企業(yè)電子商務(wù)和云計(jì)算應(yīng)用探討 里面值得借鑒

序資源利用率最大化降低能耗，構(gòu)建低碳社會電子商務(wù)，云計(jì)算能帶給我們什么？1目錄

電子商務(wù)的現(xiàn)狀及市場數(shù)據(jù)分享

服裝產(chǎn)品電子商務(wù)運(yùn)營模式探討

SPA型企業(yè)電子商務(wù)中的關(guān)注點(diǎn)

云計(jì)算與電子商務(wù)應(yīng)用上的結(jié)合

公有云與私有云在企業(yè)中的應(yīng)用◆ 電子商務(wù)的現(xiàn)狀及市場數(shù)據(jù)分享2電子商務(wù)的現(xiàn)狀及市場數(shù)據(jù)分享-網(wǎng)絡(luò)經(jīng)濟(jì)占GDP的比重呈上升趨勢，Q2到達(dá)0.43%-Q2網(wǎng)絡(luò)經(jīng)濟(jì)同比增速達(dá)55.9%,遠(yuǎn)高于同期GDP、社會零售總額增速3-2021Q2電子商務(wù)同比增長達(dá)27.6%,網(wǎng)絡(luò)經(jīng)濟(jì)主要動力-預(yù)計(jì)未來五年,網(wǎng)絡(luò)零售年平均復(fù)合增長率將到達(dá)95%電子商務(wù)的現(xiàn)狀及市場數(shù)據(jù)分享(續(xù)一)4網(wǎng)絡(luò)購物用戶數(shù)(萬人)增長率%網(wǎng)購用戶占互聯(lián)網(wǎng)民比重%3.8億28.4%電子商務(wù)的現(xiàn)狀及市場數(shù)據(jù)分享(續(xù)二)5電子商務(wù)的現(xiàn)狀及市場數(shù)據(jù)分享(續(xù)三)指標(biāo)屬性占比

指標(biāo)屬性占比性別男58.0%

個人月收入500元以下18.3%女42.0%500～<1000元7.8%年齡18歲以下1.0%1000～<1500元11.9%18～24歲44.8%1500～<2000元14.1%25～30歲33.3%2000～<2500元11.7%31～35歲11.4%2500～<3000元10.4%36～40歲5.2%3000～<4000元9.7%40歲以上4.3%4000～<5000元6.2%學(xué)歷高中(中專)以下2.6%5000～<6000元3.8%高中(中專)11.6%6000～<10000元4.2%大學(xué)專科32.6%10,000元以上1.8%大學(xué)本科43.0%

碩士9.2%婚姻未婚64.1%博士及以上1.0%已婚35.9%2021年網(wǎng)購用戶屬性特征統(tǒng)計(jì)62021-2021年中國網(wǎng)購用戶最常購置商品分類分布圖電子商務(wù)的現(xiàn)狀及市場數(shù)據(jù)分享(續(xù)四)7電子商務(wù)的現(xiàn)狀及市場數(shù)據(jù)分享(續(xù)五)億元8電子商務(wù)的現(xiàn)狀及市場數(shù)據(jù)分享(續(xù)六)億元9電子商務(wù)的現(xiàn)狀及市場數(shù)據(jù)分享(續(xù)七)10目錄

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服裝產(chǎn)品電子商務(wù)運(yùn)營模式探討

SPA型企業(yè)電子商務(wù)中的關(guān)注點(diǎn)

