分子生物學(xué)基因組轉(zhuǎn)錄組蛋白組課件

MolecularGeneticsandGenomicsFallSemester,2010植物應(yīng)用基因組學(xué)與生物信息中心11.出勤及回答問(wèn)題情況：

30%

（

隨機(jī)提問(wèn)形式）2.期末考試：

70%

（閉卷）考核方式對(duì)于選修《基因組學(xué)》課程的同學(xué)，采取寫一篇課程論文的考核方式（70%）。2學(xué)分，周五3-5節(jié)，教學(xué)樓B3012ReferencesGenomes2,Genomes3byBrownTAGeneVIII,GeneIXbyB.LewinJournalsonPlantMolecularGenetics《現(xiàn)代分子生物學(xué)》，朱玉賢，李毅

著《基因組學(xué)》楊金水著《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》（第3版），薩姆布魯克（美）主編3Chapter1:Genomes,TranscriptomesandProteomesChapter2:StudyingDNAChapter3:MappingGenomesChapter4:SequencingandAnnotationofGenomesChapter5:EukaryoticNuclearGenomesChapter6:GenomesofProkaryotesandEukaryotic OrganellesChapter7:GenomeExpressionChapter8:GenomeEvolutionOutlineofthiscourse4Chapter1: Genomes,TranscriptomesandProteomes5基因組（Genome）：由德國(guó)漢堡大學(xué)威克勒教授于1920年首創(chuàng)，指生物的整套染色體所含有的全部DNA或RNA序列。基因組是地球上每一物種具有的生物學(xué)信息的存儲(chǔ)庫(kù)?；蚪M學(xué)（Genomics）：由羅德里克于1986年首創(chuàng)，指研究生物的整個(gè)基因組，涉及基因組作圖、測(cè)序和功能分析的一門學(xué)科。1.概述632億個(gè)nt,2n=46,35,000個(gè)基因16,569bp,環(huán)形分子，多拷貝,37個(gè)基因7基因組所包含的生物信息的利用需要酶及其他參與基因組表達(dá)過(guò)程中一系列復(fù)雜生化反應(yīng)的蛋白質(zhì)的協(xié)同活性。基因組表達(dá)的最初產(chǎn)物是轉(zhuǎn)錄組，即那些含有細(xì)胞在特定時(shí)間所需生物信息、編碼蛋白質(zhì)的基因衍生而來(lái)的RNA分子的集合。轉(zhuǎn)錄組由轉(zhuǎn)錄過(guò)程來(lái)維持?；蚪M表達(dá)的第二個(gè)產(chǎn)物是蛋白質(zhì)組，即細(xì)胞中那些決定細(xì)胞能夠進(jìn)行生化反應(yīng)的所有蛋白質(zhì)組分。這是通過(guò)翻譯過(guò)程來(lái)完成的。8細(xì)胞的蛋白質(zhì)庫(kù)9DNA由JohannFriedrichMiescher在1869年發(fā)現(xiàn),這位瑞士生物學(xué)家當(dāng)時(shí)在德國(guó)蒂賓根（Tubingen）工作。2.DNA102.1GenesaremadeofDNA奧地利神父孟德?tīng)?865年根據(jù)7個(gè)碗豆性狀的實(shí)驗(yàn)提出了遺傳因子假說(shuō)，認(rèn)為每個(gè)性狀由遺傳因子控制，并提出了遺傳因子的分離與自由組合兩大遺傳規(guī)律。11證明基因由核酸

