口蹄疫及其防控策略課件

此ppt下載后可自行編輯口蹄疫及其防控策略家畜口蹄疫簡(jiǎn)介口蹄疫口蹄疫病毒口蹄疫臨床癥狀口蹄疫理論和技術(shù)研究進(jìn)展口蹄疫

口蹄疫（FootandMouthDisease,FMD）是由口蹄疫病毒引起的以偶蹄動(dòng)物為主的急性、熱性、高度傳染性疫病，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為必須報(bào)告的動(dòng)物傳染病，我國(guó)規(guī)定為一類動(dòng)物疫病。侵染對(duì)象是豬、牛、羊等主要畜種及其它家養(yǎng)和野生偶蹄動(dòng)物，易感動(dòng)物多達(dá)70余種。素有“政治經(jīng)濟(jì)病”之稱。口蹄疫病毒口蹄疫病毒粒子呈球形，無(wú)囊膜，粒子直徑28-30nm，分子量為6.9×106道兒頓，由結(jié)構(gòu)蛋白VP4、VP2、VP3、和VP1各60分子組成的衣殼包裹一個(gè)分子的RNA組成，中心是緊密團(tuán)集的RNA，外周包裹著一層薄的（約5nm）衣殼

。FMDVX-射線衍射圖FMDV電鏡照片典型口蹄疫病理發(fā)生階段由于多種動(dòng)物的易感性不同，也由于病毒的數(shù)量和毒力以及感染門戶不同，潛伏期的長(zhǎng)短和病狀也不完全一致。

漿液性滲出（或原發(fā)性水泡）階段病毒血癥階段繼發(fā)性水泡階段轉(zhuǎn)歸階段漿液性滲出（或原發(fā)性水泡）階段

口蹄疫病毒由消化道粘摸、呼吸道粘摸或損傷的皮膚三種途徑侵入機(jī)體后，首先在侵入部位的上皮細(xì)胞內(nèi)迅速繁殖，引起漿液性滲出而形成原發(fā)性水泡，稱其為第一期水泡，此時(shí)，感染動(dòng)物通常不表現(xiàn)臨床癥狀或只表現(xiàn)輕度發(fā)熱，因此往往不容易發(fā)現(xiàn)。在第一期水泡的上皮細(xì)胞和水泡液內(nèi)，存有高濃度口蹄疫病毒。人工感染時(shí)，漿液性水泡一般出現(xiàn)于感染后14～16小時(shí)。病毒血癥階段

通常在原發(fā)性水泡出現(xiàn)數(shù)小時(shí)后，大量的病毒由原發(fā)性水泡進(jìn)入淋巴和血液循環(huán)系統(tǒng)，導(dǎo)致病毒血癥。此時(shí)，機(jī)體產(chǎn)生全身性反應(yīng)，引起體溫升高，出現(xiàn)全身癥狀。人工感染后20～26小時(shí)，血液和部分內(nèi)臟中含有大量病毒，56小時(shí)后則顯著減少。

繼發(fā)性水泡階段口蹄疫病毒對(duì)口、鼻、蹄、舌、及乳房等處的上皮細(xì)胞有極強(qiáng)的親和力。繼病毒血癥之后1～3天，病毒隨著血液循環(huán)，抵達(dá)嗜好部位如口腔粘摸、舌面、鼻端、蹄冠狀帶趾間、趾底等部位的皮膚表層組織內(nèi)，繼續(xù)繁殖，形成繼發(fā)性水泡，稱作第二期水泡。此外，病毒還會(huì)在全身有關(guān)腺體如胰腺、唾液腺、乳房腺泡與腺管上皮細(xì)胞、直腸及腎臟的上皮細(xì)胞以及心肌細(xì)胞內(nèi)大量繁殖?？谔阋叩奶卣餍园Y狀在該階段出現(xiàn)。轉(zhuǎn)歸階段隨著第二期水泡的發(fā)展、融合、破裂，體溫一般隨即下降，逐漸恢復(fù)正常，病毒從血液中逐漸減少以至消失，病畜即進(jìn)入恢復(fù)期。此時(shí)，多數(shù)病例逐漸好轉(zhuǎn)；部分動(dòng)物，特別是幼畜，會(huì)因惡性口蹄疫而死亡；部分動(dòng)物，特別是?？赊D(zhuǎn)為持續(xù)性感染。口蹄疫臨床癥狀-牛

早期癥狀：奶牛產(chǎn)奶量突然減少，厭食、精神沉郁和發(fā)熱。

1天后，口腔及周圍、蹄部和乳房，乳頭上可發(fā)現(xiàn)水泡。在8-12小時(shí)內(nèi)隨著液體的積聚變得更加凸起。在形成水泡的急性病程中，口腔疼痛，感染牛的唇和下腭震顫，分泌過(guò)量唾液（流涎），在水泡破裂后流涎更明顯嚴(yán)重，常出現(xiàn)白沫狀口水，粘稠的唾液。

