SN-T 3064.7-2011國(guó)境口岸蠅類、蜚蠊攜帶重要病原體檢測(cè)方法

中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)國(guó)境口岸蠅類、蜚蠊攜帶重要病原體檢測(cè)方法第7部分：副溶血性弧菌Detectionsofimportantpathogensinfliesandcockroachsatfrontierport-2011-09-09發(fā)布ISN/T3064.7—2011--第1部分：通用要求；——第3部分：志賀氏菌；——第10部分：甲型肝炎病毒；1國(guó)境口岸蠅類、蜚蠊攜帶重要病原體檢測(cè)方法第7部分：副溶血性弧菌1范圍SN/T3064的本部分規(guī)定了國(guó)院口岸輸大性蠅類和蜚蠊攜帶副溶血性弧菌的檢測(cè)方法、結(jié)果報(bào)GB/T4789.7—2008食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)3%氯化鈉堿性蛋白胨水，氯化鈉蛋白胨水，氯化鈉溶液，氧化酶試劑。具體成分及制備方法見(jiàn)3.2檢測(cè)程序副溶血性弧菌檢測(cè)程序參見(jiàn)附錄A。3.3.1增菌培養(yǎng)分別取1mL樣本處理液加入到100mL3%氯化鈉堿性蛋白胨水增菌液中，將3%氯化鈉堿性蛋白胨水增菌液于36℃±1℃培養(yǎng)18h±1h。 1)科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基(CHROMagarVibrio)是由法國(guó)博賽科瑪嘉公司提供的產(chǎn)品的商品名。給出這一信息是為了方便本標(biāo)準(zhǔn)的使用者，并不表示對(duì)該產(chǎn)品的認(rèn)可。如果其他等效產(chǎn)品具有相同的效果，則可使用這些等23.3.2分離培養(yǎng)用接種針取增菌后的培養(yǎng)物四區(qū)法劃線接種于TCBS平板或科瑪嘉弧菌顯色平板上，36℃±1℃培養(yǎng)18h±1h。鈉營(yíng)養(yǎng)瓊脂，36℃±1℃培養(yǎng)24h±3h。若平板上的可疑菌落少于5個(gè)，則應(yīng)該全部挑取傳代培養(yǎng)。具體操作步驟見(jiàn)GB/T4789.7—2008中5.5.1具體操作步驟見(jiàn)GB/T4789.7—2008中5.5.4。3.3.5.3氯化鈉三糖鐵試驗(yàn)b)瓊脂斜面：3.3.6.1鳥氨酸脫羧酶試驗(yàn)接種鳥氨酸脫羧酶氯化鈉肉湯。在肉湯上面覆蓋1mL滅菌礦物油。36℃±1℃培養(yǎng)24h+3h.3.3.6.2賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)具體操作步驟見(jiàn)SN0173—1992中6.3.4。3具體操作步驟見(jiàn)SN0173—1992中6.3.5。具體操作步驟見(jiàn)SN0173—1992中6.3.6。自氯化鈉營(yíng)養(yǎng)瓊脂上挑取培養(yǎng)物1滿環(huán)，接種ONPG培養(yǎng)基，于36℃±1℃培養(yǎng)1h～3h和24h將可疑菌落接種于裝有5mL色氨酸氯化鈉肉湯中，36℃±1℃培養(yǎng)24h±3h。培養(yǎng)后加入1ml3.3.7擴(kuò)大生化確認(rèn)鑒定程序生化項(xiàng)目生化性狀初步生化篩選氧化酶陽(yáng)性嗜鹽性無(wú)鹽胰胨水3%氯化鈉胰胨水6%氯化鈉胰胨水8%氯化鈉胰胨水10%氯化鈉胰胨水幾乎不生長(zhǎng)生長(zhǎng)旺盛明顯生長(zhǎng)明顯生長(zhǎng)幾乎不生長(zhǎng)氯化鈉三糖鐵斜面底層硫化氫產(chǎn)堿產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣陰性生化確認(rèn)鳥氨酸脫羧酶賴氨酸脫羧酶精氨酸雙水解酶V-P動(dòng)力ONPG靛基質(zhì)陽(yáng)性陽(yáng)性陰性陰性陽(yáng)性陰性陽(yáng)性擴(kuò)大生化確認(rèn)蔗糖陽(yáng)性發(fā)酵型不分解44報(bào)告結(jié)果5陽(yáng)性結(jié)果處置6.1抗原制備副溶血性弧菌的抗原分為O、k、H三種。血清學(xué)分型以)及K抗原進(jìn)行。將經(jīng)生化試驗(yàn)證實(shí)為副溶血性弧菌的菌株轉(zhuǎn)種在兩支3%氯化鈉普通瓊脂斜面上，36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。用含3%氯化鈉的5%甘油溶液沖洗斜面培養(yǎng)物，制成濃厚的菌懸液。6.30抗原凝集試驗(yàn)具體操作步驟見(jiàn)GB/T4789.7-2008中6.3。5圖A.1副溶血性弧菌檢測(cè)程序圖6(資料性附錄)副溶血性弧菌與其他弧菌的主要性狀名稱氧化酶賴氨酸精氨酸鳥紅破明膠脲酶V-P生蔗糖纖維二糖乳糖阿拉伯糖D-甘露糖D-T)-甘露醇T)-NPG%0368副溶血性弧菌V.parahaemolyticus十十+十V—十—V—十十十—一十十十創(chuàng)傷弧菌十十十十 十十十十V十十十—溶藻弧菌V.alginolyticus十十十十-十十十—十十十十十十霍亂弧菌V.cholerae十十十十V十十——十十十十十?dāng)M態(tài)弧菌V.mimicus十十十十—十—!十十十十——河弧菌V.fluvialis十十—十——V