高二生物同步講義：基因工程的基本操作程序（學(xué)生版）

《第3章基因工程》第2節(jié)基因工程的基本操作程序必會(huì)知識(shí)考點(diǎn)梳理拓展延伸易錯(cuò)警示必會(huì)知識(shí)一目的基因的篩選與獲取1．目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因，如與生物抗逆性、優(yōu)良品質(zhì)、生產(chǎn)藥物、毒物降解和工業(yè)用酶等相關(guān)的基因。2．獲取目的基因的方法(1)從基因文庫中獲取目的基因①基因文庫：將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導(dǎo)入受體菌的群體中儲(chǔ)存，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同的基因，稱為基因文庫。②基因文庫的種類：基因組文庫：包含一種生物所有的基因；部分基因文庫：只包含一種生物的一部分基因，如cDNA文庫。cDNA文庫與基因組文庫的區(qū)別文庫類型cDNA文庫基因組文庫文庫大小小大基因中啟動(dòng)子(具有啟動(dòng)作用的DNA片段)無有基因中內(nèi)含子(位于編碼蛋白質(zhì)序列內(nèi)的非編碼DNA片段)無有基因數(shù)量某種生物的部分基因某種生物的全部基因物種間的基因交流可以部分基因可以③從基因文庫中獲取目的基因的方法：用DNA探針從基因文庫中準(zhǔn)確提取目的基因。根據(jù)目的基因的核苷酸序列制成一段與之互補(bǔ)的核苷酸短鏈，并用同位素標(biāo)記，即成為探針。基因文庫中變性的DNA片段，如果有一個(gè)DNA片段能和探針片段互補(bǔ)結(jié)合成雜交鏈，這一片段即含有所需的目的基因。(2)利用PCR獲得和擴(kuò)增目的基因①含義：PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫。它是一項(xiàng)根據(jù)DNA半保留復(fù)制的原理，在體外提供參與DNA復(fù)制的各種組分與反應(yīng)條件，對目的基因的核苷酸序列進(jìn)行大量復(fù)制的技術(shù)。需要具備的條件有模板、原料、引物、酶、控制溫度等。②原理：利用DNA半保留復(fù)制原理，在體外將目的基因的核苷酸序列不斷地加以復(fù)制，使其數(shù)量成指數(shù)形式擴(kuò)增(約為2n，其中為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù))。③前提：有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物。④PCR的反應(yīng)及其作用條件作用在一定的緩沖液(含Mg2+)中進(jìn)行提供相對穩(wěn)定的pH環(huán)境；真核細(xì)胞和細(xì)菌的DNA聚合酶都需要Mg2+激活4種脫氧核苷酸作為合成DNA子鏈的原料DNA母鏈作為DNA復(fù)制的模板Taq酶(耐高溫)催化合成DNA子鏈引物使Taq酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸溫度控制90℃以上變性：使DNA片段雙鏈解開50℃左右復(fù)性：使解開的兩條DNA單鏈分別與相應(yīng)的引物結(jié)合(退火)72℃左右延伸：Taq酶催化子鏈合成⑤擴(kuò)增的過程：第一步：將反應(yīng)體系(包括雙鏈模板、引物、Taq酶、4種脫氧核苷酸以及酶促反應(yīng)所需的離子等)加熱至90℃以上，使雙鏈DNA兩條鏈之間的氫鍵打開，變成單鏈，分別作為聚合反應(yīng)的模板。第二步：將反應(yīng)體系降溫至50℃左右，使引物分別與模板DNA鏈3'端的相應(yīng)序列互補(bǔ)配對，這個(gè)過程稱為復(fù)性。第三步：將反應(yīng)體系升溫至72℃左右，在Taq酶的催化作用下，將與模板DNA互補(bǔ)的單個(gè)核苷酸加到引物所提供的3'—OH上，使DNA鏈延伸，產(chǎn)生一條與模板鏈互補(bǔ)的單鏈DNA。如圖所示：上述三步反應(yīng)完成后，一個(gè)DNA片段就變成了兩個(gè)DNA片段，隨著重復(fù)次數(shù)的增多，DNA的數(shù)量就以約2n的倍數(shù)增加。