舌面上皮逐漸壞死，并在1-2天內(nèi)破裂，留下無(wú)表皮（露肉）的紅色糜爛（爛斑），抓舌（檢查）可加速破裂導(dǎo)致大片舌皮脫落。

出現(xiàn)水泡的部位還有：鼻孔內(nèi)和口鼻凸出部。鼻孔中的病損通常很小，愈合后表面形成結(jié)痂。

蹄部病損造成跛行，不愿意移步和間歇性的抽動(dòng)腿腳。在感染急性期動(dòng)物的鼻腔和眼常有漿液性-膿性排泄物?？谇徊p消退很快。一旦水泡破裂，血清纖維蛋白就開始填補(bǔ)創(chuàng)面，4天左右整個(gè)創(chuàng)面被纖維蛋白組織覆蓋，7天后幾乎完成全部上皮的重新生成。蹄部病損與口腔病損痊愈過(guò)程相似。

成年牛口蹄疫的死亡率很少超過(guò)5%，但幼小牛犢可達(dá)90%。小牛犢突然死亡是由于心肌的多點(diǎn)壞死造成的，通常在水泡病損癥狀出現(xiàn)之前就發(fā)生死亡?？谔阋吲R床癥狀-牛牛的FMD病損A）流涎），白色泡沫狀。B）小肉牛蹄部（發(fā)白的區(qū)域）出現(xiàn)早期水泡C）牛乳房，乳頭上出現(xiàn)水泡。D）小肉牛舌面未破裂水泡和齒齦上的破裂水泡牛和豬的FMD病損A）小肉牛口腔，舌面和齒墊上有病損。B）小肉?？谇?，齒墊和齒齦上有爛斑。C）小肉牛舌面、齒墊和齒齦上的病損，D）豬的心臟，心肌壞死（黃色）口蹄疫臨床癥狀-豬

早期癥狀：跛行、發(fā)熱、精神沉郁、厭食。蹄部表現(xiàn)疼痛，病豬臥躺在地，不愿活動(dòng)，蜷縮、弓背或者采取犬坐姿勢(shì)。病豬蹄部發(fā)熱，沿著趾或附趾的冠狀帶呈現(xiàn)白色。這些部位很快充滿液體而變成水泡。大約1天后水泡破裂，留下紅色的、裸露的爛斑。在蹄踵球部和趾間也可能形成水泡。蹄部嚴(yán)重的病損可導(dǎo)致蹄甲脫落。在口鼻吻突上面的水泡在破裂前含有數(shù)毫升液體。水泡也可能出現(xiàn)在乳頭和乳房上。懷孕母豬可能流產(chǎn)。吃奶仔豬可能死亡但不出現(xiàn)水泡。仔豬死后心臟呈現(xiàn)心肌黃色條紋，俗稱‘虎斑心’。豬水泡病損的痊愈過(guò)程與上述牛的相同。

豬的FMD病損A）豬鼻吻突上有未破裂的大水泡。B）豬蹄部早期未破裂水泡（發(fā)白的區(qū)域）C）豬蹄趾和附趾沿冠狀帶上的水泡。D）一只豬蹄的角質(zhì)組織（蹄甲）脫落

拱背吮乳仔豬急性死亡心臟病變口蹄疫臨床癥狀-羊

綿羊群或山羊群感染的第一癥狀通常是突然發(fā)現(xiàn)許多羊嚴(yán)重跛行，并伴隨有精神沉郁、厭食和發(fā)熱，或者幼畜的突然死亡，羊羔死亡率很高。在乳頭和陰門處可能出現(xiàn)水泡。公羊包皮上可能出現(xiàn)水泡，不能或不愿配種。跛行的羊很可能發(fā)現(xiàn)其蹄部發(fā)熱，觸摸時(shí)疼痛。在蹄趾間、蹄踵球部和沿冠狀帶可能發(fā)現(xiàn)水泡。

齒齦上水泡不常見(jiàn)，即使有水泡，也很快消退。山羊的病損通常比綿羊少且輕，迅速痊愈，尤其是口腔中的病損。羊典型口蹄疫癥狀較難看到。綿羊的FMD病損A）綿羊蹄部在趾間有一個(gè)破裂水泡。B）綿羊蹄沿冠狀帶有一個(gè)破裂水泡C）綿羊舌面和齒墊上的爛斑。D）綿羊口腔，齒墊和上唇有爛斑口蹄疫研究理論突破和技術(shù)發(fā)展1514在意大利最早記錄了口蹄疫,至今已有近五百年歷史

1546描述（記載）口蹄疫1897確認(rèn)病原因子,首例由病毒（FMDV）引發(fā)的動(dòng)物疫病1920證實(shí)豚鼠對(duì)FMDV易感；1922~26確認(rèn)FMDV三個(gè)血清型，O、A、C1925第一次抗FMD免疫接種1927確認(rèn)血清型內(nèi)的抗原性變異1930在動(dòng)物體外培養(yǎng)病毒1931第一次計(jì)算病毒的大小1943年發(fā)現(xiàn)每個(gè)血清型有不同的亞型,1986年后研究減少。1947用舌組織塊大規(guī)模培養(yǎng)病毒1948確認(rèn)非洲三個(gè)血清型(SAT1,SAT2,SAT3)1951利用乳鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物1952在荷蘭大規(guī)模免疫接種1954確認(rèn)第七個(gè)血清型，亞洲1型

