第二章 核酸教材

第一部分生物大分子第二章核酸1868

F.

Miescher從膿細(xì)胞的細(xì)胞核中分離出了一種含磷酸的有機(jī)物，當(dāng)時(shí)稱(chēng)為核素（nuclein,后稱(chēng)為核酸nucleicacid）（細(xì)胞核化學(xué)創(chuàng)始人和DNA發(fā)現(xiàn)者）1944

Avery

等通過(guò)肺炎球菌轉(zhuǎn)化試驗(yàn)證明DNA是遺傳物質(zhì)。1952

Hershey-Chase噬菌體標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。1953

Watson和Crick提出DNA結(jié)構(gòu)的雙螺旋模型。1958

Crick提出遺傳信息傳遞的中心法則。1973

Boyer,Cohen首次DNA重組成功。1976DNASequencing(序列分析）。1991HumanGeneProject（人類(lèi)基因組計(jì)劃）。核酸的發(fā)展簡(jiǎn)史光滑型細(xì)胞（有毒）粗糙型細(xì)胞（無(wú)毒）破碎細(xì)胞DNAase降解后的DNA粗糙型細(xì)胞接受光滑型DNA只有粗糙型大多數(shù)仍為粗糙型少數(shù)光滑型細(xì)胞被轉(zhuǎn)化SSRRR+DNA1944年Avery細(xì)菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)1952年，美國(guó)Hershey-Chase噬菌體浸染細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)。第二章核酸

本章內(nèi)容簡(jiǎn)介

掌握內(nèi)容講授

本章要點(diǎn)回顧

本章習(xí)題本章內(nèi)容簡(jiǎn)介本章主要介紹了核酸的結(jié)構(gòu)與功能、重要的理化性質(zhì)。重點(diǎn)掌握:DNA和RNA在組分、結(jié)構(gòu)和功能上的差異；核酸的紫外吸收、變性、復(fù)性與雜交。掌握內(nèi)容講授2.1

核酸的結(jié)構(gòu)與功能2.2DNA的結(jié)構(gòu)與功能2.3RNA的結(jié)構(gòu)與功能2.4

核酸重要理化性質(zhì)2.1核酸的結(jié)構(gòu)與功能脫氧核糖核酸（DNA—Deoxyribonucleicacid)、核糖核酸（RNA—Ribonucleicacid)P含量平均，在DNA中9.9%；在RNA中9.4%核酸的結(jié)構(gòu)單元是核苷酸2.1.1核苷酸的組成

堿基、戊糖、核苷、核苷酸2.1.2核苷酸的衍生物核酸nucleicacid核苷酸nucleotide核苷nucleoside磷酸phosphate嘌呤堿purinebase

嘧啶堿pyrimidinebase（堿基base）核糖ribose

脫氧核糖deoxyribose

（戊糖amylsugar）(結(jié)構(gòu)單元)NNNNHHHHNNNNHHHH123456789嘌呤NH2腺嘌呤adenine（A）NNNNHHHHOH2N鳥(niǎo)嘌呤guanine（G）基本堿基（嘌呤堿基和嘧啶堿基）、稀有/修飾堿基NNHHHH嘧啶123456NNHHHHNH2OH胞嘧啶cytosine（C）NNHHHHOOHH尿嘧啶uracil（U）NNHHHHOOHHCH3胸腺嘧啶thymine（T）二氫尿嘧啶（DHU/D）

核酸中也存在一些不常見(jiàn)的稀有堿基,大部分是上述堿基的甲基化或羥甲基化或加氫還原的產(chǎn)物戊糖：核糖和脫氧核糖OHOH2COHOHOH12OHOH2COHHOH12β-D-2-核糖β-D-2-脫氧核糖H核糖+H+糠醛甲基間苯二酚FeCl3綠色產(chǎn)物Δ脫氧核糖+H+