PCR的反應(yīng)過程都是在PCR擴(kuò)增儀(PCR儀)中完成的。完成后，常采用瓊脂糖凝膠電泳來鑒定PCR產(chǎn)物。必會(huì)知識(shí)二基因表達(dá)載體的構(gòu)建1．基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心。其中心內(nèi)容是使目的基因與運(yùn)載體結(jié)合，形成重組運(yùn)載體，最后通過重組運(yùn)載體將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞。2．構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。3．基因表達(dá)載體的組成及其作用(1)目的基因：外源DNA分子中有遺傳效應(yīng)的片段。(2)啟動(dòng)子：位于基因的上游，緊挨轉(zhuǎn)錄的起始位點(diǎn)，是一段有特殊序列結(jié)構(gòu)的DNA片段，是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終表達(dá)出人類需要的蛋白質(zhì)。(3)終止子：位于基因的下游，也是一段有特殊序列結(jié)構(gòu)的DNA片段，是轉(zhuǎn)錄結(jié)束點(diǎn)。(4)標(biāo)記基因的作用：為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來。常用的標(biāo)記基因是抗生素抗性基因。3．基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程(1)用一定的限制酶切割載體，使其出現(xiàn)一個(gè)黏性末端(或平末端)的切口。(2)用限制酶切割目的基因，產(chǎn)生與載體一樣的黏性末端(或平末端)。(3)將切下的目的基因片段與載體混合，再加入適量DNA連接酶，使載體與目的基因結(jié)合成重組DNA分子(如圖)。必會(huì)知識(shí)三將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞1．轉(zhuǎn)化：目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程，稱為轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化的實(shí)質(zhì)是將目的基因整合到受體細(xì)胞的基因組中，可能存在于細(xì)胞質(zhì)中，也可能整合到染色體DNA上?；蚬こ讨谐Ｓ玫氖荏w細(xì)胞有大腸桿菌、枯草桿菌、農(nóng)桿菌、酵母菌和動(dòng)植物細(xì)胞。2．將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法：根據(jù)受體和載體的類型不同，所采用的導(dǎo)入方法也不同，見下表。細(xì)胞種類植物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞微生物細(xì)胞常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法花粉管通道法顯微注射技術(shù)Ca2+處理法(CaCl2)受體細(xì)胞受精卵或體細(xì)胞受精卵常用原核細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程農(nóng)桿菌能在自然條件下侵染雙子葉植物和裸子植物，對大多數(shù)單子葉植物沒有侵染能力。將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌導(dǎo)入植物細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞的染色體DNA上→表達(dá)單子葉植物中常用的一種基因轉(zhuǎn)化方法，但是成本較高。