口蹄疫研究理論突破和技術(shù)發(fā)展1958用電子顯微鏡觀察研究病毒1958146S顆粒的免疫作用,分離病毒的感染性核酸,世界口蹄疫參考實(shí)驗(yàn)室建立1959從帶毒動(dòng)物分離出病毒,1958年1959年，巴西人VanBekkam等人首次從臨床健康牛的食道/咽部（O/P）刮取物中分離到病毒。1962~64用細(xì)胞系培養(yǎng)病毒1963提純病毒粒子1965證實(shí)病毒毒株之間的重組1965年Hyslop證實(shí)在已感染牛的周圍口蹄疫病毒以氣溶膠的形式大量存在，而且健康牛也能被人工氣溶膠病毒感染。1966用血清學(xué)方法確認(rèn)病毒的聚合酶1968Burrows在潛伏期從感染動(dòng)物的粘膜、排泄物和分泌物連續(xù)采樣分析，結(jié)果顯示咽部是病毒早期定居和增殖的場(chǎng)所，被感染動(dòng)物在臨床癥狀出現(xiàn)的前后數(shù)天內(nèi)隨排泄物和分泌物釋放出大量的病毒1969測(cè)定病毒蛋白的成分1969確定單個(gè)蛋白在免疫應(yīng)答中的重要作用1972TepIIctpa等研究證實(shí)豬在感染了含有病毒的氣溶膠后病毒初始復(fù)制部位是在肺部，被感染的豬在臨床癥狀出現(xiàn)前呼出大量的病毒氣溶膠，且比牛和羊呼出的病毒氣溶膠更具感染性口蹄疫研究理論突破和技術(shù)發(fā)展1973證實(shí)單個(gè)分離的蛋白誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體（Laporte等）1977病毒基因組生化圖譜1978病毒自身的病毒RNA聚合酶1981免疫原性蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)（Kleid等）,此后表達(dá)技術(shù)日益成熟(非結(jié)構(gòu)蛋白)1982可形成保護(hù)應(yīng)答的肽的化學(xué)合成1984病毒粒子的第一次結(jié)晶1986第一次完成病毒基因組核苷酸序列分析19892.9?分辨率病毒結(jié)構(gòu)分析1990感染性cDNA1993Carol首次將聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）用于O/P液的檢測(cè)，成功地檢測(cè)到了口蹄疫病毒。國(guó)家口蹄疫參考實(shí)驗(yàn)室1995年開始研究應(yīng)用PCR技術(shù)1996~2003確認(rèn)易感細(xì)胞上的受體國(guó)內(nèi)外口蹄疫流行狀況和我國(guó)防控重點(diǎn)國(guó)際口蹄疫發(fā)生格局和發(fā)展態(tài)勢(shì)周邊國(guó)家口蹄疫疫情對(duì)我國(guó)的威脅國(guó)內(nèi)口蹄疫流行狀態(tài)及特點(diǎn)我國(guó)口蹄疫防控重點(diǎn)（1）一些發(fā)達(dá)國(guó)家和長(zhǎng)期無(wú)疫國(guó)家暴發(fā)口蹄疫。歐洲（英國(guó)除外）在經(jīng)歷了半個(gè)世紀(jì)的疫苗接種后，疫情得到了控制，多數(shù)西歐國(guó)家達(dá)到了無(wú)疫標(biāo)準(zhǔn)，在歐共體于1991年停止了疫苗的使用。在亞洲的日本、韓國(guó)、中國(guó)臺(tái)灣、蒙古等多年無(wú)疫的國(guó)家或地區(qū)及已控制了FMD的阿根廷等國(guó)2000～2001年后又重新暴發(fā)了FMD。（2）流行的血清型有跨區(qū)流行的趨勢(shì)。傳統(tǒng)上，歐洲流行Ｏ、Ａ、Ｃ三個(gè)型；亞洲主要流行Ｏ、Ａ、Ｃ和AsiaⅠ型；非洲不僅有Ｏ、Ａ、Ｃ三個(gè)型，還有獨(dú)特流行的SAT1、SAT2和SAT3三個(gè)型；南美洲流行Ｏ、Ａ、Ｃ三個(gè)型。本世紀(jì)初，全世界流行的FMD主要為Ｏ、Ａ、Asia1、SAT1和SAT2型。但特別值得關(guān)注的是：南非獨(dú)特流行的SAT2型已傳至中東的科威特和沙特（2000年）；亞洲獨(dú)特流行的AsiaⅠ型已傳至歐洲的希臘、土爾其（2000年）和格魯吉亞（2001年）?？偟母窬趾吞攸c(diǎn)總的格局和特點(diǎn)（3）毒株的流行全球化。在當(dāng)今交通便利、國(guó)際貿(mào)易頻繁的形式下，加快了毒株傳播的速度，并使毒株的傳播全球化，沒(méi)有一個(gè)地方是安全的。盡管FMD流行態(tài)勢(shì)有所變化，但總的格局依然如故。北美和大洋洲繼續(xù)保持無(wú)FMD狀態(tài)，重疫區(qū)仍為亞洲、非洲和南美洲，歐洲為地方性流行或散發(fā)。南美的一些國(guó)家通過(guò)疫苗接種取得了無(wú)FMD國(guó)家地位。發(fā)達(dá)國(guó)家繼續(xù)享受無(wú)FMD地位，發(fā)展中國(guó)家未擺脫FMD危害。印度:因貧困和宗教信仰，使FMD難以控制，O、A、C和Asia1到處流行。巴基斯坦、尼泊爾、不丹等國(guó)情況相同。馬來(lái)西亞、緬甸、泰國(guó)、老撾、柬埔寨和越南流行O、A、和Asia1流行。菲律賓1976年進(jìn)口南美牛將C型帶入。1996年印度和菲律賓暴發(fā)發(fā)生C型口蹄疫，雖此后再未見(jiàn)有暴發(fā)，但C型的潛在威脅不容忽視。日本、南朝鮮、蒙古、俄羅斯于2000年發(fā)生O型FMD，毒株屬O型泛亞毒株。前蘇聯(lián)解體后與我國(guó)相鄰的國(guó)家，大多流行過(guò)或正在流行A型口蹄疫。2005年后，俄羅斯、越南等國(guó)與我國(guó)接壤的地區(qū)先后發(fā)生了Asia1型口蹄疫。不丹、伊朗、伊拉克、沙特阿拉伯和巴基斯坦疫情更為嚴(yán)重，尤其是巴基斯坦疫情復(fù)雜，同時(shí)流行A、O和Asia1型，對(duì)我國(guó)威脅最大。

