蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)-等電點(diǎn)和膠體性質(zhì)

生物化學(xué)重慶醫(yī)藥高等專(zhuān)科學(xué)校佘玉罕蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)等電點(diǎn)（一）兩性解離-COOH-COO--H

++H+-COO--COOH-NH3+-NH2+H+-H

+-NH3+-NH2蛋白質(zhì)分子除兩端的氨基(-NH2)和羧基(-COOH)可解離外，氨基酸殘基側(cè)鏈中某些基團(tuán)，也可解離成帶負(fù)電荷或正電荷的基團(tuán)。一、兩性解離和等電點(diǎn)實(shí)質(zhì)：各種帶電基團(tuán)得失氫離子(H

+

)的過(guò)程。各種蛋白質(zhì)的pI不同，多接近5.0。PrCOOHNH3+PrCOO-NH3+PrCOO-NH2+H+pH<pI陽(yáng)離子pH>pI陰離子當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一pH時(shí)，蛋白質(zhì)解離成正、負(fù)離子的趨勢(shì)相等，即成為兼性離子，凈電荷為0，此時(shí)溶液的pH稱(chēng)為蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)(pI)。（二）等電點(diǎn)pH=pI兼性離子-H+-H++H+

在電場(chǎng)中，帶電顆粒向電性相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象稱(chēng)為電泳。如蛋白質(zhì)分子帶正電，向負(fù)極泳動(dòng)；帶負(fù)電則向正極泳動(dòng)。

應(yīng)用pI-pH的關(guān)系所帶電荷電離基團(tuán)移動(dòng)方向pI-pH=0不帶電-不移動(dòng)pI

-pH>0帶正電-NH3+向負(fù)極移動(dòng)pI

-pH<0帶負(fù)電-COO-向正極移動(dòng)電泳：練習(xí)：現(xiàn)有一含A、B、C，三種蛋白質(zhì)的混合樣品。其pI依次為4.5、10.2、9.2，在pH為8緩沖溶液中進(jìn)行醋酸薄膜電泳分離，請(qǐng)?jiān)谙聢D中標(biāo)示出點(diǎn)樣位置及電泳結(jié)果。＋－

解析：pH=8A蛋白：pI–pH=-3.5<0，帶“-”

，向正極移動(dòng)；B蛋白：pI–pH=2.2>0，帶“+”

，向負(fù)極移動(dòng)；C蛋白：pI–pH=1.2>0，帶“+”

，向負(fù)極移動(dòng)；

因B>C，故B蛋白跑得更快。ACB練習(xí)：現(xiàn)有一含A、B、C、D、E，五種蛋白質(zhì)的混合樣品。其pI依次為4.5、10.2、9.2、8.6、5.2，在pH為8緩沖溶液中進(jìn)行醋酸薄膜電泳分離，請(qǐng)?jiān)谙聢D中標(biāo)示出點(diǎn)樣位置及電泳結(jié)果。＋－

ACBDE蛋白質(zhì)所帶電荷量越大，在電場(chǎng)中跑得越快；蛋白質(zhì)的分子量越大，在電場(chǎng)中跑得越慢。等電聚焦電泳：當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)在其等電點(diǎn)時(shí)，凈電荷為零，在電場(chǎng)中不再移動(dòng)。++－－－－+－－－－－5.06.07.0穩(wěn)定pH梯度5.06.07.0穩(wěn)定pH梯度通電++－－－－+－－－－－++－－－－+－－－－－++－－－－+－－－－－++－－－－+－－－－－蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)膠體性質(zhì)

一、蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)溶質(zhì)分子直徑與溶液真溶液膠體顆粒懸濁液

d<1nm1nm<d<100nmd>100nm蛋白質(zhì)的相對(duì)分子量1萬(wàn)-100萬(wàn)之間，分子量大。其分子直徑1-100nm之間，在膠體顆粒的范圍。因此具有膠體性質(zhì)。

蛋白質(zhì)具有膠體溶液的性質(zhì)：布朗運(yùn)動(dòng)、丁道爾現(xiàn)象、不能透過(guò)半透膜、具有吸附力等。穩(wěn)定因素：蛋白質(zhì)顆粒表面的水化膜和帶同種電荷，阻止分子間的聚集、沉淀。表面親水內(nèi)部疏水同種電荷表面親水內(nèi)部疏水同種電荷①透析：由于膠體溶液中的Pro不能通過(guò)半透膜，因此可以應(yīng)用透析法將非蛋白的小分子雜質(zhì)除去。應(yīng)用②蛋白質(zhì)的沉淀：破壞維持蛋白質(zhì)穩(wěn)定的2個(gè)因素之一（破壞同種電荷和水化膜），則導(dǎo)致蛋白質(zhì)溶液沉淀析出。（酸、堿液、脫水、鹽析、重金屬等）+H++H+pH=pIpH<pIp