操作過程：將包裹在金屬顆粒表面的表達(dá)載體DNA打入受體細(xì)胞中，使目的基因與其整合并表達(dá)在植物受粉后，花粉形成的花粉管還未愈合前，剪去柱頭；然后滴加DNA(含目的基因)至花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道進(jìn)入胚囊將含有目的基因的表達(dá)載體提純→取卵(受精卵)→顯微注射→將注射了目的基因的受精卵經(jīng)早期胚胎培養(yǎng)后移入母體子宮或輸卵管→獲得具有新性狀的動(dòng)物Ca2+處理細(xì)胞感受態(tài)細(xì)胞→將重組表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合→感受態(tài)細(xì)胞吸收外源DNA分子必會(huì)知識(shí)四目的基因的檢測與鑒定1．檢測目的：目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，是否穩(wěn)定維持和表達(dá)其遺傳特性，只有通過檢測與鑒定才能知道。2．檢測對象(1)檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因。(2)檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA。(3)檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)。3．檢測方法類型檢測內(nèi)容方法結(jié)果顯示分子水平檢測目的基因是否插到受體細(xì)胞的DNA上從轉(zhuǎn)基因生物中提取DNA，用標(biāo)記的目的基因作探針，進(jìn)行DNA分子雜交如果顯示出雜交帶，表明日的基因已插入染色體DNA上目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA從轉(zhuǎn)基因生物中提取mRNA，進(jìn)行分子雜交(DNA和mRNA之間雜交)如果顯示出雜交帶，表明轉(zhuǎn)錄成功目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原——抗體雜交如有雜交帶出現(xiàn)，表明目的基因已形成蛋白質(zhì)產(chǎn)品個(gè)體水平鑒定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的功能活性是否相同轉(zhuǎn)基因生物的抗性接種實(shí)驗(yàn)：比較基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的功能活性是否賦予了預(yù)期抗性或蛋白質(zhì)活性必會(huì)知識(shí)五DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定1．實(shí)驗(yàn)原理(1)DNA片段的擴(kuò)增①利用PCR可以在體外進(jìn)行DNA片段的擴(kuò)增。②PCR利用了DNA的熱變性原理，通過調(diào)節(jié)溫度來控制DNA雙鏈的解聚與結(jié)合。③PCR儀實(shí)質(zhì)上就是一臺(tái)能夠自動(dòng)調(diào)控溫度的儀器。一次PCR一般要經(jīng)歷30次循環(huán)。(2)DNA片段的電泳鑒定①DNA分子具有可解離的基團(tuán)，在一定的pH下，這些基團(tuán)可以帶上正電荷或負(fù)電荷。在電場的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與它所帶電荷相反的電極移動(dòng)，這個(gè)過程就是電泳。②PCR的產(chǎn)物一般通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定。在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)。凝膠中的DNA分子通過染色，可以在波長為300nm的紫外燈下被檢測出來。2．材料用具(1)儀器：PCR儀、微量離心管、微量移液器、一次性吸液槍頭、電泳裝置(包括電泳儀、電泳槽等)(2)用具：4種脫氧核苷酸的等量混合液、2種引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA、擴(kuò)增緩沖液、無菌水、電泳緩沖液、凝膠載樣緩沖液、瓊脂糖和核酸染料等。3．方法步驟(1)DNA片段的擴(kuò)增(2)DNA片段的電泳鑒定必備技能典例精講模型秒殺巧思妙解必備技能一獲取目的基因的方法[例1](2022春·陜西西安·高二?？计谀?下列不屬于獲取目的基因的方法是(

