細(xì)菌學(xué)弧菌屬培訓(xùn)課件

細(xì)菌學(xué)弧菌屬第一節(jié)霍亂弧菌第二節(jié)副溶血性弧菌2細(xì)菌學(xué)弧菌屬重點(diǎn)難點(diǎn)熟悉了解掌握1.霍亂弧菌的形態(tài)特征、培養(yǎng)特性、分類（群、型）、致病性；2.副溶血性弧菌的培養(yǎng)特性和致病性。

霍亂弧菌的免疫性、微生物學(xué)檢查和防治原則。1.霍亂弧菌的抵抗力；2.副溶血性弧菌的抵抗力、微生物學(xué)檢查和防治原則。3細(xì)菌學(xué)弧菌屬霍亂弧菌Vibriocholerae第一節(jié)4細(xì)菌學(xué)弧菌屬（一）形態(tài)染色新分離細(xì)菌呈弧形或逗點(diǎn)狀，人工培養(yǎng)后常呈桿狀。糞便直接鏡檢，排列如“魚群”狀革蘭染色陰性醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）一、生物學(xué)性狀霍亂弧菌形態(tài)（革蘭染色）（韓儉提供）霍亂弧菌“魚群”狀排列（邵世和臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)第5版配套光盤）霍亂弧菌掃描電鏡圖（金屬鍍膜）（邵世和臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)第5版配套光盤）5細(xì)菌學(xué)弧菌屬（一）形態(tài)染色菌體一端有單鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑，在病人“米泔水”樣糞便或液體培養(yǎng)物中呈快速飛鏢樣或流星樣運(yùn)動(dòng)有菌毛，無(wú)芽胞，O139群有莢膜醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）一、生物學(xué)性狀霍亂弧菌的端單鞭毛（電鏡）（邵世和臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)第5版配套光盤）6細(xì)菌學(xué)弧菌屬由2條環(huán)狀染色體組成大環(huán)：2.96Mb，攜帶2690個(gè)基因，編碼2534個(gè)蛋白小環(huán)：1.07Mb，攜帶1003個(gè)基因，編碼970個(gè)蛋白前噬菌體基因組：產(chǎn)生霍亂毒素（choleratoxin）的霍亂弧菌基因組含有前噬菌體CTXΦ基因組，攜帶10個(gè)基因（rstR、rstA、rstB、psh、cep、orfU、ace、zot、ctxA和ctxB），ctxA和ctxB編碼霍亂毒素（二）基因組特征醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）一、生物學(xué)性狀7細(xì)菌學(xué)弧菌屬（三）培養(yǎng)特性耐堿不耐酸，在pH8.8~9.0的堿性蛋白胨水或堿性瓊脂平板上生長(zhǎng)良好，初次分離常用堿性蛋白胨水增菌在普通鹽濃度環(huán)境中可生長(zhǎng)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）一、生物學(xué)性狀霍亂弧菌在堿性蛋白胨水中的培養(yǎng)物。（邵世和臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)第5版配套光盤）左測(cè)試管為對(duì)照，右側(cè)試管為經(jīng)4～6小時(shí)培養(yǎng)的霍亂弧菌，大量繁殖，培養(yǎng)液混濁，形成菌膜。8細(xì)菌學(xué)弧菌屬（三）培養(yǎng)特性在堿性瓊脂平板上形成圓形、透明或半透明S形、無(wú)色、扁平菌落在硫代硫酸鹽-枸櫞酸鹽-膽鹽-蔗糖（TCBS）培養(yǎng)基上形成黃色菌落醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）一、生物學(xué)性狀霍亂弧菌在TCBS瓊脂平板上形成發(fā)酵蔗糖的較大的黃色菌落（邵世和臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)第5版配套光盤）9細(xì)菌學(xué)弧菌屬氧化酶和觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性能發(fā)酵葡萄糖、蔗糖和甘露醇等糖和醇，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣能還原硝酸鹽吲哚試驗(yàn)陽(yáng)性（四）生化反應(yīng)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）一、生物學(xué)性狀10細(xì)菌學(xué)弧菌屬（五）抗原構(gòu)造與分型醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）一、生物學(xué)性狀根據(jù)O抗原不同進(jìn)行分群，已發(fā)現(xiàn)超過200個(gè)血清群O1群的古典生物型（classicalbiotype）引發(fā)前六次霍亂大流行；Eltor生物型（ElTorbiotype）引發(fā)第七次大流行1992年于南亞分離出O139群霍亂弧菌的抗原構(gòu)造與分型（韓儉制作）11細(xì)菌學(xué)弧菌屬（六）抵抗力在河水、井水及海水中可存活1~3周。黏附于藻類或甲殼類動(dòng)物時(shí)，可形成生物膜樣結(jié)構(gòu)，存活期會(huì)延長(zhǎng)對(duì)熱和酸敏感對(duì)含氯消毒劑敏感醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）一、生物學(xué)性狀12細(xì)菌學(xué)弧菌屬（一）致病物質(zhì)霍亂毒素（choleratoxin）