Δω-羥基-γ-酮戊醛二苯胺藍(lán)色產(chǎn)物RNA和DNA定性、定量測(cè)定

兩類(lèi)核酸的基本成分區(qū)別核苷：戊糖+堿基；核糖核苷和脫氧核糖核苷糖與堿基之間的C-N鍵，稱(chēng)為C-N糖苷鍵(脫氧)腺苷、(脫氧)胞苷、(脫氧)鳥(niǎo)苷、尿苷、(脫氧)胸苷1’2’3’4’5’(OH)1’2’3’4’5’(OH)核苷戊糖的C1′與嘧啶堿的N1連接成的糖苷鍵戊糖的C1′與嘌呤堿的N9連接成的糖苷鍵OO（N=A、G、C、U、T）HH(O)H1′2′N(xiāo)OHCH2HH5′4′3′PO-OOO-核苷酸(核苷的磷酸酯,核酸的基本組成單位)核苷分子中戊糖環(huán)上的羥基磷酸化

多為5′—（脫氧）核糖核苷酸

（脫氧）腺苷酸、（脫氧）鳥(niǎo)苷酸……PPPPPPPP常見(jiàn)（脫氧）核苷酸的結(jié)構(gòu)和命名鳥(niǎo)嘌呤核苷酸（GMP）尿嘧啶核苷酸（UMP）胞嘧啶核苷酸（CMP）腺嘌呤核苷酸（AMP）脫氧腺嘌呤核苷酸（dAMP）脫氧鳥(niǎo)嘌呤核苷酸（dGMP）脫氧胞嘧啶核苷酸（dCMP）脫氧胸腺嘧啶核苷酸（dTMP）

5′-NMP5′-NDP5′-NTPN=A、G、C、U

5′-dNMP5′-dNDP5′-dNTPN=A、G、C、T腺苷酸及其多磷酸化合物

AMP腺苷一磷酸

Adenosine

monophosphate

ADP腺苷二磷酸

Adenosine

diphosphate

ATP腺苷三磷酸

Adenosine

triphosphate1.繼續(xù)磷酸化——多磷酸核苷作為合成原料:各種核苷三磷酸(ATP、GTP、CTP、UTP）是體內(nèi)合成RNA的直接原料；各種脫氧核苷三磷酸（dATP、dGTP、dCTP、dTTP）是體內(nèi)合成DNA直接原料多磷酸核苷酸具有重要生物學(xué)作用ATP——能量“貨幣”UTP——參加糖的互相轉(zhuǎn)化與合成CTP——參加磷脂的合成GTP——參加蛋白質(zhì)和嘌呤的合成作為輔酶組成成分：NAD+、NADP+、FAD、FMN、HSCoA是核酸的衍生物，在物質(zhì)和能量代謝中起重要作用參與新陳代謝2.環(huán)化磷酸化

cAMP

cGMP第二信使—cAMP(3′5′—環(huán)化腺苷酸)由ATP在腺苷酸環(huán)化酶催化形成；其拮抗物為cGMP(3′5′—環(huán)化鳥(niǎo)苷酸)；共同在細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育中起重要調(diào)節(jié)作用。堿基、核苷、核苷酸的概念和關(guān)系

