高中生物第三章第二節(jié)月季的花藥培養(yǎng)1新人教版選修1

關于高中生物第三章第二節(jié)月季的花藥培養(yǎng)1新人教版選修11、被子植物定義：凡是種子有果皮包被著，胚珠有子房壁包被著的植物，就叫做被子植物。一、被子植物和裸子植物2、裸子植物定義：凡是胚珠裸露，外面沒有子房壁包被，種子外面沒有果皮包被的植物稱為裸子植物。實例：玉米、大豆、梨、杏實例：松、杉、柏第2頁,共26頁，2024年2月25日，星期天第3頁,共26頁，2024年2月25日，星期天花的結構：花梗、花托、萼片、花瓣、雌蕊和雄蕊3、花的結構第4頁,共26頁，2024年2月25日，星期天二、被子植物花粉粒的形成花絲花藥：囊狀結構，內有很多花粉粒1、雄蕊的結構雄蕊：第5頁,共26頁，2024年2月25日，星期天花粉是花粉母細胞經過減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細胞。2、被子植物花粉的發(fā)育②花粉粒的形成花粉母細胞（小孢子母細胞）減數(shù)分裂①經歷時期：四分體時期、單核期、雙核期第6頁,共26頁，2024年2月25日，星期天四分體時期（進入單核期）有絲分裂單核靠邊期(小孢子)單核居中期(小孢子)

小孢子（單核花粉粒）第7頁,共26頁，2024年2月25日，星期天精子精子有絲分裂花粉管細胞核生殖細胞核生殖細胞營養(yǎng)細胞雙核期兩個精子和一個營養(yǎng)核的基因型相同第8頁,共26頁，2024年2月25日，星期天1個花粉母細胞4個小孢子減數(shù)分裂有絲分裂4個花粉管細胞核4個生殖細胞核有絲分裂8個精子2nnnnn第9頁,共26頁，2024年2月25日，星期天四、產生花粉植株的兩條途徑五、影響花藥培養(yǎng)的因素1、材料的選擇沒有絕對的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比。第10頁,共26頁，2024年2月25日，星期天不同植物的誘導成功率很不相同，就同一種植物來說親本的生理狀況對誘導成功率也有直接影響。②選擇合適的花粉發(fā)育時期是提高誘導成功率的重要因素。因為并不是任何時期的花粉都可以經過培養(yǎng)產生愈傷組織或胚狀體，花粉發(fā)育的過程中，只有某一個時期對離體刺激敏感。選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關鍵。①選材第11頁,共26頁，2024年2月25日，星期天一般來說，在單核期，細胞核由中央移向細胞一側的時期，花藥培養(yǎng)的成功率最高。即：最適合花藥培養(yǎng)的小孢子發(fā)育時期為單核靠邊期。選擇單核期以前的花藥接種，質地幼嫩，極易破碎；選擇單核期之后的花藥接種，花瓣已有些松動，又給材料的消毒帶來困難，且難以挑選到單核期的花藥。③花藥培養(yǎng)時期的選擇④其它時期選擇的缺點第12頁,共26頁，2024年2月25日，星期天為了挑選到單核期的花藥，通常選擇完全未開放的花蕾。盛開的或略微開放的花，都不宜選作實驗材料。⑥選擇完全未開放花蕾的原因完全未開放的花蕾，可挑選到單核期的花藥，菌少、易消毒⑤單核期花藥的挑選第13頁,共26頁，2024年2月25日，星期天⑦為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難？

花瓣松動后，微生物就可能侵入到花藥，給材料的消毒帶來困難。⑦花藥培養(yǎng)時間一般月季的花藥培養(yǎng)時間選在5月初到5月的中旬，即月季的初花期。初花期的花蕾營養(yǎng)狀態(tài)及生理狀態(tài)會比較好，可提高花粉的誘導成功率。第14頁,共26頁，2024年2月25日，星期天月季花藥培養(yǎng)時的花粉粒最好是（）