)A．利用mRNA反轉(zhuǎn)錄形成 B．從基因組文庫中提取C．從受體細(xì)胞中提取 D．利用化學(xué)方法人工合成必備技能二PCR技術(shù)的原理、過程及條件[例2](2023·全國·高三專題練習(xí))利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因，其原理與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制類似(如下圖所示)。圖中引物為單鏈DNA片段，它是子鏈合成延伸的基礎(chǔ)。下列敘述錯(cuò)誤的是(

)A．用PCR方法擴(kuò)增目的基因時(shí)不必知道基因的全部序列B．設(shè)計(jì)引物時(shí)需要避免引物之間形成堿基互補(bǔ)配對而造成引物自連C．復(fù)性溫度過高可能導(dǎo)致PCR反應(yīng)得不到任何擴(kuò)增產(chǎn)物D．第四輪循環(huán)產(chǎn)物中同時(shí)含有引物A和引物B的DNA片段所占的比例為15/16必備技能三基因表達(dá)載體的構(gòu)建[例3](2023·浙江·統(tǒng)考一模)PCR擴(kuò)增得到的P基因經(jīng)酶切連接插入載體后，與編碼FLAG的序列形成一個(gè)融合基因，如圖甲所示，下列相關(guān)敘述正確的是(

)A．其中“ATGTGCA”為P基因編碼鏈起始序列。將該重組載體導(dǎo)入細(xì)胞后，融合基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA序列出現(xiàn)了錯(cuò)誤B．據(jù)圖甲分析其中翻譯出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正確，但P基因?qū)?yīng)的氨基酸序列與P可能不同C．運(yùn)用限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ切割啟動(dòng)子可以識(shí)別P基因的序列D．通過PCR技術(shù)一定程度上可以解決融合基因出現(xiàn)排斥的反應(yīng)必備技能四目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法[例4](2022秋·江蘇淮安·高三校聯(lián)考期中)在基因工程中，常采用花粉管通道法和土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞。下圖為花粉管通道法的一般原理示意圖。相關(guān)敘述正確的是(

)A．外源DNA進(jìn)入胚囊最終獲得的種子均含有目的基因B．植物生長各個(gè)時(shí)期均可通過花粉管通道導(dǎo)入外源DNAC．花粉管通道法最大的優(yōu)點(diǎn)是無需植物組培，技術(shù)簡單D．含外源DNA的種子發(fā)育成植株后均具有相應(yīng)性狀必備技能五目的基因的檢測與表達(dá)[例5](2022春·陜西渭南·高二統(tǒng)考期末)下列選項(xiàng)中能說明目的基因已成功導(dǎo)入受體細(xì)胞中并表達(dá)的是(

)A．在棉花二倍體細(xì)胞中檢測到細(xì)菌的抗蟲基因B．在大腸桿菌中檢測到人胰島素基因及其mRNAC．在山羊乳腺細(xì)胞中檢測到人生長激素DNA序列D．在酵母菌細(xì)胞中提取到人干擾素必備技能六基因工程操作步驟的綜合考查[例6](2022·浙江·模擬預(yù)測)如圖是培育抗除草劑玉米的技術(shù)路線圖，含有內(nèi)含子的報(bào)告基因只能在真核生物中正確表達(dá)，其產(chǎn)物能催化無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色。轉(zhuǎn)化過程中愈傷組織表面常殘留農(nóng)桿菌，會(huì)導(dǎo)致未轉(zhuǎn)化的愈傷組織可能在含除草劑的培養(yǎng)基中生長。下列相關(guān)敘述正確的是(

)A．過程①中除草劑抗性基因插入T－DNA中，導(dǎo)致T－DNA片段失活B．過程②用Ca2＋處理使農(nóng)桿菌細(xì)胞壁的通透性改變，成為感受態(tài)細(xì)胞C．檢測是否轉(zhuǎn)化成功，過程③應(yīng)在培養(yǎng)基中加入除草劑和物質(zhì)KD．轉(zhuǎn)化過程中未轉(zhuǎn)化的愈傷組織可能在含除草劑的培養(yǎng)基中生長是因?yàn)榛蚱票厮⒑妙}基礎(chǔ)演練能力提升巔峰突破1．(2022秋·安徽·高三校聯(lián)考階段練習(xí))體外條件下，DNA復(fù)制必須有引物，引物是一小段單鏈DNA或RNA，引物的3?端為結(jié)合模板DNA的關(guān)鍵堿基，5?端無嚴(yán)格限制，可添加某些序列。下列有關(guān)敘述正確的是(

)A．引物制備的前提是已知目的基因的全部脫氧核苷酸序列B．引物可以作為DNA復(fù)制開始時(shí)RNA聚合酶的結(jié)合位點(diǎn)C．進(jìn)行體外DNA復(fù)制時(shí)，引物設(shè)計(jì)要有兩種且不能互補(bǔ)配對D．PCR時(shí)，dNTP作為擴(kuò)增的原料會(huì)依次連接到引物的5?端2．(2022·浙江·統(tǒng)考模擬預(yù)測)反向PCR流程如圖所示，該技術(shù)可利用一段已知DNA序列設(shè)計(jì)合理的引物，擴(kuò)增已知序列兩端的未知序列。圖中已知序列一條鏈的堿基排列順序?yàn)椤?’-AACTATGCGCTCATGA-……-GCAATGCGTAGCCTCT-3'”。下列敘述錯(cuò)誤的是(