NitrogenousbasePentosesugarHOCH2HOHDoxyribose(inDNA)HOCH2HOOHRibose(inRNA)PhosphatePyrimidinesCytosineThymineUracilCUTPurinesAdenineGuanineAG核苷核苷酸糖苷鍵5′—磷酸酯鍵核酸的生物功能：核酸是生物體遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)，DNA是大多數(shù)生物體的遺傳物質(zhì)。RNA主要參與蛋白質(zhì)的生物合成。RNA功能具有多樣性，還有：RNA的轉(zhuǎn)錄后加工與修飾、參與基因表達(dá)的調(diào)控、催化作用如核酶、遺傳信息的加工、病毒RNA或類(lèi)病毒是遺傳信息的載體等。DNA是主要的遺傳物質(zhì)(1):原核生物:沒(méi)有細(xì)胞核,它的DNA存在于一個(gè)叫“類(lèi)核/擬核”的結(jié)構(gòu)中。在某些細(xì)菌具有以質(zhì)粒形式存在的DNA。質(zhì)粒：plasmid，指染色體外基因，能自主復(fù)制，并給出附加的性狀。(2)：真核生物：不同種的生物細(xì)胞的DNA含量相差很大，但同種生物細(xì)胞的DNA含量總是相同的；DNA在細(xì)胞核內(nèi)呈高度卷曲的雙股螺旋線(xiàn)性分子，與組蛋白結(jié)合形成染色體；線(xiàn)粒體和葉綠體也含有DNA，但不與組蛋白結(jié)合，分子也較小。(3)：原核生物染色體DNA，質(zhì)粒DNA，真核生物細(xì)胞器DNA都是環(huán)狀雙鏈DNA；真核生物染色體DNA是線(xiàn)形雙鏈DNA，末端具有高度重復(fù)序列形成的端粒結(jié)構(gòu)。除少數(shù)病毒（RNA病毒）以RNA作為遺傳物質(zhì)外，多數(shù)有機(jī)體的遺傳物質(zhì)是DNA。RNA在蛋白質(zhì)的

生物合成中起重要作用基因功能的表達(dá)是以蛋白質(zhì)的形式體現(xiàn)出來(lái)的。大量的實(shí)驗(yàn)證明：RNA在蛋白質(zhì)生物合成中起著重要作用，即RNA的核心功能是：遺傳信息由DNA到蛋白質(zhì)的中間傳遞體。2.2DNA的結(jié)構(gòu)與功能2.2.1DNA的分子組成2.2.2DNA的分子結(jié)構(gòu)與功能㈠、

DNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)㈡、

DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)㈢、

DNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)㈣、

DNA與蛋白質(zhì)復(fù)合物的結(jié)構(gòu)

——染色體2.2DNA的結(jié)構(gòu)與功能DNA的基本組成單位是脫氧核苷酸主要有dAMP、dGMP、dCMP、dTMPDNA的堿基組成特點(diǎn)：A=T；G=C；A+G=T+C；具有種的特異性，沒(méi)有器官和組織的特異性5’5’3’3’DNA一級(jí)結(jié)構(gòu)：核苷酸的排列順序。每個(gè)核苷酸戊糖上3′-OH和相鄰核苷酸戊糖上5′-磷酸形成3′，5′

---磷酸二酯鍵相連成長(zhǎng)鏈結(jié)構(gòu)式5′-磷酸端（常用5′-P表示）；3′-羥基端（常用3′-OH表示）核苷酸鏈具有方向性，當(dāng)表示一個(gè)核苷酸鏈時(shí)，必須注明它的方向，一般是5′→3′。DNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的概念、特點(diǎn)與功能：概念：脫氧核苷酸（堿基）在分子中的排列順序DNA分子一級(jí)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)A:DNA是沒(méi)有分支的多核苷酸長(zhǎng)鏈，各脫氧核苷酸之間以3′5′—磷酸二酯鍵相連B：相間排列的戊糖和磷酸構(gòu)成脫氧核糖核酸大分子的主鏈，而其堿基則可看成是側(cè)鏈基團(tuán)；HHH5′3′OHC:天然DNA分子長(zhǎng)鏈的兩端，總是有一個(gè)核糖帶有自由的5′-磷酸，而另一端的核糖帶有自由的3′-OH。DNA的方向就是從5′端到3′端；D:DNA分子的核糖的2′位上沒(méi)有自由羥基,這DNA作為主要遺傳物質(zhì)極其穩(wěn)定的根本原因，特別是對(duì)于堿的抵抗力DNA分子一級(jí)結(jié)構(gòu)的意義:不僅在于它的堿基排列可通過(guò)轉(zhuǎn)錄以密碼子的方式蘊(yùn)藏了遺傳信息,而且還決定了DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)和空間結(jié)構(gòu)。生物界物種的多樣性即寓于DNA分子中四種核苷酸千變?nèi)f化的不同排列組合之中。Watson