A、四分體時期B、單核居中期

C、單核靠邊期D、二核或三核花粉粒C2、培養(yǎng)基：花藥培養(yǎng)基所采用的培養(yǎng)基可能因植物的不同而有所變化小麥為N6培養(yǎng)基，馬鈴薯、月季為MS培養(yǎng)基，油菜為B5培養(yǎng)基。第15頁,共26頁，2024年2月25日，星期天3、其他因素親本植株的生長條件、材料的低溫預處理以及接種的密度等對誘導成功都有一定的影響六、實驗操作（一）材料的選取②某些植物的花粉細胞核不易著色，需采用焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細胞核染成藍黑色。①最常用的方法有醋酸洋紅法1、方法第16頁,共26頁，2024年2月25日，星期天①醋酸洋紅法染色機理醋酸洋紅為堿性染色劑，而花粉細胞內有染色體，染色體主要成分是DNA和蛋白質,易被堿性染料著色染成紅色

。將體積分數(shù)45％的醋酸100ml煮沸，緩緩加入1g洋紅，再加熱回流8h，冷卻至50℃，過濾即可。②醋酸洋紅的配置2、醋酸洋紅法第17頁,共26頁，2024年2月25日，星期天將花藥放在載玻片上，加一滴質量分數(shù)1％的醋酸洋紅，用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片在顯微鏡下檢查。③染色操作3、焙花青—鉻釩法將無水酒精與冰醋酸按體積比為3：1的比例混勻①卡諾氏固定液的配制方法第18頁,共26頁，2024年2月25日，星期天花藥應該在卡諾氏固定液中固定20min，然后取出放在載玻片上，加焙花青—鉻釩溶液染色，蓋上蓋玻片后在顯微鏡下檢查。這種方法能將花粉細胞核染成藍黑色。將5g鉻明礬[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸餾水中，溶解后加入0.1g焙花青，混勻并加熱至沸騰，煮沸5分鐘后冷卻至室溫，過濾，加蒸餾水定容至100ml。②焙花青—鉻釩溶液的配制方法③染色操作第19頁,共26頁，2024年2月25日，星期天（二）材料的消毒1、酒精處理①花蕾用體積分數(shù)為70%的酒精浸泡30秒，立即取出。②無菌水清洗③無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分第20頁,共26頁，2024年2月25日，星期天2、消毒液處理①放入質量分數(shù)為0.1%的氯化汞溶液中2-4分鐘（也可質量分數(shù)為1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液）。②無菌水沖洗3-5次用于培養(yǎng)的花藥，實際上多數(shù)未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護，通常處于無菌狀態(tài)，所以只要將整個花蕾或幼穗消毒即可。第21頁,共26頁，2024年2月25日，星期天在無菌條件下除去萼片和花瓣用鑷子取出花藥②要徹底去除花絲，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。立即將花藥接種于培養(yǎng)基上，通常每瓶接種花藥7-10個。1、剝取花藥①勿損傷花藥，否則接種后容易從受傷部位產生愈傷組織。2、接種注意：（三）接種和培養(yǎng)第22頁,共26頁，2024年2月25日，星期天①培養(yǎng)條件：溫度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。

3、培養(yǎng)②培養(yǎng)：一般經過20-30天培養(yǎng)后，會發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀體。長出愈傷組織則將愈傷組織及時轉移到分化培養(yǎng)基上，以便進一步分化出再生植株。③注意：如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個花藥內就會產生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開。第23頁,共26頁，2024年2月25日，星期天在花藥培養(yǎng)中，特別是通過愈傷組織形成的花粉植株，常常會出現(xiàn)染色體倍性的變化（主要原因是營養(yǎng)細胞核和生殖細胞核融合造成的）。4、鑒定和篩選第24頁,共26頁，2024年2月25日，星期天5、植物組織培養(yǎng)技術與花藥培養(yǎng)技術的異同點：植物組織培養(yǎng)技術與花藥培養(yǎng)技術的相同之處是：培養(yǎng)基配制方法、無菌技術及接種操作等基本