周邊國(guó)家疫情對(duì)我國(guó)的威脅

亞洲是口蹄疫的重災(zāi)區(qū)。多年以來(lái)，我國(guó)始終處于AsiaI型口蹄疫包圍之中。據(jù)世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE，2002-2004年度）公布的疫情資料顯示，在我國(guó)周邊的印度、巴基斯坦、阿富汗、尼泊爾、伊朗、阿塞拜疆、土耳其、泰國(guó)、緬甸、老撾、越南、不丹等12個(gè)亞洲國(guó)家一直存在AsiaI型口蹄疫疫情。這些國(guó)家與我國(guó)西藏、新疆的克州和喀什地區(qū)與其中的一些國(guó)家具有很長(zhǎng)的邊境線，過(guò)境放牧和野生動(dòng)物季節(jié)性遷徙普遍存在，具有傳染AsiaI型口蹄疫的機(jī)會(huì)。周邊國(guó)家疫情對(duì)我國(guó)的威脅國(guó)內(nèi)口蹄疫流行狀態(tài)及特點(diǎn)我國(guó)口蹄疫發(fā)生特點(diǎn)1、國(guó)際貿(mào)易及周邊疫情對(duì)我國(guó)威脅很大，周邊疫情多次沖擊我國(guó)；2、新的毒型對(duì)我國(guó)高頻次影響（Asia1江蘇05，A），出現(xiàn)多個(gè)血清型并存；3、在疫苗免疫政策的影響下，一些疫情得到有效控制；4、在疫苗免疫等綜合措施的影響下，季節(jié)性不明顯；但春、秋季相對(duì)多發(fā)；5、新發(fā)毒型呈現(xiàn)傳播速度快，波及范圍廣、空間聚集性強(qiáng)的暴發(fā)態(tài)勢(shì)；6、新的變異毒株對(duì)養(yǎng)殖業(yè)危害很大（豬O型變異株）；7、不同地區(qū)飼養(yǎng)模式差距很大，免疫狀況不同，部分畜群處于非免疫保護(hù)狀態(tài)，為口蹄疫易感的高風(fēng)險(xiǎn)畜群；部分地區(qū)畜群口蹄疫感染抗體較高，具有較大暴發(fā)危險(xiǎn)。

防疫（控）重點(diǎn)（一）O型（泛亞、新豬毒）（二）Asia1型（江蘇毒）（三）A型

(四)C、SAT2-國(guó)家層面，技術(shù)儲(chǔ)備牛、羊：O、Asia1豬：O型，嚴(yán)密監(jiān)控Asia1型口蹄疫防制策略

口蹄疫難以控制的因素3個(gè)策略6種措施技術(shù)支撐口蹄疫防控成功事例口蹄疫防控技術(shù)規(guī)范口蹄疫難以控制的因素病毒因素1、FMD的易感動(dòng)物種類繁多。2、FMDV變異性極強(qiáng)。3、有7個(gè)血清型，型間不能交叉免疫，免疫防治等于面對(duì)7種不同的傳染病。型內(nèi)不同病毒株間的遺傳變異可導(dǎo)致抗原差異。4、FMDV的感染性和致病力特別強(qiáng)。5、FMD有多種傳播方式和感染途徑。6、與其他動(dòng)物病毒相比，動(dòng)物機(jī)體對(duì)FMD病毒的免疫應(yīng)答程度較低。FMDV的上述特點(diǎn)給該病的控制和消滅增加了難度。社會(huì)因素1、動(dòng)物及其產(chǎn)品的移動(dòng)問(wèn)題2、地區(qū)間、國(guó)家間防治水平不平衡采取綜合措施，防控口蹄疫3個(gè)策略：撲滅根除策略；免疫控制策略；預(yù)防策略。6種措施：

