抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)生物多樣性影響評(píng)價(jià)技術(shù)導(dǎo)則（試行）(HJ 1344-2023)

1抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)生物多樣性影響評(píng)價(jià)技術(shù)導(dǎo)則（試行）1適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)生物多樣性影響評(píng)價(jià)的原則、程序、內(nèi)容和方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于在開(kāi)放環(huán)境條件下進(jìn)行生產(chǎn)性試驗(yàn)和生產(chǎn)應(yīng)用的抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)生物多樣性影響的評(píng)價(jià)。2規(guī)范性引用文件本標(biāo)準(zhǔn)引用了下列文件或其中的條款。凡是注明日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T30989高通量基因測(cè)序技術(shù)規(guī)程GB/T32722土壤質(zhì)量土壤樣品長(zhǎng)期和短期保存指南GB/T32725實(shí)驗(yàn)室測(cè)定微生物過(guò)程、生物量與多樣性用土壤的好氧采集、處理及貯存指南HJ710.1生物多樣性觀測(cè)技術(shù)導(dǎo)則陸生維管植物HJ710.3生物多樣性觀測(cè)技術(shù)導(dǎo)則陸生哺乳動(dòng)物HJ710.4生物多樣性觀測(cè)技術(shù)導(dǎo)則鳥(niǎo)類(lèi)HJ710.6生物多樣性觀測(cè)技術(shù)導(dǎo)則兩棲動(dòng)物HJ710.7生物多樣性觀測(cè)技術(shù)導(dǎo)則內(nèi)陸水域魚(yú)類(lèi)HJ710.8生物多樣性觀測(cè)技術(shù)導(dǎo)則淡水底棲大型無(wú)脊椎動(dòng)物HJ710.9生物多樣性觀測(cè)技術(shù)導(dǎo)則蝴蝶HJ710.10生物多樣性觀測(cè)技術(shù)導(dǎo)則大中型土壤動(dòng)物HJ710.13生物多樣性觀測(cè)技術(shù)導(dǎo)則蜜蜂類(lèi)農(nóng)業(yè)部953號(hào)公告—8.4—2007轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品環(huán)境安全檢測(cè)抗蟲(chóng)水稻第4部分：生物多樣性影響農(nóng)業(yè)部953號(hào)公告—10.4—2007轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品環(huán)境安全檢測(cè)抗蟲(chóng)玉米第4部分：生物多樣性影響農(nóng)業(yè)部953號(hào)公告—12.4—2007轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品環(huán)境安全檢測(cè)抗蟲(chóng)棉花第4部分：生物多樣性影響3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物insect-resistanttransgenicplants通過(guò)基因工程技術(shù)引入或修飾基因，改變受體植物基因組構(gòu)成而培育出的具有抗蟲(chóng)性狀的植物。23.2靶標(biāo)生物targetorganisms轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)性狀所針對(duì)的生物。3.3非靶標(biāo)生物non-targetorganisms抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物中轉(zhuǎn)基因性狀所針對(duì)的靶標(biāo)生物以外的其他生物。3.4生物多樣性biodiversity生物（動(dòng)物、植物、微生物）與環(huán)境形成的生態(tài)復(fù)合體以及與此相關(guān)的各種生態(tài)過(guò)程的總和，包括生態(tài)系統(tǒng)、物種和基因三個(gè)層次。本標(biāo)準(zhǔn)主要指調(diào)查區(qū)域內(nèi)可能受到抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物影響的物種多樣性。4評(píng)價(jià)原則4.1預(yù)先防范原則對(duì)于可能會(huì)對(duì)生物多樣性產(chǎn)生不利影響的抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物，即使目前缺乏充分的試驗(yàn)證據(jù)，也應(yīng)對(duì)該抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物的生物多樣性影響進(jìn)行評(píng)價(jià)，并采取適當(dāng)措施預(yù)防可能出現(xiàn)的不利影響。評(píng)價(jià)區(qū)域存在重點(diǎn)保護(hù)物種等敏感對(duì)象（如農(nóng)作物的野生近緣種）的，需要采取專(zhuān)門(mén)措施將抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物局限在最小影響范圍內(nèi)或者禁止轉(zhuǎn)基因植物在該區(qū)域種植。4.2科學(xué)性原則必須基于嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度、采用科學(xué)的方法和技術(shù)評(píng)價(jià)抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)生物多樣性的影響，對(duì)調(diào)查到的試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行科學(xué)的統(tǒng)計(jì)分析，得出可驗(yàn)證的評(píng)價(jià)結(jié)果，并對(duì)評(píng)價(jià)結(jié)果進(jìn)行科學(xué)的解釋。4.3個(gè)案分析原則針對(duì)外源基因特征、受體植物類(lèi)型、釋放環(huán)境及用途、待調(diào)查生物的特性等，采用適當(dāng)流程和方法，開(kāi)展抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)生物群落或特定生物種群的影響評(píng)價(jià)。4.4比較分析原則抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)生物多樣性影響評(píng)價(jià)需要以非轉(zhuǎn)基因植物為對(duì)照，在條件一致的環(huán)境中進(jìn)行比較和分析。5評(píng)價(jià)程序抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)生物多樣性的影響評(píng)價(jià)程序見(jiàn)圖1，一般包括如下5個(gè)步驟：a）收集和整理抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物的相關(guān)生物學(xué)背景資料、種植狀況和管理措施等信息；b）確定生物多樣性調(diào)查的對(duì)象、區(qū)域、時(shí)間和方法；c）根據(jù)評(píng)價(jià)目的開(kāi)展群落或者種群水平生物多樣性調(diào)查，包括對(duì)自然保護(hù)地等環(huán)境中可能受到抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物影響的重點(diǎn)保護(hù)物種、極小種群動(dòng)植物進(jìn)行調(diào)查；d）判斷抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)生物群落或特定生物種群是否具有顯著影響。