湖北省結(jié)核病防治研究所實驗室診斷

結(jié)核病實驗室診斷湖北省結(jié)核病防治研討所周麗平2021年8月魯進(jìn)上傳，以供學(xué)習(xí)結(jié)核分枝桿菌是結(jié)核病的致病因子與確診根據(jù)，結(jié)核病實驗室診斷就是用直接或間接的方法來證明患者體內(nèi)存在結(jié)核分枝桿菌。在臨床患者樣本中尋覓結(jié)核分枝桿菌也就是實驗室檢測的主要內(nèi)容。理想的診斷技術(shù)應(yīng)該具有快速、特異、敏感、準(zhǔn)確簡便和價錢低廉的特點，這也是結(jié)核界近百年來技術(shù)研討的方向。目前結(jié)核病實驗室檢查主要有：結(jié)核病的細(xì)菌學(xué)診斷〔涂片染色顯微鏡檢查、分枝桿菌分別培育、分枝桿菌藥物敏感性實驗、分枝桿菌菌種鑒定〕結(jié)核病的免疫學(xué)診斷〔皮膚結(jié)核菌素實驗、結(jié)核抗體測定、結(jié)核抗原測定、細(xì)胞因子檢測〕結(jié)核病分子生物學(xué)檢測〔DNA探針技術(shù)、PCR測序、PCR定性檢測結(jié)核分枝桿菌、雙重實時熒光PCR技術(shù)和TaqMan探針技術(shù)及等溫擴(kuò)增技術(shù)〕，目前分子生物學(xué)檢測技術(shù)開展非?？臁＝Y(jié)核病病理學(xué)診斷。根據(jù)國家和我省的“十二五〞結(jié)核病防治規(guī)劃，要求100％的地〔市〕級結(jié)核病實驗室具備藥物敏感性實驗才干、100％的區(qū)〔縣〕級實驗室具備分枝桿菌培育才干，同時根據(jù)我省“三位一體〞任務(wù)開展的實踐情況，目前我省各級開展結(jié)核病診斷的實驗室在涂片、培育、藥敏實驗方面才干還顯缺乏。因此主要從細(xì)菌學(xué)診斷給大家做些引見，同時簡介目前我國正在評價和推行運用的新診斷技術(shù)?？顾峋科?/p>

涂片制備 每一張玻片都要編號 涂抹痰標(biāo)本 自然枯燥 加熱固定運用鉛筆在磨砂面上編號運用竹木簽進(jìn)展涂抹不得運用火焰加熱的方法加速痰膜枯燥×加熱固定涂片太厚適宜太薄痰膜的厚薄好 零落好 不均勻適宜太厚太薄涂片厚度挑取了痰標(biāo)本的膿性部分做螺旋狀軌跡涂抹均勻大小約為2cmX1cm不要太厚透過染色前的痰膜可以隱約看到報紙上的字好的涂片Ziehl-Neelsen染色過程初染(堿性復(fù)紅)脫色(鹽酸酒精)復(fù)染(亞甲蘭)

抗酸菌非抗酸菌堿性復(fù)紅脫色Z－N染色原理－4復(fù)染染色過程將涂片排放在染色架上滴加堿性復(fù)紅染色液，加熱出現(xiàn)蒸汽后，堅持5分鐘流水輕緩沖洗滴加脫色液，堅持1分鐘流水輕緩沖洗滴加亞甲蘭復(fù)染液，堅持1分鐘流水輕緩沖洗將涂片排放在染色架上，留意間隔滴加堿性復(fù)紅加熱流水沖洗脫色-流水輕緩沖洗復(fù)染流水洗去復(fù)染液在玻片架上自然枯燥涂片抗酸染色檢查方法Z－N染色步驟