(DNA或RNA)組成的3個(gè)著名實(shí)驗(yàn)：①肺炎雙球菌的轉(zhuǎn)化試驗(yàn)；②噬菌體感染實(shí)驗(yàn)；③煙草花葉病毒的感染實(shí)驗(yàn)。12A.1928年，荷蘭細(xì)菌學(xué)家格里菲斯（Griffith）的肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)Griffith在研究肺炎球菌時(shí)發(fā)現(xiàn)肺炎球菌有很多不同菌株，其中有一種菌株它的球菌有毒性，能引起小鼠得敗血病。這些有毒的球菌外面有保護(hù)作用的多糖膠狀莢膜，使它們可以不被宿主的正常保護(hù)機(jī)構(gòu)所破壞；當(dāng)它們生長(zhǎng)在培養(yǎng)基上時(shí)，每一個(gè)細(xì)菌長(zhǎng)成一個(gè)明亮的光滑菌落，叫光滑型（S）菌株；另外一些菌株無(wú)莢膜，菌落粗糙，沒(méi)有毒性，不會(huì)引起疾病，叫R型菌株。13(1)(2)(3)(4)14這表明無(wú)毒性的R型活細(xì)菌在與被加熱殺死的S型細(xì)菌混合后，轉(zhuǎn)化成了有毒性的S型活細(xì)菌。這些轉(zhuǎn)化成的S型細(xì)菌的后代也是有毒性的S型細(xì)菌，可見(jiàn)這種性狀的轉(zhuǎn)化是可以遺傳的。1944年，艾弗里從S型活細(xì)菌中提取了DNA，蛋白質(zhì)和多糖等物質(zhì)，然后分別加入到培養(yǎng)R型細(xì)菌的培養(yǎng)基中。結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有加入DNA時(shí)，

R型細(xì)菌才能轉(zhuǎn)化成S型細(xì)菌。通過(guò)上述研究表明，DNA是使R型細(xì)菌產(chǎn)生轉(zhuǎn)化的物質(zhì)，所以DNA是遺傳物質(zhì)。15B.噬菌體感染實(shí)驗(yàn)

噬菌體T2有一個(gè)蛋白質(zhì)的外殼，DNA裹在其中。當(dāng)噬菌體T2感染大腸桿菌時(shí)，它的尾部吸附在菌體上。然后，菌體內(nèi)形成大量噬菌體，菌體裂解后，釋放出幾十個(gè)乃至幾百個(gè)與原來(lái)感染細(xì)菌一樣的噬菌體T2。構(gòu)成蛋白質(zhì)的氨基酸中，甲硫氨酸和半胱氨酸含有硫，DNA中不含S，所以S只存在于T2噬菌體的蛋白質(zhì)。相反，P主要存在于DNA中，至少占T2噬菌體含磷量的99％。AlfedHershey和MarthaChase(1952)將宿主菌細(xì)胞分別放在含35S或含32P的培養(yǎng)基中。宿主細(xì)胞在生長(zhǎng)過(guò)程中就被35S或32P標(biāo)記上了。然后用噬菌體去感染分別被S或P標(biāo)記的細(xì)菌，并在這些細(xì)菌中復(fù)制增殖。宿主菌裂解釋放出很多子代噬菌體，這些子代噬菌體也被標(biāo)記上35S或32P。16接著，用分別被35S或32p標(biāo)記的噬菌體去感染沒(méi)有被放射性同位素標(biāo)記的宿主菌，然后測(cè)定宿主菌細(xì)胞帶有的同位素。被35S標(biāo)記的噬菌體所感染的宿主菌細(xì)胞內(nèi)很少有35S，而大多數(shù)35S出現(xiàn)在宿主菌細(xì)胞的外面。也就是說(shuō)，35S標(biāo)記的噬菌體蛋白質(zhì)外殼在感染宿主菌細(xì)胞后，并未進(jìn)入宿主菌細(xì)胞內(nèi)部而是留在細(xì)胞外面。被32p標(biāo)記的噬菌體感染宿主菌細(xì)胞后，測(cè)定宿主菌的同位素，發(fā)現(xiàn)32p主要集中在宿主菌細(xì)胞內(nèi)。所以噬菌體感染宿主菌細(xì)胞時(shí)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的主要是DNA。由此可以得出結(jié)論：噬菌體注入宿主菌細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)是DNA，釋放出來(lái)的是跟原先感染細(xì)菌細(xì)胞一樣的噬菌體。可見(jiàn)在噬菌體的生活史中，只有DNA是聯(lián)系親代和子代的物質(zhì)。1718C.煙草花葉病毒的感染實(shí)驗(yàn)對(duì)病毒的研究逐漸深入以后，發(fā)現(xiàn)一些植物的病毒僅含有RNA沒(méi)有DNA。當(dāng)用煙草花葉病毒（TMV）的RNA和蛋白質(zhì)分別進(jìn)行感染試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)只有RNA才能誘發(fā)感染。RNA也是遺傳物質(zhì)19RNA蛋白質(zhì)RNA酶處理202.2ThestructureofDNA核苷酸A.Nucleotidesandpolynucleotides2’-脫氧核糖21多聚核苷酸3’,5’-磷酸二酯鍵22DNA多聚核苷酸合成的聚合反應(yīng)232.2ThestructureofDNAB.Themodelofdoublehelix