如果評(píng)價(jià)結(jié)果顯示抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)生物群落或特定生物種群無(wú)顯著影響，則進(jìn)入確定評(píng)價(jià)結(jié)論環(huán)節(jié)；如果評(píng)價(jià)結(jié)果顯示抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)生物群落或特定生物種群具有顯著影響，則進(jìn)一步判斷該影響的范圍、持續(xù)性、程度、原因等是否明確，如未明確則繼續(xù)開(kāi)展資料收集和調(diào)查，直至明確影響的范圍、3否是是否是是持續(xù)性、程度、原因等才可以進(jìn)入確定評(píng)價(jià)結(jié)論環(huán)節(jié)；e）確定評(píng)價(jià)結(jié)論，編制評(píng)價(jià)報(bào)告。步驟步驟4：對(duì)生物群落或特定生物種群是否具有顯著否否圖1抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)生物多樣性影響評(píng)價(jià)程序6背景資料6.1受體植物受體植物的背景資料主要包括：a）學(xué)名、分類(lèi)學(xué)地位、生物學(xué)特性和進(jìn)化史；b）原產(chǎn)地及引進(jìn)時(shí)間，用途和在國(guó)內(nèi)的應(yīng)用情況；c）對(duì)人體健康和生態(tài)環(huán)境的安全性記錄；d）生活史和在自然界中生存繁殖的能力；e）在國(guó)內(nèi)的地理分布和自然生境，生長(zhǎng)發(fā)育、繁殖所要求的生態(tài)環(huán)境條件；f）遺傳變異和遺傳穩(wěn)定性，監(jiān)測(cè)方法和監(jiān)控的可能性；g）在無(wú)法獲得受體植物時(shí)，可參考上述要求調(diào)查非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参锏挠嘘P(guān)背景資料。6.2基因操作基因操作方面的背景資料主要包括：a）引入或修飾基因的核苷酸序列和推導(dǎo)的氨基酸序列及其功能和安全性；b）引入或修飾基因序列在植物細(xì)胞中的定位及其確定方法；c）引入或修飾基因表達(dá)的器官和組織，如根、莖、葉、花、果、種子等；4d）引入或修飾基因表達(dá)的穩(wěn)定性；e）其他類(lèi)型的基因操作。6.3抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物的背景資料主要包括：b）雜草性和入侵性；c）基因漂移及其環(huán)境影響；d）種植情況；e）耕作栽培措施的變化。6.4種植區(qū)域生物多樣性本底種植區(qū)域生物多樣性本底的背景資料主要包括：a）生境特征（如土壤性質(zhì)、氣象特點(diǎn)、生態(tài)類(lèi)型）；b）植物物種多樣性；c）動(dòng)物物種多樣性；d）土壤微生物多樣性；e）其他可能涉及的生物物種多樣性。7評(píng)價(jià)內(nèi)容7.1對(duì)主要靶標(biāo)生物的影響評(píng)價(jià)抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)主要靶標(biāo)生物生長(zhǎng)發(fā)育、繁殖、種群動(dòng)態(tài)的影響。7.2對(duì)物種多樣性的影響對(duì)物種多樣性的影響評(píng)價(jià)應(yīng)包括以下內(nèi)容：a）優(yōu)勢(shì)種種群動(dòng)態(tài)；b）指示種種群動(dòng)態(tài)；c）具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值、生態(tài)價(jià)值、文化價(jià)值、觀賞價(jià)值等物種種群動(dòng)態(tài)；d）國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)物種、極小種群動(dòng)植物、特有種等種群動(dòng)態(tài)；e）其他可能涉及的物種多樣性動(dòng)態(tài)。7.3對(duì)生物群落多樣性的影響對(duì)生物群落多樣性的影響評(píng)價(jià)應(yīng)包括以下內(nèi)容：a）草本、木本等植物群落多樣性；b）植食性、捕食性、寄生性、腐生性等動(dòng)物群落多樣性；c）細(xì)菌、真菌等微生物群落多樣性；d）其他可能涉及的生物群落多樣性。58調(diào)查方案8.1一般要求評(píng)價(jià)抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)生物多樣性影響的調(diào)查方案一般包括調(diào)查對(duì)象、調(diào)查區(qū)域和采樣點(diǎn)、調(diào)查時(shí)間和頻次、調(diào)查內(nèi)容、調(diào)查方法等。8.2調(diào)查對(duì)象直接或者間接暴露于抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物的生物，主要包括取食抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物的動(dòng)物、生存于抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物內(nèi)部和表面的微生物。8.3調(diào)查區(qū)域和采樣點(diǎn)調(diào)查區(qū)域主要為抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物生長(zhǎng)地及周邊的農(nóng)田、林地、水體。采樣點(diǎn)應(yīng)具有所評(píng)價(jià)環(huán)境中生物多樣性的代表性；采樣點(diǎn)面積應(yīng)根據(jù)抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物的生物學(xué)特性、對(duì)生物多樣性影響的方式和特點(diǎn)、調(diào)查對(duì)象的生長(zhǎng)繁殖特性等確定；采樣點(diǎn)數(shù)量應(yīng)滿(mǎn)足統(tǒng)計(jì)學(xué)的基本要求。8.4調(diào)查時(shí)間和頻次根據(jù)抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物的生活周期確定調(diào)查時(shí)間和頻次。短期影響應(yīng)進(jìn)行3次以上的調(diào)查，調(diào)查時(shí)間應(yīng)包括抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物的旺盛生長(zhǎng)期和抗蟲(chóng)基因表達(dá)高峰期。中長(zhǎng)期影響應(yīng)進(jìn)行不少于5年的調(diào)查，可根據(jù)抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物的生活周期，每年在其重要生長(zhǎng)階段（如苗期、花期、結(jié)實(shí)期、收獲期）進(jìn)行調(diào)查。8.5調(diào)查內(nèi)容及方法8.5.1調(diào)查內(nèi)容8.5.1.1靶標(biāo)生物多樣性在抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物及其對(duì)照植物的主要生育期，調(diào)查主要靶標(biāo)生物的種類(lèi)及其落卵量、幼蟲(chóng)齡期和數(shù)量、為害率等。