中心醫(yī)院輸血科輸血質量管理體系SOP

南陽市中心醫(yī)院輸血科質量管理體系作業(yè)指導書（第二版）編輯：徐學新責任編輯：胡松2016年3月南陽市中心醫(yī)院輸血科目錄第一部分樣本管理類作業(yè)指導書患者準備及原始標本識別………………1臨床醫(yī)生的指導…………1申請單的填寫、處理及保存……………2輸血相容性檢測標本采集容器及必須添加劑、采集類型和量………2標本采集方法……………3標本采集注意事項………3安全處置…………………4血液標本的運送…………6輸血相容性檢測標本的接收與拒收的標準……………6血液標本的保存…………7附加檢驗項目及時間限制………………7因分析失敗而需要再檢驗標本的處理…………………7醫(yī)療廢物的處理…………8已檢標本的處理存放……………………8輸血科離心機標準操作程序……………8第二部分試驗方法類作業(yè)指導書試管法鑒定ABO血型標準操作規(guī)程……10試管法鑒定RhD血型標準操作規(guī)程……17微柱凝膠卡式法鑒定ABO正反血型及RhD血型標準操作規(guī)程………20鹽水法交叉配血試驗標準操作規(guī)程……26凝聚胺交叉配血試驗標準操作規(guī)程……29微柱凝膠卡式法交叉配血試驗標準操作規(guī)程…………32新生兒溶血?。℉DN）血型血清學檢查標準操作規(guī)程…37紅細胞不規(guī)則抗體篩選標準操作規(guī)程…………………48孕婦血清中紅細胞血型抗體效價測定標準操作規(guī)程…52冷自身抗體的鑒定………55溫自身抗體的鑒定………57毛細管離心分離新老紅細胞技術………60酶處理細胞的制備………61輸血相容性檢測室內質控標準操作規(guī)程………………63輸血科室間質評標準操作規(guī)程…………67室內質控操作流程（簡易版）……………70輸血科試劑質量管理操作規(guī)程（試劑質控）……………78附質控品使用說明書……………………85手工抗人球蛋白試驗操作規(guī)程…………104Rh血型分型(試管法)試驗標準操作規(guī)程……………111ABO及Rh血型抗體效價測定試驗標準操作規(guī)程………117吸收-放散試驗標準操作規(guī)程……………124RhD血型確證試驗(卡式抗人球法)標準操作規(guī)程……129可溶性血型物質的測定…………………134A1和A2亞型鑒定…………137B亞型鑒定………………139全自動血型配血分析儀作業(yè)指導書……140手工卡式操作規(guī)程（簡易版）……………149儲存式自身輸血操作規(guī)程………………156輸血相容性實驗操作規(guī)程………………164輸血科全自動血型分析儀使用要點（優(yōu)化版）………175附：異常實驗結果的處理方法………………176第三部分儀器類操作規(guī)程作業(yè)指導書4℃貯血冷藏冰箱（SANYO）操作規(guī)程……194-30℃儲血冰箱（SANYO）操作規(guī)程………195試劑（標本）冰箱操作規(guī)程………………196血型血清學專用（臺式KUBOTAKA-2200）離心機操作規(guī)程……………196高速式離心機操作規(guī)程……………………197毛細管離心機標準操作規(guī)程………………198顯微鏡（OLYMPUSCH30）操作規(guī)程………201電熱恒溫箱（HH．W21.600型）操作規(guī)程………………201冰凍血漿解凍儀（PH-1型）操作規(guī)程操作規(guī)程…………202血小板恒溫振蕩保存箱（XHZ-ⅢA型）操作規(guī)程………204生物安全柜操作規(guī)程………205自動高頻熱合機操作規(guī)程…………………206血液加溫器使用原則及操作規(guī)程…………207PX-T型低溫血液操作臺操作規(guī)程…………208血栓彈力圖操作規(guī)程………209TD2-24血型卡離心機操作規(guī)程……………223德國GermanyWAECO半導體血液運輸箱使用流程……225冷鏈系統(tǒng)概述………………227老肯牌空氣消毒機使用說明………………228免疫微柱孵育器操作規(guī)程…………………231

作業(yè)指導書作業(yè)指導書是臨床實驗室開展日常工作的指導性文件，是所有參與檢驗前、檢驗中、檢驗后過程的工作人員必須遵守的操作行為指南。第一部分樣本管理類作業(yè)指導書適用于ABO、Rh血型鑒定、稀有血型抗原測定、不規(guī)則抗體篩查與鑒定、交叉配血、抗體效價測定、吸收放散試驗、抗人球蛋白試驗等標本的采集、接收及處理。有效指導輸血相容性檢測標本的采集、接收及保存，使標本中的待測成分不受影響，標本量能夠滿足檢測的要求，保證檢測結果準確可靠。一患者準備及原始標本識別1、患者血液采集前，應避免跑步、騎自行車、爬樓梯等劇烈的運動，要求患者休息15分鐘后進行采血,冬季采血時應保持血液循環(huán)通暢。2、靜脈血標本由臨床醫(yī)護人員采集，遵照醫(yī)囑準備好標本采集前所用的容器以及消毒器材、一次性注射器、標本條形碼、檢驗申請單或輸血申請單等備用。確認患者姓名、病案(ID)號和血型，并將姓名、ID號、血型和標本條形碼貼于采血真空試管上。3、采血前應向患者做適當解釋，以消除其疑慮和恐懼。如遇患者采血后發(fā)生暈厥，可讓患者平臥，通常休息片刻即可恢復。必要時可嗅芳香氨酊，針刺或指掐人中、合谷等穴位。4、標本條形碼上的申請單號是原始標本的唯一標識。二臨床醫(yī)生的指導1、臨床醫(yī)生必須對患者講清楚輸血相容性檢測的目的、采血時間(住院患者應在早晨臥床時采血；其他人員最好在空腹時采血，急診除外)及相關注意事項。2、臨床醫(yī)生應向患者講清楚采集血液標本前，使用青霉素、非那西丁、氨基比林、磺胺、甲基多巴、肝素、右旋糖酐等藥物可能會影響檢驗結果.臨床醫(yī)生若確認患者近期使用過上述藥物，應在申請單中注明或直接通知輸血科工作人員，以利于試驗結果的正確判斷。三申請單的填寫、處理及保存1、臨床醫(yī)生在開具輸血申請單或輸血相容性檢測申請單時，應采用計算機程序進行申請，填寫完整。門診患者包括患者姓名、性別、出生日期或年齡、申請科室、病人ID號、申請日期、標本類型、臨床診斷、申請檢驗項目及特殊說明等；住院患者還需要住院號。輸血申請單還需要填寫患者輸血前檢測項目結果，包括ABO及RhD血型、血紅蛋白含量、白細胞計數(shù)、血小板計數(shù)、ALT、HBsAg、抗HCV、抗HIV、梅毒等檢驗結果。2、臨床醫(yī)護人員：根據(jù)申請單類別，做好標本采集的準備工作。醫(yī)護人員采集完血液標本后應在輸血申請單或檢驗申請單上注明采集者姓名及采集時間。3、輸血工作人員：必須在收到臨床醫(yī)生電子打印的、信息完整的輸血申請單或檢驗申請單時，方可接收標本并實施相應的檢驗。4、輸血申請單、相容性檢測申請單：至少保存10年。四輸血相容性檢測標本采集容器及必需添加劑、標本采集的類型和量標本采集容器是一次性含EDTA-K2或EDTA-K3抗凝劑的真空采血管(規(guī)格：12mm×l00mm，紫色)；標本采集的類型是靜脈血(特殊情況下可以使用動脈血)；標本量是抗凝血≥2ml。五標本采集方法1、靜脈血液標本采集過程：臨床醫(yī)生開具申請單→臨床護士審核合格后，打印申請單條碼，檢查真空管條碼與申請單是否一致→患者做好準備→找好采血靜脈并消毒→使用裝有EDTA-K2或EDTA-K3的真空管采集靜脈血2ml以上→干棉簽壓迫針刺處→充分混勻標本(在檢驗申請單上注明標本采集者姓名和采集時間)→送至輸血科檢測。注意：一次只能抽取一個患者血液，先抽血注入試管再貼lis條碼。