云計(jì)算與電子商務(wù)應(yīng)用上的結(jié)合

公有云與私有云在企業(yè)中的應(yīng)用◆ 服裝產(chǎn)品電子商務(wù)運(yùn)營模式探討11服裝產(chǎn)品電子商務(wù)運(yùn)營模式探討12服裝產(chǎn)品電子商務(wù)運(yùn)營模式探討(續(xù)一)13服裝產(chǎn)品電子商務(wù)運(yùn)營模式探討(續(xù)二)14服裝產(chǎn)品電子商務(wù)運(yùn)營模式探討(續(xù)三)15服裝產(chǎn)品電子商務(wù)運(yùn)營模式探討(續(xù)四)16同樣是互聯(lián)網(wǎng)服裝零售商，作為PPG的跟隨者VANCL，成功之處在哪里？創(chuàng)始人團(tuán)隊(duì)的外鄉(xiāng)互聯(lián)網(wǎng)消費(fèi)心理學(xué)經(jīng)驗(yàn)； PPG:美國的目錄銷售及美國消費(fèi)者的消費(fèi)習(xí)慣 VANCL:國內(nèi)成功互聯(lián)網(wǎng)團(tuán)隊(duì)和傳統(tǒng)服裝業(yè)團(tuán)隊(duì)(卓越,PPG,紅孩子， 海瀾之家，傳統(tǒng)服裝業(yè))，正在建設(shè)品牌團(tuán)隊(duì)和垂直行業(yè)平臺產(chǎn)品設(shè)計(jì)和品質(zhì)控制，物流供給鏈建設(shè)； PPG:產(chǎn)品單一，品控缺乏行業(yè)專家，倉儲物流外包效勞跟不上 VANCL:產(chǎn)品線相對豐富，有服裝行業(yè)人才，自建倉儲物流體系市場推廣活動的方法，及廣告的投入產(chǎn)出比； PPG:2億元的媒體廣告，希望引導(dǎo)非網(wǎng)民成為網(wǎng)購消費(fèi)者 VANCL:互聯(lián)網(wǎng)廣告，1/10本錢，消費(fèi)者受眾針對性強(qiáng)服裝產(chǎn)品電子商務(wù)運(yùn)營模式探討(續(xù)五)17

2008年9月份創(chuàng)立并正式投入運(yùn)營；

2009年末團(tuán)隊(duì)90+人，銷售額5千萬；

2010年1月得到紅衫資本800萬美元投資；

2010年3月實(shí)體體驗(yàn)店在北京世貿(mào)天階開業(yè)；目前團(tuán)隊(duì)人數(shù)達(dá)200+，2010年銷售額將突破1億。創(chuàng)業(yè)團(tuán)隊(duì)三角模式：產(chǎn)品+營銷+技術(shù)孫弘： 服裝行業(yè)工作10余年，對設(shè)計(jì)、生產(chǎn)、效勞、供給鏈管理各個 環(huán) 節(jié)有豐富經(jīng)驗(yàn)并擁有服裝行業(yè)大量資源；張樹略: 前新浪高管，對網(wǎng)絡(luò)營銷、數(shù)據(jù)庫營銷、CRM管理、SEO優(yōu)化、 用戶行為分析等有豐富經(jīng)驗(yàn)；季斌: 新浪某子公司CTO,擅長技術(shù)開發(fā)，IT系統(tǒng)運(yùn)營管理服裝產(chǎn)品電子商務(wù)運(yùn)營模式探討(續(xù)六)18服裝產(chǎn)品電子商務(wù)運(yùn)營模式探討(續(xù)七)19“廣義的商品〞而不是“狹義的IT〞承載商品的載體承載和傳遞商品的載體集，涉及到對渠道體系的搭建以及商品在渠道媒介上的有效呈現(xiàn)(apple)對具體商品的描述具體商品購置頁面的結(jié)構(gòu)，以及商品屬性、價格以及促銷的顯示與商品購置相關(guān)聯(lián)的效勞在消費(fèi)者購置商品過程中的客戶效勞，包括咨詢，互動，配送等過程商品本身的屬性是“商品〞概念中最核心的，即商品本身的款式，功能，面料，做工等，以及品牌附加值等完整的“商品〞概念服裝產(chǎn)品電子商務(wù)運(yùn)營模式探討(續(xù)八)20服裝產(chǎn)品電子商務(wù)運(yùn)營模式探討(續(xù)九)21服裝產(chǎn)品電子商務(wù)運(yùn)營模式探討(續(xù)十)22目錄

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服裝產(chǎn)品電子商務(wù)運(yùn)營模式探討

SPA型企業(yè)電子商務(wù)中的關(guān)注點(diǎn)

云計(jì)算與電子商務(wù)應(yīng)用上的結(jié)合

公有云與私有云在企業(yè)中的應(yīng)用◆ SPA型企業(yè)電子商務(wù)中的關(guān)注點(diǎn)23SPA:自有品牌服裝專賣零售商(SpecialityStoreRetailerofPrivateLabelApparel)SPA型企業(yè)電子商務(wù)中的關(guān)注點(diǎn)線上商品價格與線下實(shí)體店價格的策略線上商品品類與線下實(shí)體店品類的規(guī)劃運(yùn)營組織體系以及供給鏈的共用與分割線上會員與線下會員的整合與營銷方法品牌推廣及市場活動的線上和線下互補(bǔ)現(xiàn)有信息系統(tǒng)和環(huán)境面對電子商務(wù)改造24目錄