①?gòu)?qiáng)制撲殺；②免疫接種；③限制動(dòng)物、產(chǎn)品及染毒物的移動(dòng)；④嚴(yán)格和強(qiáng)化動(dòng)物衛(wèi)生措施；⑤流行病學(xué)調(diào)查與監(jiān)測(cè)；⑥疫情預(yù)報(bào)預(yù)測(cè)和風(fēng)險(xiǎn)分析。國(guó)際口蹄疫防控成功事例

成功事例臺(tái)灣地區(qū)1997年發(fā)生口蹄疫——免疫控制措施。

2001年英國(guó)暴發(fā)口蹄疫疫——撲滅根除政策。1年間屠宰700萬(wàn)頭牲畜，1/8，損失80億英鎊。疫情還擴(kuò)散到法國(guó)、荷蘭、愛(ài)爾蘭等國(guó)，成為歷史上最嚴(yán)重的動(dòng)物傳染病災(zāi)難之一。無(wú)FMD國(guó)家和地區(qū)——預(yù)防策略。

南美部分國(guó)家——免疫凈化控制措施

嚴(yán)格實(shí)施感染和免疫鑒別診斷，凈化，同時(shí)免疫，疫情大幅下降，甚至無(wú)疫情，有幾個(gè)地區(qū)成為免疫無(wú)疫區(qū)。值得學(xué)習(xí)推薦?？谔阋叻乐撇呗?技術(shù)支撐

免疫監(jiān)測(cè)免疫-國(guó)內(nèi)生產(chǎn)應(yīng)用的滅活疫苗滅活苗：豬O型口蹄疫滅活疫苗豬O型口蹄疫滅活疫苗（Ⅱ）牛羊口蹄疫O型滅活疫苗牛羊口蹄疫Asia1型滅活疫苗牛羊口蹄疫O-A型雙價(jià)滅活疫苗豬?？谔阋逴型通用滅活疫苗牛羊口蹄疫O-Asia1型雙價(jià)滅活疫苗口蹄疫0、A、Asia1三價(jià)疫苗免疫-正在研制,初步應(yīng)用的新型疫苗

1990s-：新型疫苗(基因工程疫苗)

合成肽疫苗(23years)FMDVVP1(141-160,200-213)14aa-20aa-14aa,個(gè)別地區(qū)已經(jīng)開始應(yīng)用)空衣殼疫苗:部分地區(qū)試用(目前正在研究階段的新型疫苗)活載體疫苗偽狂犬載體腺病毒載體羊痘病毒載體DNA疫苗轉(zhuǎn)基因植物

監(jiān)測(cè)技術(shù)我國(guó)擁有的OIE推薦的檢測(cè)技術(shù)病原鑒定間接夾心ELISA

補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

RT-PCR核酸檢測(cè)法RT-PCR(敏感、快速、可檢樣品廣泛，經(jīng)序列測(cè)定后，還可明確被檢病毒血清型、基因型、與疫苗毒株的親緣關(guān)系等）。

抗體檢測(cè)

病毒中和試驗(yàn)液相阻斷ELISA

固相競(jìng)爭(zhēng)ELISA感染與免疫抗體鑒別檢測(cè)非結(jié)構(gòu)蛋白ELISA

酶聯(lián)免疫凝膠電泳法(EITB)VIA瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(現(xiàn)很少用)

根據(jù)檢驗(yàn)?zāi)康倪x擇樣品

FMD的檢驗(yàn)對(duì)象可括分為活畜和畜產(chǎn)品二類。檢驗(yàn)樣品主要是水泡皮(液)、O/P液(食道咽部括取物)、血液樣品等，也可檢驗(yàn)動(dòng)物的組織、臟器、分泌物、排泄物等以及肉制品、奶制品和皮革制品等。檢測(cè)目標(biāo)為病毒、病毒抗原抗體、病毒核酸等。

口蹄疫主要檢驗(yàn)方法及所需的樣品種類

檢驗(yàn)?zāi)康臋z驗(yàn)方法所需樣品檢驗(yàn)抗原病原分離和鑒定補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)反向間接血球凝集試驗(yàn)食道/咽部查毒試驗(yàn)間接夾心ELISA血清中和試驗(yàn)水皰液、水皰皮、O/P液、唾液、奶樣、肌肉、淋巴結(jié)、脊髓等組織；水皰液、水皰皮；試驗(yàn)動(dòng)物組織懸液，細(xì)胞培養(yǎng)物水皰液、水皰皮；試驗(yàn)動(dòng)物組織懸液，細(xì)胞培養(yǎng)物O/P液水皰液、水皰皮；試驗(yàn)動(dòng)物組織懸液，細(xì)胞培養(yǎng)物水皰液、水皰皮；試驗(yàn)動(dòng)物組織懸液，細(xì)胞培養(yǎng)物檢驗(yàn)抗體血清中和試驗(yàn)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)LPB-ELISA正向間接血球凝集血清血清血清血清病毒核酸RT-PCR水皰液、水皰皮、O/P液、唾液、奶樣、肌肉、淋巴結(jié)、脊髓等組織；試驗(yàn)動(dòng)物組織懸液，細(xì)胞培養(yǎng)物；皮毛及病毒污染物水泡材料