和Crick

于1953年提出了DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型，說(shuō)明了DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)。（即B型DNA）雙螺旋結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)（1）主鏈：脫氧核糖和磷酸基通過(guò)3′5′—磷酸二酯鍵連接成為螺旋的主鏈骨架，二條主鏈以反平行方式組成右手螺旋；主鏈處于螺旋外側(cè)，這是由核糖和磷酸的親水性所決定的；核糖平面與螺旋軸平行，堿基處于螺旋的內(nèi)側(cè)

(2)直徑與螺距:螺旋的直徑為2nm；螺距（雙螺旋鏈中的任意一條鏈繞軸一周所升降的距離）為3.4nm,其中包含10個(gè)核苷酸,因此同一條鏈上相鄰堿基之間的軸向距離(堿基堆積距離)0.34nm,相對(duì)于螺旋軸移動(dòng)36°.2.0nm（3）堿基對(duì)：由于雙螺旋結(jié)構(gòu)要求有一個(gè)正常的螺旋形式，就必須按堿基互補(bǔ)的原則進(jìn)行堿基配對(duì)；嘌呤環(huán)和嘧啶環(huán)上的氨基和酮基是親水的，兩條鏈配對(duì)的堿基之間能夠形成氫鍵；而嘌呤環(huán)和嘧啶環(huán)本身都是疏水的，因而同一條鏈中的相鄰堿基能夠形成一種堆積力；這兩種力的協(xié)同作用就維持了雙螺旋結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性(4)大溝小溝:兩條主鏈和堿基并不充滿(mǎn)雙螺旋的空間,其表面形成兩條凹槽,一條寬而深為大溝；一條狹而淺為小溝。特別是大溝,對(duì)于Pr識(shí)別DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)上的特定信息是非常重要的。因?yàn)橹挥性跍蟽?nèi)，Pr才能“感覺(jué)”到不同堿基順序，而在雙螺旋的表面全是相同的磷酸和脫氧核糖的骨架，是沒(méi)有什么信息可言的2.0nm小溝大溝AB

Z外型粗短適中細(xì)長(zhǎng)螺旋方向右手右手

左手螺旋直徑2.55nm2nm1.84nm螺距0.23nm0.34nm0.38nm堿基夾角32.70

34.6060.00每圈堿基數(shù)1110.412軸心與堿基對(duì)關(guān)系2.46nm3.32nm4.56nm堿基傾角190

10

90糖苷鍵構(gòu)象反式反式

C、T反式，G順式大溝很窄很深很寬較深平坦小溝很寬、淺窄、深較窄很深DNA雙螺旋的構(gòu)象類(lèi)型DNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)——超螺旋1）超螺旋是指雙螺旋進(jìn)一步扭曲或再螺旋的構(gòu)象。2）正超螺旋（變緊，過(guò)旋）和負(fù)超螺旋（變松，欠旋）。3）人類(lèi)46條染色體的

DNA總長(zhǎng)可達(dá)1.7-2.0m，經(jīng)過(guò)螺旋化壓縮，實(shí)際總長(zhǎng)只有200nm。真核生物的基因一般分布在若干條染色體上DNA與組蛋白結(jié)合成染色體組蛋白是真核生物染色體的基本結(jié)構(gòu)蛋白，富含帶正電荷的Arg和Lys等堿性氨基酸，pI一般在10.0以上，屬堿性蛋白質(zhì)，可以和酸性的DNA緊密結(jié)合，而且一般不要求特殊的核苷酸序列核小體——染色體的基本結(jié)構(gòu)單位DNA壓縮的基本原則是在螺旋上形成螺旋，再形成螺旋組蛋白與DNA的結(jié)合真核生物染色體DNA組裝的不同層次的結(jié)構(gòu)DNA核小體鏈纖絲突環(huán)玫瑰花結(jié)螺旋圈染色體2.3RNA的結(jié)構(gòu)與功能2.3.1RNA的分子組成和種類(lèi)2.3.2RNA的分子結(jié)構(gòu)㈠、

RNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)㈡、

RNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)㈢、

RNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)㈣、

mRNA㈤、

tRNA㈥、

rRNA

㈦、反義RNA2.3RNA的結(jié)構(gòu)與功能RNA的基本組成單位是核苷酸主要有AMP、GMP、CMP、UMP主要種類(lèi)有mRNA、tRNA、rRNARNA的一級(jí)結(jié)構(gòu):

RNA分子中各核苷酸（堿基）的排列順序叫做RNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)OHOHOH5′3′

RNA與DNA的差異

DNA

RNA糖脫氧核糖核糖堿基AGCTAGCU

不含稀有堿基含稀有堿基tRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)特征

單鏈三葉草葉形四臂四環(huán)酵母tRNA

Ala

的二級(jí)結(jié)構(gòu)DHU/D環(huán)IGC反密碼子反密碼子環(huán)氨基酸臂可變環(huán)/額外環(huán)TψC環(huán)CCAAla3′5′D臂反密碼子臂TψC臂1.氨基酸臂3′端有CCAOH的共有結(jié)構(gòu),與轉(zhuǎn)運(yùn)的Aa形成酯鍵；2.D環(huán)有二氫尿嘧啶(D/DHU),氨酰-tRNA合成酶的結(jié)合位點(diǎn)；3.反密碼子環(huán)的反密碼子與mRNA相互作用4.可變環(huán)上的核苷酸數(shù)目可以變動(dòng),決定tRNA分子大?。?.TψC環(huán)含有T和ψ,與核糖體結(jié)合位點(diǎn)；6.含有修飾堿基和不變核苷酸。tRNA三級(jí)結(jié)構(gòu)特征：

1:形狀象倒寫(xiě)的字母“L”2：Aa臂和TΨC臂沿同一軸排列，形成12bp連續(xù)螺旋；在與之垂直的方向，反密碼子臂和D臂沿同一軸排列；D環(huán)和TΨC環(huán)構(gòu)成倒L的轉(zhuǎn)角，兩環(huán)間的氫鍵和堿基堆積力穩(wěn)定了轉(zhuǎn)角的構(gòu)象3.氫鍵使多核苷酸鏈的某些部分固定在一定的位置。所有的tRNA折疊后形成大小及三維構(gòu)象相似的三級(jí)結(jié)構(gòu)，有利于攜帶AA的tRNA進(jìn)入核糖體的特定部位。

mRNA(messengerRNA)信使RNA，占細(xì)胞總RNA的5%左右，含量最少，代謝活躍。mRNA在蛋白質(zhì)的生物合成中起模板作用。它將DNA的遺傳信息傳遞給蛋白質(zhì)。

原核生物mRNA特征：

先導(dǎo)區(qū)+翻譯區(qū)（多順?lè)醋樱?末端序列真核生物mRNA特征：

“帽子”（m7G-5′ppp5′-N-3′p）+單順?lè)醋?“尾巴”（PolyA）原核細(xì)胞mRNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)5′3′順?lè)醋禹樂(lè)醋禹樂(lè)醋硬迦腠樞虿迦腠樞蛳葘?dǎo)區(qū)末端順序真核細(xì)胞mRNA的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)AAAAAAA-OH5′

