有助于潤腸通便檢驗方法

有助于潤腸通便檢驗方法1動物實驗1.1小腸運動實驗經(jīng)口灌胃給予造模藥物復方地芬諾酯或洛哌丁胺，建立小鼠小腸蠕動抑制模型，計算一定時間內(nèi)小腸的墨汁推進率，來判斷模型小鼠胃腸蠕動功能。1.1.2儀器和材料1.1.2.1儀器和試劑手術剪、眼科鑷、直尺、注射器、天平、活性炭粉、阿拉伯樹膠、復方地芬諾酯或洛哌丁胺。1.1.2.2試劑配制1.1.2.2.1墨汁的配制：準確稱取阿拉伯樹膠100g，加水800mL，煮沸至溶液透明，稱取活性碳（粉狀）50g加至上述溶液中煮沸三次，待溶液涼后加水定容到1000mL，于冰箱中4℃保存，用前搖勻。1.1.2.2.2復方地芬諾酯混懸液的配制：濃度為0.025%。復方地芬諾酯片，每片含復方地芬諾酯2.5mg，取復方地芬諾酯片25mg（10片用研缽研碎呈粉末后加水至100mL，臨用前配制。1.1.2.2.3洛哌丁胺溶液的配制洛哌丁胺劑量為2－4mg/kgBW。依據(jù)洛哌丁胺的實用劑量取用，按實驗所需濃度配制，可加熱待溶質(zhì)完全溶解、充分搖勻后使用。1.1.3.1實驗動物選用成年雄性小鼠，體重18－22g，每組10－15只。1.1.3.2劑量分組及受試樣品給予時間實驗設三個劑量組，一個陰性對照組和一個模型對照組。以人體推薦量的10倍為其中的一個劑量組，另設二個劑量組，必要時設陽性對照組。陰性對照組和模型對照組同樣途徑給蒸餾水。受試樣品給予時間7天，必要時可延長至15天。1.1.3.3實驗步驟1.1.3.3.1模型的建立給受試樣品7天后，各組小鼠禁食不禁水16小時。模型對照組和三個劑量組灌胃給予復方地芬諾酯（5mg/kgBW）或洛哌丁胺（2~4mg/kgBW空白對照組給蒸餾水。1.1.3.3.2指標測定的方法給復方地芬諾酯或洛哌丁胺后0.5小時后，劑量組分別給予含相應受試樣品的墨汁（含5%的活性炭粉、10%阿拉伯樹膠陰性和模型對照組給墨汁灌胃。25分鐘后立即脫頸椎處死動物，打開腹腔分離腸系膜，剪取上端自幽門、下端至回盲部的腸管，置于托盤上，輕輕將小腸拉成直線，測量腸管長度為“小腸總長度”，從幽門至墨汁前沿為“墨汁推進長度”。按下式計算墨汁推進率：墨汁推進率(%)=1.1.4數(shù)據(jù)處理及結果判定墨汁推進率需進行數(shù)據(jù)轉換，X＝Sin-1p，式中P為墨汁推進率，用小數(shù)表示。在進行方差分析時，需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F(xiàn)值<F0.05，結論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當?shù)淖兞哭D換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計；若變量轉換后仍未達到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統(tǒng)計。在模型成立的前提下，受試樣品組小鼠的墨汁推進率顯著高于模型對照組的墨汁推進率時，可判定該項實驗結果陽性。1.2排便時間、糞便粒數(shù)和糞便重量的測定經(jīng)口灌胃給予造模藥物復方地芬諾酯或洛哌丁胺，建立小鼠便秘模型，測定小鼠的首粒排黑便排便時間、5或6小時內(nèi)排便粒數(shù)和排便重量，來反映模型小鼠的排便情況。1.2.2儀器和材料1.2.2.1儀器和試劑眼科鑷、注射器、分析天平、活性炭粉、阿拉伯樹膠、復方地芬諾酯、洛哌丁胺。1.2.2.2試劑配制1.2.2.2.1墨汁的配制：同小腸運動實驗。1.2.2.2.2復方地芬諾酯混懸液的配制：濃度為0.05%。復方地芬諾酯片，每片含2.5mg復方地芬諾酯。取復方地芬諾酯片50mg（20片用研缽研碎后加蒸餾水至100mL，臨用前配制。1.1.2.2.3洛哌丁胺溶液的配制：洛哌丁胺劑量為4－7mg/kgBW。依據(jù)洛哌丁胺的實用劑量取用，按實驗所需濃度配制，可加熱待溶質(zhì)完全溶解、充分搖勻后使用。1.2.3實驗方法1.2.3.1實驗動物選用成年雄性小鼠，體重18－22g，每組10－15只。1.2.3.2劑量分組及受試樣品給予時間實驗設三個劑量組，一個陰性對照組和一個模型對照組。以人體推薦量的10倍為其中的一個劑量組，另設二個劑量組，必要時設陽性對照組。陰性對照組和模型對照組同樣途徑給蒸餾水。受試樣品給予時間7天，必要時可適當延長至15天。1.2.3.3實驗步驟1.2.3.3.1模型的建立給受試樣品7天后，各組小鼠禁食不禁水16小時。陰性對照組給蒸餾水，模型對照組和三個劑量組灌胃給予復方地芬諾酯（10mg/kgBW）或洛哌丁胺（4~7mg/kg1.2.3.3.2指標測定的具體方法給復方地芬諾酯或洛哌丁胺0.5小時后，陰性對照組和模型對照組小鼠用墨汁灌胃，劑量組給予含受試樣品的墨汁，動物均單籠飼養(yǎng)，正常飲水進食。從灌墨汁開始，記錄每只動物首粒排黑便時間、5或6小時內(nèi)排黑便粒數(shù)及重量。