DNA晶體X射線衍射圖譜為揭示DNA分子的二級(jí)結(jié)構(gòu)提供了重要實(shí)驗(yàn)證據(jù)威爾金斯弗蘭克林24a.WatsonandCrick(1953)提出的DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型：DNA分子通常以右手雙螺旋形式存在，兩條核苷酸鏈反向平行，且互為互補(bǔ)鏈。戊糖－磷酸骨架在分子的外鍘，在分子表面形成大溝和小溝，堿基堆積于螺旋內(nèi)部.堿基間通過(guò)氫鍵相互連接，A和T以2個(gè)氫鍵配對(duì)，G和C以3個(gè)氫鍵配對(duì).螺旋中相鄰堿基間相隔0.34nm，每10個(gè)堿基對(duì)螺旋上升一圈，螺距為3.4nm，直徑為2.37nm。25Width2.37nm3.4nm26431425627盡管氫鍵使得雙鏈中的堿基間的配對(duì)具有特異性（只有互補(bǔ)的兩條鏈之間才能形成DNA雙鏈），但其對(duì)于雙螺旋的總體上的穩(wěn)定性并無(wú)太大貢獻(xiàn)。核酸分子的穩(wěn)定性的根源在于堿基對(duì)之間的疏水堆積力。作為芳香族化合物，堿基的平面使其不能在自由溶液中與水分子形成氫鍵，即它們是疏水的。疏水效應(yīng)使雙鏈DNA成為能量上最為穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。盡管這種堆積作用在RNA中也存在，但其在雙鏈DNA中達(dá)到了最大化。b.DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定力：堿基間形成的氫鍵相鄰堿基間的疏水堆積力堿基相互作用的范德華力28c.DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的類型:三種形態(tài)的DNA：A-DNA,B-DNA,Z-DNA兩類：右手螺旋和左手螺旋ABZ29ABZMiMaMaMiMiMa較寬，結(jié)構(gòu)更緊密，是RNA及RNA與DNA雜合體的主要螺旋形式單一交替的嘧啶－嘌呤序列如5’-CGCGCG-3’不是體內(nèi)核酸的主要形式所有DNA的穩(wěn)定形式11121030DNA雙螺旋不同構(gòu)象的特征螺旋直徑螺距313.RNAandtheTranscriptome基因組表達(dá)的最初產(chǎn)物是轉(zhuǎn)錄組，即那些含有細(xì)胞在特定時(shí)間所需生物信息、編碼蛋白質(zhì)的基因衍生而來(lái)的RNA分子的集合。轉(zhuǎn)錄組中的RNA分子以及其他來(lái)自非編碼基因的RNA都由轉(zhuǎn)錄過(guò)程產(chǎn)生。323.1ThestructureofRNA核糖A,C,G,U穩(wěn)定性差主要以單鏈形式存在2’,3’-環(huán)磷酸二酯33依賴模板的RNA合成DNA-dependentRNApolymerases343.2細(xì)胞內(nèi)的RNA組分一個(gè)典型的細(xì)菌細(xì)胞含有0.05–0.10pg的RNA，約占其總質(zhì)量的6%。一個(gè)哺乳動(dòng)物細(xì)胞，比細(xì)菌大得多，含有20–30pgRNA，但是只占細(xì)胞總質(zhì)量的1%。35細(xì)胞內(nèi)的RNA組分核小RNA核仁小RNA微小RNA短干擾RNA構(gòu)成轉(zhuǎn)錄組所有生物僅真核生物36核小RNA(SnRNA)：發(fā)現(xiàn)于真核生物細(xì)胞核中，與前體mRNA剪接成成熟mRNA的過(guò)程相關(guān)。核仁小RNA（snoRNA）：發(fā)現(xiàn)于真核細(xì)胞核的核仁區(qū)，在rRNA分子的加工過(guò)程中起到核心作用（比如在某個(gè)核苷酸位點(diǎn)上加上一個(gè)甲基）。微小RNA（miRNA）和短干擾RNA（siRNA）：是調(diào)控個(gè)別基因表達(dá)的小RNA。373.3ProcessingofprecursorRNA末端修飾剪接剪切化學(xué)修飾pre-rRNApre-tRNARNAediting新的化學(xué)基團(tuán)383.4Thetranscriptome轉(zhuǎn)錄組雖然不到細(xì)胞總RNA的4%，卻是細(xì)胞中最重要的組分，因?yàn)樗嘶蚪M表達(dá)的下一個(gè)階段中所要使用的編碼RNA。轉(zhuǎn)錄組從不從頭合成（denovo），一個(gè)細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞分裂誕生時(shí)就接收了其上一代的部分轉(zhuǎn)錄組，并維持一生。