操作流程涂痰膜自然干燥復(fù)紅加熱初染5分鐘自然干燥鏡檢流水沖洗美蘭復(fù)染30秒5%鹽酸酒精脫色1-3分鐘流水沖洗流水沖洗熒光染色0.1%金胺“O〞染液染色10分鐘，水洗；3%的鹽酸酒精脫色1-2分鐘，直至無黃色可見，水洗；0.5%高錳酸鉀溶液復(fù)染1-2分鐘，水洗，晾干。檢測用10倍目鏡，40倍物鏡，不加油。顯微鏡讀片檢查及結(jié)果報告單一的抗酸菌“V〞-字形成簇的抗酸菌復(fù)染太濃呵斥的影響適宜的復(fù)染萋尼氏法鏡檢結(jié)果報告規(guī)范陰性 未發(fā)現(xiàn)抗酸菌/300視野報告實踐菌落數(shù) 1-8條/300視野(1+) 3-9條/100視野(2+) 1-9條/l0視野(3+) 1-9條/每視野(4+) 到達(dá)或超越10條/每視野報告1+至少察看300視野，2+至少察看100視野，3+以上至少50個視野熒光法鏡檢結(jié)果報告規(guī)范陰性 未發(fā)現(xiàn)抗酸菌/50視野報告實踐菌落數(shù) 1-9條/50視野(1+) 10-49條/50視野(2+) 1-9條/每視野(3+) 10-99條/每視野(4+) 到達(dá)或超越100條/每視野報告2+至少察看50視野，3+以上至少20個視野分枝桿菌培育操作步驟對照標(biāo)志的患者姓名，在生物平安柜內(nèi)將約2ml痰標(biāo)本置于相應(yīng)的前處置管中；運用吸管，將與痰標(biāo)本等體積4%NaOH參與前處置管中；旋緊處置管螺旋蓋，接通渦旋振蕩器電源，將處置管在渦旋振蕩器上渦旋震蕩30秒左右；假設(shè)以手持拿處置管，持拿方法是以拇指、無名指分別持拿處置管外壁，食指、中指按處置管螺旋蓋。操作步驟將前處置管置于試管架內(nèi)，置于生物平安柜內(nèi)，室溫靜置15分鐘；擰開羅氏培育管螺旋蓋，檢查培育基斜面底部的凝固水，假設(shè)凝固水過多，那么沿著斜面相對的一面的培育管內(nèi)壁，將凝固水棄去。以無菌吸管汲取前處置后的痰標(biāo)本，汲取時汲取的程度要小于擠壓的程度，使吸管前端一段不含液體，防止液體不測滴落。操作步驟堅持培育基斜面程度或底端略高，均勻接種至酸性羅氏培育基斜面上，每支培育基運用接種2滴〔約0.1-0.15ml〕，接種時第一滴液體接種至斜面中部，第二滴接種到培育基上部；將用過的吸管置于廢液缸內(nèi)；旋上培育管螺旋蓋，不要太緊；悄然轉(zhuǎn)動并放低培育管底部，使接種的液體均勻的在斜面上鋪開。培育基置于恒溫培育箱內(nèi)，36±1℃孵育；操作

痰標(biāo)本1－2倍4%NaOH振蕩勻化靜置15分鐘

37℃豎直培育8周均勻接種0.1ml,2支/標(biāo)本斜面向上，37℃程度放置24小時接種和孵育培育流程圖

渦旋振蕩1-2分鐘痰標(biāo)本中參與1-2倍體積4%NaOH分別接種0.1ml前處置液至2只培育基斜面接種后3天、7天察看，以后每周察看一次置37℃溫箱培育有菌落生長需經(jīng)抗酸染色確認(rèn)，至第8周無菌落生長報告陰性室溫靜置15分鐘4325671登記與報告

接種后第3和7日察看培育情況，以后每周察看一次，直至第八周末。每次察看后要在培育結(jié)果記錄本上記錄察看結(jié)果。無菌落生長報告培育陰性菌落生長不及斜面面積1/4時報告實踐菌落數(shù)菌落占斜面面積1/4報告(1+)菌落占斜面面積1/2報告(2+)菌落占斜面面積3/4報告(3+)菌落布滿培育基斜面報告(4+)初步斷定、報告以藥物敏感性測試為目的〔包括耐藥性診斷和耐藥監(jiān)測等〕，不需求對培育物進(jìn)展涂片檢查，只需將培育物送至進(jìn)展藥物敏感性測試的實驗室，并附培育物生長情況的報告單。以培育作為診斷或評價療效為目的，需求對培育物進(jìn)展涂片顯微鏡檢查、鑒定，根據(jù)涂片和鑒定結(jié)果進(jìn)展報告。培育物經(jīng)涂片顯微鏡檢查確定為抗酸菌后，結(jié)合菌落形狀、生長時間，報告：羅氏培育抗酸菌陽性經(jīng)菌種初步鑒定，證明為結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群后，報告：羅氏培育結(jié)核菌陽性菌落形狀1、幼稚菌落比較小，外表光滑而有光澤呈黃色；成熟典型菌普通為中等大小或較大，枯燥粗糙，易碎，呈奶酪色，白色或橘黃色，不透明凸起菌落。2、不典型菌落為細(xì)小、園形、潮濕、易乳化、呈黃紅色，普通7-10天內(nèi)就成熟，常為非典型抗酸桿菌或非致病菌。假設(shè)發(fā)現(xiàn)培育基污染，按污染面積報告污染菌有明顯界限，且不超越斜面面積1/4報告(C1+)污染菌有明顯界限，且不超越斜面面積1/2報告(C2+)污染菌有明顯界限，且不超越斜面面積3/4報告(C3+)污染菌沒有明顯界限或布滿培育基斜面報告(C4+)