水泡材料是指病畜的水泡液和水泡皮，該類材料富含病毒，易于診斷。水泡液采集：用消毒過(guò)的注射器從未破潰水泡中吸出水泡液，水泡液應(yīng)清亮透明，裝入滅菌瓶中，（可加入適量的抗生素，如青霉素1000U/ml，鏈霉素1000ug/ml），加蓋后用膠帶封口，貼上標(biāo)簽，冷藏保存。水泡皮

選采新鮮、成熟、未破裂或剛破不久的水泡泡皮，陳舊、結(jié)痂或腐敗變質(zhì)的殘破水泡皮則不能用O/P液

O/P液是從動(dòng)物食道/咽部括取的粘膜樣品，主要用于查明牛、羊等反芻動(dòng)物感染FMD及持續(xù)帶毒狀況。被檢動(dòng)物預(yù)先禁食12小時(shí)（可飲水），防止采樣時(shí)反芻胃內(nèi)容物污染O/P液。采樣用特制的食道探杯（probangcup），在使用前先用0.2%檸檬酸或2%NaOH溶液浸泡消毒，再用清水沖洗后使用。采樣前應(yīng)預(yù)備容量為25ml的樣品瓶，每個(gè)樣品瓶預(yù)先加8-10ml樣品保存液（細(xì)胞培養(yǎng)維持液或0.04mol/LPBS，pH7.6）。貼上防水標(biāo)簽，用防水筆寫明樣品的名稱，編號(hào)，采集地點(diǎn)，動(dòng)物種類，時(shí)間等，采到的樣品應(yīng)立即放入有冰塊的冷藏箱內(nèi)保存。EEEEEtrappingAb

AgdetectingAb

conjugate

Substrate/chromogen聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)

快速診斷試紙條是20世紀(jì)九十年代以來(lái)在單克隆抗體技術(shù)、膠體金免疫層析技術(shù)和新材料技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新型體外診斷技術(shù)。其原理是將特異性的抗原（或抗體）以條帶狀先固定于硝酸纖維膜上的某一區(qū)帶，將可顯色的標(biāo)記物（膠體金或有色乳膠微球）吸附在結(jié)合墊上。當(dāng)待測(cè)樣品（血清等）被加到試紙條一端的樣品墊上后，通過(guò)毛細(xì)作用向前移動(dòng)，溶解固化在結(jié)合墊上的標(biāo)記物并與之相互反應(yīng)形成復(fù)合物，再移動(dòng)至固定的抗原（或抗體）的區(qū)域時(shí)，待測(cè)物和標(biāo)記物的復(fù)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留積聚，從而在檢測(cè)帶上出現(xiàn)可以目測(cè)的顯色結(jié)果。診斷新技術(shù)-免疫層析快速診斷試紙條口蹄疫防治技術(shù)規(guī)范

適用范圍診斷疫情處置疫情監(jiān)測(cè)免疫檢疫監(jiān)督保障措施口蹄疫防治技術(shù)規(guī)范

口蹄疫（FootandMouthDisease,FMD）是由口蹄疫病毒引起的以偶蹄動(dòng)物為主的急性、熱性、高度傳染性疫病，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為必須報(bào)告的動(dòng)物傳染病，我國(guó)規(guī)定為一類動(dòng)物疫病。

為預(yù)防、控制和撲滅口蹄疫，依據(jù)《中華人民共和國(guó)動(dòng)物防疫法》、《重大動(dòng)物疫情應(yīng)急條例》、《國(guó)家突發(fā)重大動(dòng)物疫情應(yīng)急預(yù)案》等法律法規(guī)，制定本技術(shù)規(guī)范?？谔阋叻乐渭夹g(shù)規(guī)范1適用范圍2診斷2.1診斷指標(biāo)2.1.1流行病學(xué)特點(diǎn)2.1.2臨床癥狀2.1.2.4傳播速度快，發(fā)病率高；成年動(dòng)物死亡率低，幼畜常突然死亡且死亡率高，仔豬常成窩死亡。2.1.3病理變化2.1.3.1消化道可見(jiàn)水泡、潰瘍；2.1.3.2幼畜可見(jiàn)骨骼肌、心肌表面出現(xiàn)灰白色條紋，形色酷似虎斑?？谔阋叻乐渭夹g(shù)規(guī)范2.1.4病原學(xué)檢測(cè)2.1.4.1間接夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，檢測(cè)陽(yáng)性（ELISAOIE標(biāo)準(zhǔn)方法附件一）；2.1.4.2RT-PCR試驗(yàn)，檢測(cè)陽(yáng)性（采用國(guó)家確認(rèn)的方法）；2.1.4.3反向間接血凝試驗(yàn)（RIHA），檢測(cè)陽(yáng)性（附件二）；2.1.4.4病毒分離，鑒定陽(yáng)性。2.1.5血清學(xué)檢測(cè)2.1.5.1中和試驗(yàn)，抗體陽(yáng)性；2.1.5.2液相阻斷酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，抗體陽(yáng)性；2.1.5.3非結(jié)構(gòu)蛋白ELISA檢測(cè)感染抗體陽(yáng)性；2.1.5.4正向間接血凝試驗(yàn)（IHA），抗體陽(yáng)性（附件三）。口蹄疫防治技術(shù)規(guī)范2.2結(jié)果判定2.2.1疑似口蹄疫病例2.2.2確診口蹄疫病例