1.2.4數(shù)據(jù)處理及結果判定資料可用方差分析，需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F(xiàn)值<F0.05，結論：各組均數(shù)間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進行統(tǒng)計；對非正態(tài)或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當?shù)淖兞哭D換，待滿足正態(tài)或方差齊要求后，用轉換后的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計；若變量轉換后仍未達到正態(tài)或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統(tǒng)計。在小腸便秘模型成立的前提下，受試樣品組小鼠的首粒排黑便時間明顯短于模型對照組，即可判定該項指標結果陽性。5或6小時內(nèi)排黑便粒數(shù)明顯高于模型對照組，可判定該項指標結果陽性。5或6小時內(nèi)排黑便重量明顯高于模型對照組，可判定該項指標結果陽性。1.2.5結果判定5或6小時內(nèi)排糞便重量和糞便粒數(shù)任一項結果陽性，同時小腸運動實驗和排便時間任一項結果陽性，可判定該項實驗結果陽性。1.2.6注意事項1.2.6.1實驗中應將復方地芬諾酯懸液不斷振蕩，以保持其濃度均一。洛哌丁胺溶液在4℃保存有時會出現(xiàn)結晶，放置室溫一段時間或加熱后可溶解。1.2.6.2墨汁配制時待阿拉伯膠加熱透明后再加入碳末。1.2.6.3應去除小鼠排出第一粒黑便前的糞便。1.3糞便性狀感官描述2人體試食試驗2.1納入受試者標準2.1.1排便次數(shù)減少和糞便硬度增加者。2.1.2大便一周少于3次者。2.1.3無器質(zhì)性便秘者。2.1.4習慣性便秘者。2.2受試者排除標準2.2.1不能經(jīng)口進食者或不能按規(guī)定服用受試樣品者。2.2.2主訴不清者。2.2.3體質(zhì)虛弱無法進行試驗者。2.2.430天內(nèi)進行過外科手術引起便秘癥狀發(fā)生者。2.2.5因嚴重器質(zhì)病變引起的近期排便困難者（結腸癌，嚴重的腸炎、腸梗阻，炎癥性腸病等）2.2.6便秘困難并伴有疼痛者。2.2.730天內(nèi)發(fā)生過急性胃腸道疾病者。2.2.8孕期及經(jīng)期婦女。2.2.9合并有心血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴重全身疾病患者。2.2.10有其它伴隨疾病正在治療者。2.2.11短期內(nèi)服用與受試功能有關的物品，影響到對結果的判斷者。2.3試驗設計及分組要求采用自身和組間對照兩種試驗設計。按受試者的便秘癥狀（排便次數(shù)、糞便性狀、癥狀持續(xù)時間等）隨機分為試食組和對照組，盡可能考慮到影響結果的主要因素如年齡、性別、日常飲食、便秘原因等，進行均衡性檢驗，以保證組間的可比性。每組受試者不少于50例。2.4受試樣品的劑量和使用方法試食組按推薦服用方法、服用量服用受試產(chǎn)品，對照組可服用安慰劑或采用空白對照，也可服用具有同樣作用的陽性物。按盲法進行試食試驗。受試樣品給予時間7天，必要時可以延長至15天。試驗期間不改變原來的飲食習慣，正常飲食。2.5觀察指標：2.5.1安全性指標2.5.1.1一般狀況包括精神、睡眠、飲食、大小便、血壓等2.5.1.2血、尿、便常規(guī)檢查2.5.1.3肝、腎功能檢查2.5.1.4胸片、心電圖、腹部部B超（在試驗開始前檢查一次）2.5.2功效性指標每日對受試者進行詢問并記錄，同時記錄受試者服用受試樣品前6天及試驗時的情況。2.5.2.1每日排便次數(shù)記錄受試者試食前后排便次數(shù)的變化。2.5.2.2排便狀況根據(jù)排便困難程度（腹痛或肛門燒灼感、下墜感、不適感，有否便頻但排便困難而量少等癥狀）分為I-IV級，統(tǒng)計積分值。I級（0分排便正常II級（1分僅有下墜感、不適感II級（2分下墜感、不適感明顯，或有便頻但排便困難而量少，較少出現(xiàn)腹痛或肛門燒灼感IV級（3分經(jīng)常出現(xiàn)腹痛或肛門燒灼感，影響排便2.5.2.3糞便性狀根據(jù)布里斯托（Bristol）糞便性狀分類法將糞便性狀分為I－III級。I級（0分像香腸或蛇，平滑而且軟；像香腸，但在它的表面有裂痕；軟的團塊，有明顯的邊緣（容易排出）II級（1分香腸形狀，但有團塊；松散的塊狀，邊緣粗糙，像泥漿狀的糞便III級（2分分離的硬團，像果核（不易排出）2.5.2.4日常飲食情況：纖維素類食物的比例。2.5.2.5記錄有無不良反應（惡心、脹氣、腹瀉、腹痛及糞便異常等）。2.6數(shù)據(jù)處理和結果判定試驗數(shù)據(jù)為計量資料，可用t檢驗進行分析。凡自身對照資料可以采用配對t檢驗，兩組均數(shù)比較采用成組t檢驗，后者需進行方差齊性檢驗，對非正態(tài)分布或方差不齊的