本卷須知留取標(biāo)本后，盡能夠立刻進(jìn)展培育。假設(shè)不能立刻處置，應(yīng)冷藏；將氫氧化鈉分裝成假設(shè)干小瓶〔小包裝〕，每次運用新的氫氧化鈉；假設(shè)只需一臺生物平安柜，防止同時進(jìn)展涂片和培育操作；在同一批處置的痰標(biāo)本中，優(yōu)先處置涂片陰性的標(biāo)本，其次處置陽性級別低的標(biāo)本，最后處置涂片陽性級別高的標(biāo)本翻開標(biāo)本容器蓋子時要緩慢以減少氣溶膠的產(chǎn)生，同時防止猛烈震蕩標(biāo)本，震蕩后靜置幾分鐘，然后再翻開蓋子本卷須知處置標(biāo)本時，盡能夠隨時蓋上容器蓋子，防止在生物平安柜內(nèi)敞開一切的標(biāo)本容器用過的無菌吸管應(yīng)置于廢液缸中；正確標(biāo)志培育管防止標(biāo)本之間混淆；控制前處置去污染的接觸時間，從向標(biāo)本中參與氫氧化鈉到接種時間不能超越20分鐘，為此，當(dāng)標(biāo)本數(shù)量較多時，應(yīng)分批處置，每批標(biāo)本數(shù)量不超越6份為宜；本卷須知應(yīng)將培育結(jié)果及時反響給臨床醫(yī)生。7天以內(nèi)的結(jié)果察看中假設(shè)發(fā)現(xiàn)污染，應(yīng)告知病人及時搜集另一份標(biāo)本；假設(shè)發(fā)現(xiàn)快速生長分枝桿菌〔7天內(nèi)長出的菌落〕。立刻報告結(jié)果并要求再搜集另一份痰標(biāo)本。結(jié)核菌能夠在3-4周內(nèi)生長。發(fā)現(xiàn)菌落并鑒定后立刻報告結(jié)果。報告陰性培育結(jié)果時應(yīng)孵育滿8周。登記內(nèi)容應(yīng)包括：菌落初生長的日期以及陽性培育物的菌落特征;污染結(jié)果應(yīng)隨時檢出并報告。常用的評價目的涂陽培陰率=培育陰性的病例總數(shù)/涂片檢查陽性的病例總數(shù)*100%涂陽培陰率應(yīng)<10%污染率=污染的培育管數(shù)量/培育管總數(shù)*100%污染率應(yīng)<5%可能原因解決方法標(biāo)本保存不當(dāng)(時間、溫度）標(biāo)本留取后盡快培養(yǎng)，暫時無法培養(yǎng)應(yīng)于4C冰箱保存。標(biāo)本選擇不當(dāng)選擇標(biāo)本中膿樣、干酪樣可疑部分過處理（時間、濃度)4％NaOH，1－2倍體積，20分鐘接種量太小每管接種0.1毫升溫箱溫度不當(dāng)溫箱內(nèi)置溫度計，每日監(jiān)測溫度。涂陽培陰率過高？可能原因解決方法標(biāo)本保存不當(dāng)(時間、溫度）標(biāo)本留取后盡快培養(yǎng)，暫時無法培養(yǎng)應(yīng)于4C冰箱保存。前處理不充分4％，1－2倍，充分混旋，20分鐘。材料滅菌不佳接種用吸管需高壓滅菌。操作不當(dāng)培訓(xùn)，預(yù)培養(yǎng)，嚴(yán)格按操作規(guī)程操作。培養(yǎng)基因素統(tǒng)一供應(yīng)，4C直立保存，1個月內(nèi)使用污染率過高？藥敏實驗?zāi)康模褐委?，監(jiān)測，診斷耐藥主要就是診斷耐藥結(jié)核病、選擇和調(diào)整耐藥結(jié)核病治療方案、開展耐藥監(jiān)測以了解某一地域結(jié)核分枝桿菌的耐藥程度。比例法Canetti,1963臨界藥物濃度〔單和多藥物濃度〕臨界菌群比＝耐藥菌群數(shù)/全菌群數(shù)1%、10%…絕對濃度法Meisnner，1963臨界藥物濃度〔單或多藥物濃度〕臨界藥物菌落數(shù)〔10、20菌落〕比率法Mitchson，1963RR=MIC被檢菌/MICH37Rv常見幾種法：比例法藥敏實驗的根本步驟含藥培育基的制備菌液制備和稀釋接種培育報告結(jié)果推薦濃度（ug/ml)藥物L(fēng)J*7H107H11Bactec460MGIT960異煙肼0.20.20.20.10.1利福平40.01.01.02.01.0乙胺丁醇2.05.07.52.55.0鏈霉素4.02.02.02.01.0吡嗪酰胺

