GB 4789.4-2024 食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗

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華

人

民

共

和

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國

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標

準學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載4GB4789.—20244食品安全國家標準食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗國

家

市

場

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家

市

場

監(jiān)

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管

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總

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發(fā)

布-

- -

-學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載4GB4789.—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載4前 言本標準代替

GB4789.食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗》。本標準與

GB4789.—2016相比,主要變化如下:———修改了設備和材料、培養(yǎng)基和試劑;———修改了檢驗程序和操作步驟;———修改了附錄

A和附錄B。學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載4GB4789.—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載4食品安全國家標準食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗1

范圍S本標準規(guī)定了食品中沙門氏菌(almonela)的檢驗方法。S本標準適用于食品中沙門氏菌的檢驗。2

設備和材料除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設備外,其他設備和材料如下。 212. 冰箱:

℃~8 21 3 4 42342. 恒溫培養(yǎng)箱:6℃±1℃,恒溫裝置:2℃±1℃、 3 4 42342. 均質(zhì)器。2. 振蕩器。 152. 天平:感量 156 27892.

無菌錐形瓶:容量500mL、506 27892. 無菌量筒:容量50mL。2. 無菌均質(zhì)杯、無菌均質(zhì)袋。2. 無菌廣口瓶:容量500mL。 1 1 11 912.0

無菌吸管:

mL(具0.1mL刻度)、0mL(具0.mL刻度)或微 1 1 11 912.1

無菌培養(yǎng)皿:直徑60mm、0mm。 1 1 11 312.2

無菌試管:0mm×75mm、5mm×150mm、8mm×180mm

1 1 11 312.3

無菌小玻管:

mm×50mm。 1 111112.4

無菌接種環(huán):0μL(直徑約3mm)、

μL以及 1 111112.5

pH

計或精密pH

試紙。2.6

微生物生化鑒定系統(tǒng)。2.7

生物安全柜。3

培養(yǎng)基和試劑 B 113. 緩沖蛋白胨水(PW): B 11 22 33 B 44 553. 四硫磺酸鈉 22 33 B 44 553. 氯化鎂孔雀綠大豆胨(RVS)增菌液:見

A.。3. 亞硫酸鉍(S)瓊脂:見

A.。3.

HE瓊脂:見

A.。 66 778 83. 木糖賴氨酸脫氧膽鹽(XLD)瓊 66 778 83. 三糖鐵(TSI)瓊脂:見

A.。3.

營養(yǎng)瓊脂(NA):見

A.。1學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載4GB4789.—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載4 993. 半固體瓊脂:見

99 11 2 1p1 11 11 113.0

蛋白 11 2 1p1 11 11 113.1

尿素瓊脂(H7.):見

A.1。3.2

氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基:見

A.2。3.3

賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基:見

A.3。3.4

糖發(fā)酵培養(yǎng)基:見

A.4。 11 111113.5

鄰硝基酚β-D半乳糖苷(ONPG)培養(yǎng)基: 11 111113.6

丙二酸鈉培養(yǎng)基:見

A.6。3.7

沙門氏菌顯色培養(yǎng)基。3.8

沙門氏菌診斷血清。3.9

生化鑒定試劑盒。4

檢驗程序沙門氏菌檢驗程序見圖1。2學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載4GB4789.—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載4圖1

沙門氏菌檢驗程序5

操作步驟15. 預增菌1無菌操作取25g(mL)樣品,置于盛有225mLBPW

的無菌均質(zhì)杯中,以8000r/min~10000r/min3分離瓊脂平板菌落特征BS瓊脂菌落為黑色有金屬光澤、棕褐色或灰色,菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色;有些菌株形成灰綠色的菌落,周圍培養(yǎng)基不變色XLD瓊脂菌落呈粉紅色,帶或不帶黑色中心,有些菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心,或呈現(xiàn)全部黑色的菌落;有些菌株為黃色菌落,帶或不帶黑色中心HE瓊脂藍綠色或藍色,多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色;有些菌株為黃色,中心黑色或幾乎全黑色沙門氏菌顯色培養(yǎng)基符合相應產(chǎn)品說明書的描述學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載4GB4789.—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載4/ 8 2均質(zhì)1min~2min,或置于盛有225mLBPW

的無菌均質(zhì)袋內(nèi),用拍擊式均質(zhì)器拍打1/ 8 2對于液態(tài)樣品,也可置于盛有225mLBPW

的無菌錐形瓶或其他合適容器中振蕩混勻。如需調(diào)節(jié)pH時,用1molLNaOH

或

HCl調(diào)pH

至6.±0.。無菌操作將樣品轉(zhuǎn)至500mL錐形瓶或其他合適容器內(nèi)(如均質(zhì)杯本身具有無孔蓋或使用均質(zhì)袋時,可不轉(zhuǎn)移樣品),置于36℃±1℃培養(yǎng)8h~18h。對于乳粉,無菌操作稱取25g樣品,緩緩傾倒在廣口瓶或均質(zhì)袋內(nèi)225mLBPW