)A．I酶切：用一種限制酶切割DNA，以使兩端未知序列形成相同的黏性末端B．II連接：使用DNA連接酶催化相鄰核苷酸之間形成磷酸二酯鍵C．設(shè)計(jì)的兩種引物分別是“5'-AACTATGCGCTCATGA–3’”和“5'-AGAGGCTACGCATTGC-3’”D．對PCR產(chǎn)物測序，經(jīng)分析得到了片段F的完整序列。該DNA單鏈序列可能為“5'-AATTCCAGT-……-CTGAATT-3'”3．(2022春·遼寧丹東·高二統(tǒng)考期末)重疊延伸PCR技術(shù)是采用具有互補(bǔ)末端的引物，使PCR產(chǎn)物形成重疊鏈，從而在隨后的擴(kuò)增反應(yīng)中通過重疊鏈的延伸，獲得想要的目的基因。某科研團(tuán)隊(duì)運(yùn)用重疊延伸PCR技術(shù)在水蛭素基因的特定位點(diǎn)引入特定突變，以實(shí)現(xiàn)基因的定點(diǎn)突變，原理見圖。下列說法錯(cuò)誤的是(

)A．過程②需要含Mg2+的緩沖液、DNA模板、引物、四種脫氧核苷酸、耐高溫的DNA聚合酶等B．若引物1、引物2組成的反應(yīng)系統(tǒng)和引物3、引物4組成的反應(yīng)系統(tǒng)中均進(jìn)行一次DNA分子的復(fù)制后，一共會(huì)產(chǎn)生2種DNA分子C．經(jīng)過過程④獲得的雜交DNA有2種，其中只有一種可以經(jīng)過過程⑤獲得目的基因D．過程⑤使用耐高溫的DNA聚合酶延伸，不需要引物4．(2022春·河北石家莊·高二統(tǒng)考期末)RT-PCR是將RNA逆轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的PCR相結(jié)合的技術(shù)，可利用此技術(shù)獲取目的基因，具體過程如圖所示。以下說法錯(cuò)誤的是(

)A．設(shè)計(jì)擴(kuò)增目的基因的引物時(shí)需已知一段目的基因序列B．GC含量高的引物在與模板鏈結(jié)合時(shí)，需要更高的溫度C．過程Ⅰ需要加入緩沖液、原料、耐高溫的DNA聚合酶和引物A等D．過程Ⅱ擬對單鏈cDNA進(jìn)行n次循環(huán)的擴(kuò)增，理論上需要2n-1個(gè)引物B5．(2020秋·天津·高二校聯(lián)考期末)如圖是利用基因工程培育抗蟲植物的示意圖，以下相關(guān)敘述，正確的是(

)A．用Ti質(zhì)粒作為基因的載體，目的基因的插入位置應(yīng)該在T-DNA片段內(nèi)，①、②的操作中使用了限制酶和DNA聚合酶B．應(yīng)用DNA探針技術(shù)，可檢測④細(xì)胞中目的基因是否表達(dá)C．將重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌中時(shí)，可以用CaCl2處理細(xì)菌以增加細(xì)胞壁的通透性D．用含有重組Ti質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌去感染正在組織培養(yǎng)中的單子葉植物細(xì)胞，再將被感染后的細(xì)胞培養(yǎng)成植株，就可能獲得具有抗旱基因的植物6．(2022春·山東德州·高二德州市第一中學(xué)?？贾軠y)下圖表示運(yùn)用影印培養(yǎng)法(使在一系列培養(yǎng)皿的相同位置上能出現(xiàn)相同菌落的一種接種培養(yǎng)方法)，檢測重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入大腸桿菌。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(