NRNRNR100.0100.0卡那霉素30.05.06.04.0阿米卡星401.01.0卷須霉素

4010.010.01.252.5環(huán)丙沙星3.02.02.02.01.0氧氟沙星2.02.02.02.02.0莫西沙星0.50.25加替沙星1.0乙硫異煙胺5.010.02.55.0丙硫異煙胺40.01.252.5PAS1.02.08.02.0環(huán)絲氨酸40NRNRNRNR氨硫脲NRNRNRNRNR利奈唑胺1.01.0WHO引薦的DST培育基藥物濃度(2007)藥敏實驗實驗前物品預(yù)備一切實驗用品必需無菌一切用品一次性拿入實驗室，不要在實驗過程中反復(fù)進(jìn)出實驗室實驗菌株的預(yù)備一、臨床標(biāo)本初分別的菌株，假設(shè)具備以下特點，可直接用于藥敏實驗：1、出現(xiàn)肉眼可見菌落后1－2周的新穎菌落。2、沒有其他污染菌共存。3、涂片確以為抗酸菌二、以下情況需求二次傳代后才干進(jìn)展藥敏實驗：1、固體培育基上生長老化的菌落。2、固體培育基上部分污染的菌落。藥敏實驗實驗人員的平安防護(hù)：分枝桿菌藥敏實驗是對高致病性病原微生物的純分別培育物進(jìn)展操作，實驗室實驗人員進(jìn)入藥敏實驗區(qū)須穿防護(hù)服、鞋套，實驗中須戴手套、帽子、N95口罩。菌懸液制備預(yù)備磨菌瓶或磨菌管：磨菌瓶為帶有可密封螺旋蓋的玻璃小瓶，裝入約10個直徑3mm的玻璃珠，高壓滅菌后待用。磨菌管為底部磨砂的玻璃管，帶有與之匹配的磨砂玻璃棰〔磨菌棒〕，分別高壓后方可可運用。菌懸液制備磨菌瓶法：在磨菌瓶中參與1~2滴10%吐溫-80，用火焰消毒的接種環(huán)刮取2-3周的新穎菌落，置于磨菌瓶中。留意盡能夠刮取多處的菌落。旋緊瓶蓋，在渦旋振蕩器上混旋0.5-1分鐘。參與少許滅菌的PBS或生理鹽水。將懸濁液轉(zhuǎn)移至比濁管中，加生理鹽水或PBS其濁度與規(guī)范麥?zhǔn)媳葷峁堋睲acFarlandNo.1〕一致，即得到1mg/ml的菌液。菌懸液制備磨菌管法向磨菌管中參與1滴10%吐溫-80，用火焰消毒的接種環(huán)刮取2-3周的新穎菌落，放入玻璃磨菌器底部，插入磨菌棒捻動，使呈乳酪樣，參與少許滅菌PBS緩沖液或生理鹽水，靜止片刻，吸適量〔1-2ml〕至比濁管中，參與生理鹽水直至其濁度與規(guī)范麥?zhǔn)媳葷峁堋睲acFarlandNo.1〕一致，即為1mg/ml的菌液。取菌磨菌菌液稀釋每株菌事先預(yù)備好2個稀釋管，然后用22SWG規(guī)范接種環(huán)或微量吸管汲取比濁好的菌液，無菌操作逐漸稀釋至10-2mg/ml和10-4mg/ml。22SWG規(guī)范接種環(huán)：金屬絲直徑0.7mm，接種環(huán)內(nèi)徑3mm，1滿環(huán)移液0.01ml。接種及培育用22SWG規(guī)范接種環(huán)分別沾取1環(huán)〔即0.01ml〕10-2mg/ml和10-4mg/ml的菌液，用劃線法均勻接種至對照及含藥培育基外表，應(yīng)留意使菌液盡能夠均勻分散于培育基斜面。最終接種菌量為10-4mg和10-6mg。接種后的培育基置于37℃培育，至周圍后報告結(jié)果。取菌液結(jié)果報告按以下方式記錄菌落生長情況：少于50個菌落：實踐菌落數(shù)50-100個菌落：1+100-200個菌落：2+大部分交融〔200-500個菌落〕：3+交融〔大于500個菌落〕：4+4周后察看結(jié)果，假設(shè)生長不良，可適當(dāng)延伸但不能超越6周報告結(jié)果.〔耐藥菌長的慢，藥效喪失〕