2、靜脈血液標本采集部位：通常采用肘部靜脈，優(yōu)先選擇順序是肘正中靜脈、貴要靜脈、頭靜脈；如肘部靜脈不明顯時，可改用手背靜脈或內踝靜脈，必要時也可從股靜脈采血。兒童可用頸外靜脈采血，但有危險性，以少用為宜。為保證檢測結果準確性，不能在靜脈輸液同側臂或輸液三通處采集靜脈血液標本。3、真空采血法：采用真空采血裝置(備有軟橡皮套管式止血裝置)，穿刺回血后，即可將另一端的硬插管插入真空定量的采血試管內，血液足量后，拔出硬插管即止血。整個采血過程無血液外溢和污染。4、注射器采血法：血管條件不好時，也可以采用注射器采血，采完后去掉針頭，拔掉真空管塞，將靜脈血沿試管壁緩慢注入試管內，重新塞緊試管塞。六標本采集注意事項1、嚴格按照無菌技術操作(除按規(guī)定穿戴工作服外，還應戴一次性手套和口罩)，防止患者采血部位感染，保證一人一針，杜絕交叉感染。真空采血過程一般情況無血液外溢和污染，如果有血液標本外溢應立即對其用0.2％過氧乙酸溶液或75％乙醇溶液消毒處理。標本采集過程中，對所使用的采集材料應妥善處置，嚴格執(zhí)行無菌操作，使用合格的材料，使用前進行嚴格檢查，保證安全；采血人員對所采集的標本應作好登記，并簽名。標本采集過程完成后，對所使用的采集材料應及時、妥善處置，保證環(huán)境和人員安全。2、靜脈采血時，止血帶壓迫時間宜<1分鐘，若止血帶壓迫>2分鐘，大靜脈血流受阻而使毛細血管內壓上升，可有血管內液與組織液交流，影響檢測結果。3、抗凝管采集血液標本后，立即將試管輕輕顛倒5、6次，使血液與抗凝劑充分混勻。4、采血時，應盡量避開水腫、血腫部位、輸血同側手臂、瘢痕部位、動靜脈瘺管或任何導管同側手臂以及靜脈輸液同側手臂。七安全處置1、銳利(注射器)器具：1.1不把用過的銳利器具(注射器等)傳遞給別人；1．2不要向用過的一次性注射器針頭上套針頭套，也不要用手毀壞用過的注射器；1.3把用過的注射器直接放到專門的容器中，統(tǒng)一處理；1.4勿將銳利廢棄物同其他廢棄物混在一起；1.5勿將銳利廢棄物放在兒童可以接觸到的地方。2、廢棄物：2.1處理廢棄物必須采用適當?shù)姆雷o設施，常用的防護設施包括乳膠手套、口罩、防護眼鏡、隔離衣等。2.2沒有被污染的廢棄物可以按一般性廢棄物處理(裝入黑色袋)；污染的廢棄物可以按醫(yī)療廢棄物(感染性廢棄物，裝入黃色袋)處理。3、意外情況處理：3.1皮膚有損傷或針刺時，建議盡可能擠出傷口血液，用大量的水沖洗；然后用滅菌生理鹽水徹底清洗傷口處，并用75％乙醇溶液消毒；最后用防水的敷料包扎傷口；當皮膚損傷或針刺時，懷疑可能有HIV、HBV、HCV感染，立即進行醫(yī)療處理并采取有效的醫(yī)學預防措施如立即注射乙肝疫苗。專家建議在4～6周檢測抗體，周期性復查(6周、12周、6個月)，并將結果上報有關部門。3.2如果被血液或體液噴濺眼睛、黏膜，立即用大量清水或生理鹽水沖洗15～20分鐘；如果被血液或體液噴濺皮膚，用肥皂液和流動水清洗污染的皮膚，再用75％乙醇或0.5％碘伏進行消毒；懷疑接觸HIV、HBV、HCV感染者的血液時，立即進行醫(yī)療處理并采取有效的醫(yī)學預防措施如立即注射乙肝疫苗。專家建議在4～6周檢測抗體，周期性復查(6周、12周、6個月)，并將結果上報有關部門。3.3處理溢出物必須采用適當?shù)姆雷o設施，常用的防護設施包括乳膠手套、口罩、防護眼鏡、隔離衣等；患者標本污染環(huán)境時，用衛(wèi)生紙將溢出物吸收，然后用0.2％過氧乙酸溶液或次氯酸鈉(有效氯為1000～2000mg／L)溶液擦拭消毒，必要時采用紫外線照射對環(huán)境進行消毒處理；患者標本污染衣物時，盡快脫掉污染衣服以防止感染物觸及皮膚，將已污染的衣物進行適當?shù)南咎幚?。如果被患者標本污染的衣服觸及皮膚時，應盡快脫掉被污染衣服并進行淋浴；懷疑標本有傳染性疾病，同時應采取有效的醫(yī)學預防措施。八血液標本的運送1、門診患者的血液標本由集中采血室負責采集；住院患者的血液標本由臨床專職外送人員或醫(yī)護人員運送。2、送檢地點：綜合病房大樓三層輸血科標本收取處。3、輸血相容性檢測標本采集后應立即送檢，臨床科室不應保存相關標本。4、血液標本的運送必須保證運送過程中的安全，防止溢出。九輸血相容性檢測標本的接收與拒收的標準1、實驗室接收合格血液標本的標準：1.1輸血申請單或輸血相容性檢測申請單應為電子格式(特殊急診患者除外)，內容必須齊全，簽字、審批符合程序，血液標本容器標志應符合本程序相關要求，標本標志應與申請單的相應內容完全一致；1.2標本種類(含EDTA-K2或EDTA-K3抗凝劑的靜脈血)、標本量(抗凝血2.0ml以上)符合所申請試驗的要求；1.3血液標本采集后應立即送檢。2、實驗室拒收血液標本的標準：2.1在一般情況下，血液標本不符合上述接收標準的，血液標本拒收；2.2標本凝血、溶血者拒收；2.3血液標本在運送過程中，容器破裂、標本外溢者拒收。3、實驗室接收不合格血液標本的說明：當患者處于休克、昏迷或為嬰幼兒等特殊情況，血液標本量采集困難，標本量不足2.0ml，但離心后能夠滿足手工操作所需，實驗室可以接收此類不符合接收標準的標本，但必須與臨床醫(yī)生聯(lián)系，經臨床醫(yī)生同意后，實驗室方可接受血液標本，并在申請單上注明。4、拒收標本應及時通知臨床醫(yī)生或護士，但原始標本由實驗室保存，其他人員未經允許不得取走。十血液標本的保存輸血相容性檢測的標本原則上在檢測前不保存，收到標本后應立即進行相關檢測，如果暫時無法完成檢測，可室溫短期保存(一般不超過6小時)。十一附加檢驗項目及時間限制輸血相容性檢測靜脈血液標本的附加檢驗項目主要為交叉配血，若原始標本有足夠的標本量，在血液標本收到后72小時內（未輸血）可提出附加檢驗申請。十二因分析失敗而需再檢驗標本的處理1、輸血相容性檢測因標本蛋白凝塊、球蛋白含量異常等原因無法得到準確結果時，應根據(jù)具體情況將試驗轉入手工操作，排除標本異常對自動化儀器的不良影響，以獲得可靠的試驗結果。2、輸血相容性檢測因儀器運行異?；騼x器沒有吸到血液標本，導致儀器檢測不出結果，應重新對原始血液標本進行檢測。3、因特殊、疑難血清學表現(xiàn)，無法獲取實驗結果，而血液標本已經用完時，可以要求臨床科室重新抽取標本，進一步進行相關檢測.十三醫(yī)療廢物的處理檢驗過程中產生的各種廢物，按《醫(yī)療廢物(液)管理程序》進行處理。十四已檢標本的處理存放已經完成輸血相容性檢測的靜脈血標本在4℃條件下保存7天，7天后按《醫(yī)療廢物(液)管理程序》處理。十五輸血科離心機標準操作程序1、目的