各蛋白質(zhì)編碼基因的轉(zhuǎn)錄過(guò)程并不是導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄組的合成，而是通過(guò)替換被降解的mRNA來(lái)維持轉(zhuǎn)錄組，并通過(guò)開(kāi)閉不同的基因的表達(dá)來(lái)改變轉(zhuǎn)錄組的組成。393.5轉(zhuǎn)錄組研究的方法A.通過(guò)序列分析研究轉(zhuǎn)錄組研究轉(zhuǎn)錄組最直接的方法是將其中的mRNA轉(zhuǎn)變?yōu)閏DNA，并對(duì)所有cDNA克隆進(jìn)行測(cè)序，再與基因組序列進(jìn)行比較分析。還可以借助第二、三代測(cè)序技術(shù)直接對(duì)RNA進(jìn)行測(cè)序。403.5轉(zhuǎn)錄組研究的方法A.通過(guò)序列分析研究轉(zhuǎn)錄組基因表達(dá)系列分析（Serialanalysisofgeneexpresion,SAGE）SAGE技術(shù)不是研究完整的cDNA，它產(chǎn)生長(zhǎng)度12bp的短序列，每一條都代表了轉(zhuǎn)錄組中存在的一種mRNA。技術(shù)基礎(chǔ)：412=16,777,216bp，真核mRNA平均1500bp，412相當(dāng)于11,000個(gè)轉(zhuǎn)錄物，這比最復(fù)雜的轉(zhuǎn)錄組中存在轉(zhuǎn)錄物數(shù)目還多，因此12bp序列能夠代表某一種mRNA。41BsmF1是一種不常見(jiàn)的限制性內(nèi)切酶，它不在其識(shí)別序列內(nèi)部，而是在識(shí)別位點(diǎn)下游10-14個(gè)nt處切割。SAGE纖維素微粒4bp頻繁切割洗脫去除連接一個(gè)含有BsmF1識(shí)別序列的寡聚核苷酸42切下來(lái)的片段被收集起來(lái)，頭尾相連以產(chǎn)生一個(gè)串聯(lián)體，進(jìn)行測(cè)序分析。串聯(lián)體中的各個(gè)標(biāo)簽序列信息被讀取并與基因組中的基因序列比對(duì)，從而可以分析哪些基因被轉(zhuǎn)錄，表達(dá)水平如何。SAGE433.5轉(zhuǎn)錄組研究的方法B.通過(guò)微陣列或芯片分析來(lái)研究轉(zhuǎn)錄組探針：原位合成并固化的寡聚核苷酸PCR產(chǎn)物cDNA優(yōu)點(diǎn)：可用于快速評(píng)估兩個(gè)或多個(gè)轉(zhuǎn)錄組間的差異。109拷貝，過(guò)量構(gòu)成轉(zhuǎn)錄組的mRNA總體被反轉(zhuǎn)錄成一個(gè)cDNA的混合物，然后被標(biāo)記，用于和芯片或微陣列雜交。443.5轉(zhuǎn)錄組研究的方法B.通過(guò)微陣列或芯片分析來(lái)研究轉(zhuǎn)錄組與基因中不同位置匹配的寡聚核苷酸鏈（包含20種左右）探針標(biāo)記效率雜交效率玻璃片，尼龍膜玻璃片，硅片45用不同的熒光來(lái)標(biāo)記cDNA樣品，微陣列與兩個(gè)樣品同時(shí)雜交，可以減少由于試驗(yàn)誤差引起的差異。464.ProteinsandtheProteome基因組表達(dá)的第二個(gè)產(chǎn)物是蛋白質(zhì)組，即細(xì)胞中那些決定細(xì)胞能夠進(jìn)行生化反應(yīng)的所有蛋白質(zhì)組分。這些蛋白質(zhì)是通過(guò)翻譯那些組成轉(zhuǎn)錄組的mRNA分子而合成的。Molcellproteomics:8.8Proteomics:4.4474.1Proteinstructure蛋白質(zhì)和DNA分子一樣，是一個(gè)線性的無(wú)分支的多聚體。蛋白質(zhì)中的單體亞單位稱為氨基酸。氨基酸形成的多聚體或多肽在長(zhǎng)度上很少超過(guò)2000個(gè)單位。氨基酸的一般結(jié)構(gòu)48A.Thefourlevelsofproteinstructure4.1Proteinstructurea.primarystructure氨基酸通過(guò)肽鍵連接成一條多肽鏈。NCCN49A.Thefourlevelsofproteinstructure4.1Proteinstructureb.secondarystructure指多肽采取的不同構(gòu)象，由不同氨基酸之間形成的氫鍵所穩(wěn)定。