8.5.1.2非靶標(biāo)生物物種多樣性8.5.1.2.1優(yōu)勢(shì)種在抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物及其對(duì)照植物的主要生育期，調(diào)查優(yōu)勢(shì)種的種類(lèi)、數(shù)量、密度和分布等。8.5.1.2.2指示種在抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物及其對(duì)照植物的主要生育期，調(diào)查指示種的種類(lèi)、數(shù)量、密度和分布等。8.5.1.2.3具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值、生態(tài)價(jià)值、文化價(jià)值、觀賞價(jià)值的物種在抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物及其對(duì)照植物的主要生育期，調(diào)查具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值、生態(tài)價(jià)值、文化價(jià)值、觀賞價(jià)值等物種的種類(lèi)、數(shù)量、密度和分布等。68.5.1.2.4國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)物種、極小種群動(dòng)植物、特有種在抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物及其對(duì)照植物的主要生育期，調(diào)查國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)物種、極小種群動(dòng)植物、特有種的種類(lèi)、數(shù)量、密度和分布等。8.5.1.3非靶標(biāo)生物群落多樣性8.5.1.3.1草本、木本等植物群落多樣性調(diào)查主要草本、木本等植物的種類(lèi)、數(shù)量、高度、蓋度、生長(zhǎng)狀態(tài)、群落結(jié)構(gòu)等。8.5.1.3.2植食性、捕食性、寄生性、腐生性等動(dòng)物群落多樣性調(diào)查主要植食性、捕食性、寄生性、腐生性等動(dòng)物的種類(lèi)、數(shù)量、密度、群落結(jié)構(gòu)和分布等。8.5.1.3.3土壤細(xì)菌、真菌等微生物群落多樣性調(diào)查土壤細(xì)菌、真菌等微生物的種類(lèi)及其數(shù)量。8.5.2調(diào)查方法應(yīng)根據(jù)評(píng)價(jià)時(shí)間、調(diào)查內(nèi)容和調(diào)查對(duì)象生物學(xué)特性的不同，確定具體的調(diào)查方法。不同生物種群或生物群落的調(diào)查方法可參考附錄A?？瓜x(chóng)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)生物群落影響評(píng)價(jià)中主要生物多樣性指標(biāo)的計(jì)算公式見(jiàn)附錄B。9評(píng)價(jià)結(jié)論判定采用方差分析等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對(duì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)“7評(píng)價(jià)內(nèi)容”和“8調(diào)查方案”獲得的調(diào)查數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得到抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物生長(zhǎng)區(qū)域與受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L(zhǎng)區(qū)域的生物多樣性指標(biāo)之間差異顯著性檢驗(yàn)結(jié)果，再結(jié)合本標(biāo)準(zhǔn)“6背景資料”的信息對(duì)評(píng)價(jià)結(jié)果進(jìn)行分析，綜合給出抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)生物多樣性影響的評(píng)價(jià)結(jié)論，以及評(píng)價(jià)的置信度、不確定性因素、其它支持評(píng)價(jià)結(jié)果的證據(jù)、評(píng)價(jià)結(jié)果的解釋等。10風(fēng)險(xiǎn)管理策略和方案根據(jù)評(píng)價(jià)結(jié)論制訂風(fēng)險(xiǎn)管理策略，并提出預(yù)防和控制抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)生物多樣性可能產(chǎn)生不利影響的風(fēng)險(xiǎn)管理內(nèi)容和方案等。11評(píng)價(jià)報(bào)告抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)生物多樣性影響的評(píng)價(jià)報(bào)告應(yīng)包括但不限于以下內(nèi)容：a）抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物的背景資料；b）評(píng)價(jià)單位的能力與經(jīng)驗(yàn)的陳述或相關(guān)證明，實(shí)施評(píng)價(jià)的人員情況；c）評(píng)價(jià)的時(shí)間、地點(diǎn)及環(huán)境狀況等；d）調(diào)查方案（包括調(diào)查內(nèi)容、調(diào)查方法等）；e）抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物對(duì)生物多樣性影響評(píng)價(jià)的主要過(guò)程及其結(jié)論；f）建議采用的風(fēng)險(xiǎn)管理策略、內(nèi)容和方案等。7（資料性附錄）不同生物種群或生物群落的調(diào)查方法A.1植物按照HJ710.1、農(nóng)業(yè)部953號(hào)公告—8.4—2007、農(nóng)業(yè)部953號(hào)公告—10.4—2007等標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法，調(diào)查抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物及其受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L(zhǎng)區(qū)域內(nèi)及周?chē)匀画h(huán)境中的植物。A.1.1調(diào)查樣方的設(shè)置在抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物和受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L(zhǎng)區(qū)域內(nèi)，以及生長(zhǎng)區(qū)域周邊（距離生長(zhǎng)區(qū)100m～300m范圍內(nèi)）生境中同時(shí)設(shè)置樣方。對(duì)于森林植物群落，在選定建立調(diào)查樣地的位置時(shí)，用森林羅盤(pán)儀確定樣地的方向（一般是正南北方向）和基線，然后用經(jīng)緯儀（全站儀）將樣地劃分為20m×20m樣方；記錄測(cè)量點(diǎn)之間的水平距、斜距和高差；對(duì)每個(gè)樣方的頂點(diǎn)編號(hào)并永久標(biāo)記；最后，用卷尺、測(cè)繩或便攜式激光測(cè)距儀將每個(gè)20m×20m樣方劃分為5m×5m小樣方，樣方頂點(diǎn)用臨時(shí)PVC管標(biāo)記，邊界用塑料繩或其他材料臨時(shí)標(biāo)記，這些5m×5m樣方作為基本調(diào)查單元；調(diào)查任務(wù)完成后將這些臨時(shí)標(biāo)記全部移除，并作無(wú)害化處理。