結(jié)果計算計算耐藥百分比：含藥培育基上生長的菌落數(shù)耐藥百分比=--------------------------×100%對照培育基上生長的菌落數(shù)假設(shè)耐藥百分比大于或等于1%，那么以為受試菌對該抗結(jié)核藥耐藥。

結(jié)果記錄方式對照SMINHEMBRFPKANOFX病人編號－4－6最終判斷S/R菌濃度藥物練習(xí)培養(yǎng)基菌濃度10－2菌濃度10－4耐藥百分比（100％）對照4+50SM3+25？INH1+9？EMB20？RFP4+45？藥敏接種預(yù)備質(zhì)量控制假設(shè)高稀釋度菌液〔10-4mg/ml〕在對照培育基上生長的菌落數(shù)少于20個菌落，那么應(yīng)從對看管傳代培育，反復(fù)實驗。每批實驗以結(jié)核分枝桿菌參考菌株〔H37Rv敏感株〕檢測含藥培育基的質(zhì)量。本卷須知培育基制備－藥物效價、保管與運用期限選擇新穎、生長旺盛的菌落進(jìn)展藥敏實驗，生長不良或陳舊菌株應(yīng)傳代后再進(jìn)展實驗比濁、菌液稀釋應(yīng)力求準(zhǔn)確，以保證接種菌量的準(zhǔn)確。以下操作應(yīng)嚴(yán)厲按技術(shù)規(guī)范進(jìn)展，防止產(chǎn)生氣溶膠：挑取菌落、磨菌、菌液稀釋和接種、燒灼接種環(huán)。實驗后按要求處置廢棄物和實驗物品。比例法藥敏實驗流程對照培育基含藥培育基藥物儲存液混合、搖勻根底液改良L-J100ml1ml磨菌分裝凝固分裝凝固1mg/ml菌懸液10-4mg/ml10-2mg/ml100倍稀釋100倍稀釋接種0.01ml接種0.01ml2-3周新穎菌落凍存分支桿菌的菌種鑒定〔初篩〕根據(jù)分支桿菌在一些特定培育基上能否生長的特性，將其初步鑒定為人型結(jié)核分支桿菌、牛型結(jié)核分支桿菌和非典型分支桿菌。主要的培育基為PNB〔對硝基苯甲酸〕、TCH〔噻吩-2-羥酸肼〕培育基接種方法：用22SWG規(guī)范接種環(huán)沾取1環(huán)10-1mg/ml的菌液〔即0.01ml〕，用劃線法均勻接種至PNB、TCH培育基外表，每管最終接種菌量為10-3mg/管。接種后的培育基置于37℃培育，至周圍后報告結(jié)果。結(jié)果判別對照培養(yǎng)基PNBTCH人型+_+牛型+__非典型+++我國目前正在評價的新診斷技術(shù)衛(wèi)生部-----蓋茨基金會工程新診斷技術(shù)項目省地市級縣級國家級二極管發(fā)光顯微鏡(LED)3----61等溫擴(kuò)增技術(shù)(LAMP)1----21線性探針(LPA)44-----1基因芯片(Genechip)4-----1多色巢式定量PCR(GenXpert)44-----1我國目前正在評價的新診斷技術(shù)衛(wèi)生部----梅里埃基金會工程新診斷技術(shù)項目省地市級縣級國家級二極管發(fā)光顯微鏡2----2等溫擴(kuò)增技術(shù)2----2線性探針2----2液體培養(yǎng)2----2r干擾素釋放試驗2基因分型11我國