的液體表面,勿調(diào)節(jié)pH,也暫不混勻,室溫靜置60min±5min后再混勻,置于36℃±1℃培養(yǎng)16h~18h。冷凍樣品如需解凍,取樣前在40℃~45℃的水浴中解凍不超過15min,或在2℃~8℃冰箱緩慢2化凍不超過18h。25. 選擇性增菌1輕輕搖動預增菌的培養(yǎng)物,移取0.mL轉(zhuǎn)種于10mLRVS中,混勻后于42℃±1℃培養(yǎng)18h~124h。同時,另取1mL轉(zhuǎn)種于10mLTTB中后混勻,低背景菌的樣品(如深加工的預包裝食品等)置于36℃±1℃培養(yǎng)18h~24h,高背景菌的樣品(如生鮮禽肉等)置于42℃±1℃培養(yǎng)18h~24h。如有需要,可將預增菌的培養(yǎng)物在2℃~8℃冰箱保存不超過72h,再進行選擇性增菌。35. 分離3B振蕩混勻選擇性增菌的培養(yǎng)物后,用直徑3mm

的接種環(huán)取每種選擇性增菌的培養(yǎng)物各一環(huán),分別B劃線接種于一個BS瓊脂平板和一個

XLD瓊脂平板(也可使用

HE瓊脂平板、沙門氏菌顯色培養(yǎng)基平板或其他合適的分離瓊脂平板),于36℃±1℃分別培養(yǎng)40h~48h(S瓊脂平板)或18h~24h(XLD瓊脂平板、HE瓊脂平板、沙門氏菌顯色培養(yǎng)基平板),觀察各個平板上生長的菌落,是否符合表1的菌落特征。如有需要,可將選擇性增菌的培養(yǎng)物在2℃~8℃冰箱保存不超過72h,再進行分離。表1

不同分離瓊脂平板上沙門氏菌的菌落特征45. 生表1

不同分離瓊脂平板上沙門氏菌的菌落特征4415.. 挑取4個以上典型或可疑菌落進行生化試驗,這些菌落宜分別來自不同選擇性增菌液的不同41離瓊脂;也可先選其中一個典型或可疑菌落進行試驗,若鑒定為非沙門氏菌,再取余下菌落進行鑒定。將典型或可疑菌落接種三糖鐵瓊脂,先在斜面劃線,再于底層穿刺;同時接種賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂(或其他合適的非選擇性固體培養(yǎng)基)平板,于36℃±1℃培養(yǎng)18h~24h。三糖鐵和賴氨酸脫羧酶試驗的結果及初步判斷見表2。將已挑菌落的分離瓊脂平板于2℃~8℃保存,以備必要時復查。425.. 初步判斷為非沙門氏菌者,直接報告結果。對疑似沙門氏菌者,從營養(yǎng)瓊脂平板上挑取其純424三糖鐵賴氨酸脫羧酶初步判斷斜面底層產(chǎn)氣硫化氫KA+(-)+(-)+疑似沙門氏菌KA+(-)+(-)-疑似沙門氏菌AA+(-)+(-)+疑似沙門氏菌AA+/-+/--非沙門氏菌KK+/-+/-+/-非沙門氏菌注:K:產(chǎn)堿;A:產(chǎn)酸;+:陽性;-:陰性;+(-):多數(shù)陽性,少數(shù)陰性;+/-:陽性或陰性。尿素(pH7.2)氰化鉀賴氨酸脫羧酶判斷結果---甲型副傷寒沙門氏菌(要求血清學鑒定結果)-++沙門氏菌Ⅳ或Ⅴ(符合該亞種生化特性并要求血清學鑒定結果)+-+沙門氏菌個別變體(要求血清學鑒定結果)注:+:陽性;-:陰性。序號硫化氫靛基質(zhì)尿素(pH7.2)氰化鉀賴氨酸脫羧酶A1+---+A2++--+A3----+/-注:+:陽性;-:陰性;+/-:陽性或陰性。準ｏｍ標．ｃ下ｗｗ兔ｗ．ｂｚｆ學兔ｘｗ載4GB4789.—2024準ｏｍ標．ｃ下ｗｗ兔ｗ．ｂｚｆ學兔ｘｗ載4 2p養(yǎng)物接種蛋白胨水(供做靛基質(zhì)試驗)、尿素瓊脂(H7.)、氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基,也可在接種三糖鐵 2p脂和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基的同時,接種以上3種生化試驗培養(yǎng)基,于36℃±1℃培養(yǎng)18h~24h,按表3判定結果。表2

