界條件，但更重要的是需要適宜的抗原抗體分子比例。只有當二者的結合價彼此飽和時，才能連接成一個大網格樣凝集物，出現凝集或沉淀。整理課件抗原抗體凝集〔沉淀〕反響形成的條件：1、抗原結合價必須在2價以上；2、抗體結合價也必須是2價或2價以上；3、抗原抗體能形成復合物但不一定能形成沉淀；4、抗原抗體結合形成大分子凝集物的前提是要求其結合價彼此飽和；5、當抗原大大過量時，只有溶解狀態(tài)的抗原抗體復合物，而無沉淀出現，在免疫檢測中稱為前帶現象。整理課件第二節(jié)影響抗原抗體反響的因素

整理課件一、反響物自身因素

抗原:理化性狀、表位種類和數目1、抗原抗原的理化性狀、抗原決定簇的數目和種類均可影響血清學反響結果例如，可溶性抗原與相應抗體反響出現沉淀，而顆粒性抗原與相應抗體反響那么出現凝集;單價抗原與抗體結合不出現可見反響;粗糙型細菌在生理鹽水中易出現自凝；紅細胞與IgG類抗體結合不出現直接凝集等。整理課件反響物自身因素抗體:來源、特異性、親和性、效價2、抗體抗體是血清學反響中的關鍵因素，對反響的影響表現在以下三個方面:(1)來源:來自不同動物的免疫血清，其反響性有差異。家兔等大多數動物的免疫血清具有較寬的等價帶，通常在抗原過量時才易出現可溶性免疫復合物;馬等大動物和人的免疫血清等價帶較窄，少量的抗原或抗體過剩，均可形成可溶性免疫復合物;家禽免疫血清不能結合哺乳動物的補體，并且在高鹽濃度〔80g/LNaCl溶液中沉淀現象明顯。單克隆抗體一般不適用于沉淀反響或凝集反響(2)特異性與親和力特異性和親和力是影響血清學反響的兩個關鍵因素，它們共同影響試驗結果的準確程度。免疫動物早期獲得的抗血清特異性較好，但親和力低;后期獲得的抗血清一般親和力較高，但長期免疫易使免疫血清中抗體的類型和反響性變得更為復雜。因此，用于診斷的試劑必須盡量選用特異性高、親和力強的抗體，才能保證和提高試驗結果的可靠性。整理課件〔3〕濃度:

抗體的濃度往往是與抗原相對而言。適宜的濃度才出現明顯的反響現象。因此許多試驗應進行抗體預滴定，找出最適反響濃度。

整理課件二、環(huán)境因素電解質:生理鹽水或緩沖液酸堿度:pH6～pH9溫度:15℃～40℃，37℃最適整理課件1.電解質抗原抗體結合后由親水性變?yōu)槭杷裕藭r易受電解質影響，如有適當濃度電解質存在，就會使抗原抗體失去一局部電荷而相互凝集或沉淀，出現可見反響;假設無電解質存在，那么不出現可見反響。通常在血清學試驗中，以8·5g/LNaCl溶液作為抗原抗體的稀釋液及反響液，其中Na+和Cl-可分別中和膠體顆粒上的電荷，使膠體顆粒的電勢下降，形成可見的沉淀物或凝集物。但如果電解質濃度過高，那么會出現非特異性蛋白質沉淀，即鹽析。補體參與的溶細胞反響，除需要等滲的NaCl溶液外，還需適雖的Mg2+和Ca2+離子參與。整理課件2.酸堿度適宜的pH是抗原抗體反響的必要條件之一。血清學試驗一般以pH6--9為宜，超出此范圍可影響抗原和抗體的理化性質，導致假陽性或假陰性結果。當pH為3左右時，接近細菌抗原的等電點，可出現非特異性酸凝集，造成假象。整理課件整理課件3.溫度抗原抗體反響一般在15一40℃范圍內均可進行，最適溫度為37℃。在此范圍內溫度越高，分子運動速度加快，增加抗原抗體接觸時機，反響速度越快，但亦容易引起復合物解離;溫度越低，反響速度緩慢，但抗原抗體結合牢固，易于觀察。某些特殊的抗原抗體反響需要特定的溫度，如冷凝集素在4℃時與紅細胞結合，20℃以上反而解離。整理課件T整理課件4、作用時間抗原抗體反響應有足夠的時間，不同反響時間不同整理課件此外，抗原抗體反響在液相中反響時，適當振蕩與攪拌，也可促進抗原抗體分子的接觸，加速反響。整理課件第三節(jié)：主要的抗原抗體反響類型免疫電泳對流免疫電泳對流免疫電泳整理課件第三節(jié)抗原與抗體反響-免疫檢測法抗原與抗體結合后，只有出現可見的反響，如凝集、溶血、沉淀實驗等，或用熒光素、酶、放射性同位素等標記方法提高可測性，才便于在免疫檢測中運用?？梢娦苑错懙某霈F，對抗原抗體分子適宜比例的要求遠比對彼此絕對量方面要高得多。這就是說，一方面在進行免疫檢測時要注意抗原抗體的用量；另一方面只要提高可見度或可測性，便可大大提高免疫檢測方法的靈敏度。整理課件一、凝集反響〔Agglutination)凝集反響是指顆?？乖?凝集原)與相應抗體結合反響出現的可見性現象。顆?？乖缤暾募毦?、紅細胞等與相應抗體相混合，在一定條件下出現凝集。抗原稱為凝集原(agglutinogen)。抗體稱為凝集素〔agglutinin)整理課件二、沉淀反響當抗原是可溶性分子時，與抗體結合那么形成沉淀。1、絮狀沉淀反響一系列試管中參加等量的抗體和遞增量的抗原，在中性條件下37度保溫1-2h，便可見到絮狀的沉淀。可用于尋找抗原抗體反響的適宜比例，檢測抗原抗體的分子比。整理課件尋找抗原抗體反響的適宜比例整理課件2、環(huán)狀沉淀反響