規(guī)范離心機的操作和維護，保證實驗室正常工作

2、適用范圍

適用于實驗室作血漿、血清等分離工作。

3、操作步驟

3.1打開電源開關，打開蓋板，小心將待離心試管放入護管內，注意對稱兩邊護管內的重量應小于1克，蓋上蓋板。

3.2轉速調節(jié)，根據(jù)要求調節(jié)旋鈕。

3.3時間設置，根據(jù)所需時間調節(jié)旋鈕。

3.4等旋轉停止后，打開蓋板取出離心管。

3.5工作日結束時后，關掉電源開關。長時間不用時應拔出電源插頭，確保安全。

4、注意事項

4.1為了延長使用壽命，減少故障發(fā)生，必須注意對稱兩邊離心管護管內的等重要求；

4.2為確保離心機內氣溶膠不造成實驗室污染，應在停止旋轉后方

可打開蓋板。

4.3儀器不使用時請罩防塵罩。

4.4注意檢查儀器的運行情況，并填寫《儀器使用、維護登記表》。5、儀器維護

5.1日常維護——保持機外清潔，注意對稱平衡，觀察噪音異常；

5.2月維護——每季度用消毒液清洗護管套及機內；

5.3按需維護——根據(jù)使用頻率及時更換碳刷，勿使碳刷后金屬絲磨擦整流子軸柱，造成硬性損壞；

5.4嚴格按照儀器的關機規(guī)程關機。

6、期間核查

離心機的定標不需要特別的周期間隔。

7、相關記錄

儀器使用、維護登記表。

第二部分試驗方法類作業(yè)指導書一、試管法鑒定ABO血型標準操作規(guī)程1、目的為規(guī)范輸血科ABO血型鑒定的技術操作，確保鑒定結果準確及臨床輸血安全有效，依據(jù)《輸血實驗室管理程序》4.1.7條款的要求制定本規(guī)程。2、適用范圍本文件適用于本院輸血科ABO血型鑒定的操作過程的規(guī)范化管理。3、方法及原理3.1方法：試管凝集法3.2原理：根據(jù)紅細胞上有或無A抗原或/和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型4種。可利用紅定紅細胞上有無相應的A抗原或/和B抗原；所謂反定型，是用已知A細胞和B細胞來測定血清中有無相應的抗-A或/和抗-B。4、試劑4.1血清抗A（市售）、抗B（市售）、抗A+B（健康O型人血清）；4.25%A、B及0型試劑紅細胞鹽水懸液；4.3受檢者血清或血漿；4.4受檢者5%紅細胞鹽水懸液;5、樣本采集及處理用一次性EDTA-K2真空采血管抽取靜脈血1ml，將標示有患者姓名、性別、年齡、住院號、病室/門急。6、操作步驟6.1正定型：取潔凈小試管3支，分別標明抗A，抗B和抗A+B，用滴管分別加抗A，抗B和抗A+B。分型血清各1滴于試管底部，再以滴管分別加入受檢者5%紅細胞鹽水懸液1滴，混合。6.2反定型：另取潔凈小試管3支，分別標明A，B和O細胞。用滴管分別加入受檢者血清1滴于試管底部，再分別以滴管加入A，B和O型5%試劑紅細胞懸液1滴，混合。立即以1000r/min離心1min。6.3將試管輕輕搖動，使沉于管底的紅細胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集（或溶血）現(xiàn)象。如肉眼不見凝集，應將反應物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。7、結果判斷：凝集為陽性（+），不凝集為陰性（-），ABO定型結果如下表ABO正反定型結果標準血清+被檢者紅細胞血檢者血型標準紅細胞+被檢者血清抗A抗B抗A+BA細胞B細胞O細胞+-+A-+--++B+-----O++-+++AB---8、干擾：8.1分型血清質量性能符合要求，用畢后應放冰箱保存，以免細菌污染。8.2試劑紅細胞以3個健康者同型新鮮紅細胞混和，用生理鹽水洗滌1次，以除去存在于紅細胞中的抗體及可溶性抗原。8.3試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。8.4操作方法應按規(guī)定，一般應先加血清，然后再加紅細胞懸液，以便容易核實是否漏加血清。8.5按理IgM抗-A和抗-B與相應紅細胞的反應溫度以4℃為最強，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍在室溫（20～24℃）內進行試驗，37℃可使反應減弱。8.6離心時間不宜過長或過短，速度不宜過快或過慢，以防止假陽性或假陰性結果。8.7觀察時應注意紅細胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。8.8判斷結果后應仔細核對、記錄，避免筆誤。9、凝強度判斷:觀察結果應仔細，首先注意有無凝集，再按下述情況說明凝集強度：9.14＋：紅細胞凝聚成一大塊，血清透明清晰。9.23＋：紅細胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。9.32＋：紅細胞凝集分散成多個小塊，可見游離紅細胞。9.41＋：肉眼可見大顆粒，周圍有較多紅細胞。9.5±：鏡下可見數(shù)個紅細胞凝集在一起，周圍有很多紅細胞。9.6混合凝集視場（MF,mixedfield）：鏡下可見數(shù)個紅細胞凝集，大多數(shù)紅細胞分散分布為MF。陰性（－）：鏡下未見凝集，紅細胞均勻分布。10、質量控制：單克隆抗-A（B）試劑應在有效期內使用，每批次在使用前應檢測特異性及效價，試劑紅細胞的質控執(zhí)行《輸血科試劑質控標準操作規(guī)程》，每天常規(guī)血型鑒定前先做室內質控（具體執(zhí)行《輸血科室內質量控制的標準操作規(guī)程》），結果在控后方可將常規(guī)檢查的報告發(fā)出。11、醫(yī)學解釋：11.1血液治療已成為臨床上必不可少的治療手段。輸血必須輸入ABO同型血，否則輸入的紅細胞可能迅速被破壞，導致嚴重的溶血反應，常常威脅生命甚至造成死亡。所以在臨床工作中必須杜絕ABO血型不合的血液輸入人體，這以顯得十分重要。11.2腎、皮膚等器官或組織移植時，必須保證供體與受體之間ABO血型符合，否則將發(fā)生排斥反應，造成移植術失敗。11.3ABO血型不合所致的新生兒溶血病，可導致流產、死胎或因出生后搶救不及時而致死等。目前早期診斷仍依賴于ABO血型血清學檢查。11.4ABO血型在人群中的分布，可用作遺傳距離和聚類的分析，現(xiàn)已知道中國人分為北方、南方兩大群，前者以較高B基因，后者以較高O基因為特征。11.5其他：如親子鑒定，法醫(yī)學上對可疑血跡、精斑、毛發(fā)等ABO血型鑒定。12、最常見的誤差來源：12.1自制分型血清抗體效價太低、親和力不強，造成定型不準。12.2患者纖維蛋白原升高或異常蛋白質血狀假凝集。誤認其脫下的膠狀硅酸鹽為串錢狀凝集。12.312.4血清中存在不規(guī)則抗體，如A2和A2B型患者血清內有A1抗體，能凝集A1紅細胞。此外還有I抗體等。有些癌癥患者（如胃癌、胰腺癌等）血中大量的可溶性A或B物質可中和抗體血清的抗體，從而抑制反應，造成假的不凝集。12.5嬰兒尚未產生自己的抗體（出生3~6個月后方逐漸產生），或有從母親獲得的血型抗體，故新生兒不宜用血清作反向定型。12.6老年人血型抗體水平會下降，某些免疫缺陷的人或慢性淋巴細胞白血病、遺傳性無丙種球蛋白血癥以及有些用了免疫抑制劑的患可出現(xiàn)反向定性錯誤。12.7用近期內輸過血的患者血液做對照紅細胞，其紅細胞是多種紅細胞的混合物。12.8病人紅細胞已經被大量抗體包被（如某些自身免疫疾病或新生兒溶血病患者的紅細胞），或紅細胞懸浮于含高濃度蛋白的介質中，紅細胞都會自發(fā)地發(fā)生凝集。12.9有些人紅細胞膜有遺傳或獲得性異常，易發(fā)生多凝集（較罕見）。12.10A或B的弱抗原易判斷為不凝集（假陰性），而由細菌引起的獲得性類B抗原易誤判為陽性。12.11由于患白血病或某些惡性腫瘤（如Hodgkin病）使A或B抗原變弱。嬰兒及老年人的紅細胞抗原較青壯年弱，在實驗室內保存過久的紅細胞及部分衰老的紅細胞抗原性也會減弱。12.12當用血清配制紅細胞懸液時，若血清中有高濃度血型物質則會中和分型血清中的抗體，而不再與紅細胞抗原起反應。12.13紅細胞被細菌污染。12.14，2%B型紅細胞會定為O型，但血清中只有抗A抗體。12.15用了不潔的玻璃器皿或使用了嚴重污染的血清、紅細胞可出現(xiàn)假陽性。試管沾染了洗滌劑會造成假陰性。12.16紅細胞與血清的比例不當、過度離心或離心不足可引起假陽性或假陰性。12.17將出現(xiàn)的溶血現(xiàn)象（陽性）誤認為陰性結果。12.18溫度過高會造成假陰性。因為ABO血型系統(tǒng)的IgM抗體最適溫度為4~22℃，如達37℃凝集力即下降。12.19弄錯標本、試劑、標簽，或出現(xiàn)記錄錯誤。注意事項:1、O型紅細胞反應為陰性且抗A、抗B反應強度小于4+、A型紅細胞或B型紅細胞反應強度小于2+或正反定型不相符，符合上述情況正定型需加做多克隆抗-A、抗-B、抗-H并根據(jù)情況加做抗-AB、抗-A1，操作步驟同步驟③，反定型可先加大血清量，從步驟④中的1～2滴血清可最多加至8滴，但需要在抗體減弱管和O細胞管同時加大血清量，另外根據(jù)情況加做A2型紅細胞，操作步驟同步驟④，結果判定。2、若O型紅細胞反應為陽性，其余抗原抗體反應強度符合表1標準相互對應，符合上述情況需對待檢血清進行抗體鑒定。3、對于正定型單克隆抗-A，抗-B及人源抗-A，抗-B均無法檢出抗原，且反定型檢出相應抗體的標本，需要進行吸收放散試驗，取待檢標本壓積紅細胞1ml，洗滌3次后加入等量人源抗-A或抗-B，同時使用1mlO型壓積紅細胞進行平行試驗，混勻后放入4℃冰箱吸收30分鐘，吸收完畢使用冰鹽水快速洗滌6次，后進行熱放散，收集放散液，并向其中加入1滴A型細胞或B型細胞，1000g離心15秒，肉眼判斷紅細胞凝集情況，試驗管凝集強度高于對照管2+即為陽性結果，反之則為陰性結果。二、試管法鑒定RhD血型標準操作規(guī)程1、目的為規(guī)范輸血科RhD血型鑒定的技術操作，確保鑒定結果準確及臨床輸血安全有效，依據(jù)《輸血實驗室管理程序》相關條款的要求制定本規(guī)程。2、適用范圍本文件適用于本院輸血科RhD血型鑒定的操作過程的規(guī)范化管理。3、方法及原理3.1方法：試管凝集法3.2原理：Rh血型抗體多系不完全抗體，屬IgG型。因分子短小，與紅細胞上的抗原作用后，不能使紅細胞靠攏凝集。木瓜酶能破壞紅細胞表面上的唾液酸，降低其表面電荷，減少紅細胞之間的排斥力，紅細胞得以靠攏，在不完全抗體的作用下，紅細胞便出現(xiàn)凝集。4、試劑市售IgG型抗D標準血清；受檢者5%紅細胞鹽水懸液。5、標本采集及處理同ABO血型檢查。6、操作步驟6.1取小試管1支，用蠟筆標記，加入抗D血清1滴，再加5%受檢者紅細胞鹽水懸液1滴，混勻，立即以1000r/min離心1min。6.2將試管輕輕搖動，使沉于管底的紅細胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集（或溶血）現(xiàn)象。如肉眼不見凝集，應將反應物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。7、結果判斷：受檢管凝集，表示受檢紅細胞上有D抗原；受檢管不凝集，即表示受檢紅細胞上沒有D抗原，Rh（D）陰性。8、臨床意義8.1Rh血型與輸血。Rh陰性患者如輸入Rh陽性血液，可刺激患者產生免疫性抗體，當?shù)诙卧俳邮躌h陽性血液時，即發(fā)生溶血性輸血反應。Rh陰性婦女如孕育過Rh陽性胎兒，當輸入Rh陽性血液時亦可產生溶血性反應，嚴重者可導致死亡。8.2Rh血型與妊娠。Rh陰性母親孕育了Rh陽性胎兒后，在胎盤有小的滲漏時，胎兒血液可滲入母體血循環(huán)中，母體受到胎兒紅細胞的刺激可產生相應的抗體。此種免疫性抗體能通過胎盤而破壞胎兒紅細胞，如果第一胎所產生抗D抗體效價較低，一般對胎兒無明顯影響。如再次妊娠Rh陽性胎兒時，抗D效價很快升高。此抗體通過胎盤進入胎兒體內而發(fā)生新生兒溶血病。9、質量控制：單克隆抗-D試劑應在有效期內使用，每批次在使用前應檢測特異性及效價，具體執(zhí)行《輸血科試劑質控標準操作規(guī)程》，每天常規(guī)血型鑒定前先做室內質控（具體執(zhí)行《輸血科室內質量控制的標準操作規(guī)程》），結果在控后方可將常規(guī)檢查的報告發(fā)出。10、注意事項⑴Rh血型系統(tǒng)的抗體多由獲得性免疫產生，血清中很少有天然抗體，故不需要做反定型。⑵Rh血型鑒定嚴格控制溫度與時間，因Rh抗原、抗體凝集反應凝塊比較脆弱，觀察反應結果時，應輕輕彈動試管，不可用力搖動。