三糖鐵和賴氨酸脫羧酶試驗結果及初步判斷表3

生化試驗結果鑒別表(一)4215... 符合表3中

A1者,為沙門氏菌典型表2

三糖鐵和賴氨酸脫羧酶試驗結果及初步判斷表3

生化試驗結果鑒別表(一)4215... 符合表3中

A1者,為沙門氏菌典型的生化反應,進行血清學鑒定后報告結果。尿素、氰化鉀不符合

A1,判斷為非沙門氏菌并報告結果。表4

生化試驗結果鑒別表(二)4225... 生化試驗結果符合表3表4

生化試驗結果鑒別表(二)4225... 生化試驗結果符合表3中

A2者,補做甘露醇和山梨醇試驗,沙門氏菌(靛基質(zhì)陽性變體)的甘4235... 生化試驗結果符合表3中

A3者,補做

ONPG試驗。沙門氏菌的

ONPG試驗結果為陰性423賴氨酸脫羧酶試驗結果為陽性,但甲型副傷寒沙門氏菌的賴氨酸脫羧酶試驗結果為陰性。生化試驗結果符合沙門氏菌者,進行血清學鑒定。4245... 必要時,按表5進行沙門氏菌種和亞種的生化鑒424435.. 如選擇生化鑒定試劑盒或微生物生化鑒定系統(tǒng),用分離平板上典型或可疑菌落的純培養(yǎng)物,43者根據(jù)表2初步判斷為疑似沙門氏菌的純培養(yǎng)物,按生化鑒定試劑盒或微生物生化鑒定系統(tǒng)的操作說5種腸道沙門氏菌邦戈爾沙門菌亞種腸道亞種薩拉姆亞種亞利桑那亞種雙相亞利桑那亞種豪頓亞種印度亞種項目ⅠⅡⅢaⅢbⅣⅥⅤ衛(wèi)矛醇++---d+ONPG(2h)--++-d+丙二酸鹽-+++---明膠酶-+++++-山梨醇+++++-+氰化鉀----+-+L(+)-酒石酸鹽+------半乳糖醛酸-+-++++γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶++-++++β-葡糖醛酸苷酶dd-+-d-黏液酸+++-(70%)-++水楊苷----+--乳糖---(75%)+(75%)-d-O1噬菌體裂解++-+-+d注:+:陽性;-:陰性;d:不定。準下學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標載4GB4789.—2024準下學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標載4明進行鑒定。55. 血清學鑒定5515.. 培養(yǎng)物自凝性檢512 5一般采用瓊脂含量為1.%~1.%的純培養(yǎng)物進行玻片凝集試驗。首先進行自凝性檢查,在潔2 5的玻片上滴加一滴生理鹽水,取適量待測菌培養(yǎng)物與之混合,成為均一性的渾濁懸液,將玻片輕輕搖動30s~60s,在黑色背景下觀察反應(必要時用放大鏡觀察),若出現(xiàn)可見的菌體凝集,即認為有自凝性,反之無自凝性。對無自凝的培養(yǎng)物參照下面方法進行血清學鑒定。表5

沙門氏菌種和亞種的生化鑒定52 O5.. 多價菌體抗原(

)鑒定在玻片上劃出兩個約1cm×2cm

的區(qū)域,挑取待測表5

沙門氏菌種和亞種的生化鑒定52 O5.. 多價菌體抗原(

)鑒定部,在其中一個區(qū)域下部加一滴多價菌體(O)血清,在另一區(qū)域下部加入一滴生理鹽水,作為對照。再用無菌的接種環(huán)或針將兩個區(qū)域內(nèi)的待測菌培養(yǎng)物,分別與血清和生理鹽水研成乳狀液。將玻片傾斜搖動混合1min,并對著黑暗背景進行觀察,與對照相比,出現(xiàn)可見的菌體凝集者為陽性反應。O

血清不凝集時,將菌株接種在瓊脂含量較高(如2%~3%)的培養(yǎng)基上培養(yǎng)后再鑒定,如果是由于

Vi抗原的存在而阻止了O血清的凝集反應時,可挑取待測菌培養(yǎng)物在1mL生理鹽水中制成濃菌液,在沸水中水浴20min~30min,冷卻后再進行鑒定。注:不同廠商沙門氏菌診斷血清的組成、鑒定操作及結果判斷,可能存在差異。使用商品化的沙門氏菌診斷血清進行血清學鑒定時,應遵循其產(chǎn)品說明。6O群第1相第2相ABBC1C2D(不產(chǎn)氣的)D(產(chǎn)氣的)E1E4E4ag,f,si,b,dk,v,r,cb,d,rdg,m,p,qh,vg,s,ti無無25,z152,5無無6,w,x無無表6表6

A~F各O群常見菌型

H抗原表7兔ｗｗｗ．ｂ兔ｚｆ學ｘｗ．ｃｏｍ標準下載4GB4789.—2024兔ｗｗｗ．ｂ兔ｚｆ學ｘｗ．ｃｏｍ標準下載453 H5.. 多價鞭毛抗原(

53 H2按5..的操作,將多價菌體(O)血清換成多價鞭毛(H)血清,進行多價鞭毛抗原(H)鑒定。H

抗2原發(fā)育不良時,將菌株接種在半固體瓊脂平板的中央,待菌落蔓延生長時,在其邊緣部分取菌鑒定;或?qū)⒕杲臃N在裝有半固體瓊脂的小玻管培養(yǎng)1代~2代,自遠端取菌再進行鑒定。6615. 血清學分型(選做項目6615..

O抗原的鑒定用

A~F多價

O血清做玻片凝集試驗,同時用生理鹽水做對照。在生理鹽水中自凝者為粗糙型菌株,不能分型。11被A~F多價

O血清凝集者,依次用

O4、O3,和

O11因子血清做凝集試驗。根11據(jù)試驗結果,判定O群。被O3,0血清凝集的菌株,再用單因子血清做凝集試驗,判定E1、4各亞群。根據(jù)O單因子血清的鑒定結果,確定每個O抗原成分。沒有O單因子血清的,用兩個

O復合因子血清進行鑒定。不被

A~F多價

O血清凝集者,先用9種多價

O血清鑒定,如有其中一種血清凝集,則用這種血清所包括的

O群血清逐一進行鑒定,以確定

O群。每種多價

O血清所包括的

O群血清如下:B

C

D

E

F 11

1

23

3

34

44

45

55B

C

D

E

F 11

1

23

3

34

44

45

55

56

6

66O多價2:13、6、7、8、1群O多價3:28、0、5、8、9群O多價4:40、1、2、3群O多價5:44、5、7、8群O多價6:50、1、2、3群O多價7:55、6、7、8群O多價8:59、0、1、2群O多價9:63、5、6、7群625..