目前正在評價的新診斷技術(shù)實驗方法醫(yī)院數(shù)量MIGT960液體培養(yǎng)和固體培養(yǎng)的比較5衛(wèi)生部----碧迪公司工程新方法用途LED(發(fā)光二極管顯微鏡)涂片檢查LAMP(等溫擴(kuò)增)涂陰\涂陽LPA(線性探針)MDR-TB,鑒定Genechip(基因芯片)MDR-TB,鑒定GeneXpert(多色巢式定量PCR)耐RFP,涂片陰性診斷涂片檢查：LED熒光顯微鏡發(fā)光二極管〔LED〕熒光顯微鏡光源壽命長〔30,000h〕不需求預(yù)熱不需求暗室可用現(xiàn)有的顯微鏡可運用電池電源與通常熒光顯微鏡的斷定一致率98.0%〔n=1,326/內(nèi)部資料〕FraenFluoLEDmodule兩種方法察看結(jié)果Z-N染色鏡檢結(jié)果LED鏡檢結(jié)果中蓋工程LED評價結(jié)果初診患者LED涂陽患者檢出率為14.96%〔552/3691〕，萋尼氏染色明場顯微鏡涂陽患者檢出率12.46%(460/3691)，前者較后者提高2.5個百分點〔P=0.000〕隨訪患者LED和明場顯微鏡的檢出率分別為7.09%(178/2509)和2.83%〔71/2509)，提高4.26個百分點〔P=0.000〕中蓋工程LED評價結(jié)果讀片時間LED讀片時間120.03±38.88秒，明場顯微鏡206.31±75.86秒〔p=0.00〕運用接受度調(diào)查對于進(jìn)一步推行建議，大多數(shù)(8/9)以為應(yīng)進(jìn)一步推行，但其中有2人以為應(yīng)在日任務(wù)量大的實驗室優(yōu)先運用線性探針檢測技術(shù)可檢測能否感染結(jié)核桿菌可同時檢測患者能否對利福平和異煙肼耐藥約五小時內(nèi)即可得到檢測結(jié)果操作步驟檢測步驟DNA提?。?~1.5hPCR擴(kuò)增：2.5~3h探針雜交：2~2.5h結(jié)果判讀：0.5h耐藥分子診斷的根本原理利福平/異煙肼耐藥性的產(chǎn)生與結(jié)核分枝桿菌特定基因某些位點的突變相關(guān)?？菇Y(jié)核藥基因基因功能利福平rpoB編碼DNA依賴RNA聚合酶，參與mRNA轉(zhuǎn)錄過程異煙肼katG編碼過氧化氫-過氧化物酶，參與INH體內(nèi)的轉(zhuǎn)化inhA編碼煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)依賴的enoyl-ACP還原酶，參與脂酸的合成

中蓋工程線性探針檢測利福平評價

利福平線性探針傳統(tǒng)藥敏合計一致率靈敏度特異性PPV陽性預(yù)測值NPV陰性預(yù)測值耐藥敏感合計耐藥1354117693.6%75.0%96.5%76.7%96.2%敏感4511271172合/p>

中蓋工程線性探針檢測異煙肼評價

異煙肼線性探針傳統(tǒng)藥敏總計一致率靈敏度特異性PPVNPV耐藥敏感合計耐藥1493017993.2%71.0%97.4%83.2%94.8%敏感6111081169合計21011381348

