2021獸醫(yī)檢測實驗室 ELISA 試驗測量不確定度評估指南

ELISA不確定度評估指南第PAGE第1頁共7頁2020032020030120200301獸醫(yī)檢測實驗室ELISA試驗測量不確定度評估指南1、適用范圍本指南規(guī)定了獸醫(yī)檢測實驗室對ELISA試驗進行測量不確定度評估的“從上到下法”和“從下到上法”。本指南適用于獸醫(yī)檢測實驗室對ELISA進行測量不確定度的評估。2、引用文件僅引用的版本適用；未注明日期的，引用文件的最新版本（包括任何修訂）適用。CNASCL01《檢測和校準實驗室能力認可準則》CNAS-CL01-G003:2019《測量不確定度的要求》OIE《ManualofDiagnosticTestsandVaccineforTerrestrialAnimals》“QualitymanagementinveterinarytestingChapter.2.2.4 “Measurementuncertainty”3、術語和定義測量不確定度：u含于此區(qū)間。A測量不確定度分量的評定。BA量進行的評定。合成標準不確定度：當測量結果是由若干個其他量的值求得時，按其他各量的方差（和）協(xié)方差算得的標準不確定度。自由度：在方差計算中，和的項數減去對和的限制數,符號為。（1-為顯著性水平。PKPKP表示。4ELISAELISAAA（但可能不限于不確定度、被檢樣品/試劑盒存放條件引起的不確定度、采樣是否正確及樣品是否被確定度。BB（但可能不限于）酶標儀的分辨力、孵育所用的恒（很大、試劑反復冷藏、人員身體狀況等等。ELISAAA結果按照如下方式分別計算。XXn=1nxnX ii1n:測量列數據的個數；X:第i個測量值；Sii1 n1inv2vixix

（即：測量結果減去被測量的最佳估計值）（或稱為平均值的標準偏差）sn=sn為X的實驗標準偏差每個影響因素的標準不確定度評估nu= = snB加樣器產生的不確定度加樣器產生的不確定度來源于加樣器(C)產生的不確定度u(C)和溫度效應(T)產生的不確定度u(T)。3加樣器校準(C)確度為±2%，ELISA100μL，按矩形分布處理，加樣器引入的3標準不確定度為：u(C)=（100μL×2%）/

=1.15(μL)溫度效應(T)20℃20±4℃2.1×10-4/℃，100μL2100μL（V底）u（V底）=[u2(C)+u2(T)]1/2=(1.152+0.0842)1/2=1.153(μL)同理由100μL(V終)所引起的標準合成不確定度u(V終)=（V底=1.153L)；底u(V終u（液層厚厚度）=[u2（V底）+u2(V終)]1/2=1.631(μL)酶標儀的不準確度Bu（酶標儀）=[u12+u22+u32]1/2溫育時間的不確定度ELISA45min±3min30min±3min，3min/31/2=1.732min.u（時間）=[1.7322/452+1.7322/302]1/2=0.069min溫育溫度的不確定度ELISA337℃±t℃t/31/2,所以溫度的相對不確定度為：u（溫度）=[(t/31/2)2+(t/31/2)2+(t/31/2)2]1/2如果t為±2℃,U（溫度）=2.000相對標準不確定度的合成2u=2u=2S2P2N2C2T2T12擴展不確定度的的計算與表示以標準偏差的倍數表示的不確定度稱為擴展不確定度，以U表示。在自由度ⅴ=n-195％時，最佳估計值的擴展不確定度為

UksxTKELISAK=2。不確定度的報告ELISAX=x±UxOD，UOD，XOD不確定度的應用ELISAOD>0.5ELISAOD＜0.5ELISAELISAX=x±UU±0.02ODOD0.47-0.51U±0.02，實際樣品測得的OD0.51，OD0.49-0.53OD0.480.53ODOD0.5，仍可判為陽性?！皩φ諛悠贰?ELISA“評估原理“對照樣品ELISA驗方法的全過程和性能進行監(jiān)控，直接評估該試驗過程的合成不確定度。ELISA計算出檢測結果的平均值、標準偏差（SD、相對標準偏差（RSD。RSD即為不確定度。假設數據以正態(tài)分布，在閾值附近以95%置信水平計算。擴展不確定度即為：2乘以RSD。評估舉例評估實例ELISA評估測量不確定度的方法。ELISA（本實驗是陽性對照質控樣品ODOD1PI所以弱陽性對照血清的OD值（ODL）就轉換為：PIL=100X[1-{ODL/ODN}]相對標準偏差就是：試驗檢測次數PI（%）156256361464551649試驗檢測次數PI（%）1562563614645516497598709551042經過計算可得：10，平均值（Mean）56.3，標準偏差（SD）7.9相對標準偏差（RSD）=SD/Mean=7.9/56.3=0.14假設數據以正態(tài)分布，在閾值附近以95%置信水平計算。擴展不確定度U(95%CI)=2×RSD，即2×0.14=0.28評估結果的應用ELISAPI50PI>0%PI<50%為陰性。所測