在試管中參加抗體后，小心參加相應抗原，使抗原抗體步混合，37度保溫10-20min，在二者界面上出現環(huán)狀沉淀。不能用于定量測定。該試驗主要用于鑒定微量抗原，如法醫(yī)學中鑒定血跡，流行病學用于檢查媒介昆蟲體內的微量抗原等，因該技術敏感度低，且不能作兩種以上抗原的分析鑒別，現已少用。整理課件3、雙向擴散試驗在瓊脂內抗原和抗體各自向對方擴散，在最恰當的比例處形成抗原抗體沉淀線，觀察這種沉淀線的位置、形狀以及比照關系，可作出對抗原或抗體的定性分析。沉淀線如靠近抗原孔，那么指示抗體含量較大；靠近抗體孔，那么指示著抗原含量較多；不出現沉淀線那么說明抗體或抗原過剩；另外，如出現多條沉淀線，那么說明抗原和抗體皆不是單一的成分。因此，可用于鑒定抗原或抗體的純度。當抗原、抗體存在多種體系時，會出現多條沉淀弧。整理課件雙向擴散法的操作：生理鹽水配制1%-5%的瓊脂，取4mL倒在顯微鏡用的載玻片上，凝固后打孔.

中心孔滴抗原，外周孔滴抗體,用于測定抗體效價。中心孔滴抗體，外周孔滴抗原，用于檢測抗原的存在和定性抗原。整理課件

抗原抗體為單一體系濃度不同

抗原抗體為單一體系時，抗原濃度不同，沉淀弧的特征不同：抗原抗體為多體系時，出現的沉淀弧有多條，彼此互不干擾。右整理課件兩種受檢抗原〔Ag-1,3.Ag1〕有相同表位，形成一個完全融合的沉淀線

抗體為雙價，兩種抗原完全不同〔Ag-1和Ag-24〕

抗體為雙價，兩種抗原〔Ag-1和Ag-12〕皆有相同的1表位，又有不同的2表位，所以沉淀線呈局部融合的形狀。

這種技術作為抗原的分析，是目前免疫化學中最常用的鑒定技術之一。

。整理課件4、單向免疫擴散：又稱單向瓊脂擴散，是定量抗原的一種檢測方法。與雙向擴散不同的是在瓊脂中含有一定量的抗體，孔內參加未知量的相應抗原。在37度保溫過程中，孔內的抗原向周圍擴散，與抗體形成沉淀圈。根據沉淀圈的大小確定抗原的含量整理課件5、免疫電泳技術整理課件A、免疫電泳免疫電泳為區(qū)帶電泳與免疫雙向擴散的結合，是由Grabar和Williams〔1953〕首先報道的。先利用區(qū)帶電泳技術將不同電荷和分子量的蛋白抗原在瓊脂內別離開，然后與電泳方向平行在兩側開槽，參加抗血清。置室溫或37℃使兩者擴散，各區(qū)帶蛋白在相應位置與抗體反響形成弧形沉淀線整理課件B、對流免疫電泳對流免疫電泳實質上是定向加速度的免疫雙擴散技術，其根本原理是：在瓊脂板上打兩排孔，一側各孔參加待測抗原，一側孔內放入相應抗體，抗原在陰極側，抗體在陽極側。通電后，帶負電荷的抗原泳向陽極抗體側，而抗體藉電滲作用流向陰極抗原側，在兩者之間或抗體的另一側〔抗原過量時〕形成沉淀線。整理課件C、火箭電泳單向擴散開展起來的一項定量技術，實質上是加速度的單向擴散。在含抗體的瓊脂板一端打一排抗原孔；參加待測標本后，將抗原置陰極端，進行電泳?？乖鞠蜿枠O，在抗原抗體比例恰當處發(fā)生結合沉淀隨著泳動抗原的減少，沉淀逐漸減少，形成峰狀的沉淀區(qū)，形狀似火箭，抗體濃度保持不變，峰的高度與抗原量呈正比。+整理課件三、補體結合試驗(Complementfixationtest,CFT)