一般調(diào)查樣地面積（垂直投影面積）≤50hm2的設(shè)3個(gè)樣方，50hm2～500hm2的設(shè)5個(gè)樣方；若面積＞500hm2，每增加100hm2增設(shè)1個(gè)樣方，但總樣方數(shù)量一般控制在10個(gè)以?xún)?nèi)。對(duì)于農(nóng)田植物群落，在選定的調(diào)查區(qū)域用卷尺或定制的模具設(shè)置1m×1m或2m×2m的樣方，對(duì)樣方的頂點(diǎn)編號(hào)并永久標(biāo)記，邊界用塑料繩或其他材料臨時(shí)標(biāo)記。調(diào)查的樣方數(shù)量一般應(yīng)不少于5個(gè)1m×1m或2m×2m的樣方。A.1.2森林植物調(diào)查在設(shè)置的樣方中采用目測(cè)估計(jì)法進(jìn)行喬木、灌木、草本等植物種類(lèi)調(diào)查。所有個(gè)體應(yīng)鑒定到種水平，對(duì)調(diào)查現(xiàn)場(chǎng)不能鑒定或有疑問(wèn)的種，須采集標(biāo)本、拍照、記錄植物個(gè)體編號(hào)，請(qǐng)分類(lèi)專(zhuān)家鑒定。對(duì)于抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物及其對(duì)照植物的主要伴生種，應(yīng)該調(diào)查該種的胸徑或基徑、冠幅、生長(zhǎng)狀態(tài)、蓋度等。A.1.3農(nóng)田植物調(diào)查在設(shè)置的樣方中采用目測(cè)估計(jì)法進(jìn)行植物種類(lèi)調(diào)查。所有個(gè)體應(yīng)鑒定到種水平，對(duì)調(diào)查現(xiàn)場(chǎng)不能鑒定或有疑問(wèn)的種，須采集標(biāo)本、拍照、記錄植物個(gè)體編號(hào)，請(qǐng)分類(lèi)專(zhuān)家鑒定。對(duì)于抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物及其受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┑闹饕樯N，應(yīng)該調(diào)查該種的多度、平均高度和冠幅、生活力、蓋度等。8A.2土壤微生物按照GB/T30989、GB/T32722、GB/T32725等技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的土壤樣品采集和保存、微生物測(cè)定方法，調(diào)查抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物及其受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L(zhǎng)區(qū)域內(nèi)的土壤微生物。A.2.1樣品采集在抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物及其對(duì)照植物生長(zhǎng)區(qū)域采集根際土和根圍土，采集深度主要取決于植物種類(lèi)：一般農(nóng)作物為0～20cm，果林類(lèi)作物為0～60cm。為了保證樣品的代表性，采取采集混合樣的方案。每個(gè)采樣區(qū)可以是自然分割的一個(gè)田塊，也可以由多個(gè)田塊所構(gòu)成，范圍不小于400m2（20m×20m采樣區(qū)采用對(duì)角線、梅花點(diǎn)、棋盤(pán)式或蛇形取樣法調(diào)查5個(gè)樣點(diǎn)，每點(diǎn)1～2株植物。采樣前應(yīng)去除地表植被、苔蘚及凋落物，采樣時(shí)還需去除土壤中植物的根系、碎片、落葉及土壤動(dòng)物等肉眼可見(jiàn)的生物材料。A.2.2樣品貯存土壤樣品應(yīng)避光通氣貯存，用于磷脂脂肪酸（PLFA）分析以及高通量測(cè)序的樣品應(yīng)在-20℃條件下保存。A.2.3微生物多樣性分析A.2.3.1磷脂脂肪酸法土壤微生物中脂類(lèi)的提取采用Bligh&Dyer提取法，受試土壤經(jīng)土壤提取液振蕩分離去除水相，有機(jī)相和懸浮液經(jīng)干燥后形成脂類(lèi)提取物。磷脂脂肪酸的提取方法：將脂類(lèi)提取物通過(guò)硅膠柱分離后，經(jīng)中度堿水解，使磷脂轉(zhuǎn)化為脂肪酸甲酯。利用固相萃取柱（包括強(qiáng)陽(yáng)離子交換柱和氨丙基柱）將脂肪酸甲酯分離為飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸、羥基脂肪酸、非酯鏈未取代脂肪酸和非酯鏈羥基取代脂肪酸，將不同的脂肪酸經(jīng)衍生化后用于氣相測(cè)定。磷脂醚酯的提取方法：將脂類(lèi)提取物通過(guò)硅膠柱分離后，經(jīng)酸水解斷裂磷脂的極性基團(tuán)以獲得醚酯，經(jīng)氫碘酸斷裂醚鍵來(lái)釋放醚酯中的醚鍵烴類(lèi)（如碘代烷烴），最后通過(guò)鋅粉還原脫鹵后轉(zhuǎn)化為磷脂醚酯用于氣相測(cè)定。將不同的磷脂脂肪酸/磷脂醚酯采用氣相色譜/質(zhì)譜進(jìn)行分析測(cè)定，利用色譜分析軟件對(duì)各組分進(jìn)行定性與定量分析?？偽⑸锪靠赏ㄟ^(guò)土壤總磷脂脂肪酸含量進(jìn)行估算。不同的脂肪酸甲酯含量可用摩爾百分比表示。不同土壤類(lèi)型或不同處理土壤之間的磷脂脂肪酸含量變化可采用主成分分析法進(jìn)一步分析相關(guān)性。A.2.3.2高通量測(cè)序法將提取的土壤微生物DNA進(jìn)行高通量測(cè)序。擴(kuò)增引物基于細(xì)菌16SrRNA和真菌18SrRNA的保守區(qū)域片段（引物序列見(jiàn)表A.1），通過(guò)測(cè)序獲得樣本的細(xì)菌16SrRNA和真菌18SrRNA的保守區(qū)域片段的序列信息，利用Mothur、QIIME或R軟件與數(shù)據(jù)庫(kù)中來(lái)源明確、鑒定可靠的細(xì)菌和真菌基因序列相比對(duì)，以確定不同土壤微生物種類(lèi)。9表A.1擴(kuò)增細(xì)菌16SrRNA和真菌18SrRNA保守區(qū)域片段的引物序列420bp480bp400bpA.3地上節(jié)肢動(dòng)物參照HJ710.9、HJ710.13、農(nóng)業(yè)部953號(hào)公告—8.4—2007、農(nóng)業(yè)部953號(hào)公告—10.4—2007、農(nóng)業(yè)部953號(hào)公告—12.4—2007等技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法，調(diào)查抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物及其受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L(zhǎng)區(qū)域內(nèi)的昆蟲(chóng)等地上節(jié)肢動(dòng)物。A.3.1直接觀察法在轉(zhuǎn)基因植物生長(zhǎng)旺盛期，根據(jù)不同調(diào)查對(duì)象，設(shè)置不同大小調(diào)查區(qū)域，調(diào)查區(qū)域應(yīng)不小于150m2或覆蓋植株數(shù)不少于100株，每小區(qū)采用對(duì)角線或棋盤(pán)式取樣法調(diào)查5個(gè)樣點(diǎn)，每點(diǎn)調(diào)查至少5株植物。采用目測(cè)法調(diào)查整個(gè)植株或單個(gè)枝葉及植株附近地面各種節(jié)肢動(dòng)物的數(shù)量、種類(lèi)和發(fā)育階段。