保健食品中綠原酸的測(cè)定 編制說(shuō)明

《保健食品中綠原酸的測(cè)定》（征求意見稿）編制說(shuō)明一、工作簡(jiǎn)況根據(jù)《國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)關(guān)于下達(dá)2023年第二批推薦性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)外文版計(jì)劃的通知》（國(guó)標(biāo)委發(fā)〔2023〕37香豆酸。5-O-咖啡酰奎寧酸（5-CQA）是在奎寧酸和咖啡酸之間形早期的命名編號(hào)）。需要強(qiáng)調(diào)的是，當(dāng)前文獻(xiàn)出現(xiàn)的術(shù)語(yǔ)CGA于指代相關(guān)奎寧酸偶聯(lián)物家族。類似的其他膳食酚類化合物CGAs規(guī)則。然而，許多研究人員和化學(xué)品供應(yīng)商繼續(xù)使用“pre-IUPAC”命名法，并錯(cuò)誤地將3-咖啡?？鼘幩岱Q為綠原酸，這是該化合物家奎寧酸（5-CQA）。首先，必須說(shuō)明綠原酸這個(gè)名稱不應(yīng)僅用于一如上所述，最大的問(wèn)題是5-CQA和3-CQA的換向。如今，這多數(shù)供應(yīng)商保留了IUPAC之前的命名法，并以3-咖啡?？鼘幩岬?024年1月，開展新修訂保健食品中綠原酸測(cè)定方法的實(shí)驗(yàn)室2024年2月，起草工作組在前期工作二、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)編制原則、主要內(nèi)容及其確定依據(jù)(1)流動(dòng)相調(diào)整：A為乙腈，B為0.1%磷酸溶液，梯度洗脫條件實(shí)現(xiàn)對(duì)綠原酸異構(gòu)體的良好分離，無(wú)疊加干擾，峰型較好，而且通過(guò)）：）：三、試驗(yàn)驗(yàn)證的分析線性關(guān)系良好。方法準(zhǔn)確度和精密度：該方法的回收率在90.8%~105%范圍區(qū)間，不同劑型6次平行試驗(yàn)結(jié)果的RSD%在1.01%~3.50%范圍區(qū)間，說(shuō)明該方法精確度較好，能夠滿足保健食品中綠原四、與國(guó)際、國(guó)外同類標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)內(nèi)容的對(duì)比情況國(guó)際上有關(guān)綠原酸的標(biāo)準(zhǔn)方法有AOACOfficialMethod957.04本研究方法與AOACOfficialMethod957.04和AOACOfficialMethod957.05的樣品檢測(cè)方法不同，采用高效液相色譜法，可對(duì)單五、以國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)為基礎(chǔ)的起草情況六、與有關(guān)法律、行政法規(guī)及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系七、重大分歧意見的處理經(jīng)過(guò)和依據(jù)八、涉及專利的有關(guān)說(shuō)明九、實(shí)施國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的要求，以及組織措施、技術(shù)措施、過(guò)渡期和實(shí)施日期的建議建議本標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布6個(gè)月后實(shí)施，由歸口單位組織行業(yè)相關(guān)單位十、其他應(yīng)當(dāng)說(shuō)明的事項(xiàng)附件：方法學(xué)驗(yàn)證內(nèi)容保健食品中綠原酸的測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證內(nèi)容050綠原酸分離，色譜柱2無(wú)法分離綠原酸和隱綠原酸。使用流動(dòng)相梯度洗脫程序2條件時(shí)，色譜柱1和色譜柱2均可以分離。經(jīng)查詢，色譜柱2填料硅膠顆粒表面經(jīng)極性基團(tuán)修飾，可以使用(2)流動(dòng)相A為甲酸(FA)和磷酸(H?PO?)體系的比較表3不同A相和梯度條件下多組分綠原酸異構(gòu)體保留時(shí)間(min)綠原酸異構(gòu)體A相為0.1%H?PO?洗A相為0.1%H?PO?洗新綠原酸綠原酸隱綠原酸異綠原酸B異綠原酸C地的藥典，為磷酸體系，部分多酚或綠原酸(異構(gòu)體)的地方標(biāo)準(zhǔn)、團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)為甲酸/乙酸體系，原保健食品圖1中，紅色為0.1%FA色譜圖，藍(lán)色為0.1%H?PO?色譜圖。(3)綠原酸和隱綠原酸分離度圖2綠原酸和隱綠原酸的分離效果圖2中，藍(lán)色圖線為綠原酸單一標(biāo)準(zhǔn)，紅色圖線為混合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)綠原酸與隱綠原酸的有效分別。(4)濾膜對(duì)綠原酸類化合物的影響使用尼龍材質(zhì)0.45μm有機(jī)濾膜，發(fā)現(xiàn)濾膜對(duì)異綠原酸A、B、C均有不同程度的吸附，對(duì)綠原酸、新綠原酸、隱綠原酸無(wú)明顯吸附。表450μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液過(guò)膜后濃度(μg/mL)化合物綠原酸隱綠原酸異綠原酸A異綠原酸C過(guò)膜后濃度流動(dòng)相梯度洗脫程序1綠原酸和隱綠原酸分離度更高，A相為0.1%H?PO?下綠原酸峰型更佳，靈敏度更高，故最終選取流動(dòng)相梯度洗脫程序1,使用0.1%H?PO?和乙腈作為流動(dòng)相?；衔锞€性范圍線性方程相關(guān)系數(shù)綠原酸圖5綠原酸校準(zhǔn)曲線線性范圍，線性方程和相關(guān)系數(shù)圖6綠咖啡提取物色譜圖圖7金銀花提取物色譜圖圖8金銀花茶色譜圖(7)綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的穩(wěn)定性對(duì)綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的穩(wěn)定性的研究多數(shù)在分析方法的開發(fā)和方法學(xué)驗(yàn)證的文獻(xiàn)中有涉及。作者IrinaN.Urakova(IrinaN.Urakova,OlgaN.Pozharitskaya,AlexanderN.Shikov,VeraM.Kosman,ValeryMakarov,ComparisonofhighperformanceTseparationandquantificationofchlorogenicacidingrextracts,J.Sep.Sci.,Volume31,Issue2,237-241,2/10.1002/jssc.200700472)提到，在采用HPLC法定量分析綠咖啡豆提取物中綠原酸的含量時(shí)，綠原酸儲(chǔ)備液和工作液在4℃條件下保存時(shí)，一周內(nèi)穩(wěn)定，無(wú)分解。本工作組將濃度為50μg/mL工作液在4℃存放20天后測(cè)定，濃度降低小于10%。2、特異性在空白溶劑和空白輔料干擾性試驗(yàn)中，選擇空白溶劑，軟膠囊、結(jié)果顯示綠原酸保留時(shí)間為9.353,空白溶劑及各劑型的空白輔料均不干擾綠原酸峰的測(cè)定。見圖9-15。圖9綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液圖11空白輔料(軟膠囊)圖12空白輔料(口服液)圖13空白輔料(硬糖)圖14空白輔料(硬膠囊)劑型試樣稱量(g)加入綠原酸(200μg/mL)體積(uL)定量限(mg/kg)片劑硬膠囊軟膠囊口服液硬質(zhì)糖果劑型片劑軟膠囊口服液硬質(zhì)糖果檢出限(mg/kg)33333>0.999）。12345樣品名稱本底值添加水平mg/kg標(biāo)曲查得濃度μg/mL(%)率(%)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%軟膠囊未檢出50500飲料/口服液未檢出50500硬糖未檢出50500酒劑未檢出500醋未檢出50500樣品編號(hào)綠原酸含量（m