)A．導(dǎo)入大腸桿菌的重組質(zhì)粒中有特殊的標(biāo)記基因B．影印培養(yǎng)法使用的是固體培養(yǎng)基進(jìn)行微生物培養(yǎng)C．培養(yǎng)基A和B中的1菌落的類型并不相同D．培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B的化學(xué)成分不完全相同7．(2022秋·黑龍江大慶·高三鐵人中學(xué)?？奸_學(xué)考試)我國科學(xué)家將外源生長激素基因?qū)膈庺~受精卵，培育出轉(zhuǎn)基因鯉魚，與對照組相比，生長速度加快?？茖W(xué)家介紹，外源基因?qū)胧荏w細(xì)胞后，必須整合到受體細(xì)胞的DNA上才能發(fā)揮作用。下列有關(guān)說法錯(cuò)誤的是(

)A．導(dǎo)入的是DNA分子的一段脫氧核苷酸序列B．將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞的方法是顯微注射法C．未整合到受體細(xì)胞DNA上的生長激素基因也不會(huì)被DNA酶水解D．外源基因能整合到其它生物的DNA上是因?yàn)樗鼈兊慕Y(jié)構(gòu)與組成相類似8．(2022秋·浙江紹興·高三校考階段練習(xí))某轉(zhuǎn)基因植物培育過程如下圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是(

)A．重組Ti質(zhì)粒的濃度和質(zhì)量會(huì)影響其導(dǎo)入農(nóng)桿菌的效率B．與機(jī)械法相比，酶解法獲得單細(xì)胞的效率更高C．農(nóng)桿菌的濃度和狀態(tài)會(huì)影響目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的效率D．前置篩選和后置篩選所依據(jù)的指標(biāo)是相同的9．(2022秋·浙江杭州·高三浙江省杭州第二中學(xué)?？茧A段練習(xí))常見的探針有核酸探針和蛋白質(zhì)探針。兩種探針結(jié)構(gòu)和功能均不相同，故而應(yīng)用在不同的檢測中。而兩種探針的制備過程中所應(yīng)用的技術(shù)也不相同。請回答下列問題。Ⅰ、蛋白質(zhì)探針的制備。(1)蛋白質(zhì)探針常用_____________技術(shù)來制備。該技術(shù)的基本流程是將_____________注射給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，獲取的脾細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合后，用HAT培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)對象。該篩選過程得到的雜交瘤細(xì)胞是產(chǎn)生_____________的雜交瘤細(xì)胞，接下來要經(jīng)過_____________檢測來獲得產(chǎn)生特定蛋白的雜交瘤細(xì)胞。最終將純化得到的特定蛋白結(jié)合上熒光或放射性標(biāo)記，即為蛋白質(zhì)探針。(2)上述HAT培養(yǎng)基是_____________(填“液體”或“固體”)培養(yǎng)基。融合成雜交瘤細(xì)胞后再檢測尋找產(chǎn)生特定目標(biāo)蛋白的雜交瘤細(xì)胞，而不直接在脾細(xì)胞中尋找產(chǎn)生特定蛋白的B淋巴細(xì)胞的原因是_____________。Ⅱ、不對稱PCR是利用不等量的一對引物來產(chǎn)生大量單鏈DNA(ssDNA)的方法。該方法制備的ssDNA結(jié)合上熒光或放射性標(biāo)記，即為核酸探針。(3)不對稱PCR中加入的一對引物中含量較少的被稱為限制性引物，含量較多的被稱為非限制性引物。兩者的比例通常為1:100。PCR反應(yīng)的最初的若干次循環(huán)中，其擴(kuò)增產(chǎn)物主要是雙鏈DNA(dsDNA)，但當(dāng)限制性引物消耗完后，就會(huì)產(chǎn)生大量的ssDNA。據(jù)下圖可知，最后大量獲得的ssDN