對(duì)田間不易識(shí)別的種類(lèi)進(jìn)行采樣標(biāo)記，放入75%乙醇溶液保存，供進(jìn)一步鑒定。A.3.2吸蟲(chóng)器調(diào)查法在轉(zhuǎn)基因植物生長(zhǎng)旺盛期，根據(jù)不同調(diào)查對(duì)象，設(shè)置不同大小調(diào)查區(qū)域，調(diào)查區(qū)域應(yīng)不小于150m2或覆蓋植株數(shù)不少于100株，每小區(qū)采用對(duì)角線或棋盤(pán)式取樣法調(diào)查5個(gè)樣點(diǎn)。每點(diǎn)用吸蟲(chóng)器吸取至少5株植物或枝葉（全株）及其地面1m2范圍內(nèi)的所有節(jié)肢動(dòng)物種類(lèi)。將抽取的樣品帶回室內(nèi)清理和初步分類(lèi)后，放入75%乙醇溶液保存，供進(jìn)一步鑒定。A.3.3陷阱法在轉(zhuǎn)基因植物生長(zhǎng)旺盛期，根據(jù)不同調(diào)查對(duì)象，設(shè)置不同大小調(diào)查區(qū)域，調(diào)查區(qū)域應(yīng)不小于150m2或覆蓋植株數(shù)不少于100株，每小區(qū)采用對(duì)角線或棋盤(pán)式取樣法調(diào)查5個(gè)樣點(diǎn)，每點(diǎn)設(shè)置一個(gè)陷阱。陷阱結(jié)構(gòu)是：使用3個(gè)塑料杯(Φ15cm×10cm），間隔0.5m，埋入土壤中作為陷阱，杯口與地面相平，每個(gè)陷阱上都有用鐵絲支撐的塑料碗做棚。杯中放有濃度為5%的洗滌劑水，不超過(guò)杯容積的1/3。在埋杯第2d調(diào)查杯中的節(jié)肢動(dòng)物種類(lèi)和數(shù)量，不易識(shí)別的種類(lèi)編號(hào)后放入75%乙醇溶液保存，供進(jìn)一步鑒定。A.3.4誘捕法在轉(zhuǎn)基因植物生長(zhǎng)旺盛期，根據(jù)不同調(diào)查對(duì)象，設(shè)置不同大小調(diào)查區(qū)域，調(diào)查區(qū)域應(yīng)不小于150m2或覆蓋植株數(shù)不少于100株，每小區(qū)采用對(duì)角線或棋盤(pán)式取樣法調(diào)查樣點(diǎn)，每150m2設(shè)置2至3個(gè)專(zhuān)用誘捕器，各誘捕器間距離20m左右，在每個(gè)誘捕器內(nèi)放置一定量的性誘劑或食物。甜菜夜蛾、斜紋夜蛾等大型昆蟲(chóng)在距離植物頂部20cm左右放置專(zhuān)用誘捕器；小菜蛾等體型相對(duì)較小的昆蟲(chóng)于靠近植物頂部處放置專(zhuān)用誘捕器。誘捕器使用轉(zhuǎn)換接口外接容器（如可樂(lè)瓶）作為貯蟲(chóng)設(shè)備。誘蟲(chóng)點(diǎn)每月更換一次以保證誘蟲(chóng)效果，通過(guò)統(tǒng)計(jì)單瓶誘蟲(chóng)量，監(jiān)測(cè)昆蟲(chóng)種類(lèi)和數(shù)量動(dòng)態(tài)變化。A.3.5振落法在轉(zhuǎn)基因植物生長(zhǎng)旺盛期，根據(jù)不同調(diào)查對(duì)象，設(shè)置不同大小調(diào)查區(qū)域。調(diào)查區(qū)域應(yīng)不小于150m2或覆蓋植株數(shù)不少于100株，每小區(qū)采用對(duì)角線或棋盤(pán)式取樣法調(diào)查5個(gè)樣點(diǎn)，每點(diǎn)至少調(diào)查5株植物；對(duì)于高大樹(shù)木上的昆蟲(chóng)，可用振落的方法進(jìn)行捕捉。其方法是：先在樹(shù)下鋪上白布，然后搖動(dòng)或敲打樹(shù)枝樹(shù)葉，利用昆蟲(chóng)的假死習(xí)性，將其振落到白布上進(jìn)行收集。用這種方法可以采集到鞘翅目（Coleoptera）、脈翅目（Neuroptera）和半翅目（Hemiptera）的許多種類(lèi)昆蟲(chóng)。有些沒(méi)有假死習(xí)性的昆蟲(chóng)，可在振動(dòng)后的飛行過(guò)程中用網(wǎng)捕捉。A.3.6網(wǎng)捕法A.3.6.1空網(wǎng)法、掃網(wǎng)法和刮網(wǎng)法根據(jù)用處不同制作空網(wǎng)、掃網(wǎng)和刮網(wǎng)。網(wǎng)口直徑通常為1/3m，網(wǎng)長(zhǎng)2/3m，手柄1至數(shù)m?？站W(wǎng)：用透氣、堅(jiān)韌、淺色的珠羅紗、尼龍紗等制成，專(zhuān)門(mén)用來(lái)采集蝴蝶、蜂類(lèi)、蜻蜓等飛翔迅速的昆蟲(chóng)。掃網(wǎng)：用來(lái)掃捕樹(shù)叢、雜草中隱蔽的昆蟲(chóng)，采用較結(jié)實(shí)的白布或亞麻布制作網(wǎng)袋，網(wǎng)框和網(wǎng)柄都要選擇堅(jiān)固的材料，以承受掃網(wǎng)時(shí)較大的阻力。刮網(wǎng)：在樹(shù)皮上采集昆蟲(chóng)時(shí)，可用粗鋁絲作架，前面連接上一段有彈性的鋼條，縫上白布的網(wǎng)袋，底端可捆上個(gè)小瓶，以便接蟲(chóng)。在轉(zhuǎn)基因植物生長(zhǎng)旺盛期，根據(jù)不同調(diào)查對(duì)象，設(shè)置不同大小的調(diào)查區(qū)域，但應(yīng)不小于150m2或覆蓋植株數(shù)不少于100株，每小區(qū)采用對(duì)角線或棋盤(pán)式取樣法調(diào)查5個(gè)樣點(diǎn)，使用合適的捕蟲(chóng)網(wǎng)對(duì)至少5株植物上的節(jié)肢動(dòng)物進(jìn)行采集，每次收集的標(biāo)本均按號(hào)放入75%乙醇溶液保存，供進(jìn)一步鑒定。A.3.6.2馬來(lái)氏網(wǎng)法在轉(zhuǎn)基因植物生長(zhǎng)旺盛期，根據(jù)不同調(diào)查對(duì)象，設(shè)置不同大小調(diào)查區(qū)域，但應(yīng)不小于400m2（20m×20m）或覆蓋植株數(shù)不少于100株。馬來(lái)氏網(wǎng)選用國(guó)際通用的馬來(lái)氏網(wǎng)Ⅰ型和Ⅱ型。馬來(lái)氏網(wǎng)Ⅰ型前部高180cm，后部高110cm，長(zhǎng)165cm，寬116cm；馬來(lái)氏網(wǎng)Ⅱ型前部高180cm，后部高110cm，長(zhǎng)165cm，寬180cm；材質(zhì)選用聚乙烯100目以上紗網(wǎng)布，網(wǎng)布高度110cm以下部分網(wǎng)為黑色，110cm以上部分為白色，網(wǎng)紗在前部與昆蟲(chóng)收集器之間緊密連接，并留有直徑3cm～4cm的收集孔；收集器分為上下兩部分，上部與網(wǎng)體連通，下部用于盛放無(wú)水乙醇收集液且可替換。在布設(shè)馬來(lái)氏網(wǎng)時(shí)，確保中部開(kāi)口部分朝向樣點(diǎn)區(qū)域，如需多個(gè)馬來(lái)氏網(wǎng)，間隔應(yīng)大于500m。收集瓶?jī)?nèi)應(yīng)灌滿(mǎn)無(wú)水乙醇，每10d～15d取樣一次，取樣時(shí)將收集瓶擰下并迅速擰緊瓶蓋，每次收集的標(biāo)本均按號(hào)放入75%乙醇溶液保存，供進(jìn)一步鑒定。A.4浮游動(dòng)物A.4.1采樣點(diǎn)布設(shè)原則調(diào)查區(qū)域?yàn)榭瓜x(chóng)轉(zhuǎn)基因植物種植區(qū)的農(nóng)田水體以及周邊灌溉水、池塘、湖泊等自然水域。根據(jù)水域的面積和形態(tài)、浮游動(dòng)物的生態(tài)分布特點(diǎn)等決定采樣點(diǎn)數(shù)量（表A.2）。采樣點(diǎn)應(yīng)有代表性，能反映整個(gè)水體浮游動(dòng)物的基本情況。表A.2采樣點(diǎn)數(shù)量設(shè)置3>500A.4.2采樣定量樣品應(yīng)在定性采樣之前用采水器采集。