高效液相色譜法測(cè)定山楂合劑中枸櫞酸的含量

高效液相色譜法測(cè)定山楂合劑中枸櫞酸的含量目的：建立高效液相色譜法測(cè)定山楂合劑中枸櫞酸的含量。方法：采用AgilentC18色譜柱（ZORBAXSB—C184.6mmx250mm,5pm）；流動(dòng)相為0.5%NH4H2PO4水溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.8）；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，流速為1.0mL/min,柱溫為25°C。結(jié)果：枸櫞酸進(jìn)樣量在0.058?29.0yg（r=0.99999）范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為99.29%,RSD=0.56%（n=9）。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便、快速、專(zhuān)屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好；可作為山楂合劑的質(zhì)量控制方法。標(biāo)簽：枸櫞酸；高效液相色譜法；山楂合劑；含量測(cè)定山楂合劑是由山楂、烏梅、陳皮等藥制成，具有消食健胃、理氣健脾、安蛔的功效。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有規(guī)定含量測(cè)定方法。本文根據(jù)《中國(guó)藥典》2005年版一部“山楂”和“烏梅”項(xiàng)下選擇枸櫞酸為質(zhì)量控制指標(biāo)，采用HPLC法測(cè)定山楂與烏梅的主要成分——枸櫞酸的含量。獲得滿意的結(jié)果。1儀器與藥品高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent1100系列儀）。包括自動(dòng)進(jìn)樣裝置、VWD可變紫外檢測(cè)器、柱溫箱等；METTLERAE240型電子分析天平。除高效液相色譜檢測(cè)所用試劑為色譜純外，其他試劑均為分析純。枸櫞酸對(duì)照品（CHEMSERVICELot：281—76A,純度99%,含1分子的結(jié)晶水[C6H8O7?H2O],分子量為：210）；山楂合劑由本院制劑室配制（批號(hào)070523、070718、070722）。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱：AgilentC18色譜柱（Z（）RBAXSB—C184.6mmx250mm,5pm）；流動(dòng)相：0.5%NH4H2PO4水溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH至2.8）；流速：1.0mL/min；柱溫：25C；檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm；進(jìn)樣量：5卩1。理論板數(shù)按枸櫞酸峰計(jì)算為5000。2.2溶液的制備精密稱取枸櫞酸對(duì)照品64.08mg（實(shí)際含量二64.8x99%X192m210=58.0mg）,置10mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1mL中含枸櫞酸5.8mg的溶液（貯備液），分別精密吸取溶液（貯備液）①0.01mL、②0.05mL、③0.1mL、④0.5mL、⑤1mL、⑥5mL；分別置5mL量瓶中，加水稀釋至刻度，分別得每1mL含①0.0116mg、②0.058mg、③0.116mg、④0.58mg、⑤1.16mg、⑥5.8mg的對(duì)照品溶液。取山楂合劑5mL,置25mL量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻，用0.45pm的微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。2.3方法學(xué)考察2.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍精密吸取枸櫞酸對(duì)照品溶液①、②、③、④、⑤、⑥各5pL,分別注入高效液相色譜儀測(cè)定。以枸櫞酸對(duì)照品含量（pg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，直線幾乎通過(guò)原點(diǎn)，所以采用外標(biāo)一點(diǎn)法進(jìn)行含量測(cè)定。線性回歸方程為Y=87.67X+5.45,r=0.99999，線性范圍為0.058?29.0yg。2.3.2精密度試驗(yàn)：取同一枸櫞酸對(duì)照品溶液④5卩1,注入液相色譜儀，連續(xù)測(cè)定6次，結(jié)果峰面積積分值分別為：229.7922，225.4753，227.4164，228.3199，227.5747,225.7234；積分值平均為：227.38,RSD=0.71%。結(jié)果表明儀器精密度較好。2.3.3穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液（批號(hào)為070523）各5卩1,分別于0,2,5,10,15,20,24h注入液相色譜儀測(cè)定,結(jié)果供試品溶液峰面積積分值的RSD=1.2%，表明在24h內(nèi)對(duì)照品和供試品的峰面積積分值穩(wěn)定，說(shuō)明測(cè)定溶液配制好后，放置24h內(nèi)測(cè)定均可。2.3.4重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一批號(hào)的山楂合劑（批號(hào)：070523）,按供試品溶液的制備方法重復(fù)操作測(cè)定6次,結(jié)果平均含量為3.26mg／mL,RSD=1.16%。回收率試驗(yàn)采用加樣回收法,取已知含量的同一批號(hào)（070523）山楂合劑（含量為：3.26mg/mL）適量，分別精密加入枸櫞酸對(duì)照品適量，按供試品溶液的制備及測(cè)定法操作。結(jié)果見(jiàn)表1。陰性干擾試驗(yàn)照上述條件測(cè)定山楂合劑空白（不含山楂、烏梅藥材制成的陰性合劑）制劑，結(jié)果在枸櫞酸色譜峰相對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)吸收峰，說(shuō)明處方中其它藥味對(duì)山楂、烏梅中的枸櫞酸測(cè)定無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。2.4樣品含量測(cè)定按供試品溶液的制備及測(cè)定法操作，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5卩1,注入液相色譜儀測(cè)定，外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算。結(jié)果見(jiàn)表2。SI山槽含桶中曲豐■加涯砂詼廟曲果加亠勺》卑枠社iff晶■苗毗味酗bN足憾?i收卿竽勵(lì)貝~TOC\o"1-5"\h\z3 [LU 7.M 17.KM3 0.71 7.h 17.S ILU 17.554寶LI聶$ 肛“ bi 慷豈迪 W-21（L?E flkll |軌時(shí)辭 胃L儲(chǔ) 列?窖P 。再J D.Tt I出4旳34.37n.TISU.7￡ ?.R￡1 11. 2）. 個(gè)‘関IJ.7QZJ.-W3W.73嵐令 嵐令 誼匸nyiml.l勺曲苫間:"Fl上:1_苗 斗羽 a.E*mtia xm am xi?呦”幻 -：LII 314 3.12I直lw如3討論枸櫞酸是山楂與烏梅中主要的活性成分之一，也是山楂合劑治療疾病的重要成