附：試管法凝集強度判讀表輕搖使紅細胞扣脫落時凝集情況繼續(xù)振搖2秒后凝集情況結果整塊懸起，呈一個凝塊依然呈一個結實的凝塊4+呈一個或數(shù)個凝塊底液清澈底液保持清澈3+呈一個或數(shù)個凝塊底液清澈底液變渾濁2+呈數(shù)個凝塊底液渾濁肉眼不可見任何凝塊±有明顯游離細胞同時出現(xiàn)一個或數(shù)個凝塊凝塊數(shù)量增多不明顯底液渾濁混合視野（mf）紅細胞扣完全或部分消失，細胞上清液為透明紅色溶血（H）紅細胞從細胞扣細沙樣均勻滑落，即使出現(xiàn)缺口，但無肉眼可見凝塊出現(xiàn)，直至細胞扣完全消失

三、微柱凝膠卡式法鑒定ABO正反血型及RhD血型標準操作規(guī)程1、目的為規(guī)范輸血科ABO和RhD血型鑒定的技術操作，確保鑒定結果準確及臨床輸血安全有效，依據(jù)《輸血實驗室管理程序》相關條款的要求制定本規(guī)程。2、適用范圍本文件適用于本院輸血科ABO正反血型和RhD血型鑒定的操作過程的規(guī)范化管理。3、職責：輸血科技術人員負責本實驗的技術操作。4、試驗方法及原理4.1試驗方法：微柱凝膠免疫測試法4.2原理：本微量定型系統(tǒng)凝膠測試法基于生物化學凝膠過濾技術和離心技術及免疫化學抗原抗體特異反應。當抗原抗體反應，則紅細胞發(fā)生凝集形成紅細胞免疫復合物。離心時凝集塊不能通過凝膠間隙而留在凝膠上層，呈陽性反應，未凝集細胞離心時可通過凝膠間隙而沉積在凝膠管底部，呈陰性反應。ABO血型基礎血型抗原與抗血清反應與A1，B細胞反應抗-A抗-B抗-A,BA1BAA++++0++++0+/++++BB0+++++++++/++++0ABAB++++++++++++00OH000+/+++++/++++Rh血型Rh血型系統(tǒng)包括的主要血型抗原：C,c,E,e,D五種。DCe/dce=R1r(頻率32.68%英國),DCe=R1(頻率17.68%英國),dce=rr(頻率15.1%英國)DCe/DcE=R1R2(頻率11.8%英國),DcE=R2(頻率1.99%英國).與抗-D陽性反應的紅細胞為Rh陽性。5、樣本采集和處理：受血者血樣為EDTA-K2抗凝血。抽取受血者靜脈血1～2ml于專用管（紫色頭管）內，離心分離出血漿。將細胞配成0.8%的懸液備用。6、試劑：6.10.9%的生理鹽水；6.2長春博迅公司的血型定型試劑卡；6.3長春博迅公司的0.8%的A、B型試劑紅細胞懸液；7、儀器：7.1XTL-4.7細胞洗滌離心機；7.2長春博迅公司的FYQ型免疫微柱孵育器；7.3長春博迅公司的TD-3A型血型血清學專用離心機；8、操作程序：8.1工作準備：8.1.1將0.8%A、B型試劑紅細胞懸液室溫平衡。準備樣本，標記卡。8.1.20.8%樣本紅細胞制備：將8μl壓積紅細胞加到1ml生理鹽水中充分混勻。8.1.3將50μlA1、B標準反定細胞加入血型卡的第5-6管中，將待檢者血漿或血清50μl加到血型卡的第5-6管中。將0.8%樣本紅細胞分別加入到血型卡的第1-4管中，各50μl。8.1.4將血型卡放入TD-3A型血型血清學專用離心機離心5分鐘后，判斷結果，并作好記錄。9、結果判斷：－100%的紅細胞沉在微管的底部+/- 100%的紅細胞沉在微管的下端1/3之內1+ 80%的紅細胞沉在微管的下端2/3之內2+ 80%的紅細胞沉在微管的上端2/3之內3+ 80%的紅細胞沉在微管的上端1/3之內4+ 凝集的細胞全部處于微管的頂部d.p. 雙群Hemo. 溶血4+ 3+ 2+ 1+ +/- - 溶血雙群10、方法確認：10.1ABO系統(tǒng)抗體以外其他血型抗體可通過抗體篩查來檢查。用O型細胞可檢查血漿、血清樣本有無其他血型抗體。方法簡便，快速準確檢出臨床意義抗體。10.2結果清楚明確，凝集在上層為陽性，沉積在下層為陰性，血型配血結果清晰明了，結果易判定。10.3結果穩(wěn)定、可保存、可拍照、可存入計算機?？蓮蜋z。10.4操作簡明，凝膠卡中已有抗血清，加入樣本細胞即可定型。避免因忘記加抗血清引起的錯誤。10.5可檢出不完全抗體。避免了ABO以外血型抗體引起的輸血反應。同時本卡不存在抗人球被中和問題，避免了費時費力的洗滌過程和假陰性。10.6樣本用量少，有利于新生兒及少血液量樣本的檢測。10.7結果重現(xiàn)性好，血型配血操作可實現(xiàn)標準化，血型配血可自動化。11、質量控制:每批血型鑒定卡和試劑紅細胞使用前進行質量確認，具體執(zhí)行《輸血科試劑質控標準操作規(guī)程》，每天常規(guī)血型鑒定前先做室內質控（具體執(zhí)行《輸血科室內質量控制的標準操作規(guī)程》），結果在控后方可將常規(guī)檢查的報告發(fā)出。12、注意事項：12.1每日實驗前，先取出標準細胞和微柱凝膠卡，放置一段時間到室溫，以防冷凝集。12.2實驗前將卡離心3-4分鐘。必須標注血型卡。12.3血型卡封口已損壞時，管中干涸，或有氣泡時，卡不可使用。12.4紅細胞濃度要在