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服裝產(chǎn)品電子商務(wù)運(yùn)營模式探討

SPA型企業(yè)電子商務(wù)中的關(guān)注點(diǎn)

云計(jì)算與電子商務(wù)應(yīng)用上的結(jié)合

公有云與私有云在企業(yè)中的應(yīng)用◆ 云計(jì)算與電子商務(wù)應(yīng)用上的結(jié)合25☆SaaS,SoftwareasaService軟件效勞☆PaaS,PlatformasaService平臺效勞☆I(lǐng)aaS,InfrastructureasaService根底實(shí)施效勞云計(jì)算與電子商務(wù)應(yīng)用上的結(jié)合26亞馬遜Amazon:簡單數(shù)據(jù)庫(SimpleDB,SDB)消息傳遞(SimpleQueueService,SQS)彈性計(jì)算云(ElasticComputeCloud,EC2)簡單存儲效勞(SimpleStorageService,S3)谷歌Google:應(yīng)用程序引擎(GoogleAppEngine,GAE)它是PaaS應(yīng)用的典型代表,AppEngine方便用戶開發(fā)新的效勞邏輯，并且在云計(jì)算平臺上運(yùn)行這些新的效勞。微軟的Office365，含Office、在線SharePoint、在線Lync、在線ExchangeSalesForce的CRM，IBM“藍(lán)云〞計(jì)算平臺，世紀(jì)互聯(lián)的CloudEX云主機(jī)360云殺毒,搜狗云輸入法，QQ云輸入法，百度在線輸入法等中國電信的云存儲效勞，中國移動BigCloud，聯(lián)通的云聯(lián)云方正虹云，印刷企業(yè)色彩管理數(shù)據(jù)計(jì)算、數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換和存儲云計(jì)算與電子商務(wù)應(yīng)用上的結(jié)合(續(xù)一)27云計(jì)算與電子商務(wù)應(yīng)用上的結(jié)合(續(xù)二)28數(shù)據(jù)歸屬權(quán)/平安 托管公司把數(shù)據(jù)出售給這家公司的競爭對手會怎 么樣？托管公司決定挖掘數(shù)據(jù)中的電子郵件和用 戶重要信息怎么辦？數(shù)據(jù)的高可用性 網(wǎng)站中斷對于在云計(jì)算中托管重要任務(wù)的應(yīng)用程 序的時候該怎么辦？選擇一個IaaS平臺中的存儲效勞或數(shù)學(xué)/圖形等計(jì)算效勞選擇一個有Oracle/DB2效勞或某個中間件的PaaS平臺選擇一個SaaS模式的在線商城、在線客戶效勞系統(tǒng)等云計(jì)算與電子商務(wù)應(yīng)用上的結(jié)合(續(xù)三)29目錄

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服裝產(chǎn)品電子商務(wù)運(yùn)營模式探討

SPA型企業(yè)電子商務(wù)中的關(guān)注點(diǎn)

云計(jì)算與電子商務(wù)應(yīng)用上的結(jié)合

公有云與私有云在企業(yè)中的應(yīng)用◆ 公有云與私有云在企業(yè)中的應(yīng)用30公有云與私有云在企業(yè)中的應(yīng)用公有云(PublicCloud)公有云又稱外部云,第三方供給商可以用公有云的形式提供個性化的軟件、硬件效勞，并按用戶的使用情況收費(fèi)。私有云(PrivateCloud)企業(yè)自建，可以放在數(shù)據(jù)中心的防火墻內(nèi)，或者也可以將它們部署在一個平安的主機(jī)托管場所，并且為其專用.31公有云與私有云在企業(yè)中的應(yīng)用(續(xù)一)公有云私有云數(shù)據(jù)安全性★節(jié)省前期投入★高可用性★小企業(yè)適用性★技術(shù)成熟性★公有云私有云與現(xiàn)有資源的兼容性★中國云計(jì)算應(yīng)用的突破口★資源利用率和節(jié)能減排★對現(xiàn)有IT流程的影響★32公有云與私有云在企業(yè)中的應(yīng)用(續(xù)二)公有云應(yīng)用舉例：