每個(gè)采樣點(diǎn)應(yīng)采水樣1000ml。分層采樣時(shí)，可將各層水樣分別定量取平均值，或?qū)⒏鲗铀伤畼拥攘炕靹蚝笕?000ml再定量，作為此點(diǎn)的定量樣品。枝角類(lèi)和橈足類(lèi)動(dòng)物的定量樣品應(yīng)在定性采樣之前用采水器采集，每個(gè)采樣點(diǎn)應(yīng)采水樣10000ml～50000ml，再用25號(hào)浮游植物網(wǎng)過(guò)濾濃縮至100ml，用37%～40%（V/V）甲醛溶液固定，用量為水樣體積的5%。原生動(dòng)物、輪蟲(chóng)和無(wú)節(jié)幼體定量樣品，可采集10000ml～50000ml水樣混合后，除留一部分供活體觀察不固定外，其余立即用魯哥氏液固定，用量為水樣體積的1%～1.5%（V/V）。如樣品需較長(zhǎng)時(shí)間保存，則需加入37%～40%（V/V）甲醛溶液，用量為水樣體積的4%（V/V）。A.4.3水樣的沉淀和濃縮原生動(dòng)物和輪蟲(chóng)樣品固定后，靜置沉淀24h。虹吸濃縮后的水量多少視原生動(dòng)物和輪蟲(chóng)濃度大小而定，一般情況下可用透明度作參考，根據(jù)透明度確定水樣濃縮體積見(jiàn)表A.3。表A.3根據(jù)透明度確定水樣濃縮體積的方法>100>1000（稀釋?zhuān)┲穷?lèi)和橈足類(lèi)動(dòng)物常用過(guò)濾法濃縮水樣。A.4.4計(jì)數(shù)依據(jù)調(diào)查對(duì)象、樣品體積和具體情況，取水樣進(jìn)行種類(lèi)鑒定、個(gè)體計(jì)數(shù)和室內(nèi)分析。A.4.5浮游動(dòng)物生物量的測(cè)定原生動(dòng)物、輪蟲(chóng)可根據(jù)體積法求得生物量；枝角類(lèi)和橈足類(lèi)可用體長(zhǎng)-體重回歸方程求得體重（濕重），也可用電子天平直接稱(chēng)重。A.5土壤動(dòng)物在抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物及其受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L(zhǎng)區(qū)域劃分網(wǎng)格，按照HJ710.10中規(guī)定的簡(jiǎn)單隨機(jī)抽樣法確定樣方，每個(gè)調(diào)查對(duì)象不少于3個(gè)樣方，每個(gè)樣方不小于5m×5m，樣方間距離不小于10m。每樣方內(nèi)按照隨機(jī)或者均勻設(shè)置5個(gè)樣點(diǎn)，樣點(diǎn)需包含或緊鄰被評(píng)價(jià)的植物。A.5.1大型土壤動(dòng)物每個(gè)樣點(diǎn)調(diào)查面積不小于1m×1m×0.2m（長(zhǎng)×寬×深利用鐵鏟等工具將被調(diào)查樣點(diǎn)土塊快速取出，通過(guò)目視手檢法對(duì)大型土壤動(dòng)物種類(lèi)和數(shù)量鑒別統(tǒng)計(jì)。對(duì)于不能夠準(zhǔn)確鑒別的動(dòng)物，應(yīng)保存于75%乙醇或防壓標(biāo)本盒中，在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)一步鑒定。蚯蚓等環(huán)節(jié)動(dòng)物是土壤質(zhì)量與生態(tài)功能的指示類(lèi)群，在調(diào)查中應(yīng)當(dāng)重點(diǎn)關(guān)注。A.5.2中型土壤動(dòng)物每個(gè)樣點(diǎn)調(diào)查面積不小于0.2m×0.2m（長(zhǎng)×寬）土壤，采用取土器（半徑2.5cm）鉆取0～0.2m土層，每樣點(diǎn)三點(diǎn)取樣，混勻后迅速帶回實(shí)驗(yàn)室分離鑒定中、小型土壤動(dòng)物，土壤樣品的運(yùn)輸保存按照GB/T32722執(zhí)行。利用高溫高梯度Tullgren干法設(shè)備（篩網(wǎng)網(wǎng)眼為2mm），將土壤動(dòng)物（主要分離小節(jié)肢類(lèi)土壤動(dòng)物類(lèi)群）從土壤樣品中分離出來(lái)。收集溫度：從20℃開(kāi)始，每12h升高5℃,升到40℃為止，共持續(xù)48h。用Torne氏收集液（1000ml異丙醇，30ml冰醋酸，3ml福爾馬林）收集，然后轉(zhuǎn)移到75%的乙醇中。A.5.3小型土壤動(dòng)物土壤樣品采集方法按照A.5.2進(jìn)行。利用Baermann淺盤(pán)法，將篩盤(pán)（網(wǎng)眼為2mm）放入相應(yīng)的淺盤(pán)中，在篩盤(pán)上放置一層濾紙，稱(chēng)取20g～50g的樣土（視土壤動(dòng)物的密度而定），均勻鋪在濾紙上，小心加水至浸沒(méi)土壤，置于20℃室溫條件下分離。12h時(shí)，可直接取淺盤(pán)上層水體，直接顯微鏡觀察原生動(dòng)物數(shù)量和種類(lèi)。48h后，用篩盤(pán)（網(wǎng)眼為25μm）對(duì)淺盤(pán)中的水進(jìn)行過(guò)篩，沖洗，將收集的土壤動(dòng)物（主要為線蟲(chóng)等類(lèi)群）保存于75%的乙醇。A.6兩棲動(dòng)物按照HJ710.6中規(guī)定的方法，調(diào)查抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物及其受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L(zhǎng)區(qū)域內(nèi)的兩棲動(dòng)物。A.6.1樣線法根據(jù)兩棲動(dòng)物分布與生境因素的關(guān)系，如海拔梯度、植被類(lèi)型、水域狀態(tài)等設(shè)置樣線。樣線盡可能涵蓋不同生態(tài)系統(tǒng)類(lèi)型。調(diào)查應(yīng)在太陽(yáng)落山一小時(shí)后開(kāi)展，每次調(diào)查應(yīng)重復(fù)3d。在農(nóng)田或農(nóng)田與自然生態(tài)系統(tǒng)交接區(qū)，可采用長(zhǎng)樣線，長(zhǎng)度500m～1000m之間；在生境較為復(fù)雜的自然生態(tài)系統(tǒng)，可設(shè)置多條短樣線，每條樣線長(zhǎng)度20m～100m之間。每個(gè)調(diào)查樣地的樣線應(yīng)在7條以?xún)?nèi)，短樣線可適當(dāng)增加數(shù)量。樣線的寬度根據(jù)視野情況而定，一般為2m～6m。調(diào)查時(shí)速度應(yīng)保持在2km/h左右，行進(jìn)期間記錄物種（成體、幼體、蝌蚪和卵）和個(gè)體數(shù)量，不宜拍照和采集。A.6.2樣方法在調(diào)查樣地內(nèi)隨機(jī)或均勻設(shè)置一定數(shù)量的樣方，樣方應(yīng)盡可能涵蓋不同的生境類(lèi)型和環(huán)境梯度。樣方一般設(shè)置為方形，大小可設(shè)置成5m×5m或10m×10m。樣方之間應(yīng)間隔100m以上。每個(gè)觀測(cè)樣地的樣方數(shù)應(yīng)在7個(gè)以上。依次翻開(kāi)樣方內(nèi)的石塊，檢視石塊下的個(gè)體（包括卵），記錄樣方內(nèi)見(jiàn)到的所有兩棲動(dòng)物種類(lèi)和個(gè)體數(shù)量。A.6.3人工庇護(hù)所法在調(diào)查區(qū)內(nèi)隨機(jī)設(shè)置3個(gè)10m×10m的樣方，樣方之間應(yīng)間隔100m以上。在每個(gè)樣方內(nèi)，挑選樹(shù)蛙常選擇的產(chǎn)卵樹(shù)10株，每株樹(shù)捆綁固定6個(gè)竹筒（或PVC桶2個(gè)在地面，2個(gè)離地面70cm，2個(gè)離地面150cm，共布設(shè)60個(gè)竹筒（或PVC桶）。竹筒長(zhǎng)15cm～18cm，內(nèi)徑3cm～6cm，竹筒內(nèi)加入5cm～10cm深的水。