0.8%左右，不可太濃或太稀。12.5纖維蛋白可吸附部分紅細胞，應將血樣充分離心。12.6反定管先加樣，以便標準細胞與血清或血漿反應。先加細胞后加血漿。12.7正反定型對照，確定結果及A亞型。正定型結果若為弱陽性，應懷疑為ABO亞型，可重做完全測試，正反結果不符時，請設計實驗分析。12.8質控（ctl）為陽性時，請先用生理鹽水洗細胞，再做血型。12.9嚴格按標準程序操作可檢出弱抗原，血型亞型。12.10某些藥物，疾病可導致弱陽性及正反定型不符。12.11細菌及異常血清蛋白可影響結果。12.12禁用嚴重溶血標本，它會強烈干擾結果的判讀。嚴禁使用非抗凝血標本配制紅細胞懸液，以免出現(xiàn)假陽性結果。12.13被酶處理過的紅細胞會產生非特異性凝集，禁用被污染的標本和材料。12.14卡配套的專用離心機，以確保結果的準確。13、醫(yī)學解釋：13.1輸血已成為臨床上必不可少的治療手段。輸血必須輸入ABO同型血，否則輸入的紅細胞可能迅速被破壞，導致嚴重的溶血反應，常常威脅生命甚至造成死亡。所以在臨床工作中必須杜絕ABO血型不合的血液輸入人體，這以顯得十分重要。13.2腎、皮膚等器官或組織移植時，必須保證供體與受體之間ABO血型符合，否則將發(fā)生排斥反應，造成移植術失敗。13.3ABO血型不合所致的新生兒溶血病，可導致流產、死胎或因出生后搶救不及時而致死等。目前早期診斷仍依賴于ABO血型血清學檢查。13.4ABO血型在人群中的分布，可用作遺傳距離和聚類的分析，現(xiàn)以知道中國人氛圍北方、南方兩大群，前者以較高B基因，后者以較高O基因為特征。13.5其他：如親子鑒定，法醫(yī)學上對可疑血跡、精斑、毛發(fā)等ABO血型鑒定。四、鹽水法交叉配血試驗標準操作規(guī)程1、目的為規(guī)范輸血科交叉配血試驗的技術操作，確保鑒定結果準確及臨床輸血安全有效，依據(jù)《輸血實驗室管理程序》相關條款的要求制定本規(guī)程。2、適用范圍本文件適用于本院輸血科進行交叉配血的操作技術的規(guī)范化管理。3、職責：輸血科技術人員負責本實驗的技術操作。4、試驗方法及原理：4.1試驗方法：鹽水介質配血法4.2原理：天然類血型抗體與對應紅細胞抗原相遇，在室溫下的鹽水介質中出現(xiàn)凝集反應。通過離心，觀察受血者血清與供血者紅細胞以及受血者紅細胞與供血者清之間有無凝集現(xiàn)象，判斷供血、受血者之間有無ABO血型不合的情況。5、樣本采集及處理血樣本為血漿（EDTA-K2抗凝）。抽取受血者靜脈血3~4ml，3000轉/分離心2分鐘，分離出血漿，并將紅細胞配成2%鹽水懸液。將供血者血樣以同樣方法分離血清（血漿），并配制2%紅細胞懸液。配血所用受血者血樣必需是輸血前3天內的。6、操作步驟：6.1取潔凈小試管2支，1支標明受血者血清（PS）+供血者細胞（DC）；另1支標明供血清（DS）+受血者細胞（PC）。6.2按標記主側管放受血者血清1滴，加供血者紅細胞懸液1滴。次側管放供血者血清1滴，加受血者紅細胞懸液1滴，混勻，以1000r/min離心1min，輕輕側動試管，觀察結果。6.3觀察結果：先觀察試管上層液有無溶血，再斜持試管輕輕側動或輕輕彈動，觀察管底反應物有無凝集（必要時用顯微鏡觀察）。冬季室溫較低，應將試管保溫，以防冷凝集素引起的凝集反應。7、結果判斷：ABO同型配血，主側和次側均無溶血、無凝集表示無輸血禁忌，可以輸血。異型配血時，主測無凝集，次測凝集，無溶血，可以輸給少量。輸異型血時，如次測不凝集，不可以輸血，應重新復查血型或追查其原因。8、質量控制：每天常規(guī)實驗前先做室內質控（具體執(zhí)行《輸血科室內質量控制的標準操作規(guī)程》），結果在控后方可將常規(guī)檢查的報告發(fā)出。9、注意事項：9.1季室溫較低，應將試管保溫，以防冷凝集素引起的凝集反應。9.2復核血型：配血時應復核受血者和供血者血型，必要時要查對以前配血記錄。9.3同型之間交叉配血不合的處理：①與個別同型供血者不能配合，可另選同型供血者進行配血。②當受血者與多個同型獻血員配血不合時，首先要想到受血者血型鑒定有無差錯，應用標準的抗A、B、O型人的血清和標準A、B、O型紅細胞進行復查。其次，要注意是否為非特異性凝集，并進行確定。如果血型鑒定無誤，又不能證明假陽性，則應進行ABO亞型的鑒定，選擇同型的人進行輸血。如為免疫性抗體造成的配血不合，要用不規(guī)則抗體篩選紅細胞和（或）譜細胞檢查病人的血清，確定免疫抗體的性質，選擇不含與此抗體相應的抗原的紅細胞進行輸注。③當獻血者標本與多個同型受血者血標本配血不合時，主側不合應考慮獻血紅細胞的直接抗人球蛋白試驗是否為陽性，若次側不合應考慮獻血者血漿中是否含有紅細胞不規(guī)則抗體。附:蛋白凝集血樣的處理a原理：解決由于受檢者體內蛋白異常所造成的假凝集現(xiàn)象對血清學試驗的干擾b所需設備：臺式離心機、顯微鏡c材料或試劑：生理鹽水d方法與步驟：若在試管中加入2滴血清和1滴紅細胞，離心后在鹽水介質即出現(xiàn)的、無明顯反應格局的、對反應溫度（4℃、室溫、37℃）變化不敏感的凝集，結合鏡檢結果可判定為蛋白凝集?？稍诹硪桓嚬苤屑尤胂嗤?滴血清以及2滴生理鹽水，再加入1滴紅細胞，輕搖后離心觀察結果。e結果判定：凝集明顯減弱

五、凝聚胺交叉配血試驗標準操作規(guī)程1、目的為規(guī)范輸血科交叉配血試驗的技術操作，確保鑒定結果準確及臨床輸血安全有效，依據(jù)《輸血實驗室管理程序》相關條款的要求制定本規(guī)程。2、適用范圍本文件適用于本院輸血科進行交叉配血的操作技術的規(guī)范化管理。3、職責：輸血科技術人員負責本實驗的技術操作。4、試驗方法及原理4.1試驗方法：凝聚胺介質配血法4.2原理：針對不規(guī)則抗體的檢出及鑒定多采用紅細胞的凝聚反應試驗，而凝聚反應試驗的成效則與分布紅細胞表面之電荷以及抗體的親和性息息相關。凝聚胺法是利用低離子介質（LIM）來降低介質的離子強度，進而減少紅細胞之間距，以促進紅細胞和血清（血漿）中的抗體發(fā)生特異性結合；接著加入凝聚胺（polybrene）此種多價陽離子聚合物來中和紅細胞上的陰性電荷，使細胞間發(fā)生非特異性凝聚；最后加入重懸液，使之中和由凝聚胺所引起之非特異凝聚，倘若沒有凝聚發(fā)生，則判定為陰性；若有凝集，則得知存在特殊性之抗原抗體反應，則判定為陽性。5、樣本采集和處理同鹽水交叉配血試驗。6、試劑：貝索的試劑盒：低離子溶液（LIM）聚凝胺溶液（POLYBRENE）懸浮液（RESUSPENDING）7、操作步驟7.1取試管兩支,分別標明主次側管,主側管加入受血者血清兩滴,再加入2~5%獻血者紅細胞懸液1滴,次側管反之。7.2每支試管中加入0.7mlLIM液,混勻;再各加入2滴POLYBRENE液,混勻。7.33400轉離心10秒，棄上清液，不要瀝干，讓管底殘留約0.1ml液體。7.4輕搖試管，目測紅細胞有無凝集，若無凝集則必須重作。7.5加2滴resuspeneing液，輕搖試管混合并同時觀察結果。8、結果判斷立即目測并鏡檢觀察凝集狀態(tài)。如果30秒內凝集散開，代表是由polybrene引起的非特異性聚集，配血結果相合。若凝集不散開，則為紅細胞抗原抗體結合的特異性凝集，配血結果不相合。若反應可疑，可進一步用顯微鏡觀察。9、質量控制：每天常規(guī)實驗前先做室內質控（具體執(zhí)行《輸血科室內質量控制的標準操作規(guī)程》），結果在控后方可將常規(guī)檢查的報告發(fā)出。10、注意事項10.1可以用含EDTA之血漿代替血清使用。10.2若病人血清含肝素多，如洗腎患者，則應加入雙倍量的Polybrene液和肝素。10.3試劑使用前，應恢復室溫再做。10.4在冬天氣溫極低的情況下，操作交叉配血試驗，由于某些病人血清可能含有冷凝集素等因素而導致假陽性結果出現(xiàn)。若有懷疑，建議在最后滴加RESUSPENDING液時將試管立即置于370C水浴中,輕輕轉動試管混合,并在30秒內觀察結果。六、微柱凝膠卡式法交叉配血試驗標準操作規(guī)程1、目的為規(guī)范輸血科交叉配血試驗的技術操作，確保鑒定結果準確及臨床輸血安全有效，依據(jù)《輸血實驗室管理程序》相關條款的要求制定本規(guī)程。2、適用范圍本文件適用于本院輸血科進行交叉配血的操作技術的規(guī)范化管理。3、職責：輸血科技術人員負責本實驗的技術操作。4、試驗方法及原理4.1試驗方法：凝膠測試法4.2原理：本微量定型系統(tǒng)凝膠測試法基于生物化學凝膠過濾技術和離心技術及免疫化學抗原抗體特異反應。當抗原抗體反應，抗人球試驗時，血細胞發(fā)生凝集。離心時凝集塊不能通過凝膠間隙而留在凝膠上層，呈陽性反應，未凝集細胞離心時可通過凝膠間隙而沉積在凝膠管底部，呈陰性反應。5、樣本采集和處理受血者血樣為EDTA-K2抗凝血。抽取受血者靜脈血3~4ml于專用管（紫色頭管）內，分離出血漿。紅細胞配成0.8%的懸液，供血者血樣以同樣方法分離血漿，并配制0.8%紅細胞懸液。配血所用受血者血樣必需是輸血前3天內的。6、試劑：6.10.9%的生理鹽水；6.2長春博迅公司的IgG試劑卡7、儀器：7.1XTL-4.7細胞洗滌離心機；7.2DiaMed-IDIncubator37SⅠ溫育器；7.3DiaMed-IDCentrifuge12SⅡ8、操作程序：8.1工作準備：8.1.1生理鹽水室溫平衡。準備樣本。標記合血卡。8.1.20.8%-1%樣本紅細胞制備：加25μl樣本壓積紅細胞懸浮液于2ml低離子稀釋液中。8.1.3于1號管中（主側）加入50μl獻血者紅細胞（0.8%）。25μl受血者血漿或血清。8.1.42號管中（次側）加入50μl受血者紅細胞（0.8%）。25μl獻血者血漿或血清。8.1.537℃孵育15分鐘。8.1.6離心10分鐘。判斷結果，并作好記錄。9、結果判斷：1+至4+為抗人球配血不相容；—（0）為配血相容，可以輸注。10、醫(yī)學解釋：ABO交叉配血試驗是檢查供、受血者血液中是否含有不相合的抗原和抗體成分的試驗。其目的是發(fā)現(xiàn)ABO血型的不規(guī)則抗體；發(fā)現(xiàn)ABO血型以外的配血不和合，防止因錯誤定型所致的輸血事故。是安全輸血的根本保證。11、質量控制：每天常規(guī)實驗前先做室內質控（具體執(zhí)行《輸血科室內質量控制的標準操作規(guī)程》），結果在控后方可將常規(guī)檢查的報告發(fā)出。12、注意事項：12.1含抗體的新鮮血清，如補體尚有活性，遇相應紅細胞抗原，可發(fā)生溶血現(xiàn)象，其意義與凝集相同。12.2可以用含EDTA的血漿代替血清使用。12.3每日實驗前，先取出2號稀釋液及標準細胞，放置一段時間到室溫，以防冷凝集。12.4實驗前將卡離心3-4分鐘。必須標記合血卡。12.5合血卡封口已損壞時，管中干涸，或有氣泡時，卡不可使用。12.6必須用低離子稀釋液保證反應結果可靠，細胞濃度要在