：目前已知的致瀉毒素中最為強(qiáng)烈的毒素。來(lái)源：O1群和O139群攜帶前噬菌體CTXΦ的溶原性霍亂弧菌產(chǎn)生結(jié)構(gòu)：由一個(gè)A亞單位和5個(gè)相同的B亞單位構(gòu)成，A亞單位由A1和A2兩條肽鏈組成。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）二、致病性與免疫性霍亂毒素結(jié)構(gòu)模式圖（韓儉制作）B亞單位A1A2A亞單位13細(xì)菌學(xué)弧菌屬霍亂毒素的作用機(jī)制：B亞單位與小腸上皮細(xì)胞表面的神經(jīng)節(jié)苷脂GM1受體結(jié)合，介導(dǎo)A亞單位進(jìn)入細(xì)胞，激活腺苷酸環(huán)化酶，使細(xì)胞內(nèi)cAMP水平升高，刺激腸黏膜細(xì)胞主動(dòng)分泌Cl-和HCO3-，抑制對(duì)Na+的攝入，水伴隨著離子大量丟失而丟失，導(dǎo)致患者出現(xiàn)嚴(yán)重腹瀉與嘔吐。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）AC：

腺苷酸環(huán)化酶（adenylatecyclase）Gsα：腺苷酸環(huán)化酶G亞單位ADPR：ADP核糖PKA：蛋白激酶A霍亂毒素作用機(jī)制模式圖（韓儉制作）14細(xì)菌學(xué)弧菌屬（一）致病物質(zhì)與定植有關(guān)的因素毒素共調(diào)解菌毛A（TcpA）：介導(dǎo)細(xì)菌黏附和定植于小腸黏膜上皮細(xì)胞表面；可充當(dāng)噬菌體CTXΦ的受體HapA：有助于細(xì)菌穿透至小腸黏膜層趨化蛋白（chemotaxisprotein）：cep編碼的黏附性因子鞭毛：有助于細(xì)菌穿過黏液層而接近腸壁上皮細(xì)胞形成生物膜醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）二、致病性與免疫性霍亂弧菌黏附于患者小腸黏膜上皮細(xì)胞（電鏡）（邵世和臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)第5版配套光盤）15細(xì)菌學(xué)弧菌屬（一）致病物質(zhì)其它致病物質(zhì)：副霍亂腸毒素、緊密連接毒素、神經(jīng)氨酸酶、溶血毒素、空泡毒素、RTX毒素等O139群存在多糖莢膜和特殊LPS毒性決定簇醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）二、致病性與免疫性16細(xì)菌學(xué)弧菌屬（三）所致疾病O1群和O139群：引發(fā)霍亂（甲類傳染?。?，可從無(wú)癥狀或輕型腹瀉到嚴(yán)重的致死性腹瀉（占5%-10%）。典型病例：劇烈腹瀉和嘔吐，排出“米泔水”樣糞便；脫水、肌肉痙攣、低鉀血癥、代謝性酸中毒、低容量性休克、腎功能衰竭、意識(shí)障礙。未經(jīng)治療者死亡率高達(dá)60%，及時(shí)治療后死亡率可小于1%非O1群和O139群霍亂弧菌引發(fā)輕癥腹瀉醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）二、致病性與免疫性18細(xì)菌學(xué)弧菌屬（四）免疫性感染后可刺激機(jī)體產(chǎn)生牢固免疫力，可維持3年以上。稻葉型與小川型之間有交叉免疫保護(hù)?；疾『?，可出現(xiàn)保護(hù)性抗毒素抗體及抗菌抗體，包括腸黏膜表面的sIgA和血清中的IgM和IgG，主要是sIgA發(fā)揮作用。O139群的保護(hù)性免疫以針對(duì)脂多糖和莢膜多糖的抗菌免疫為主，抗毒素免疫為輔。O1群獲得的免疫不能交叉保護(hù)O139群感染。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）二、致病性與免疫性19細(xì)菌學(xué)弧菌屬醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）三、微生物學(xué)檢查法標(biāo)本“米泔水”樣糞便、肛拭、嘔吐物分離培養(yǎng)快速診斷血清分群基因檢測(cè)生化反應(yīng)堿性蛋白胨水增菌TCBS培養(yǎng)基/4號(hào)瓊脂/慶大霉素瓊脂生長(zhǎng)現(xiàn)象形態(tài)及活菌運(yùn)動(dòng)觀察免疫制動(dòng)試驗(yàn)、O1和O139群血清凝集試驗(yàn)PCR擴(kuò)增ctxA、rfb20細(xì)菌學(xué)弧菌屬控制傳染源：隔離治療患者。及時(shí)補(bǔ)充水和電解質(zhì)，預(yù)防低血容量性休克和酸中毒是治療霍亂的關(guān)鍵；可選用的抗菌藥物包括：多西環(huán)素、紅霉素、環(huán)丙沙星等。