每3d巡視檢查一次，記錄兩棲動(dòng)物的種類(lèi)以及成體、亞成體、幼體、蝌蚪和卵的數(shù)量。連續(xù)進(jìn)行3次。A.6.4人工覆蓋物法根據(jù)統(tǒng)計(jì)分析的要求和兩棲動(dòng)物物種個(gè)體大小、種群數(shù)量等因素確定人工覆蓋物的數(shù)目和尺寸。人工覆蓋物的材料為木板或波浪狀瓦片較好。尺寸一般為30cm×20cm或以上。樣地內(nèi)應(yīng)采用統(tǒng)一的覆蓋物。人工覆蓋物的排列方式一般設(shè)置成平行線、網(wǎng)格等形狀。網(wǎng)格形狀的排列方式可采用5個(gè)×5個(gè)覆蓋物的樣方，覆蓋物之間的間距為5m?？稍诜胖酶采w物的地方下挖5cm，形成足夠的隱蔽空間，坑底鋪放一些草葉，形成一個(gè)適宜的隱蔽環(huán)境。每天早晨8～10時(shí)查看一次。查看時(shí)迅速拿起覆蓋物，捕獲匿居其下的兩棲動(dòng)物，并臨時(shí)放在塑料袋或廣口瓶中以備測(cè)量、標(biāo)記和采樣。A.7底棲動(dòng)物A.7.1調(diào)查樣地的設(shè)置調(diào)查區(qū)域?yàn)榭瓜x(chóng)轉(zhuǎn)基因植物及對(duì)照植物種植區(qū)的農(nóng)田水體以及周邊灌溉水、池塘、湖泊等自然水域。根據(jù)調(diào)查水體（水田或者溝渠等）的形態(tài)特點(diǎn)、底質(zhì)類(lèi)型和底棲無(wú)脊椎動(dòng)物的分布特征等因素，在調(diào)查水體內(nèi)設(shè)置若干具有代表性的樣線，使同一樣線上的差異程度盡可能小，在同一樣線上每隔一定距離設(shè)置一個(gè)采樣點(diǎn)。A.7.2樣品采集使用底泥采泥器采集泥樣。采樣時(shí)每個(gè)采樣點(diǎn)累計(jì)采樣面積1/8m2～1/3m2。即使用1/16m2的彼得生采泥器或改良的彼得生采泥器（1/12m2），采泥2～4次，采樣厚度一般為10cm～15cm。A.7.2.1大型底棲動(dòng)物參照HJ710.8中規(guī)定的方法，調(diào)查抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物及其受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L(zhǎng)區(qū)域內(nèi)的淡水底棲大型無(wú)脊椎動(dòng)物。將獲得的底泥樣品置于40目篩中，在清水中輕輕搖蕩，洗去樣品中剩余的污泥，篩洗后挑出其中的雜物和植物枝條、葉片等（仔細(xì)檢查并揀出摻雜在其中的動(dòng)物），將篩上肉眼能看得見(jiàn)的全部樣品倒入白瓷盤(pán)中進(jìn)行分揀，同時(shí)利用解剖鏡等工具進(jìn)行物種分類(lèi)，并記錄大型底棲動(dòng)物數(shù)量；如不能夠及時(shí)分選鑒定，應(yīng)將初步淘洗后的樣品保存于70%乙醇中，可參考相關(guān)工具書(shū)或在相關(guān)分類(lèi)學(xué)家的指導(dǎo)下，對(duì)樣品進(jìn)行形態(tài)分類(lèi)和物種鑒別。A.7.2.2小型底棲動(dòng)物將獲得的底泥層置于上層為40目、下層為325目的套篩中，在清水中輕輕搖蕩，洗去樣品中剩余的污泥。中間截留物用于小型底棲動(dòng)物的分離，如不能夠立即操作，將中間截留物保存于濃度為5%的福爾馬林溶液中。采用ludox離心分選法分離小型底棲動(dòng)物：將中間截留物倒入離心管中，再加入4倍體積的ludoxHS-40凝膠（密度約為1.2g/ml），2000rpm離心約5min，完成后將離心管中上清液倒在325目的網(wǎng)篩上，用自來(lái)水沖洗干凈。重復(fù)上述步驟三次。將網(wǎng)篩（包括截留物）放入含有0.1%虎紅溶液的染色缸中染色1h后，自來(lái)水洗凈。用吸管將染色后截留物轉(zhuǎn)移到玻璃平皿中，于體視顯微鏡或解剖鏡下對(duì)小型底棲動(dòng)物鑒定并計(jì)數(shù)。A.8魚(yú)類(lèi)按照HJ710.7中規(guī)定的方法，調(diào)查抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物及其受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L(zhǎng)區(qū)域內(nèi)的內(nèi)陸水域魚(yú)類(lèi)。A.8.1調(diào)查樣地的設(shè)置根據(jù)待調(diào)查區(qū)域的水體底質(zhì)、水生植物組成、水深、水體形態(tài)、水流等因素劃分成若干小區(qū)，使同一小區(qū)內(nèi)變異程度盡可能小。小區(qū)的面積和數(shù)量可根據(jù)調(diào)查水體的面積、形態(tài)和生境特征、工作條件、經(jīng)費(fèi)情況等因素確定。一般設(shè)置的小區(qū)數(shù)量不少于3個(gè)。A.8.2捕撈調(diào)查法根據(jù)調(diào)查水體的形態(tài)以及生境特征等因素，利用合適的網(wǎng)具進(jìn)行捕撈，鑒定記錄魚(yú)類(lèi)的種類(lèi)和數(shù)量。對(duì)那些現(xiàn)場(chǎng)無(wú)法鑒定的物種，要盡可能采集完整的標(biāo)本并做好記錄，包括文字、影像和北斗定位系統(tǒng)記錄，以備室內(nèi)鑒定之用。應(yīng)盡可能記錄各物種所有能觀察到的形態(tài)、生物學(xué)現(xiàn)狀和生態(tài)環(huán)境信息等。在調(diào)查過(guò)程中注意收集標(biāo)本及其他相關(guān)資料，并記錄相關(guān)信息，保留作為憑證以備核查。A.9鳥(niǎo)類(lèi)按照HJ710.4中規(guī)定的方法，調(diào)查抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物及其受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L(zhǎng)區(qū)域內(nèi)的鳥(niǎo)類(lèi)。應(yīng)根據(jù)待調(diào)查區(qū)域內(nèi)鳥(niǎo)類(lèi)活動(dòng)高峰期確定一天中的調(diào)查時(shí)間。調(diào)查時(shí)的天氣應(yīng)為晴天或多云天氣，雨天或大風(fēng)天氣不能開(kāi)展調(diào)查。一般在早晨日出后3小時(shí)內(nèi)和傍晚日落前3小時(shí)內(nèi)進(jìn)行調(diào)查。需準(zhǔn)備8～12倍的雙筒望遠(yuǎn)鏡（用于行走時(shí)或在樹(shù)林中調(diào)查近距離的鳥(niǎo)類(lèi)）、25～60倍單筒望遠(yuǎn)鏡（用于調(diào)查遠(yuǎn)距離且較長(zhǎng)時(shí)間停留在某地的鳥(niǎo)類(lèi)）、鳥(niǎo)類(lèi)野外手冊(cè)或鳥(niǎo)類(lèi)圖鑒等工具書(shū)、野外記錄表、照相機(jī)、北斗衛(wèi)星定位儀、溫度計(jì)、必要的防護(hù)用品和應(yīng)急藥品等。A.9.1分區(qū)直數(shù)法根據(jù)地貌、地形或生境類(lèi)型對(duì)整個(gè)調(diào)查區(qū)域進(jìn)行分區(qū)，逐一統(tǒng)計(jì)各個(gè)分區(qū)中的鳥(niǎo)類(lèi)種類(lèi)和數(shù)量，得出調(diào)查區(qū)域內(nèi)鳥(niǎo)類(lèi)總種數(shù)及其個(gè)體數(shù)量。該方法適用于較小面積的抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物種植區(qū)的鳥(niǎo)類(lèi)調(diào)查。A.9.2樣線法根據(jù)生境類(lèi)型和地形設(shè)置樣線，各樣線互不重疊，調(diào)查者沿著固定的線路行走，并記錄樣線兩側(cè)所見(jiàn)到的鳥(niǎo)類(lèi)。