疑似口蹄疫病例，病原學(xué)檢測(cè)方法任何一項(xiàng)陽(yáng)性，可判定為確診口蹄疫病例；疑似口蹄疫病例，在不能獲得病原學(xué)檢測(cè)樣本的情況下，未免疫家畜血清抗體檢測(cè)陽(yáng)性或免疫家畜非結(jié)構(gòu)蛋白抗體ELISA檢測(cè)陽(yáng)性，可判定為確診口蹄疫病例。2.3疫情報(bào)告2.3.1疑似疫情的報(bào)告診斷為疑似口蹄疫病例時(shí)，采集病料（附件四），并將病料送省級(jí)動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)，必要時(shí)送國(guó)家口蹄疫參考實(shí)驗(yàn)室。2.3.2確診疫情的報(bào)告省級(jí)動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)確診為口蹄疫疫情時(shí)，應(yīng)立即報(bào)告省級(jí)獸醫(yī)行政管理部門和國(guó)家動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)；省級(jí)獸醫(yī)管理部門在1小時(shí)內(nèi)報(bào)省級(jí)人民政府和國(guó)務(wù)院獸醫(yī)行政管理部門。國(guó)家參考實(shí)驗(yàn)室確診為口蹄疫疫情時(shí)，應(yīng)立即通知疫情發(fā)生地省級(jí)動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)和獸醫(yī)行政管理部門，同時(shí)報(bào)國(guó)家動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)和國(guó)務(wù)院獸醫(yī)行政管理部門。省級(jí)動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)診斷新血清型口蹄疫疫情時(shí)，將樣本送至國(guó)家口蹄疫參考實(shí)驗(yàn)室?？谔阋叻乐渭夹g(shù)規(guī)范口蹄疫防治技術(shù)規(guī)范2.4疫情確認(rèn)3疫情處置3.1疫點(diǎn)、疫區(qū)、受威脅區(qū)的劃分【疫點(diǎn)】為發(fā)患病奶牛所在的地點(diǎn)。相對(duì)獨(dú)立的規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)（戶），以奶牛所在的養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）為疫點(diǎn)；散養(yǎng)戶以奶牛所在的自然村為疫點(diǎn)；放牧的兼用性奶牛以病牛所在的牧場(chǎng)及其活動(dòng)場(chǎng)地為疫點(diǎn)；在運(yùn)輸過(guò)程中發(fā)生疫情，以運(yùn)載患病奶牛的車、船、飛機(jī)等為疫點(diǎn)；在市場(chǎng)發(fā)生疫情，以患病奶牛所在市場(chǎng)為疫點(diǎn)；在屠宰加工過(guò)程中發(fā)生疫情，以屠宰加工廠為疫點(diǎn)。

【疫區(qū)】由疫點(diǎn)邊緣向外延伸3公里內(nèi)的區(qū)域。

【受威脅區(qū)】由疫區(qū)邊緣向外延伸10公里的區(qū)域。

3.2疑似疫情的處置對(duì)疫點(diǎn)實(shí)施隔離、監(jiān)控，禁止奶牛、奶產(chǎn)品及其它有關(guān)物品移動(dòng)，并對(duì)其內(nèi)、外環(huán)境實(shí)施嚴(yán)格的消毒措施。必要時(shí)采取封鎖、撲殺等措施。