當抗體與細菌、紅細胞等顆?？乖Y合并形成抗原抗體復合物后，可結合補體引起溶菌、溶血效應。用補體結合試驗既可以測知患者血清中補體的總量，也可以檢測未知抗原或抗體的量。測定人血清補體總量的方法是以綿羊紅血球的溶血為指示。當綿羊紅血球與抗綿羊紅血球結合后，加患者血清，觀測溶血程度。整理課件補體結合試驗整理課件四、中和試驗(Neutralizationtest)特異性抗體抑制多種抗原的生物學活性〔細菌外毒素的毒性、酶的活性、病毒的感染性等〕的反響。例如在臨床實驗診斷中測定風濕病患者體內的抗鏈球菌O抗體的反響。整理課件第四節(jié)免疫親和層析生物高分子具有能和某種相對應的專一分子可逆結合的特性，例如酶的活性中心或別構中心能和專一的底物、抑制劑、輔助因子效應劑通過某些次級鍵相結合，并在一定條件下又可以解離。抗體與抗原，激素及其受體，核糖核酸與其互補的脫氧核糖核酸等體系，都具有類似的特性。這種高分子和配基之間形成專一的可解離的復合物的能力稱為親和力。根據這種具有親和力的生物分子間可逆的結合和解離的原理開展起來的層析就稱為親和層析。整理課件親和層析法的根本過程：1、偶聯：將欲別離的高分子物質的配基在不影響其生物功能的情況下與水不相溶性的載體結合，制成親和吸附劑或免疫吸附劑。2、裝柱：在層析柱內裝入固相化的配基3、親和層析：含有高分子物質的混合液在有利于配基和高分子之間形成復合物的條件下進入裝有親和吸附劑的層析柱。高分子物質結合留在柱內，其他雜質流出。4、洗脫：改變條件，促使配基和高分子物質別離而釋放出需要的物質。5、再生：將親和層析柱的充分洗滌再生，用于下一周期的純化工作。整理課件整理課件整理課件TheEnd整理課件三、現代免疫標記技術免疫標記技術(Immuno-labellingtechnique)是指將抗原或抗體用熒光素、酶、放射性同位素和電子致密物質等加以標記，借以提高其靈敏度的一類新技術。優(yōu)點：特異性強、靈敏度高、應用范圍廣、反響速度快、容易觀察、能定位、定量甚至定位。旺雕彤俊侖肖負規(guī)謊寇傻抵世編蹬憂侄到資同章哪份貴炬臘邯兌兇非粹舀抗原抗體反響及應用抗原抗體反響及應用整理課件1、免疫熒光技術〔Immunofluorescencetechnique)將結合有熒光素的熒光抗體進行抗原抗體反響的技術。常用的熒光素有異硫氰酸熒光素〔fluoresceinisothiocyanate,FITC)和羅丹明〔lissaminerhodamineB200,RB200)等。它們可與抗體球蛋白中賴氨酸的氨基結合，在藍紫光激發(fā)下，可分別出現鮮明的黃綠色及玫瑰紅色。伺楚爹霧魏毯髓荊朝計宙叼遲們煥岸檬遂聘蛻字俊礦薛腐賤客代狗雜鋁娜抗原抗體反響及應用抗原抗體反響及應用整理課件2、酶免疫測定〔Enzymeimmunoassay,EIA)用酶標記的抗體或抗抗體來進行的抗原抗體反響。用酶代替熒光素作標記物以及顯示酶標記抗體的方法是用酶的特殊底物來處理標本。由于酶的催化作用可使原來無色的底物通過水解、氧化或復原反響而顯示顏色。和瞎倉滅荔爛疆魯先府哀選煎憑匠宗滁枉持宗釋叛茬泉箱韋的啦申樟鞍畝抗原抗體反響及應用抗原抗體反響及應用整理課件免疫酶測定的優(yōu)點1〕反響結果產生顏色，可用顯微鏡觀察結果。2〕標本經酶標抗體染色后，還可用其他染料復染，顯示細胞形態(tài)結構。3〕標本可長久保存，隨時備查。4〕特異性強。5〕靈敏度高。澡幻坑創(chuàng)琳略趴罩此袍六你普喚奢裳旨冉賂談日茸擇山衙乖嬸銷鶴巷紅臍抗原抗體反響及應用抗原抗體反響及應用整理課件標記酶應具備的特點1〕純度高、高溶性、特異性強、穩(wěn)