IDC的虛擬主機(jī)，網(wǎng)絡(luò)存儲；第三方網(wǎng)上商店系統(tǒng)，VIP會員管理系統(tǒng)；

e-Learning系統(tǒng)；在云計(jì)算中心的中間件上定制一些應(yīng)用，例如電子商務(wù)；

ORACLEPeopleSoft等系統(tǒng)。私有云應(yīng)用舉例：采用虛擬化、負(fù)載均衡等技術(shù)實(shí)現(xiàn)的效勞器資源池，網(wǎng)絡(luò)帶寬在各種應(yīng)用中(應(yīng)用系統(tǒng)，語音及視頻，互聯(lián)網(wǎng)訪問等)的動態(tài)分配；效勞器+瘦終端方式的辦公軟件應(yīng)用。33公有云與私有云在企業(yè)中的應(yīng)用(續(xù)三)產(chǎn)品設(shè)計(jì)產(chǎn)品生產(chǎn)產(chǎn)品銷售客戶效勞APPLE,SPACoca-Cola,KFCWal-Mart,蘇寧淘寶,eBay在供給鏈上的任何環(huán)節(jié)占主導(dǎo)地位的企業(yè)可以嘗試合作伙伴私有云客戶34結(jié)束QA&作為一名雇員的企業(yè)責(zé)任：降低本錢提高效率創(chuàng)造利潤作為一個公民的社會責(zé)任：節(jié)能減排低碳生活保護(hù)環(huán)境本文觀看結(jié)束?。?！謝謝欣賞！5-Aza-CdR對人食管癌細(xì)胞株生物學(xué)行為及TFPI-2mRNA表達(dá)的影響5-Aza-CdR對人食管癌細(xì)胞株生物學(xué)行為及TFPI-2mRNA表達(dá)的影響杜雅冰，邵應(yīng)舉，樊青霞，孫楨，王琳，趙培榮作者單位：(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南鄭州450002)【摘要】目的探討5-氮雜-2-脫氧胞苷(5-Aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)干預(yù)對食管鱗癌細(xì)胞株Eca9706生長增殖及其組織因子途徑抑制物2(tissuefactorpathwayinhibitor-2，TFPI-2)基因表達(dá)的影響。方法選取食管鱗癌細(xì)胞株Eca9706，并用不同濃度的5-Aza-CdR處理該細(xì)胞株。MTT法檢測干預(yù)前后細(xì)胞增長率的變化，F(xiàn)CM法檢測干預(yù)前后細(xì)胞凋亡率的變化，RT-PCR技術(shù)檢測干預(yù)前后Eca9706細(xì)胞TFPI-2基因mRNA的表達(dá)，免疫組化檢測干預(yù)前后Eca9706細(xì)胞TFPI-2蛋白的表達(dá)。結(jié)果食管鱗癌細(xì)胞株Eca9706存在TFPI-2基因超甲基化狀態(tài)，經(jīng)5-Aza-CdR處理后，超甲基化狀態(tài)解除，細(xì)胞增殖受到抑制，細(xì)胞凋亡率明顯提高(P<0.05);細(xì)胞中TFPI-2蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)，同時mRNA的表達(dá)水平也較處理前明顯提高(P<0.05)。結(jié)論食管癌細(xì)胞系TFPI-2基因超甲基化可抑制其mRNA表達(dá)，當(dāng)其超甲基化解除后，細(xì)胞增殖受到抑制，同時細(xì)胞凋亡率相應(yīng)提高?！娟P(guān)鍵詞】食管癌;組織因子途徑抑制物-2;5-氮雜-2-脫氧胞苷;甲基化;免疫組化;逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反響;凋亡ABSTRACT：ObjectiveToexploretheeffectsof5-Aza-2-deoxycytidine(5-Aza-CdR)interventiononthegrowthandproliferationofEca9706celllineandproteinexpressionoftissuefactorpathwayinhibitor-2(TFPI-2).MethodsEca9706celllinewastreatedby5-azaCdRofdifferentconcentrations;MTT，flowcytometry，immunohistochemistryandRT-PCRwereusedtodeterminethecellgrowth，apoptosis，andtheexpressionofTFPI-2geneanditsprotein.ResultsEca9706celllinehadhypermethylationofTFPI-2.Afterdemethylationby5-Aza-CdRtreatment，theproliferationofEca9706wasinhibited，theapoptosisratewasalsoincreasedsignificantlyintheconcentration-dependentmanner.RT-PCRdetectedthatmRNAexpressionofTFPI-2geneinEca9706celllinerecoveredsignificantly(P<0.05).Conclusion5-Aza-CdRcanslowthegrowthofEca9706cell，increasetheapoptosisrate，reactivatetheTFPI-2genetranscriptionandproteinexpressionbydemethylation.KEYWORDS：esophagealcarcinoma;tissuefactorpathwayinhibitor-2;5-Aza-CdR;methylation;immunohistochemistry;RT-PCR;apoptosis組織因子途徑移植物2(tissuefactorpathwayinhibitor，TFPI-2)是絲氨酸蛋白酶抑制物，在調(diào)控腫瘤細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移方面起著重要作用。目前，關(guān)于TFPI-2在食管癌中的基因表達(dá)情況的分析研究尚少。本研究旨在探討TFPI-2基因的失活機(jī)制，并尋找食管癌治療的新靶點(diǎn)。1材料與方法1.1材料RPMI-1640培養(yǎng)基購自北京索萊寶生物科技;標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清購自天津市灝洋生物制品科技;Trizol試劑購自MBI公司;RT-PCR試劑盒購自MBI公司;5-Aza-CdR購自Sigma公司;人食管癌細(xì)胞株Eca9706由鄭州大學(xué)腫瘤生物學(xué)研究室惠贈。1.2細(xì)胞培養(yǎng)和藥物處理人食管癌細(xì)胞Eca9706以含10mL/L胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，37℃、50mL/LCO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每2～3d消化傳代1次。1.3MTT法檢測干預(yù)前后細(xì)胞增長率的變化取對數(shù)生長期細(xì)胞，調(diào)整密度至5×104/mL接種于96孔板，按5-Aza-CdR濃度分為6組：0、0.4、1.6、6.4、25.6、102.4μmol/L，每組復(fù)設(shè)5個孔。待細(xì)胞貼壁后，分別于24、48、72h后參加MTT液，4h后棄去上清液，每孔加DMSO150μL，在490nm波長測定各孔吸光度值(absorbance，A)。細(xì)胞增殖抑制率(cellularproliferationinhibitionrate，CPIR)按公式計(jì)算：CPIR=(1-實(shí)驗(yàn)組A均值/對照組A均值)×100%。1.4流式細(xì)胞儀(FCM)檢測干預(yù)前后細(xì)胞凋亡率的變化取對數(shù)生長期細(xì)胞，按5×105/mL的密度接種于6孔板內(nèi)，待細(xì)胞貼壁后加藥，分組如下：對照組(0μmol/L),1.6μmol/L5-Aza-CdR組，25.6μmol/L5-Aza-CdR組，102.4μmol/L5-Aza-CdR組。每組均于5-Aza-CdR作用48h后消化收集細(xì)胞，700mL/L冰乙醇固定，流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞凋亡測定。1.5RT-PCR技術(shù)檢測TFPI-2基因mRNA的表達(dá)分組同F(xiàn)CM，每組細(xì)胞均5-Aza-CdR作用48h。TFPI-2的上、下游引物分別為5′-GTCGATTCTGCTGTTTTCC-3′和5′-ATGGAATTTTCTTTGGTGCG-3′，合成產(chǎn)物為440bp;β-actin作為內(nèi)參照，上下游引物分別為5′-AGGCATTGTGATGGACTCCG-3′和5′-AGTGATGACCTGGCCGTCAG-3′，合成產(chǎn)物為301bp。按照試劑盒說明書，用Trizol試劑提取細(xì)胞總RNA，經(jīng)紫外分光光度計(jì)分析后，按Sigma公司RevertAidFirstStrandcDNASynthesisKit說明書操作。先逆轉(zhuǎn)錄制備單鏈cDNA，再以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，用上、下游產(chǎn)物進(jìn)行PCR反響擴(kuò)增目的基因。反響條件為：94℃預(yù)變性3min，然后94℃變性30s,51℃退火30s,72℃延伸30s，循環(huán)30次，最后72℃延伸5min,4℃保溫。擴(kuò)增片段經(jīng)20g/L瓊脂糖凝膠電泳鑒定。1.6免疫組化方法檢測TFPI-2蛋白的表達(dá)取對數(shù)生長期細(xì)胞，按5×104/mL的密度接種于經(jīng)預(yù)處理的蓋玻片上，待細(xì)胞貼壁后加藥(分組同RT-PCR)。