每種生境類(lèi)型的樣線在2條以上，每條樣線長(zhǎng)度以1km～3km為宜，若因地形限制，樣線長(zhǎng)度不應(yīng)小于1km。調(diào)查時(shí)行進(jìn)速度通常為1.5km/h～3km/h。根據(jù)對(duì)樣線兩側(cè)調(diào)查記錄范圍的限定，樣線法又分為不限寬度、固定寬度和可變寬度3種方法。不限寬度樣線法即不考慮鳥(niǎo)類(lèi)與樣線的距離，固定寬度樣線法即記錄樣線兩側(cè)固定距離內(nèi)的鳥(niǎo)類(lèi)，可變寬度樣線法需記錄鳥(niǎo)類(lèi)與樣線的垂直距離。該方法適用于大規(guī)?？瓜x(chóng)轉(zhuǎn)基因植物種植區(qū)的鳥(niǎo)類(lèi)調(diào)查。A.9.3樣點(diǎn)法樣點(diǎn)法是樣線法的一種變形，即調(diào)查者行走速度為零的樣線法。以固定距離設(shè)置調(diào)查樣點(diǎn)，樣點(diǎn)之間的距離應(yīng)根據(jù)生境類(lèi)型確定，一般在0.2km以上，在每個(gè)樣點(diǎn)調(diào)查3min～10min。根據(jù)對(duì)樣點(diǎn)周?chē){(diào)查記錄范圍的界定，樣點(diǎn)法又分為不限半徑、固定半徑和可變半徑3種方法。不限半徑樣點(diǎn)法即調(diào)查時(shí)不考慮鳥(niǎo)類(lèi)與樣點(diǎn)的距離，固定半徑樣點(diǎn)法即記錄樣點(diǎn)周?chē)潭ň嚯x內(nèi)的鳥(niǎo)類(lèi)，可變半徑樣點(diǎn)法需記錄鳥(niǎo)類(lèi)與樣點(diǎn)的距離。樣點(diǎn)法更適合在崎嶇的山地或抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物種植片段化的生境中使用。A.9.4紅外相機(jī)自動(dòng)拍攝法紅外感應(yīng)自動(dòng)照相機(jī)能拍攝到活動(dòng)隱蔽的地面活動(dòng)鳥(niǎo)類(lèi)。安置紅外相機(jī)前，應(yīng)調(diào)查鳥(niǎo)類(lèi)的活動(dòng)區(qū)域和日?；顒?dòng)路線。盡量將相機(jī)安置在目標(biāo)動(dòng)物經(jīng)常出沒(méi)的通道上或其活動(dòng)痕跡密集處?？刹捎梅謱映闃臃ɑ蛳到y(tǒng)抽樣法設(shè)置觀測(cè)樣點(diǎn)。分層抽樣法中，每種生境類(lèi)型設(shè)置7個(gè)以上樣點(diǎn)（樣點(diǎn)之間間距0.5km以上）。系統(tǒng)抽樣法中，在觀測(cè)樣地內(nèi)按照固定間距設(shè)置觀測(cè)樣點(diǎn)，每1km2至少設(shè)置1個(gè)觀測(cè)樣點(diǎn)。記錄各樣點(diǎn)名稱(chēng)，進(jìn)行編號(hào)，并用北斗衛(wèi)星定位儀定位。每個(gè)樣點(diǎn)于田間或樹(shù)干、樹(shù)樁上裝設(shè)1或2臺(tái)紅外感應(yīng)自動(dòng)相機(jī)。相機(jī)架設(shè)位置一般距離地面0.3m～1.0m，架設(shè)方向盡量不朝東方太陽(yáng)直射處。相機(jī)鏡頭與地面大致平行，略向下傾，一般與鳥(niǎo)類(lèi)活動(dòng)路徑呈銳角夾角，并清理相機(jī)前的空間，減少對(duì)照片成像質(zhì)量的干擾。每一個(gè)樣點(diǎn)應(yīng)該至少收集1000個(gè)相機(jī)工作小時(shí)的數(shù)據(jù)。在夏季每個(gè)樣點(diǎn)需至少連續(xù)工作30d，以完成一個(gè)觀測(cè)周期。根據(jù)設(shè)備供電情況，定期巡視樣點(diǎn)并更換電池，調(diào)試設(shè)備，下載數(shù)據(jù)。記錄各樣點(diǎn)拍攝起止日期、照片拍攝時(shí)間、動(dòng)物物種與數(shù)量、年齡等級(jí)、性別、外形特征等信息，建立信息庫(kù)，歸檔保存。A.10嚙齒動(dòng)物參照HJ710.3等標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的方法，調(diào)查抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因植物及其受體植物（或非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参铮┥L(zhǎng)區(qū)域內(nèi)的嚙齒動(dòng)物。A.10.1單公頃弓形夾法對(duì)于晝間活動(dòng)為主的嚙齒類(lèi)動(dòng)物（如旱獺、黃鼠等）可采用單公頃弓形夾法，根據(jù)生境和地形，選擇若干塊面積為1hm2（100m×100m或者50m×200m）的樣地，為了保證樣地為規(guī)整的正方形或長(zhǎng)方形，可采用羅盤(pán)或者北斗衛(wèi)星定位儀來(lái)定位。確定好樣地后，邊堵洞邊計(jì)數(shù)，24h后查盜開(kāi)洞（有效洞）數(shù)量。同時(shí)，在盜開(kāi)洞口布放好弓形夾，24h后收夾，期間每隔1h～2h檢查1次（夜間可不必檢查），檢查中凡捕獲的鼠類(lèi)全部取下，夾子仍布放原洞口。鼠類(lèi)密度的計(jì)算公式(A.1)：DNS式中：D——鼠密度，只/hm2；N——捕獲鼠總數(shù)量，只；S——總樣方面積，hm2。有效洞口系數(shù)的計(jì)算公式（A.2）：R式中：R——有效洞口系數(shù)；D——鼠密度，只/hm2；DNh（A.2）Nh——單公頃有效洞口數(shù)量，個(gè)/hm2。根據(jù)鼠密度和有效洞口系數(shù)評(píng)價(jià)大面積鼠類(lèi)種群數(shù)量和危害程度，對(duì)于大面積估算的面積應(yīng)不少于該調(diào)查面積的0.5%。A.10.2夾夜法對(duì)于夜間活動(dòng)為主的嚙齒類(lèi)動(dòng)物（如跳鼠、沙鼠等）可采用夾夜法，使用板夾每5m～10m布放1夾，每行100夾，行間距20m～50m，用面粉加植物油或花生米等作餌料。一般天黑前布放，天亮后檢查捕獲鼠類(lèi)情況并收夾。以捕獲率表示鼠密度，捕獲率計(jì)算公式（A.3）：（A.3）R100%（A.3）式中：R——捕獲率，%；Nr——捕獲鼠的鼠夾數(shù)，夾；Ne——有效鼠夾數(shù)，夾。為了盡可能準(zhǔn)確反映當(dāng)?shù)貒X動(dòng)物種群的數(shù)量，建議在一個(gè)地區(qū)布放的板夾數(shù)不低于1000個(gè)。A.10.3單公頃樣方捕盡法此法適用于群居的嚙齒類(lèi)動(dòng)物（如長(zhǎng)爪沙鼠、高原鼠兔等），即把樣地分為高、中、低3種類(lèi)型進(jìn)行調(diào)查，每種類(lèi)型設(shè)置2～3個(gè)樣方，將不同密度進(jìn)行平均作為該地區(qū)該種類(lèi)的密度。樣方設(shè)定好后采用堵洞盜開(kāi)法連續(xù)布夾48h，捕盡樣地內(nèi)嚙齒類(lèi)動(dòng)物。A.10.4標(biāo)記重捕法單次標(biāo)記重捕法指根據(jù)第二次捕獲量中被標(biāo)記個(gè)體所占比例推算目標(biāo)動(dòng)物種群數(shù)量的標(biāo)記重捕法。目標(biāo)動(dòng)物的種群大小N和方差Vn分別按下列公式（A.4～A.5）計(jì)算：N1（A.4）式中：N——種群個(gè)體數(shù)，個(gè)；M——第一次釋放的標(biāo)記個(gè)體數(shù)，個(gè)；n——第二次捕捉個(gè)體數(shù)，個(gè)；m——n中被標(biāo)記個(gè)體數(shù)，個(gè)。V(M1)(n1)(Mm)(nm)(m1)2(m2)（A.5）式中：Vn——種群個(gè)體數(shù)的方差；M——第一次釋放的標(biāo)記個(gè)體數(shù)，個(gè)；n——第二次捕捉個(gè)體數(shù)，個(gè)；m——n中被標(biāo)記個(gè)體數(shù)，個(gè)。此法的前