毛發(fā)中氟胺酮、去甲氟胺酮的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

1毛發(fā)中氟胺酮、去甲氟胺酮的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本文件描述了用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)測定毛發(fā)中氟胺酮、去甲氟胺酮的方法。本文件適用于毛發(fā)中氟胺酮及去甲氟胺酮的定性分析。本文件氟胺酮的方法檢出限為0.01ng/mg，去甲氟胺酮的方法檢出限為0.01ng/mg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GA/T122毒物分析名詞術(shù)語3術(shù)語和定義GA/T122界定的術(shù)語和定義適用于本文件。4原理毛發(fā)樣品經(jīng)清洗和冷凍研磨后，以甲醇超聲法提取，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進行檢測，經(jīng)與平行操作的空白樣品和添加樣品作對照，以保留時間、特征離子對和離子對豐度比進行定性分析。5試劑和材料5.1試劑5.1.1除另有說明外，所用試劑均為分析純，實驗用水應(yīng)符合GB/T6682中一級水的要求。5.1.2甲醇：HPLC級。5.1.350％甲酸溶液：HPLC級。5.1.4乙酸銨：HPLC級。5.1.5丙酮。5.1.6甲氧那明。5.2試劑配制15.2.1含0.1％甲酸的5mmol/L乙酸銨水溶液（以配制500mL為例）：稱取0.1925g乙酸銨，加水溶解后，再加入0.5mL甲酸，用水稀釋至500mL，混勻。5.2.2100μg/mL氟胺酮、去甲氟胺酮標準液：市售氟胺酮、去甲氟胺酮標準物質(zhì)溶液。密封，置于冰箱中冷凍保存，保存時間12個月。5.2.3氟胺酮、去甲氟胺酮標準物質(zhì)工作溶液：試驗中所用其他濃度的標準物質(zhì)工作溶液均由上述標準物質(zhì)溶液用甲醇稀釋而得。密封，置于冰箱中冷藏保存，保存時間3個月。5.2.41.0mg/mL甲氧那明標準儲備溶液：稱取甲氧那明10mg于10mL容量瓶中，加入適量甲醇溶解并定容至刻度，配制成1.0mg/mL甲氧那明標準儲備溶液。密封，置于冰箱中冷凍保存，保存時間12個月。5.2.51.0μg/mL甲氧那明標準工作溶液：移取1.0mg/mL甲氧那明標準儲備溶液10μL置于10mL容量瓶中，加入適量甲醇溶解并定容至刻度，配制成1.0μg/mL甲氧那明標準工作溶液。密封，置于冰箱中冷凍保存，保存時間3個月。5.2.62.0ng/mL甲氧那明標準工作溶液：移取1.0μg/mL甲氧那明標準工作溶液100μL置于50mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，配制成2.0ng/mL甲氧那明標準工作溶液。密封，置于冰箱中冷凍保存，保存時間3個月。5.3材料5.3.1具蓋離心管。5.3.2具蓋研磨管。5.3.3容量瓶。6儀器設(shè)備6.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)。6.2電子天平：感量0.1mg。6.3離心機。6.4超聲波清洗儀。6.5冷凍研磨儀。6.6恒溫水浴鍋。6.7微量移液器。7操作方法7.1樣品前處理7.1.1案件樣品毛發(fā)樣品依次用適量的水和丙酮振蕩洗滌兩次，晾干后剪成約1mm段，置于冷凍研磨儀中粉碎，呈粉末狀。稱取毛發(fā)粉末20mg，加入1.0mL內(nèi)標甲氧那明標準工作液，超聲30min，離心，移取上清液，于60℃水浴空氣流下吹干。殘留物用200μL甲醇復(fù)溶，供儀器分析。7.1.2空白樣品取空白毛發(fā)樣品20mg，按7.1.1的要求，與案件樣品平行提取操作。7.1.3添加樣品取空白毛發(fā)樣品20mg，添加氟胺酮及去甲氟胺酮對照品，按7.1.1的要求，與案件樣品平行提取操作。27.2儀器檢測7.2.1儀器條件7.2.1.1液相色譜條件以下為參考條件，可根據(jù)不同儀器實際進行調(diào)整：a)色譜柱：ZORBAXEclipsePlusC18(2.1cm×50mm，1.8μm)；b)流動相：A為5mmol/L乙酸銨和0.1％甲酸緩沖液，B為甲醇，流動相洗脫梯度見表1；表1流動相梯度洗脫程序55555c)流速：0.3mL/min；d)柱溫：35℃;e)進樣量：1.0μL。7.2.1.2質(zhì)譜條件7.2.1.2.1以下條件作為參考，可根據(jù)不同儀器實際情況進行調(diào)整：a)離子源：電噴霧電離-正離子模式(ESI+)；b)檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)；c)離子源電壓(IS)：4800V；d)碰撞氣(CAD)、氣簾氣(CUR)、霧化氣(GS1)、輔助氣(GS2)均為高純氮氣，使用前調(diào)節(jié)各氣流流量以使質(zhì)譜靈敏度達到檢測要求；e)噴霧電壓(IS)、去簇電壓(DP)、碰撞能量(CE)等電壓值應(yīng)優(yōu)化至最佳靈敏度。7.2.1.2.2在以上色譜、質(zhì)譜條件下，氟胺酮、去甲氟胺酮和內(nèi)標物的定性離子對和保留時間見表2。氟胺酮、去甲氟胺酮的MRM色譜圖參見附錄A。表2氟胺酮、去甲氟胺酮和內(nèi)標物的定性離子對和保留時間7.2.2進樣分別吸取案件樣品、空白樣品和添加樣品提取液，按7.2.1的條件進樣分析。37.2.3記錄記錄案件樣品、空白樣品和添加樣品中氟胺酮和去甲氟胺酮可疑色譜峰的保留時間、特征離子和離子對豐度比。7.2.4定性判斷依據(jù)以保留時間、質(zhì)譜特征碎片離子峰和離子對相對豐度比作為定性判斷依據(jù)。如果案件樣品中出現(xiàn)氟胺酮和去甲氟胺酮的兩對定性離子對的特征色譜峰，保留時間與添加樣品中相應(yīng)標準物質(zhì)的色譜峰保留時間比較，相對誤差在±2.5％內(nèi)，且定性離子對豐度比與濃度相近添加樣品的離子對豐度比的相對誤差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判斷案件樣品中存在該種目標物。表3相對離子對豐度比的最大允許相對誤差相對離子對豐度比/(%)允許的相對誤差/(%)8分析結(jié)果評價8.1陰性結(jié)果評價8.1.1如果案件樣品中僅檢出內(nèi)標甲氧那明，未檢出氟胺酮和去甲氟胺酮，則陰性結(jié)果可靠。8.1.2如果案件樣品中未檢出內(nèi)標，則陰性結(jié)果不可靠，應(yīng)按第7章重新提取檢驗。8.2陽性結(jié)果評價8.2.1如果案件樣品中檢出氟胺酮、去甲氟胺酮且空白樣品無干擾，則陽性結(jié)果可靠。8.2.2如果案件樣品中檢出氟胺酮、去甲氟胺酮且空白樣品亦