H抗原的鑒62屬于

A~F各

O群的常見菌型,依次用表6所述

H

因子血清鑒定第1相和第2相的

H

抗原。學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載4GB4789.—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載4不常見的菌型,先用8種多價

H

血清鑒定,如有其中一種或兩種血清凝集,則再用這一種或兩種血清所包括的各種

H

因子血清逐一進行鑒定,以確定第1相和第2相的

H

抗原。8種多價

H

血清所包括的

H

因子血清如下:bcdiH

多價1:a、bcdihenxenz

fgg sgpugpgq tgzryzz

lvl henxenz

fgg sgpugpgq tgzryzz

lvl lz

lz

lz2151617zH

多價3:k、、、、10、,、,w、,13、,28、,40H

多價4:1,、,、,、,、64

z

z

z

z

z

z

z

z

zz

z

zz

z4

z

z

z

z

z

z

z

z

zz

z

zz

z

zH

多價6:z39、41、42、44H

多價7:z52、53、54、55z

z

z

zH

多價8:z56、57z

z

z

z每個

H

抗原成分的最后確定均應根據(jù)

H

單因子血清的鑒定結果,沒有

H

單因子血清的要用兩個H

復合因子血清進行鑒定。檢出第1相

H

抗原而未檢出第2相

H

抗原的或檢出第2相

H

抗原而未檢出第1相

H

抗原的,要用以下位相變異的方法鑒定其另一相。單相菌不必做位相變異鑒定。6215... 簡易平621將半固體瓊脂平板烘干表面水分,挑取已知相的

H

因子血清1環(huán),滴在半固體平板表面,正置平板片刻待血清吸收,在滴加血清部位的中央點種待測菌株,翻轉(zhuǎn)平板置于36℃±1℃培養(yǎng)后,在形成蔓延生長的菌苔邊緣取菌鑒定。6225... 小玻6221將1mL~2mL半固體瓊脂熔化后冷卻至48

℃左右,加入已知相的

H

因子血清0.5mL~10.mL,混勻后裝入3mm×50mm

兩端開口的小玻管內(nèi)。待瓊脂凝固后,用接種針挑取待測菌,接種于小玻管一端的瓊脂內(nèi)。將小玻管平放在平皿內(nèi),置于36℃±1℃培養(yǎng),并采取保濕措施以防瓊脂中水分蒸發(fā)而干縮。每天觀察結果,待另一相細菌解離后,從小玻管另一端挑取細菌進行鑒定。培養(yǎng)基內(nèi)血清的濃度應有適當?shù)谋壤?過高時細菌不能生長,過低時同一相細菌的動力不能抑制。一般按原血清26231∶(00~800)的量加26235... 小套管法1在裝有大約10mL半固體瓊脂培養(yǎng)基的試管中,插入3mm×50mm

兩端開口的小玻管(下端開1口要留一個缺口,不要平齊),小玻管的上端應高出于培養(yǎng)基的表面,21

℃高壓滅菌15min后備用。臨用時加熱熔化,并冷卻至48℃左右,挑取已知相的

H

因子血清1環(huán),加入小玻管中的培養(yǎng)基內(nèi),略加攪動使其混勻。待瓊脂凝固后,在小玻管中的半固體表層內(nèi)接種待測菌,于36℃±1℃培養(yǎng),每天觀察結果,待另一相細菌解離后,從小玻管外的半固體表面取菌鑒定,或?qū)⑺〉木D(zhuǎn)種1%瓊脂斜面,于6336℃±1℃培養(yǎng)后再進行鑒定635..

Vi抗原的鑒定用

Vi因子血清進行鑒定。已知具有

Vi抗原的菌型有:傷寒沙門氏菌,丙型副傷寒沙門氏菌,都柏林沙門氏菌。8學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載4GB4789.—2024學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標準下載4645.. 血清型的判64根據(jù)血清學分型鑒定的結果,按照附錄B或有關沙門氏菌屬抗原表判定血清型。6

結果與報告綜合以上生化試驗和血清學鑒定的結果,報告25g(mL)樣品中檢出或未檢出沙門氏菌。9．ｃｘｗｚｆｗｗ．ｂ兔ｗ學兔ｏｍ標準下載4GB4789.—2024．ｃｘｗｚｆｗｗ．ｂ兔ｗ學兔ｏｍ標準下載4附 錄

A培養(yǎng)基和試劑 B111A. 緩沖蛋白胨水 B111A.. 成分005蛋白胨 10.g005氯化鈉 5.g磷酸氫二鈉(含12個結晶水) 9.g磷酸二氫鉀 1.g蒸餾水 1000mL12A.. 制12將各成分加入蒸餾水(或其他符合要求的實驗用水,下同)中,攪勻后加熱溶解,必要時調(diào)節(jié)pH,2 2121℃高壓滅菌15min。滅菌后的培養(yǎng)基在25℃的pH

為7.2 2 T221A. 四硫磺酸鹽煌綠增菌液 T221A.. 基礎液05750蛋白胨 9.g05750牛肉浸粉 4.g氯化鈉 2.g碳酸鈣 40.g硫代硫酸鈉(含5個結晶水) 50.g牛膽鹽 5.g蒸餾水 1000mL將各成分加入蒸餾水中,攪勻后加熱溶解。煮沸,無須高壓滅菌。煮沸后的培養(yǎng)基在25℃的pH6 222為6 222A.. 碘溶液0碘化鉀 25.g0碘 20.g蒸餾水 100mL將碘化鉀溶解于少量的蒸餾水中,再加入碘,振搖至碘全部溶解。加蒸餾水至100mL,轉(zhuǎn)入棕色瓶內(nèi),塞緊瓶塞冷藏貯存。23A.. 煌綠溶235煌綠 0.g5蒸餾水 100mL將煌綠在蒸餾水中溶解后,存放在冷暗處不少于1d。24A.. 制24基礎液 1000mL10ｘｗ．ｃ學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｏｍ標準下載4GB4789.—2024ｘｗ．ｃ學兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｏｍ標準下載40煌綠溶液 2.mL0碘溶液 20.mL使用的當天,在冷卻后的基礎液中以無菌操作加入煌綠溶液搖勻,加入碘溶液,再搖勻,分裝到無菌試管中。加入煌綠和碘液的培養(yǎng)基當天使用,且不能再次加熱。3 (31A. 氯化鎂孔雀綠大豆胨