0.8%左右，不可太濃或太稀。12.7纖維蛋白可吸附部分紅細胞，應將血樣離心。12.8液體應加在反應卡反應室中。12.9嚴格按標準程序操作可檢出弱抗原抗體反應，弱凝集。12.10某些藥物、疾病可導致血液不配合。12.11細菌及異常血清蛋白可影響結果。13、最常見的誤差來源：13.1自制分型血清抗體效價太低、親和力不強，造成定型不準。13.2患者纖維蛋白原升高或異常蛋白質血狀假凝集。誤認其脫下的膠狀硅酸鹽為串錢狀凝集。13.3病人輸入了高分子血漿代用品或靜脈注射造影劑等藥物集。13.4血清中存在不規(guī)則抗體，如A2和A2B型患者血清內有A1抗體，能凝集A1紅細胞。此外還有I抗體等。有些癌癥患者（如胃癌、胰腺癌等）血中大量的可溶性A或B物質可中和抗體血清的抗體，從而抑制反應，造成假的不凝集。13.5嬰兒尚未產生自己的新生兒不宜用血清作反向定型。13.6老年人血型抗體水平回下降，某些免疫缺陷的人或慢性淋巴細胞白血病、遺傳性無丙種球蛋白血癥以及有些用了免疫抑制劑的患可出現(xiàn)反向定型錯誤。13.7用近期內輸過血的患者血液做對照紅細胞，其紅細胞是多種紅細胞的混合物?；蚣t細胞懸浮于含高濃度蛋白的介質中，紅細胞都回自發(fā)地發(fā)生凝集。13.9有些人紅細胞膜有遺傳或獲得性異常，易發(fā)生多凝集（較罕見）。]13.10A或B的弱抗原易判斷為不凝集（假陰性），而由細菌引起的獲得性類B抗原易誤判為陽性。13.11由于患白血病或某些惡性腫瘤（如Hodgkin?。┦笰或B抗原變弱。嬰兒及老年人的紅細胞抗原較青壯年弱，在實驗室內保存過久的紅細胞及部分衰老的紅細胞抗原性也會減弱。13.12當用血清配制紅細胞懸液時，若血清中有高濃度血型物質則會中和分型血清中的抗體，而不再與紅細胞抗原起反應。13.13紅細胞被細菌污染。，2%B型紅細胞會定為O型，但血清中只有抗A抗體。13.15用了不潔的玻璃器皿或使用了嚴重污染的血清、紅細胞可出現(xiàn)假陽性。試管沾染了洗滌劑會造成假陰性。13.16紅細胞與血清的比例不當、過度離心或離心不足可引起假陽性或假陰性。13.17將出現(xiàn)的溶血現(xiàn)象（陽性）誤認為陰性結果。13.18溫度過高會造成假凝集力即下降。13.19弄錯標本、試劑、標簽，或出現(xiàn)記錄錯誤。