有耐藥菌。切斷傳播途徑：改善社區(qū)環(huán)境，加強(qiáng)食品和水源管理及糞便處理；培養(yǎng)良好個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣。保護(hù)易感人群：接種疫苗，包括減毒活疫苗CVD103HgR、重組霍亂毒素B亞單位-全菌疫苗、滅活霍亂弧菌全菌疫苗。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）四、防治原則21細(xì)菌學(xué)弧菌屬副溶血性弧菌Vibrioparahaemolyticus第二節(jié)22細(xì)菌學(xué)弧菌屬形態(tài)特征：大多呈弧狀、棒狀、卵圓狀等多形性，革蘭染色陰性?？尚纬啥吮廾蛡?cè)鞭毛，無(wú)芽胞?；蚪M：兩個(gè)環(huán)狀染色體，攜帶4832個(gè)編碼蛋白的基因。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）一、生物學(xué)性狀副溶血性弧菌形態(tài)（革蘭染色）（邵世和臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)第5版配套光盤）23細(xì)菌學(xué)弧菌屬培養(yǎng)特征：嗜鹽，以35g/LNaCl為適宜，無(wú)鹽則不生長(zhǎng)在TCBS平板上可形成藍(lán)綠色S型菌落在我萋瓊脂（Wagatsumaagar）平板上可產(chǎn)生β溶血，稱為神奈川現(xiàn)象（Kanagawaphenomenon,KP）醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）一、生物學(xué)性狀副溶血性弧菌在TCBS上的菌落特征（邵世和臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)第5版配套光盤）24細(xì)菌學(xué)弧菌屬侵襲力：Ⅲ型分泌系統(tǒng)（T3SS）、毒力島、鞭毛、莢膜、生物膜、外膜蛋白等毒素：耐熱直接溶血素（thermostabledirecthemolysin，TDH）：存在于88%～96%的臨床標(biāo)本中，具有直接溶血毒性和腸毒素活性，通過增加腸黏膜細(xì)胞內(nèi)的鈣含量誘導(dǎo)細(xì)胞分泌氯離子而引發(fā)腹瀉。耐熱相關(guān)溶血素（thermostablerelatedhemolysin，TRH）：臨床分離的KP-副溶血性弧菌可產(chǎn)生TRH，與TDH具有類似生物學(xué)活性。（一）致病物質(zhì)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）二、致病性與免疫性25細(xì)菌學(xué)弧菌屬經(jīng)口感染引發(fā)食物中毒：烹飪不當(dāng)?shù)奈廴颈揪暮．a(chǎn)品（包括螃蟹、蝦、貝類、牡蠣和蛤類等）、鹽腌制品；因食物容器或砧板生熟不分污染本菌后均可經(jīng)口引發(fā)感染，呈急性胃腸炎表現(xiàn)，是造成我國(guó)沿海地區(qū)微生物性食物中毒的首要因素。經(jīng)傷口感染可引發(fā)蜂窩織炎。嚴(yán)重感染或伴有肝病、糖尿病或酒精中毒者的病例，細(xì)菌可擴(kuò)散至血液引發(fā)敗血癥。（二）所致疾病醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）二、致病性與免疫性26細(xì)菌學(xué)弧菌屬病后免疫力不強(qiáng)，可重復(fù)感染。（三）免疫性醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）二、致病性與免疫性27細(xì)菌學(xué)弧菌屬醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）三、微生物學(xué)檢查法標(biāo)本（糞便、肛拭或剩余食物）增菌（3.5%NaCl堿性蛋白胨水培養(yǎng)基）分離培養(yǎng)（TCBS）可疑菌落（綠色）純培養(yǎng)血清學(xué)鑒定生化鑒定PCR擴(kuò)增tdh和trh基因28細(xì)菌學(xué)弧菌屬加強(qiáng)海產(chǎn)品市場(chǎng)和食品加工過程的衛(wèi)生監(jiān)督管理；目前尚無(wú)有效疫苗可以預(yù)防；感染者病程較短，以對(duì)癥治療為主，嚴(yán)重病例需補(bǔ)充水電解質(zhì)。必要時(shí)可選用強(qiáng)力霉素、米諾環(huán)素、第三代頭孢菌素等抗菌藥物進(jìn)行治療。醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）四、防治原則29細(xì)菌學(xué)弧菌屬霍亂弧菌呈弧形，革蘭陰性，有單鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑；嗜堿不耐酸。O1、O139群是引起霍亂的主要病原，O1群又分為古典和E1Tor生物型?；魜y毒素是主要致病物質(zhì)，其B亞單位和小腸黏膜細(xì)胞的GM1神經(jīng)節(jié)苷脂受體結(jié)合后