RVS)3 (31A.. 成分52216大豆蛋白胨 4.g52216氯化鈉 7.g磷酸二氫鉀 1.6g磷酸氫二鉀 0.8g氯化鎂(含6個結晶水) 28.g孔雀綠 0.36g蒸餾水 1000mL32A.. 制321將各成分加入蒸餾水中,攪勻后加熱溶解,必要時調(diào)節(jié)pH,定量分裝于試管中,15

℃高壓滅菌12 215min。滅菌后的培養(yǎng)基在25℃的pH

為5.2 2 B441A. 亞硫酸鉍(S B441A.. 成分0030000蛋白胨 10.g0030000牛肉浸粉 5.g葡萄糖 5.g硫酸亞鐵 0.g磷酸氫二鈉 4.g煌綠 0.25g檸檬酸鉍銨 2.g亞硫酸鈉 6.g瓊脂 18.g蒸餾水 1000mL42A.. 制42將各成分加入蒸餾水中,攪勻后加熱溶解,必要時調(diào)節(jié)pH。煮沸,勿過度加熱,勿高壓滅菌。冷卻5 2至48℃±2℃傾注平皿,煮沸后的培養(yǎng)基在25℃的pH

為7.5 2注:本培養(yǎng)基應于臨用前一天制備并傾注平皿,在室溫暗處保存,第二天使用。制備完成的培養(yǎng)基保存時間超過48h會降低其選擇性。551A.

HE瓊551A.. 成分00蛋白胨 12.g00牛肉浸粉 3.g

11．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ兔ｗ學兔ｏｍ標準下載4GB4789.—2024．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ兔ｗ學兔ｏｍ標準下載4000088010乳糖 12.g000088010蔗糖 12.g水楊苷 2.g膽鹽 20.g氯化鈉 5.g硫代硫酸鈉 6.g檸檬酸鐵銨 0.g脫氧膽酸鈉 2.g酸性品紅 0.g溴麝香草酚藍 0.64g瓊脂 18.g蒸餾水 1000mL52A.. 制52將各成分加入蒸餾水中,攪勻后加熱溶解,必要時調(diào)節(jié)pH。煮沸,勿過度加熱,勿高壓滅菌。冷卻5 2至48℃±2℃傾注平皿,煮沸后的培養(yǎng)基在25℃的pH

為7.5 2 X661A. 木糖賴氨酸脫氧膽鹽(LD X661A.. 成分0075558800酵母浸粉 3.g0075558800L-賴氨酸 5.g木糖 3.5g乳糖 7.g蔗糖 7.g脫氧膽酸鈉 2.g檸檬酸鐵銨 0.g硫代硫酸鈉 6.g氯化鈉 5.g酚紅 0.8g瓊脂 15.g蒸餾水 1000mL62A.. 制62將各成分加入蒸餾水中,攪勻后加熱溶解,必要時調(diào)節(jié)pH。煮沸,勿過度加熱,勿高壓滅菌。冷卻4 2至48℃±2℃傾注平皿,煮沸后的培養(yǎng)基在25℃的pH

為7.4 2 T771A. 三糖鐵(SI T771A.. 成分0蛋白胨 20.g0牛肉浸粉 5.g乳糖 10.g蔗糖 10.g12．ｃｗｗ．ｂｚｆｘｗ兔ｗ學兔ｏｍ標準下載4GB4789.—2024．ｃｗｗ．ｂｚｆｘｗ兔ｗ學兔ｏｍ標準下載400220葡萄糖 1.g00220酚紅 0.25g氯化鈉 5.g硫酸亞鐵銨(含6個結晶水) 0.g硫代硫酸鈉 0.g瓊脂 12.g蒸餾水 1000mL72A.. 制7215 4 2將各成分加入蒸餾水中,攪勻后加熱溶解,必要時調(diào)節(jié)pH。定量分裝于試管中,15℃高壓15 4 215min。滅菌后制成斜面,底層深度不小于2.cm。滅菌后的培養(yǎng)基在25℃的pH

為7.±0.。8 (81A. 營養(yǎng)瓊脂8 (81A.. 成分00蛋白胨 10.g00牛肉浸粉 3.g氯化鈉 5.g瓊脂 15g蒸餾水 1000mL82A.. 制821將各成分加入蒸餾水中,攪勻后加熱溶解,必要時調(diào)節(jié)pH,21℃高壓滅菌15min。滅菌后的培養(yǎng)13 2基在25℃的pH

為7.3 2991A. 半固體瓊991A.. 成分000 5蛋白胨 000 5牛肉浸粉 3.g氯化鈉 5.g瓊脂 3.g~6.g蒸餾水 1000mL92A.. 制921將各成分加入蒸餾水中,攪勻后加熱溶解,必要時調(diào)節(jié)pH,21℃高壓滅菌15冷卻至48℃±14 22℃傾注平皿,或分裝小玻管。滅菌后的培養(yǎng)基在25℃的pH為7.4 211