培養(yǎng)48h后參加40g/L多聚甲醛溶液固定30min,30mL/LH2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶，室溫下10min,100mL/L動物血清封閉，室溫下10min，滴加1∶100的稀釋的TFPI-2抗體4℃過夜，二抗室溫下1h，滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素，37℃孵育30min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，脫水透明封片。另取爬片滴加PBS液代替一抗作為陰性對照。結(jié)果判定：TFPI-2蛋白陽性信號均呈棕黃色顆粒樣物質(zhì)，位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。光鏡下隨機(jī)選取10個視野(每個視野觀察細(xì)胞數(shù)不少于100個)，按陽性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行結(jié)果判定。陽性率=(陽性細(xì)胞數(shù)/1000)×100%。1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，采用單因素方差分析加LSD兩兩比較法進(jìn)行分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。2結(jié)果2.1干預(yù)前后細(xì)胞增長率的變化經(jīng)MTT檢測，結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞抑制率明顯高于未加藥組，且隨著作用時間的延長和濃度的增加而增加(表1)。表1不同濃度的5-aza-CdR對Eca9706細(xì)胞增殖的影響2.2干預(yù)前后細(xì)胞凋亡率的變化流式細(xì)胞儀分析可見，經(jīng)不同濃度5-Aza-CdR誘導(dǎo)48h后，Eca9706細(xì)胞各處理組凋亡率分別為(13.76±0.47)%、(26.97±0.39)%、(41.03±0.19)%，與5-Aza-CdR誘導(dǎo)濃度成正比。與對照組[(1.39±0.27)%]比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且各濃度組間比較差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖1)。以上實(shí)驗(yàn)重復(fù)5次。2.3干預(yù)前后Eca9706細(xì)胞mRNA的表達(dá)情況擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳顯示，Eca9706細(xì)胞中TFPI-2mRNA表達(dá)在各用藥組和未用藥組之間有明顯差異，TFPI-2mRNA在未用藥組細(xì)胞中未見表達(dá)。經(jīng)1.6、25.6、102.4μmol/L5-Aza-CdR處理后可見TFPI-2mRNA表達(dá)，說明在一定范圍內(nèi)隨5-Aza-CdR藥物濃度的增加TFPI-2mRNA表達(dá)逐漸增強(qiáng)(圖2)。圖1各組流式細(xì)胞凋亡散點(diǎn)圖A：對照組;B：1.6μmol/L5-Aza-CdR組;C：25.6μmol/L5-Aza-CdR組;D：102.4μmol/L5-Aza-CdR組。圖25-Aza-CdR處理前后Eca9706細(xì)胞TFPI-2mRNA的表達(dá)M：DNAmarker;β-actin：301bp;TFPI-2：440bp;1：對照組;2：102.4μmol/L組;3：25.6μmol/L組;4：1.6μmol/L組;5：H2O對照組。,2.4干預(yù)前后TFPI-2蛋白的表達(dá)情況免疫組化結(jié)果顯示，經(jīng)5-Aza-CdR作用Eca9706細(xì)胞48h，TFPI-2蛋白的陽性表達(dá)率增加，對照組、1.6μmol/L組、25.6μmol/L組、102.4μmol/L組TFPI-2蛋白的陽性表達(dá)率分別為(2.10±1.42)%、(9.31±2.70)%、(14.72±3.50)%、(68.20±3.20)%，不同濃度組之間以及用藥組與對照組之間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖3)。圖3各組TFPI-2蛋白的表達(dá)情況3討論人TFPI-2(hTFPI-2)基因定位于7q22區(qū)域，全長由8164個堿基組成，其cDNA全長為1222kb。其mRNA的啟動子具有典型的管家基因特征，沒有典型的TATA盒或CAAT盒，在推定的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)區(qū)域GC含量超過80%[1]。TFPI-2可在體內(nèi)多種組織廣泛表達(dá)，在這些組織內(nèi)一旦出現(xiàn)腫瘤，TFPI-2的表達(dá)水平也會隨之顯著下降[2]。有研究證實(shí)，在絨毛膜癌、乳腺癌、前列腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、纖維肉瘤和胸部惡性腫瘤組織中，與腫瘤產(chǎn)生相關(guān)的TFPI-2表達(dá)水平減少可能與其啟動子的甲基化密切相關(guān)[1,3-5]。