口蹄疫防治技術(shù)規(guī)范3.3確診疫情處置3.3.1封鎖3.3.2對(duì)疫點(diǎn)采取的措施3.3.2.1撲殺疫點(diǎn)內(nèi)所有病畜及同群易感畜，并對(duì)病死畜、被撲殺畜及其產(chǎn)品進(jìn)行無(wú)害化處理（附件五）；3.3.2.23.3.2.33.3.2.4對(duì)發(fā)病前14天售出的家畜及其產(chǎn)品進(jìn)行追蹤，并做撲殺和無(wú)害化處理。3.3.3對(duì)疫區(qū)采取的措施3.3.3.1在疫區(qū)周圍設(shè)置警示標(biāo)志，在出入疫區(qū)的交通路口設(shè)置動(dòng)物檢疫消毒站，執(zhí)行監(jiān)督檢查任務(wù)，對(duì)出入的車輛和有關(guān)物品進(jìn)行消毒；3.3.3.2所有易感畜進(jìn)行緊急強(qiáng)制免疫，建立完整的免疫檔案；口蹄疫防治技術(shù)規(guī)范3.3.3.3關(guān)閉家畜產(chǎn)品交易市場(chǎng)，禁止活畜進(jìn)出疫區(qū)及產(chǎn)品運(yùn)出疫區(qū)；3.3.3.4對(duì)交通工具、畜舍及用具、場(chǎng)地進(jìn)行徹底消毒；3.3.3.5對(duì)易感家畜進(jìn)行疫情監(jiān)測(cè)，及時(shí)掌握疫情動(dòng)態(tài);3.3.3.6必要時(shí)，可對(duì)疫區(qū)內(nèi)所有易感動(dòng)物進(jìn)行撲殺和無(wú)害化處理。3.3.4對(duì)受威脅區(qū)采取的措施3.3.4.1最后一次免疫超過(guò)一個(gè)月的所有易感畜，進(jìn)行一次緊急強(qiáng)化免疫；3.3.4.2加強(qiáng)疫情監(jiān)測(cè)，掌握疫情動(dòng)態(tài)。3.3.5疫源分析與追蹤調(diào)查按照口蹄疫流行病學(xué)調(diào)查規(guī)范，對(duì)疫情進(jìn)行追蹤溯源、擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)分析（附件八）?？谔阋叻乐渭夹g(shù)規(guī)范3.3.6解除封鎖3.3.6.1封鎖解除的條件口蹄疫疫情解除的條件：疫點(diǎn)內(nèi)最后1頭病畜死亡或撲殺后連續(xù)觀察至少14天，沒(méi)有新發(fā)病例；疫區(qū)、受威脅區(qū)緊急免疫接種完成；疫點(diǎn)經(jīng)終末消毒；疫情監(jiān)測(cè)陰性。

新血清型口蹄疫疫情解除的條件：疫點(diǎn)內(nèi)最后1頭病畜死亡或撲殺后連續(xù)觀察至少14天沒(méi)有新發(fā)病例；疫區(qū)、受威脅區(qū)緊急免疫接種完成；疫點(diǎn)經(jīng)終末消毒；對(duì)疫區(qū)和受威脅區(qū)的易感動(dòng)物進(jìn)行疫情監(jiān)測(cè)，結(jié)果為陰性。3.3.6.2解除封鎖的程序：動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)按照上述條件審驗(yàn)合格后，由獸醫(yī)行政管理部門向原發(fā)布封鎖令的人民政府申請(qǐng)解除封鎖，由該人民政府發(fā)布解除封鎖令。必要時(shí)由上級(jí)動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)組織驗(yàn)收?？谔阋叻乐渭夹g(shù)規(guī)范

4疫情監(jiān)測(cè)4.1監(jiān)測(cè)主體：縣級(jí)以上動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)。4.2監(jiān)測(cè)方法：臨床觀察、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及流行病學(xué)調(diào)查。4.3監(jiān)測(cè)對(duì)象：以牛、羊、豬為主，必要時(shí)對(duì)其他動(dòng)物監(jiān)測(cè)。4.4監(jiān)測(cè)的范圍4.4.1養(yǎng)殖場(chǎng)戶、散養(yǎng)畜，交易市場(chǎng)、屠宰廠（場(chǎng)）、異地調(diào)入的活畜及產(chǎn)品。4.4.2對(duì)種畜場(chǎng)、邊境、隔離場(chǎng)、近期發(fā)生疫情及疫情頻發(fā)等高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域的家畜進(jìn)行重點(diǎn)監(jiān)測(cè)。監(jiān)測(cè)方案按照當(dāng)年獸醫(yī)行政管理部門工作安排執(zhí)行。4.5疫區(qū)和受威脅區(qū)解除封鎖后的監(jiān)測(cè)臨床監(jiān)測(cè)持續(xù)一年，反芻動(dòng)物病原學(xué)檢測(cè)連續(xù)2次，每次間隔1個(gè)月，必要時(shí)對(duì)重點(diǎn)區(qū)域加大監(jiān)測(cè)的強(qiáng)度。4.6在監(jiān)測(cè)過(guò)程中，對(duì)分離到的毒株進(jìn)行生物學(xué)和分子生物學(xué)特性分析與評(píng)價(jià)，密切注意病毒的變異動(dòng)態(tài)，及時(shí)向國(guó)務(wù)院獸醫(yī)行政管理部門報(bào)告。4.7各級(jí)動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)對(duì)監(jiān)測(cè)結(jié)果及相關(guān)信息進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析，做好預(yù)警預(yù)報(bào)。4.8監(jiān)測(cè)結(jié)果處理監(jiān)測(cè)結(jié)果逐級(jí)匯總上報(bào)至國(guó)家動(dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)，按照有關(guān)規(guī)定進(jìn)行處理?？谔阋叻乐渭夹g(shù)規(guī)范5免疫5.1國(guó)家對(duì)口蹄疫實(shí)行強(qiáng)制免疫，各級(jí)政府負(fù)責(zé)組織實(shí)施，當(dāng)?shù)貏?dòng)物防疫監(jiān)督機(jī)構(gòu)進(jìn)行監(jiān)督指導(dǎo)。免疫密度必須達(dá)到100%。5.2預(yù)防免疫，按農(nóng)業(yè)部制定的免疫方案規(guī)定的程序進(jìn)行。5.3突發(fā)疫情時(shí)的