11

11A.0

蛋白胨水、11

11

11A.0. 蛋白胨水A.0.. 成分0蛋白胨 10.g0氯化鈉 5.g

13．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ學兔兔ｗｏｍ標準下載4GB4789.—2024．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ學兔兔ｗｏｍ標準下載40DL-色氨酸 1.g0蒸餾水 1000mL1

12A.0..1

121將各成分加入蒸餾水中,攪勻后加熱溶解,必要時調(diào)節(jié)pH。分裝小試管,21℃高壓滅菌15min。14 2滅菌后的培養(yǎng)基在25℃的pH

為7.4 21

2A.0. 靛基質(zhì)1

2 01

21 01

22A.0.. 柯凡克試劑:將5.g對二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中, 01

21 01

22A.0.. 歐-波試劑:將1.g對二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇內(nèi),然后緩慢加入濃鹽酸20mL。1

3A.0. 試驗1

33 55 p1 21

1挑取少量培養(yǎng)物接種在蛋白胨水中,6℃±1℃培養(yǎng)24h~48h。加入柯凡克試3 55 p1 21

1搖試管,試劑層呈深紅色者為陽性?；蛉W-波試劑約0.mL,沿管壁流下,覆蓋于培養(yǎng)液表面,液面接觸處呈玫瑰紅色者為陽性。A.1

尿素瓊脂(H7.)A.1. 成分0000蛋白胨 1.g0000氯化鈉 5.g葡萄糖 1.g磷酸二氫鉀 2.g酚紅 0.12g瓊脂 20.g蒸餾水 900mL20%尿素溶液 100mL1

2A.1. 1

2除尿素外,將其他成分加入900mL蒸餾水中,攪勻后加熱溶解,必要時調(diào)節(jié)pH。121℃高壓滅菌15min。冷卻至48℃±2℃,加入100mL經(jīng)過濾除菌的20%尿素溶液,分裝于無菌試管內(nèi)制成斜面。2 2滅菌后的培養(yǎng)基在25℃的pH

為7.2 21

3A.1. 試驗1

33挑取培養(yǎng)物接種在尿素瓊脂斜面上,6℃±1℃培養(yǎng)24h,觀察結果。尿素瓊脂斜面變?yōu)槊倒寮t3色者為尿素酶陽性。注:也可采用不含瓊脂的尿素培養(yǎng)基。1 (1

1A.2

氰化鉀

KCN1 (1

1A.2. 成分0蛋白胨 10.g0氯化鈉 5.g14．ｃｘｗｚｆｗｗ．ｂ學兔兔ｗｏｍ標準下載4GB4789.—2024．ｃｘｗｚｆｗｗ．ｂ學兔兔ｗｏｍ標準下載4265磷酸二氫鉀 0.25g265磷酸氫二鈉 5.4g蒸餾水 1000mL0.%氰化鉀 20.mL1

2A.2. 1

210 5將除氰化鉀以外的成分加入蒸餾水中,攪勻后加熱溶解,21℃高壓滅菌15min。充分冷卻后10 5每100mL培養(yǎng)基加入2.mL新制備的0.%氰化鉀溶液(最后濃度為1∶10000),分裝于無菌試管內(nèi),立刻用無菌管塞塞緊。同時,將不加氰化鉀的培養(yǎng)基作為對照培養(yǎng)基,分裝后備用。1

3A.2. 試驗1

35將待測菌的純培養(yǎng)物用生理鹽水配制成0.

麥氏濁度的菌懸液,滴加2滴~3滴菌懸液于氰化鉀5(KCN)培養(yǎng)基,混勻后滴加一層無菌液體石蠟進行密封。另外滴加2滴~3滴菌懸液于對照培養(yǎng)基。在36℃±1℃培養(yǎng)24h~48h,觀察結果。氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基內(nèi)有細菌生長者為陽性(不抑制),培養(yǎng)48h無細菌生長者為陰性(抑制)。注:氰化鉀是劇毒藥,操作時應戴手套,避免沾染。試驗失敗的主要原因是密封不嚴而造成假陽性反應。11

1A.3

賴氨酸脫羧酶試驗培11

1A.3. 成分0000蛋白胨 5.g0000酵母浸粉 3.g葡萄糖 1.g溴甲酚紫 0.2g蒸餾水 1000mLL-賴氨酸或DL-賴氨酸 5.g或10.g1

2A.3. 1

28除賴氨酸以外的成分加入蒸餾水中,攪勻后加熱溶解,加入L-賴氨酸或

DL-賴氨酸,對照培養(yǎng)基不8加賴氨酸。必要時調(diào)節(jié)pH。分裝后115℃高壓滅菌15min。滅菌后的培養(yǎng)基在25℃的pH

為6.±20.。21

3A.3. 試驗1

3挑取培養(yǎng)物接種于賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基,混勻后滴加一層無菌液體石蠟進行密封。36

℃±1℃培養(yǎng)18h~24h,觀察結果。培養(yǎng)基呈紫色者為賴氨酸脫羧酶陽性,培養(yǎng)基呈黃色者為賴氨酸脫羧酶陰性。對照管應為黃色。11

1A.4

糖發(fā)酵培11

1A.4. 成分000蛋白胨 10.g000牛肉浸粉 5.g氯化鈉 3.g磷酸氫二鈉(含12個結晶水) 2.g15ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃ兔ｗ兔學ｏｍ標準下載4GB4789.—2024ｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃ兔ｗ兔學ｏｍ標準下載4溴麝香草酚藍 0.25g蒸餾水 1000mL1