“帽子”3′尾巴

PolyA順?lè)醋觤7G-5′ppp5′-N-3′ptRNA(transferRNA)轉(zhuǎn)移RNA，是細(xì)胞中最小的一種RNA分子，占細(xì)胞總RNA的15%左右。是結(jié)構(gòu)研究最清楚的一類(lèi)RNA。在蛋白質(zhì)的生物合成中，tRNA起攜帶、轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸的作用。rRNA(ribosomeRNA)核糖體RNA，細(xì)胞中最主要的RNA，占細(xì)胞中總RNA80%左右。原核細(xì)胞rRNA中有3種分別是:23SrRNA和5SrRNA(大亞基)、16SrRNA(小亞基);真核細(xì)胞rRNA中有4種分別是：28SrRNA和5.8SrRNA和5SrRNA(大亞基)、18SrRNA(小亞基)。它們與核糖體蛋白共同構(gòu)成核糖體，成為蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所。

原核生物核糖體組成真核生物核糖體組成ribosome組成：Mg2+

rRNA

PrrRNA的結(jié)構(gòu)特征

與Pr組成核糖體后方能發(fā)揮其功能

單鏈，螺旋化程度較tRNA低，單鏈RNA自行盤(pán)繞形成局部雙螺旋的多“莖”多“環(huán)”結(jié)構(gòu)，螺旋部分稱(chēng)為“莖”或“臂”，非螺旋部分稱(chēng)為“環(huán)”。5srRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)反義/調(diào)節(jié)RNA：堿基序列正好與有義mRNA互補(bǔ)的RNA，單鏈，其主要調(diào)控功能：作為DNA復(fù)制的抑制因子，與引物RNA互補(bǔ)結(jié)合抑制DNA復(fù)制在轉(zhuǎn)錄水平上與mRNA5′端互補(bǔ)，阻止RNA的合成轉(zhuǎn)錄是與mRNA配對(duì)結(jié)合形成雙鏈，抑制mRNA作為模板進(jìn)行翻譯2.4核酸的重要理化性質(zhì)2.4.1

核酸的一般物理性質(zhì)2.4.2

核酸的兩性性質(zhì)及等電點(diǎn)2.4.3

核酸的水解2.4.4

核酸的紫外吸收2.4.5

核酸的變性、復(fù)性與雜交2.4.6

核酸含量的測(cè)定DNA為白色纖維狀固體，RNA為白色粉末，不溶于有機(jī)溶劑DNA溶液的粘度極高，而RNA溶液要小得多RNA在室溫條件下被稀堿水解而DNA對(duì)堿穩(wěn)定利用核糖和脫氧核糖不同的顯色反應(yīng)鑒定DNA與RNA。加熱條件下，D－核糖＋濃鹽酸＋苔黑酚綠色D－2－脫氧核糖＋酸＋二苯胺藍(lán)紫色核酸分子中既有酸性基團(tuán)（磷酸基）又有弱堿性基團(tuán)（堿基），具有兩性性質(zhì)磷酸是中等強(qiáng)度的酸，而堿基呈弱堿，所以核酸通常表現(xiàn)為酸性，其等電點(diǎn)比較低核酸分子內(nèi)的酸性解離和堿性解離相等，本身所帶的正電荷與負(fù)電荷相等時(shí)，該pH即為核酸的pIRNA的等電點(diǎn)比DNA的低，是由于其核糖的2′-OH通過(guò)氫鍵促進(jìn)了磷酸基上質(zhì)子的解離核酸在等電點(diǎn)時(shí)的溶解度最小核酸的水解:兩種戊糖(核糖和脫氧核糖)的C1與嘌呤堿的N9和嘧啶堿的N1可以形成4種糖苷鍵，即嘌呤核苷、嘌呤脫氧核苷、嘧啶核苷、嘧啶脫氧核苷；磷酸基與兩種戊糖分別形成核糖磷酸酯和脫氧核糖磷酸酯；相鄰核苷酸通過(guò)3′，5′

---磷酸二酯鍵形成核酸所有這些糖苷鍵和磷酸酯鍵都能被酸水解、堿水解和酶水解。1′3′5′糖苷鍵磷酸酯鍵磷酸酯鍵酸水解：糖苷鍵和磷酸酯鍵都能被酸水解，但糖苷鍵比磷酸酯鍵更易被水解嘌呤堿的糖苷鍵比嘧啶堿的糖苷鍵更易被酸水解對(duì)酸最不穩(wěn)定的是嘌呤與脫氧核糖之間的糖苷鍵堿水解:

RNA的磷酸酯鍵易被堿水解，產(chǎn)生核苷酸，這是因?yàn)镽NA的核糖上有2′-OH，在堿作用下形成磷酸三酯，磷酸三酯極不穩(wěn)定隨即水解，產(chǎn)生核苷2′3′-環(huán)狀磷酸酯，繼續(xù)水解產(chǎn)生2′-核苷酸和3′-核苷酸。DNA的脫氧核糖無(wú)2′-OH，不能形成堿水解的中間產(chǎn)物磷酸三酯，故對(duì)堿有一定的抗性酶水解：專(zhuān)一性核酸酶類(lèi)：專(zhuān)一水解核酸的3′,5′

---磷酸二酯鍵的磷酸二酯酶稱(chēng)為核酸酶核酸酶：（1）按作用底物專(zhuān)一性分類(lèi)：A：RNases：作用于核糖核酸B：DNases:作用于脫氧核糖核酸核酸酶：(2):按對(duì)底物的作用方式分類(lèi):A:核酸內(nèi)切酶:作用點(diǎn)在多核苷酸鏈的內(nèi)部B:核酸外切酶:作用點(diǎn)從多核苷酸鏈的末端開(kāi)始，逐個(gè)將核苷酸切下——最有應(yīng)用價(jià)值的是——限制性?xún)?nèi)切酶限制性?xún)?nèi)切酶：降解外源的DNA，具有嚴(yán)格的堿基序列專(zhuān)一性（4～6bp），交錯(cuò)切割形成粘性末端。常與甲基化酶同時(shí)成對(duì)地存在，它們具有相同的底物專(zhuān)一性，具有識(shí)別相同堿基序列的能力。甲基化酶的甲基供體為S-腺苷Met，甲基受體為DNA上的A與C。當(dāng)限制性?xún)?nèi)切酶作用位點(diǎn)上的某一些堿基被甲基化修飾后，限制酶就不能再降解這種DNA了；所以甲基化酶使細(xì)菌自身的DNA帶上標(biāo)志，限制性?xún)?nèi)切酶專(zhuān)用于降解外來(lái)入侵的異種DNA?；パa(bǔ)雙鏈正讀反讀一樣旋轉(zhuǎn)對(duì)稱(chēng)，在軸的兩側(cè)序列相同但反向紫外吸收嘌呤堿和嘧啶堿都含有共軛雙鍵體系，在260nm有最高吸收峰；根據(jù)A260/A280的比值判斷核酸樣品的純度純DNA：A260/A280≥1.8

純RNA：A260/A280≥2.0若樣品中含有Pr則A260/A280比值明顯降低，若樣品中含有RNA則A260/A280比值明顯升高可作為核酸變性和復(fù)性的指標(biāo)，當(dāng)核酸變性或降解時(shí)光吸收值顯著增加(增色效應(yīng))，但核酸復(fù)性后，光吸收值又回復(fù)到原有水平(減色效應(yīng))。天然DNA變性DNA核苷酸總吸收值1232202402602800.10.20.30.4波長(zhǎng)（nm）光吸收123核酸的光吸收值比各核苷酸光吸收值的和少30~40%，這是在有規(guī)律的雙螺旋結(jié)構(gòu)中堿基緊密地堆積在一起造成的核酸的的變性:雙螺旋區(qū)氫鍵斷裂，空間結(jié)構(gòu)破壞，形成單鏈無(wú)規(guī)則線(xiàn)團(tuán)狀，其實(shí)質(zhì)為只涉及次級(jí)鍵的破壞，一級(jí)結(jié)構(gòu)不變。有增色效應(yīng)——變性后DNA對(duì)260nm