螺旋；

片層50A.Thefourlevelsofproteinstructure4.1Proteinstructureb.tertiarystructure是將多肽鏈的二級(jí)結(jié)構(gòu)組分折疊成為三維構(gòu)型而形成的。它被各種化學(xué)力所穩(wěn)定：氨基酸殘基間的氫鍵；帶電荷的氨基酸R基團(tuán)間的靜電相互作用；疏水相互作用；半胱氨酸殘基間的二硫鍵5152A.Thefourlevelsofproteinstructure4.1Proteinstructured.quaternarystructure兩條或更多已形成三級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽鏈組合在一起形成一個(gè)多亞基蛋白質(zhì)。不是所有蛋白質(zhì)都有四級(jí)結(jié)構(gòu)；穩(wěn)定力包括：二硫鍵（穩(wěn)定）；

氫鍵，

疏水作用（松散）Nature,27NOV,200853B.蛋白質(zhì)的多樣性取決于氨基酸的多樣性4.1Proteinstructure組成蛋白質(zhì)的氨基酸在化學(xué)性質(zhì)上有多樣性，因此蛋白質(zhì)的功能也是多種多樣的。氨基酸的多樣性源于R基團(tuán)。54氨基酸的R基團(tuán)非極性（疏水）極性（親水）帶負(fù)電荷p19帶正電荷55564.2Theproteome蛋白質(zhì)組包括了在特定時(shí)間存在于細(xì)胞中的所有蛋白質(zhì)。一個(gè)典型的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，如肝細(xì)胞中，含有10000～20000種不同的蛋白質(zhì)，共有約8x109