2A.4. 1

21將各成分加入蒸餾水中,攪勻后加熱溶解,必要時調(diào)節(jié)pH,21℃高壓滅菌15min。冷卻后,加入15 4 2終濃度為0.%~1%的無菌糖溶液,分裝。滅菌后的培養(yǎng)基在25℃的pH

5 4 21

3A.4. 試驗1

33挑取少量培養(yǎng)物接種于糖發(fā)酵管,6℃±1℃培養(yǎng)24h~48h,觀察結果。培養(yǎng)基變?yōu)辄S色者為陽3性。對于培養(yǎng)48h后,懷疑為乳糖遲緩發(fā)酵者,可繼續(xù)培養(yǎng)至3d~5d再觀察結果。1 (A.5

鄰硝基酚β-D半乳糖苷

ONPG)培1 (1

1A.5. 1

1/ 5p 5p鄰硝基酚β-D半乳糖苷/ 5p 5p0.1molL磷酸鈉緩沖液(H7.) 10.mL1%

蛋白胨水(H7.) 30.mL1

2A.5. 1

2將

ONPG溶于緩沖液內(nèi),加入蛋白胨水,過濾除菌后分裝于無菌的小試管內(nèi),塞緊管塞。1

3A.5. 試驗1

33挑取培養(yǎng)物接種于

ONPG培養(yǎng)基,6℃±1℃培養(yǎng)3h觀察結果,培養(yǎng)基變?yōu)辄S色者,為β-半乳糖3苷酶陽性。若培養(yǎng)基不變色,繼續(xù)培養(yǎng)至24h,培養(yǎng)基變黃者,為β-半乳糖苷酶陽性,否則為陰性。11

1A.6

丙二酸鈉培11

1A.6. 成分006400酵母浸粉 1.g006400硫酸銨 2.g磷酸氫二鉀 0.g磷酸二氫鉀 0.g氯化鈉 2.g丙二酸鈉 3.g溴麝香草酚藍 0.25g蒸餾水 1000mL1

2A.6. 1

2將各成分加入蒸餾水中,攪勻后加熱溶解,必要時調(diào)節(jié)pH,分裝后121℃高壓滅菌15min。滅菌8 2后的培養(yǎng)基在25℃的pH

為6.8 21

3A.6. 試驗1

33用新鮮培養(yǎng)物接種于丙二酸鈉培養(yǎng)基,6℃±1℃培養(yǎng)48h,觀察結果。培養(yǎng)基變藍色者為陽性。316菌名拉丁菌名O抗原H

抗原第1相第2相A

群甲型副傷寒沙門氏菌S.ParatyphiA1,2,12a[1,5]B

群基桑加尼沙門氏菌S.Kisangani1,4,[5],12a1,2阿雷查瓦萊塔沙門氏菌S.Arechavaleta4,[5],12a1,7馬流產(chǎn)沙門氏菌S.Abortusequi4,12e,n,xa乙型副傷寒沙門氏菌S.ParatyphiB1,4,[5],12b1,2利密特沙門氏菌S.Limete1,4,12,[27]b1,5阿邦尼沙門氏菌S.Abony1,4,[5],12,[27]be,n,x維也納沙門氏菌S.Wien1,4,12,[27]bl,w伯里沙門氏菌S.Bury4,12,27cz6斯坦利沙門氏菌S.Stanley1,4,[5],12,[27]d1,2圣保羅沙門氏菌S.Saintpaul1,4,[5],12e,h1,2里定沙門氏菌S.Reading1,4,[5],12e,h1,5徹斯特沙門氏菌S.Chester1,4,[5],12e,he,n,x德爾卑沙門氏菌S.Derby1,4,[5],12f,g[1,2]阿貢納沙門氏菌S.Agona1,4,[5],12f,g,s[1,2]埃森沙門氏菌S.Essen4,12g,m加利福尼亞沙門氏菌S.California4,12g,m,t[z67]金斯敦沙門氏菌S.Kingston1,4,[5],12,[27]g,s,t[1,2]布達佩斯沙門氏菌S.Budapest1,4,12,[27]g,t鼠傷寒沙門氏菌S.Typhimurium1,4,[5],12i1,2拉古什沙門氏菌S.Lagos1,4,[5],12i1,5布雷登尼沙門氏菌S.Bredeney1,4,12,27l,v1,7基爾瓦沙門氏菌ⅡS.KilwaⅡ4,12l,we,n,x海德爾堡沙門氏菌S.Heidelberg1,4,[5],12r1,2印地安納沙門氏菌S.Indiana1,4,12z1,7斯坦利維爾沙門氏菌S.Stanleyville1,4,[5],12,[27]z4,z23[1,2]伊圖里沙門氏菌S.Ituri1,4,12z101,51表1表B. 常見沙門氏菌抗原表17下準ｏｍ標．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ兔ｗ兔學載4GB4789.—2024下準ｏｍ標．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ兔ｗ兔學載4附 錄 B常見沙門氏菌抗原表1常見沙門氏菌抗原見表B.。1菌名拉丁菌名O抗原H