中蓋工程線性探針檢測MDR評價

MDR線性探針傳統(tǒng)合計一致率靈敏度特異性PPVNPVMDR非-MDR合計MDR792810795.0%66.4%97.7%73.8%96.8%非-MDR4012011241合計11912291348結(jié)核耐藥檢測基因芯片激光共焦掃描儀軟件判讀結(jié)核耐藥檢測芯片獲北京市自主創(chuàng)新產(chǎn)品證書樣品制備儀雜交儀通量：兩個一線抗結(jié)核藥速度：6小時〔比傳統(tǒng)藥敏實驗法快50-100倍〕靈敏度：103CFU/反響特異性：對照設(shè)計嚴(yán)謹(jǐn)；自動判讀基于rpoB/katG/inhA的基因突變，快速檢測分別株或者痰樣本中結(jié)核桿菌多藥耐藥〔利福平、異煙肼〕。InternationalJournalofTuberculosisandLungDisease,13:914-920,2021〔IF=2.3〕96獲國家醫(yī)療器械證書和歐盟CE認(rèn)證基因芯片基因芯片是指采用光導(dǎo)原位合成或微量點樣等方法，將核酸片段有序地固化于支持物的外表，然后與已標(biāo)志的待測生物樣品中靶分子雜交，經(jīng)過特定的儀器對雜交信號的強(qiáng)度進(jìn)展快速、并行、高效地檢測分析，從而判別樣品中靶分子的數(shù)量。檢測過程雜交反響雜交清洗清洗枯燥掃描檢測數(shù)據(jù)分析檢測分析PCR擴(kuò)增DNA提取樣品制備芯片結(jié)果圖例芯片雜交質(zhì)控芯片制備質(zhì)控芯片制備質(zhì)控芯片雜交質(zhì)控靶基因擴(kuò)增質(zhì)控陰性對照質(zhì)控空白對照質(zhì)控產(chǎn)品指標(biāo)基因芯片線性探針注冊證書SFDA、CESFDA、CE產(chǎn)地中國德國用途從涂片陽性痰標(biāo)本或培養(yǎng)物中檢測對利福平和異煙肼的耐藥性從涂片陽性痰標(biāo)本或培養(yǎng)物中檢測分枝桿菌對利福平和異煙肼的耐藥性檢測原理耐藥相關(guān)基因的突變耐藥相關(guān)基因的突變（參考國際文獻(xiàn)）檢測方法反向雜交（斑點）反向雜交（slot\縫隙）需要儀器核酸提取儀、基因擴(kuò)增儀、芯片雜交儀、芯片洗干儀和掃描儀超聲水浴、基因擴(kuò)增儀、雜交儀試劑儲藏4℃和-20℃4℃和-20℃檢測指標(biāo)M.tb+16NTM種/群M.tb+13NTM種/群可擴(kuò)展性強(qiáng)弱內(nèi)部質(zhì)控5種3種靈敏度102-103菌/ml[JCM,inrevision]

102-103菌/ml[JCM,2002]符合率三家醫(yī)院，1724例，測序符合率100%分離株(157株)[JCM2008],(197株)[JCM2006],(219株)[CMI2006]。符合率分別為100%,,98.9%和88%

探針重復(fù)5次1次檢測重復(fù)性10次重復(fù)，結(jié)果均正確無相關(guān)資料其他樣本痰標(biāo)本、分離株痰標(biāo)本、分離株操作流程自動化高（雜交-清洗-掃描），省力，通量高，重復(fù)性好自動化低（雜交），費力，通量低，重復(fù)性稍差結(jié)果判讀儀器掃描，軟件自動判讀雜交顯示條帶需黏貼比對，肉眼或自動判讀，。成本相當(dāng)（根據(jù)兩家的市場價格和在疾病預(yù)防控制體系中應(yīng)用的承諾價格）環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)(LAMP)可同時檢測患者能否感染結(jié)核對涂陰培陽病人具有非常高的敏感性和特異性兩小時內(nèi)即可得到檢測結(jié)果，所用儀器設(shè)備極其簡單PCRLAMP?需求運用PCR擴(kuò)增儀?針對基因設(shè)計的特異性的兩條引物?擴(kuò)增效率:107?不需求運用PCR擴(kuò)增儀?多對引物保證了擴(kuò)增的特異性?擴(kuò)增效率:1010擴(kuò)增原理操作流程抽提基因組DNA擴(kuò)增管去除雜質(zhì)將純真DNA轉(zhuǎn)入擴(kuò)增管痰血液咽試子標(biāo)本類型樣品處置在幾分鐘內(nèi)就可以完成＋－Genexpert檢測技術(shù)可同時檢測患