七、新生兒溶血?。℉DN）血型血清學檢查標準操作規(guī)程引起新生兒溶血病的原因：①母嬰紅細胞血型不合所引起的免疫性溶血，②其他原因：如葡萄糖-6-磷酸脫氫酶異常，感染引起的紅細胞獲得性缺陷（風疹、巨細胞病毒等）；以及生理性黃疸。紅細胞血型免疫引起的新生兒溶血病1﹑病因：母嬰之間紅細胞血型不合所引起的同種免疫作用：在妊娠期間由于反復的“經胎盤出血”，胎兒紅細胞進入母體，刺激母體內產生與胎兒紅細胞不配合的IgG性質的血型抗體，這些抗體可通過胎盤屏障回到胎兒體內，最終導致胎兒紅細胞溶血被破壞。2、影響ABO和Rh新生兒溶血病嚴重程度的因素胎兒抗原的發(fā)育：新生兒的Rh抗原已發(fā)育完全，ABO抗原直至出生其抗原發(fā)育仍不完全。孕婦體內IgG抗A、抗B、抗AB抗體以及Rh抗體的濃度。3、新生兒溶血病的檢測包括產前免疫血液學檢測和新生兒檢測兩部分。前者用以預測新生兒溶血病發(fā)病的可能性以及嚴重程度，后者直接確認新生兒是否患病，并對制定治療方案提供依據(jù)。產前檢查1ABO、Rh血型鑒定，確定ABO和Rh抗原是否配合母子ABO血型配合與否見表：妻子血型丈夫可能與之血型及夫婦配合與否子可能之血型及配合與否OABABA、B、AB不配合O配合AB、B不配合A、O配合AB、A不配合B、O配合A、B、AB、O配合A、B不配合O配合AB、B不配合A、O配合AB、A不配合B、O配合A、B、AB、O配合Rh陰性Rh陽性Rh陽性不配合Rh陰性配合Rh陽性、陰性均配合Rh陽性不配合Rh陰性配合Rh陽性、Rh陰性均配合2夫婦，母子ABO血型不配合時，孕產婦血清抗體檢查：（1）抗體篩選與鑒定：（2）抗體效價測定：受檢者血清倍量稀釋，加入相應抗原紅細胞，做抗球蛋白試驗，以肉眼判讀。第一管出現(xiàn)“±”凝集的稀釋度，為被檢血清中的抗體效價。（3）IgG抗A（B）效價測定：a.受檢者血清100ul與2-Me應用液100ul在小試管內等量混合，加塞置37℃15min,15min后取50ul處理后血清加相應3%（A或B）紅細胞鹽水懸液50ul驗證IgM破壞程度(處理后血清1管)，若破壞完全進行下一步試驗，若未破壞完全再繼續(xù)37℃孵育15min再試驗。b.2-Me處理后血清用鹽水倍量稀釋，每管50ul，稀釋到每管10管。c.每管加相應3%（A或B）紅細胞鹽水懸液50ul，以3400轉∕分1000g離心15秒后，肉眼觀察，記錄鹽水介質凝集效價。d.37℃水浴30min，三洗，用抗人球法檢測IgG抗體效價。結果判定：當抗球蛋白介質凝集效價≧鹽水介質凝集效價二管（4倍）時，可以認為抗球蛋白蛋白介質凝集效價即為IgG抗體效價。巰基試劑破壞IgM抗體試驗質控方法：巰基試劑破壞IgM抗體試驗。巰基試劑包括2-Me（2巰基乙醇）、DTT（二硫蘇糖醇）等。常見的應用包括破壞IgM抗A、抗B后，檢測IgG抗A、抗B抗體效價。本試劑中含IgM抗D和IgG抗D抗體等。使用本質控試劑可以控制IgM抗體破壞過程。確認IgM抗體得到一定程度的破壞，同時保證IgG抗體沒有受到明顯的破壞。使用本質控試劑的過程中，可能會發(fā)現(xiàn)雖然質控試驗完全通過，說明IgM抗體已經被充分破壞，但受檢者血清在鹽水介質中仍有較強反應。這是因為IgG抗A、IgG抗B、IgG抗M等抗體均能在鹽水介質中凝集相應紅細胞，因此鹽水介質出現(xiàn)凝集并不代表IgM型抗體沒有被充分破壞。這也是有必要使用本質控試劑的重要原因之一。使用方法（以檢測IgG抗A、抗B為例）180ul待測血清+20ul質控試劑+200ul巰基試劑應用液，混勻。封口防止揮發(fā)，37℃10min或室溫30min破壞IgM抗體。按正常程序進行倍比稀釋。另取100ul破壞后血清置一試管中作為“質控管”?！百|控管”中加入3-5%O型Rh陽性紅細胞懸液50ul，其它試管中按需要加入相應的3-5%A型或B型紅細胞懸液各50ul。37℃孵育30min。取“質控管”1000g、15s離心，肉眼觀察結果。如果“質控管”未出現(xiàn)凝集，則表示體系中IgM型抗體被破壞減少了至少6個滴度。所有試管三洗，加抗球蛋白試劑，1000g、15s離心，觀察結果。如果“質控管”中出現(xiàn)1+左右凝集，則表示體系中IgG型抗體未受到明顯破壞,IgG抗體效價結果可信。以上第4步中，“質控管”離心出現(xiàn)凝集，說明IgM抗體未能被充分破壞；以上第6步中，如果“質控管”在抗球蛋白試驗中未出現(xiàn)凝集，則表明IgG抗體也受到一定程度的破壞，效價結果偏低。（二）、ABO新生兒溶血病血清學檢查1、標本預處理（1）抽患兒不抗凝（或干粉抗凝）血樣5ml，離心分離出血清。（2）血塊用竹簽搗碎，使紅細胞游離后用生理鹽水洗滌3次，得壓積紅細胞至少1ml。（3）取少量洗滌后的壓積紅細胞配成1%紅細胞懸液2ml左右備用。2、血型鑒定取小試管3支，分別標記：“抗A”“抗B”“抗D”，并加入相應抗血清各1滴，然后在這三管中各加1滴患兒1%紅細胞懸液，以3400轉∕分1000g離心15秒，肉眼看結果。3、直接抗球蛋白試驗取小試管2支分別標記：“直抗”，“鹽水”。在“直抗”管中加1滴廣譜抗球蛋白試劑，然后在這二管中各加1滴患兒1%紅細胞懸液，以3400轉∕分1000g離心15秒，肉眼看結果。直抗結果＜1+按以下步驟繼續(xù)試驗，若直抗≥1+時參考（三）中Rh溶血病檢測方法做以下試驗。4、游離抗體檢查取小試管三支，分別標記“Ac”、“Bc”、“Oc”,在這三管中各加二滴患兒血清，分別加入相應A、B、O細胞各一滴，置37℃水浴30分鐘取出，用生理鹽水洗滌3次，然后在各管中加1滴抗球蛋白試劑，以3400轉／分1000g離心15秒，肉眼觀察結果。指示紅細胞意義AcBcOc+--游離的抗A抗體-+-游離的抗B抗體++-游離的抗A、抗B或抗C抗體-或+-或++存在游離的A、B、O血型以外抗體---無游離的抗體5、釋放試驗ABO新生兒溶血病使用熱放散。（如果直抗≥1+則可能是由ABO以外血型系統(tǒng)引起的新生兒溶血病，通常采用乙醚放散）在洗滌后的壓積紅細胞中加入等量的生理鹽水，置56℃水浴箱中加熱放散，輕搖1分鐘混勻細胞后，置水浴中9分鐘，迅速以3400轉∕分1000g離心1分鐘，取上清放散液分成三份于3個標有“A”、“B”、“O”小試管中，分別加入相應的酶處理的A、B、O細胞各1滴，置37℃水浴30分鐘，用生理鹽水洗滌3次，然后在各管中加1滴抗球蛋白試劑，以3400轉∕分1000g離心15秒，看結果。指示紅細胞意義AcBcOc+--釋放出抗A抗體-+-釋放出抗B抗體++-釋放出IgG抗AB抗體（可能包括抗A或抗B）-或+-或++釋放出A、B、O血型以外抗體---未釋放出抗體（三）、Rh新生兒溶血病血清學檢查（包括其它ABO以外的血型系統(tǒng)引起的新生兒溶血?。?、標本預處理同ABO新生兒溶血病2、血型鑒定同ABO新生兒溶血病3、直接抗球蛋白試驗同“ABO新生兒溶血病血清學檢查”4、游離抗體檢查（1）鹽水法取小試管10支，標上1-10號，在各管中加上二滴患兒血清，并分別加入1滴譜細胞。（2）抗球蛋白法記錄鹽水法結果后，混勻置37℃水浴30分鐘，用生理鹽水洗滌3次后，加1滴抗球蛋白試劑，以3400轉∕分1000g離心15秒，肉眼看結果。（3）排除ABO溶血如果需要，取特定Rh血型的ABO紅細胞與放散液反應，檢測IgG抗A或抗B的含量。5、釋放試驗：（乙醚或酸釋放抗體法）（1）乙醚放散取經洗滌3次的受檢者壓積紅細胞1份加1份生理鹽水，2份乙醚，劇烈震蕩1-2分鐘，然后3400轉∕分1000g離心。離心后分成3層，上層是乙醚，中層是紅細胞基質，下層是具有抗體的釋放液，呈深紅色。用吸管吸出底層釋放液，置37℃水浴10分鐘，除盡乙醚，再離心1次，取上清液即為釋放液。酸放散三洗并壓積紅細胞（1ml左右），加入等量的酸，輕輕混勻，3400r/min離心一分鐘，取上清液于另一干凈試管中，向上清液中滴加堿試劑，直到變色為止（淺藍色）。離心去沉淀（久保田離心機HLA檔）。（2）抗體檢測預留200ul左右釋放液以備其它試驗，其余平均分配到10支試管中與1組譜紅細胞作間接抗球蛋白試驗，以鑒定抗體。（3）排除ABO溶血如果需要，取特定Rh血型的ABO紅細胞與放散液反應，檢測IgG抗A或抗B的含量。結論試驗項目ABO-HDN可疑ABO-HDN非ABO-HDN直接抗球蛋白試驗+-+--+-游離抗體檢查++--+--釋放試驗++++---附表1新生兒溶血病檢查記錄單附表2新生兒溶血病檢查報告單附表3

附表1南陽市中心醫(yī)院輸血科產前血型血清學試驗報告單孕婦資料姓名年齡歲血型孕、產史孕周數(shù)配偶血型實驗結果不規(guī)則抗體篩選：IgG抗體效價:檢驗者：復核者：收到日期：年月日報告日期：年月日備注：本報告只對所檢測的標本負責，如有疑問請在三日內與我實驗室聯(lián)系，電話：1

附表2

附表3南陽市中心醫(yī)院新生兒血清學檢查報告姓名性別年齡住院號送檢科室床號收到日期標本條形碼血型檢測結果ABO血型Rh（D）其它血型紅細胞直接抗球蛋白試驗結果多特異性抗球蛋白試驗：抗IgG試驗：抗C3試驗：游離和放散試驗結果游離試驗：放散試驗：其它試驗結果印象和建議檢測者核對者報告（檢測，核對，簽發(fā)）日期注：本報告只對所檢測的標本負責，如有疑問請在三日內與我實驗室聯(lián)系。如無特別說明，報告的檢測、核對、簽發(fā)日期相同。咨詢電話：5、61660031