抗原第1相第2相C1

群奧斯陸沙門氏菌S.Oslo6,7,14ae,n,x愛丁保沙門氏菌S.Edinburg6,7,14b1,5布隆方丹沙門氏菌ⅡS.BloemfonteinⅡ6,7b[e,n,x]:z42丙型副傷寒沙門氏菌S.ParatyphiC6,7[Vi]c1,5豬霍亂沙門氏菌S.Choleraesuis6,7c1,5豬傷寒沙門氏菌S.Typhisuis6,7c1,5羅米他沙門氏菌S.Lomita6,7e,h1,5布倫登盧普沙門氏菌S.Braenderup6,7,14e,he,n,z15里森沙門氏菌S.Rissen6,7,14f,g蒙得維的亞沙門氏菌S.Montevideo6,7,14g,m,[p],s[1,2,7]里吉爾沙門氏菌S.Riggil6,7g,[t]奧雷寧堡沙門氏菌S.Oranienburg6,7,14m,t[z57]奧里塔蔓林沙門氏菌S.Oritamerin6,7i1,5湯卜遜沙門氏菌S.Thompson6,7,14k1,5康科德沙門氏菌S.Concord6,7l,v1,2伊魯木沙門氏菌S.Irumu6,7l,v1,5姆卡巴沙門氏菌S.Mkamba6,7l,v1,6波恩沙門氏菌S.Bonn6,7l,ve,n,x波茨坦沙門氏菌S.Potsdam6,7,14l,ve,n,z15格但斯克沙門氏菌S.Gdansk6,7,14l,vz6維爾肖沙門氏菌S.Virchow6,7,14r1,2嬰兒沙門氏菌S.Infantis6,7,14r1,5巴布亞沙門氏菌S.Papuana6,7re,n,z15巴雷利沙門氏菌S.Bareilly6,7,14y1,5哈特福德沙門氏菌S.Hartford6,7ye,n,x三河島沙門氏菌S.Mikawasima6,7,14ye,n,z15姆班達卡沙門氏菌S.Mbandaka6,7,14z10e,n,z15耶路撒冷沙門氏菌S.Jerusalem6,7,14z10l,w田納西沙門氏菌S.Tennessee6,7,14z29[1,2,7]C2

群習志野沙門氏菌S.Narashino6,8ae,n,x下準ｏｍ標．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ兔ｗ兔學載4GB4789.—2024下準ｏｍ標．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ兔ｗ兔學載41表B1表B. 常見沙門氏菌抗原表

(續(xù))菌名拉丁菌名O抗原H

抗原第1相第2相名古屋沙門氏菌S.Nagoya6,8b1,5加瓦尼沙門氏菌S.Gatuni6,8be,n,x慕尼黑沙門氏菌S.Muenchen6,8d1,2曼哈頓沙門氏菌S.Manhattan6,8d1,5紐波特沙門氏菌S.Newport6,8,20e,h1,2科特布斯沙門氏菌S.Kottbus6,8e,h1,5茨昂威沙門氏菌S.Tshiongwe6,8e,h[e,n,z15]林登堡沙門氏菌S.Lindenburg6,8i1,2塔科拉迪沙門氏菌S.Takoradi6,8i1,5波那雷恩沙門氏菌S.Bonariensis6,8ie,n,x利奇菲爾德沙門氏菌S.Litchfield6,8l,v1,2病牛沙門氏菌S.Bovismorbificans6,8,20r,[i]1,5查理沙門氏菌S.Chailey6,8z4,z23[e,n,z15]哈達爾沙門氏菌S.Hadar6,8Z10e,n,xC3

群巴爾多沙門氏菌S.Bardo8e,h1,2依麥克沙門氏菌S.Emek8,20g,m,s肯塔基沙門氏菌S.Kentucky8,20iz6科瓦利斯沙門氏菌S.Corvallis8,20z4,z23[z6]D

群仙臺沙門氏菌S.Sendai1,9,12a1,5傷寒沙門氏菌S.Typhi9,12[Vi]d塔西沙門氏菌S.Tarshyne9,12d1,6伊斯特本沙門氏菌S.Eastbourne1,9,12e,h1,5以色列沙門氏菌S.Israel9,12e,he,n,z15腸炎沙門氏菌S.Enteritidis1,9,12g,m[1,7]布利丹沙門氏菌S.Blegdam9,12g,m,q沙門氏菌ⅡSalmonella

Ⅱ1,9,12g,m,[s],t[1,5,7]都柏林沙門氏菌S.Dublin1,9,12[Vi]g,p芙蓉沙門氏菌S.Seremban9,12i1,5巴拿馬沙門氏菌S.Panama1,9,12l,v1,5戈丁根沙門氏菌S.Goettingen9,12l,ve,n,z15爪哇安納沙門氏菌S.Javiana1,9,12l,z281,51表1表B. 常見沙門氏菌抗原表

(續(xù))19下準ｏｍ標．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ兔ｗ兔學載4GB4789.—2024下準ｏｍ標．ｃｘｗｚｆ．ｂｗｗ兔ｗ兔學載4菌名拉丁菌名O抗原H

抗原第1相第2相雞沙門氏菌S.Gallinarum1,9,12E1

群奧凱?？粕抽T氏菌S.Okefoko3,10cz6瓦伊勒沙門氏菌S.Vejle3,{10}{15}e,h1,2明斯特沙門氏菌S.Muenster3,{10}{15}{15,34}e,h1,5鴨沙門氏菌S.Anatum3,{10}{15}{15,34}e,h1,6紐蘭沙門氏菌S.Newlands3,{10}{15,34}e,he,n,x火雞沙門氏菌S.Meleagridis3,{10}{15}{15,34}e,hl,w雷根特沙門氏菌S.Regent3,10f,g,[s][1,6]西翰普頓沙門氏菌S.Westhampton3,{10}{15}{15,34}g,s,t阿姆德爾尼斯沙門氏菌S.Amounderness3,10i1,5新羅歇爾沙門氏菌S.Newrochelle3,10kl,w恩昌加沙門氏菌S.Nchanga3,{