啟動子區(qū)cpG島高甲基化在腫瘤形成機(jī)制中確實(shí)切作用尚不清楚，然而眾多證據(jù)說明，腫瘤抑癌基因CpG島異常的甲基化導(dǎo)致基因失活和轉(zhuǎn)錄抑制是腫瘤發(fā)生的重要機(jī)制之一[6-8]。目前，有體外實(shí)驗(yàn)說明，DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-CdR通過去甲基化作用可使多種含有CpG島的高甲基化抑癌基因重新表達(dá)，從而恢復(fù)抑癌功能[9]。本實(shí)驗(yàn)RT-PCR結(jié)果顯示，TFPI-2在Eca9706細(xì)胞中無表達(dá)，經(jīng)過不同濃度的5-Aza-CdR處理Eca9706細(xì)胞后，TFPI-2亦重新出現(xiàn)表達(dá)，且在一定范圍內(nèi)隨藥物誘導(dǎo)濃度的增大表達(dá)逐漸增強(qiáng)。MIZUNO等[10]研究說明，腫瘤細(xì)胞中DNMT的表達(dá)較正常的高4～12倍，也證實(shí)DNMT上調(diào)參與腫瘤發(fā)生。這與我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。根據(jù)MTT實(shí)驗(yàn)可知，經(jīng)過5-Aza-CdR干預(yù)處理過的Eca9706細(xì)胞增殖明顯受抑制，且隨著藥物濃度的增加，抑制作用越明顯。從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，DNA啟動子區(qū)去甲基化能較明顯地抑制食管癌細(xì)胞增殖，并與其誘導(dǎo)劑量呈正相關(guān)，推測這種抑制作用與去甲基化后重新激活TFPI-2基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)有著直接關(guān)系;此外可能與去甲基化后誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。進(jìn)而通過流式細(xì)胞儀分析，結(jié)果顯示，經(jīng)不同濃度5-Aza-CdR干預(yù)的Eca9706的細(xì)胞中，用藥組與對照組相比細(xì)胞凋亡率凋亡率有所增加，并且與5-Aza-CdR誘導(dǎo)劑量有依賴性關(guān)系。BENDER等[11]在同等條件下用5-Aza-CdR處理惡性腫瘤細(xì)胞系和正常纖維細(xì)胞系時，發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞增殖均被抑制，而纖維細(xì)胞增殖不被抑制。因此，5-Aza-CdR對Eca9706細(xì)胞增殖的抑制及凋亡的增加不是藥物的毒性影響，可能是因?yàn)槭筎FPI-2重新表達(dá)的結(jié)果。目前，國外以TFPI-2為藥物研究靶點(diǎn)，就TFPI-2在腫瘤治療、腫瘤臨床診斷、促進(jìn)傷口愈合和動脈粥樣硬化治療等領(lǐng)域中的應(yīng)用，也正在進(jìn)行廣泛深入的研究。本研究用甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-CdR處理人食管癌Eca9706細(xì)胞株，檢測TFPI-2基因表達(dá)的變化及其對細(xì)胞增殖和凋亡的影響，以期尋找治療腫瘤的新靶點(diǎn)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】[1]HUBEF，REBERDIAUP，IOCHMANNS，etal.CharacterizationandfunctionalanalysisofTFPI-2genepromoterinahumanchoriocarcinomacellline[J].ThrombRes，203，109(4)：207-215.[2]MIYAGIiY，KOSHIKAWAN，YASUMITSUH，etal.cDNAcloningandmRNAexpressionofaserineprotein5andtissuefactorpathwayinhibitor-2[J].JBiochem，1994，116(5)：939-942.[3]RAOCN，SEGAWAT，NAVARIJR，etal.MethylationofTFPI-2geneisnotthesolecauseofitssilencing[J].IntJOncol，2003，22(4)：843-848.[4]KONDURISD，SRIVENUGOPALKS，YANAMANDRAN，etal.Promotermethylandsilencingofthetissuefactorpathwayinhibitor-2(TFPI-2)，ageneencodinganinhibitorofmatrixmetalloproteinasesinhumangliomacells[J].Oncogene，2003，22(29)：4509-416.