單克隆抗體制備流程

單克隆抗體制備流程匯報人：XX2024-01-22引言雜交瘤技術的建立細胞融合與篩選單克隆抗體的生產單克隆抗體的應用舉例總結與展望contents目錄引言01單克隆抗體的定義單克隆抗體是由單一B細胞克隆產生的高度特異性抗體。具有高度均一性和特異性，能夠識別并結合到特定的抗原表位。03生物技術領域用于抗體藥物偶聯(lián)物（ADC）的制備、免疫檢測技術的開發(fā)等。01疾病診斷和治療作為靶向藥物，用于治療癌癥、自身免疫性疾病等；作為診斷試劑，用于疾病的早期檢測和預后評估。02生物醫(yī)學研究用于研究細胞信號傳導、蛋白質相互作用等生物過程，以及用于高通量篩選和藥物發(fā)現(xiàn)。單克隆抗體的應用雜交瘤技術的建立0203在免疫前，對小鼠進行適應性飼養(yǎng)，以減少應激反應。01選擇健康、適齡的BALB/c小鼠，通常6-8周齡，雌性小鼠更常用。02確保小鼠無特定病原體感染，以避免影響免疫效果和細胞融合。免疫小鼠的選擇免疫原的制備與注射根據(jù)目標抗原的特性，選擇合適的免疫原制備方法，如純化天然抗原、合成多肽或表達重組蛋白等。將免疫原與佐劑混合，以增強免疫效果。常用佐劑包括弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑。對小鼠進行多次免疫注射，通常包括初次免疫和加強免疫，每次注射間隔一定時間。小鼠脾細胞的獲取01在最后一次免疫注射后幾天，處死小鼠并無菌取其脾臟。02在無菌條件下，將脾臟研磨并通過濾網過濾，得到單細胞懸液。用紅細胞裂解液去除紅細胞，然后洗滌并計數(shù)脾細胞。03細胞融合與篩選0301通常選擇生長迅速、易于培養(yǎng)和具有穩(wěn)定遺傳特性的骨髓瘤細胞系。選擇合適的骨髓瘤細胞系02在含有適量血清、抗生素和谷氨酰胺的培養(yǎng)基中，于37℃、5%CO2條件下進行培養(yǎng)。培養(yǎng)條件03定期傳代以保持細胞活力，同時可凍存部分細胞以備后用。細胞傳代與凍存骨髓瘤細胞的培養(yǎng)化學法使用聚乙二醇（PEG）等化學試劑誘導細胞融合，通過改變細胞膜的通透性，促使細胞相互融合。電融合法在高壓電場作用下，使細胞發(fā)生電穿孔，進而實現(xiàn)細胞融合。此方法融合效率高，但對細胞損傷較大。病毒誘導法利用某些病毒（如仙臺病毒）感染細胞，促使細胞發(fā)生融合。此方法融合效率較高，但存在安全隱患。細胞融合方法HAT培養(yǎng)基篩選01利用HAT培養(yǎng)基（次黃嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶脫氧核苷）篩選雜交瘤細胞。只有成功融合的雜交瘤細胞才能在HAT培養(yǎng)基中生長?？贵w檢測02通過ELISA等方法檢測雜交瘤細胞培養(yǎng)上清中的特異性抗體，篩選出產生目標抗體的雜交瘤細胞?？寺』?3采用有限稀釋法或軟瓊脂法等對篩選出的雜交瘤細胞進行克隆化，以獲得單克隆抗體?？寺』蟮碾s交瘤細胞可穩(wěn)定傳代并持續(xù)分泌特異性抗體。雜交瘤細胞的篩選與克隆化單克隆抗體的生產04123根據(jù)雜交瘤細胞的生長特性和營養(yǎng)需求，選擇適當?shù)呐囵B(yǎng)基，如RPMI-1640、DMEM等，添加必要的生長因子和血清。選擇適當?shù)呐囵B(yǎng)基將雜交瘤細胞接種到培養(yǎng)瓶中，放入CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，定期更換培養(yǎng)基以保持細胞生長狀態(tài)。細胞接種與培養(yǎng)當細胞密度達到一定程度時，進行傳代培養(yǎng)以擴增細胞數(shù)量。傳代過程中需保持無菌操作，避免污染。細胞擴增雜交瘤細胞的培養(yǎng)與擴增抗體收集培養(yǎng)一定時間后，收集雜交瘤細胞培養(yǎng)上清液，其中含有分泌的單克隆抗體?？贵w純化通過蛋白A/G親和層析、凝膠過濾層析等方法對收集到的抗體進行純化，去除雜質和非特異性蛋白。抗體濃縮使用超濾、透析等方法對純化后的抗體進行濃縮，提高抗體濃度。單克隆抗體的收集與純化單克隆抗體的鑒定與保存定期對保存的單克隆抗體進行穩(wěn)定性檢測，確保其活性和特異性不受影響?？贵w穩(wěn)定性檢測通過ELISA、Westernblot等方法對純化后的單克隆抗體進行鑒定，確認其特異性和親和力?？贵w鑒定將鑒定合格的單克隆抗體分裝到適當?shù)娜萜髦?，加入保護劑（如甘油），于-20℃或更低溫度下保存。長期保存可選擇液氮或超低溫冰箱?？贵w保存單克隆抗體的應用舉例05單克隆抗體可用于疾病的特異性診斷，如通過檢測患者體內特定抗原或抗體來診斷癌癥、自身免疫性疾病等。疾病診斷單克隆抗體可作為藥物載體，將藥物精確導向病變部位，提高治療效果并降低副作用，如用于治療癌癥、類風濕性關節(jié)炎等疾病的生物導彈。靶向治療利用單克隆抗體的特異性，可開發(fā)高靈敏度和高特異性的免疫檢測方法，用于檢測生物樣品中的微量物質，如激素、病毒等。免疫檢測在醫(yī)學領域的應用細胞生物學研究通過單克隆抗體可研究細胞表面受體、信號傳導途徑以及細胞周期調控等，揭示細胞生長、分化和凋亡的分子機制?；蚬こ虇慰寺】贵w可用于基因表達的調控和基因治療的研究，如通過識別特定基因產物來調控基因的表達。蛋白質組學研究單克隆抗體可用于識別和分離特定蛋白質，進而研究蛋白質的結構、功能和相互作用。在生物科學領域的應用食品安全單克隆抗體可用于食品中有害微生物和毒素的檢測，保障食品安全。刑事偵查在法醫(yī)鑒定和刑事偵查中，單克隆抗體可用于檢測生物證據(jù)中的特定物質，如血跡、精液等，幫助破案和定罪。環(huán)境監(jiān)測利用單克隆抗體的高特異性，可檢測環(huán)境中的有害物質，如重金屬、農藥殘留等。在其他領域的應用總結與展望06特異性高單克隆抗體由單一B細胞克隆產生，具有高度特異性，能夠準確識別并結合特定抗原。批間差異小由于來源于同一細胞克隆，不同批次生產的單克隆抗體具有高度一致性，降低了批間差異?？纱罅可a通過細胞培養(yǎng)技術，可以大規(guī)模生產單克隆抗體，滿足臨床和科研需求。單克隆抗體制備流程的重要性030201降低免疫原性，提高治療效果。人源化抗體同時識別兩種不同抗原，拓寬治療領域。雙特異性抗體未來發(fā)展趨勢及挑戰(zhàn)