個(gè)蛋白質(zhì)分子，重約0.5ng，占細(xì)胞總重量的18-20%。各種蛋白質(zhì)的拷貝數(shù)差別很大，最少的每個(gè)細(xì)胞中不足20000個(gè)，最多的可達(dá)1億個(gè)。每個(gè)細(xì)胞中拷貝數(shù)大于50000的蛋白質(zhì)被認(rèn)為含量較豐富，通常哺乳動(dòng)物細(xì)胞中約有2000種蛋白質(zhì)屬于此類，它們大多屬于管家蛋白。574.2TheproteomeA.ThelinkbetweenthetranscriptomeandtheproteomeGeneticcode58四個(gè)標(biāo)點(diǎn)密碼子594.2TheproteomeB.Thegeneticcodeisnotuniversal標(biāo)準(zhǔn)遺傳密碼的偏差示例色氨酸精氨酸線粒體基因組604.2TheproteomeB.蛋白質(zhì)組和細(xì)胞生化功能之間的聯(lián)系基因組編碼的生物學(xué)信息最終由蛋白質(zhì)表現(xiàn)。蛋白質(zhì)能夠執(zhí)行各種生物學(xué)功能：生物催化作用（酶）；結(jié)構(gòu)（細(xì)胞骨架由蛋白質(zhì)決定）；運(yùn)動(dòng)（收縮蛋白）；運(yùn)輸（血紅蛋白運(yùn)輸血液中的氧）；調(diào)節(jié)細(xì)胞進(jìn)程（信號(hào)蛋白、活化調(diào)節(jié)因子）；保護(hù)細(xì)胞個(gè)體（抗體）；儲(chǔ)藏功能（麥醇溶蛋白）。614.3蛋白質(zhì)組研究的方法A.蛋白譜（表達(dá)蛋白質(zhì)組學(xué)）用來(lái)研究一個(gè)蛋白質(zhì)組組成的特定技術(shù)。蛋白譜基于兩項(xiàng)技術(shù)：蛋白電泳和質(zhì)譜a.雙向電泳：分子量等電點(diǎn)：蛋白質(zhì)的凈電荷為零時(shí)溶液的PH值。等電聚焦等電點(diǎn)62雙向凝膠電泳結(jié)果尋找差異表達(dá)點(diǎn)63b.MALDI-TOF(基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜)4.3蛋白質(zhì)組研究的方法A.蛋白譜用于鑒定蛋白組中的蛋白質(zhì)，最多可以分析出50個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的多肽，因此一個(gè)蛋白質(zhì)可以通過(guò)胰酶將其消化后進(jìn)行測(cè)定。一旦多肽片段被離子化，多肽的質(zhì)量/電荷比就可以通過(guò)它在質(zhì)譜儀中從電離源到檢測(cè)器的“飛行時(shí)間”來(lái)確定。通過(guò)質(zhì)荷比能夠確認(rèn)多肽片段的分子質(zhì)量。計(jì)算機(jī)中含有一個(gè)由所研究的物種基因組編碼的每一個(gè)蛋白質(zhì)經(jīng)胰酶消化后各個(gè)片段的預(yù)計(jì)相對(duì)分子質(zhì)量的數(shù)據(jù)庫(kù)，計(jì)算機(jī)通過(guò)比較數(shù)據(jù)庫(kù)與檢測(cè)到的多肽片段的分子質(zhì)量來(lái)確認(rèn)最可能的初始蛋白質(zhì)。64質(zhì)量/電荷比多肽通過(guò)來(lái)自激光的脈沖能量被電離化柱腔65質(zhì)量/電荷比波譜數(shù)據(jù)計(jì)算機(jī)通過(guò)比較數(shù)據(jù)庫(kù)與檢測(cè)到的多肽質(zhì)量來(lái)確認(rèn)最可能的初始蛋白質(zhì)。664.3蛋白質(zhì)組研究的方法B.蛋白質(zhì)印跡法（Western雜交）Western雜交是將蛋白質(zhì)電泳、印跡、免疫測(cè)定融為一體的特異性蛋白質(zhì)的檢測(cè)方法。其原理是：生物中含有一定量的目標(biāo)蛋白。先從生物細(xì)胞中提取總蛋白或目標(biāo)蛋白，將蛋白質(zhì)樣品溶解于含有去污劑和還原劑的溶液中，經(jīng)SDS電泳將蛋白質(zhì)按分子量大小分離，再把分離的各蛋白質(zhì)條帶原位轉(zhuǎn)移到固相膜（硝酸纖維素膜或尼龍膜）上，接著將膜浸泡在高濃度的蛋白質(zhì)溶液中溫育，以封閉其非特異性位點(diǎn)。674.3蛋白質(zhì)組研究的方法B.蛋白質(zhì)印跡法（Western雜交）然后加入特異性抗體（一抗），膜上的目的蛋白（抗原）與一抗結(jié)合后，再加入能與一抗專一性結(jié)合的帶標(biāo)記的二抗（通常一抗用兔來(lái)源的抗體時(shí)，二抗常用羊抗兔免疫球蛋白抗體），最后通過(guò)二抗上帶標(biāo)記化合物（一般為辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶，或用同位素或生物素標(biāo)記）的特異性反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，從而可得知被檢生物細(xì)胞內(nèi)目的蛋白的表達(dá)與否、表達(dá)量及分子量等情況。68Westernblotting電泳印跡694.3蛋白質(zhì)組研究的方法C.鑒定與某一蛋白質(zhì)相互作用的蛋白質(zhì)通過(guò)鑒定有相互作用的成對(duì)或成組的蛋白質(zhì)能夠獲得基因組活性相關(guān)的重要數(shù)據(jù)。構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用圖譜被視為是連接蛋白質(zhì)組學(xué)與細(xì)胞生物化學(xué)過(guò)程的一個(gè)重要步驟。704.3蛋白質(zhì)組研究的方法C.鑒定與某一蛋白質(zhì)相互作用的蛋白質(zhì)a.噬菌體展