八、紅細胞不規(guī)則抗體篩選標準操作規(guī)程1、目的為規(guī)范輸血科紅細胞規(guī)則抗體篩選的技術操作，確保檢測結果準確及臨床輸血安全有效，依據(jù)《輸血實驗室管理程序》相關條款的要求制定本規(guī)程。2、適用范圍本文件適用于本院輸血科紅細胞規(guī)則抗體篩選的操作技術的規(guī)范化管理。3、職責：輸血科技術人員負責本實驗的技術操作。4、試驗方法及原理：不規(guī)則抗體是指不符合ABO血型系統(tǒng)Landsteiner法則的血型抗體，多數(shù)為免疫性抗體（IG性質），輸血前受血者體內若發(fā)現(xiàn)此類抗體，應輸入無對應抗原的紅細胞，以避免抗原抗體反應，引起溶血性輸血反應。若產婦體內發(fā)現(xiàn)此類抗體，則應確定其效價并觀察其效價變化，以避免其引起新生兒溶血病的發(fā)生。目前不規(guī)則抗體篩查是采用已知抗原表型的O型試劑紅細胞，在不同溫度下、采用不同介質篩查被檢血清中有無有臨床意義的不規(guī)則抗體。常用的方法有鹽水凝集試驗、聚凝胺試驗、抗人球蛋白試驗、酶試驗等。本科根據(jù)本科實際情況采用鹽水凝集試驗、聚凝胺試驗、抗人球蛋白試驗篩查不規(guī)則抗體。其反應原理同配血試驗。5、樣本采集和處理取受檢者不抗凝血3ml（若不知受檢者血型，應同時抽EDTA-K2抗凝血1ml）及時送檢。6、實驗程序：6.1鹽水介質法篩選紅細胞不規(guī)則抗體6.1.1試劑：生理鹽水，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號不規(guī)則抗體篩選細胞（0.5-0.8%的濃度）6.1.2儀器：XTL-4.7細胞洗滌離心機，電熱恒溫水浴箱。6.1.3操作程序：取小試管4支，分別加入受檢者血清2滴（100μL），然后在前三管中分別加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號篩選細胞試劑各1滴，在第四管中加入3%的自身對照紅細胞1滴，混勻后，根據(jù)需要（4℃，室溫，37℃）放置數(shù)分鐘，用血型專用離心機以1000rpm離心1分鐘，輕輕側動試管，觀察結果。6.1.4結果判斷：凝集強度觀察同鹽水配血試驗，自身對照及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ管均無凝集者表明未檢出紅細胞不規(guī)則抗體；四管均凝集表明受檢者血清（血漿）中含自身抗體或同時伴有同種免疫性紅細胞不規(guī)則抗體；若自身對照無凝集而Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ管中至少有1管凝集出現(xiàn)表明受檢者血清（血漿）中含有同種免疫性紅細胞不規(guī)則抗體。本實驗的鹽水法若出現(xiàn)凝集表示受檢者體內有IgM型的不規(guī)則抗體存在。6.2凝聚胺法篩選紅細胞不規(guī)則抗體6.2.1試劑：生理鹽水；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號不規(guī)則抗體篩選細胞（0.5-0.8%的濃度）；貝索的試劑盒：低離子溶液（LIM），聚凝胺溶液（POLYBRENE），懸浮液（RESUSPENDING）。6.2.2儀器：XTL-4.7細胞洗滌離心機；普通離心機。6.2.3操作步驟：鹽水介質法篩查紅細胞不規(guī)則抗體結束后可轉做凝聚胺試驗，具體方法如凝聚胺配血法。6.2.4結果判斷：凝集強度觀察同凝聚胺配血試驗，自身對照及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ管均無凝集者表明未檢出紅細胞不規(guī)則抗體；四管均凝集表明受檢者血清（血漿）中含IgG自身抗體或同時伴有IgG同種免疫性紅細胞不規(guī)則抗體；若自身對照無凝集而Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ管中至少有1管凝集出現(xiàn)表明受檢者血清（血漿）中含有IgG型的同種免疫性紅細胞不規(guī)則抗體。6.3微柱凝膠抗人球蛋白法篩選紅細胞不規(guī)則抗體6.3.1試劑：生理鹽水，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號不規(guī)則抗體篩選細胞（0.5-0.8%的濃度），博迅的不規(guī)則抗體篩查卡。6.3.2儀器：XTL-4.7細胞洗滌離心機，博研微術凝膠卡專用孵育器及離心機。6.3.3操作程序：微柱凝膠抗人球蛋白法篩選紅細胞不規(guī)則抗體的具體方法如微術凝膠配血法，具體操作如下：1）將準備好的檢測卡做好標記；2）將0.5-0.8%Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ篩檢紅細胞各50μl分別加入對應的微管中;3）將待檢者血清各50μl分別加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ微管中；4）37℃孵育15分鐘；5）離心5分鐘（900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘）。6.3.4結果判斷：凝集強度觀察同微柱凝膠配血試驗，結果判斷同凝聚胺法。7、質量控制：7.1細胞不規(guī)則抗體篩查試驗時至少應選擇1種可檢出IgG抗體的方法。7.2所有試劑都應在有效期內使用，每批使用前應對試劑進行質量控制，確保質量符合要求。7.3試驗同步設置必要的陰陽性及自身對照。8、注意事項：8.1多數(shù)IgG類紅細胞不規(guī)則抗體比IgM類紅細胞不規(guī)則抗體更有臨床意義，鹽水介質法通常只能檢出IgM類不規(guī)則抗體，不宜單獨采用鹽水法檢測不規(guī)則抗體，可結合凝聚胺或微柱凝膠抗人球蛋白法檢測。8.2理論上認為，凝聚胺法除不能檢出抗-K外，其他紅細胞血型抗體均可檢出，但實際工作中許多紅細胞血型弱抗體（包括IgM和IgG類）不能被凝聚胺法檢出，對部分IgM類紅細胞血型抗體的檢測，凝聚胺法甚至沒有鹽水法敏感。8.3微柱凝膠抗人球蛋白法對IgM和IgG類紅細胞不規(guī)則抗體檢測均敏感，且操作簡便，可進行大批量檢測，目前已可實現(xiàn)自動化檢測，但此方法檢測不規(guī)則抗體不能鑒別抗體是否有臨床意義，且試劑體格較昂貴。8.4條件允許時應采用鹽水法和抗人球蛋白法或凝聚胺法聯(lián)合檢測紅細胞不規(guī)則抗體，以減少不規(guī)則抗體的漏檢。九、孕婦血清中紅細胞血型抗體效價測定標準操作規(guī)程1、目的為規(guī)范輸血科紅細胞血型抗體效價測定的技術操作，確保檢測結果準確，依據(jù)《輸血實驗室管理程序》相關條款的要求制定本規(guī)程。2、適用范圍本文件適用于本院輸血科測定IgG抗-A(B)抗體效價，用以評估胎母血型不合妊娠時發(fā)生胎兒及新生兒免疫溶血性疾?。℉DN）的風險程度及其他臨床需要。3、職責：輸血科技術人員負責本實驗的技術操作。4、原理將受檢血清（如檢測IgG類紅細胞血型抗體，先用2-巰基乙醇處理）經連續(xù)倍稀釋后與表達檢測目標抗體對應抗原的試劑紅細胞反應，以受檢血清凝集試劑紅細胞的最高稀釋倍數(shù)的倒數(shù)作為受檢血清中檢測目標抗體的效價。5、試劑：生理鹽水，0.2mol/L的2-巰基乙醇（2-Me）應用液，博迅的微柱凝膠抗人球蛋白卡，0.8%的A和B型標準試劑紅細胞。6、儀器：XTL-4.7細胞洗滌離心機，博研微術凝膠卡專用孵育器及離心機，電熱恒溫水浴箱。7、操作步驟與方法：7.1準備試劑：觀察微柱凝膠卡的外觀，如有干膠、雜質、氣泡不可使用，之后將卡放置室溫（18－25℃）平衡，再用專用離心機離心5分鐘。吸取2-Me15μl,加生理鹽水至1ml為0.2M2-Me應用液。7.2血清/血漿標本的制備：取血清50ul和150ul的生理鹽水作1：4的稀釋后再加入0.2M2-Me應用液200ul混勻，密封試管口，37℃水浴60分鐘。滅活母體血清中IgM時，必須將試管口密封，并經常搖晃試管，以保證滅活效果。同時用單克隆抗A或抗B作為對照，用來確認2-Me是否有效滅活IgM抗體。7.3取7只干凈試管，做好標記；在第1管中加入處理后的血清200ul和200ul生理鹽水，混勻（為1:16稀釋）；第2-7管中依次加200ul的生理鹽水和前一管中的血清/血漿200ul，做倍比稀釋。7.4將抗人球蛋白卡標記好，從第7管開始到第2管依次將倍比稀釋后的相應50ul血清分別加入標記孔中。在所有孔中加入50ul與父親同型的A型或B型0.8%紅細胞懸液，測定孕婦血清中的抗A（B）IgG血型抗體。7.5將加樣后的試劑卡，置37℃孵育器中孵育15分鐘后用專用離心機離心5分鐘(900rpm2分鐘，1500rpm3分鐘),取出，判定結果。8、結果判定：8.1產生1+凝集的最高稀釋度，其倒數(shù)即為效價。8.2陽性結果：紅細胞凝集塊位于凝膠表面或凝膠中。8.3陰性結果：紅細胞完全沉降到膠底部，在凝膠管底部形成紅細胞扣。9、注意事項：9.1.為保證滅活效果，避免母體效價值偏高，滅活前應將母體血清稀釋至用父親同型紅細胞檢測凝集強度為4+的最高稀釋倍數(shù)。9.2.滅活后的母體血清用父親同型紅細胞檢測（即反定型試驗）無凝集，證明IgM滅活比較完全，如出現(xiàn)凝集，說明滅活不完全，需要重新滅活?；蛘唧w內有IgG完全抗體，此種情況多見于O型血母親。9.3.滅活時間不能超過60分鐘，滅活時間過長或2-Me濃度過高可使血清蛋白變性呈膠凍狀。9.4.為保證倍比稀釋的準確度，從高濃度向低濃度倍比稀釋時要求每次移液后更換新的吸頭。9.5.父親紅細胞標本也可用與其同型的A型或B型紅細胞代替。9.6.每日試驗前，先取出微柱凝膠卡放置至室溫。9.7.檢測卡應放在18-25℃儲存，如若長期放在4℃冰箱，建議每1-2個月取出，用專用離心機離心一次，以防止干膠或產生氣泡。十、冷自身抗體的鑒定冷自身抗體RBC的處理（1）、含冷自身抗體的RBC加37℃或56℃溫鹽水反復洗滌，直至自身細胞不凝。（2）、ABO正定型。2、冷自身抗體血清的處理