22.4熒光免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)講解

第二十二章

免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)知識(shí)目標(biāo)1.掌握：免疫組化技術(shù)的定義、基本過程、抗原的修復(fù)方法（重難點(diǎn)），抗體的選擇和保存；酶標(biāo)記抗體的免疫組化染色（直接、間接法）的原理，熒光免疫組化標(biāo)本類型和保存。2.熟悉：免疫組化標(biāo)本來源、固定于保存，結(jié)果判斷；非標(biāo)記酶免疫組化的常見類型及原理、親和組織化學(xué)技術(shù)的定義及分類（重點(diǎn)）。3.了解：常見親和組織化學(xué)技術(shù)的原理、優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用。能力目標(biāo)掌握抗原的修復(fù)方法，免疫組化標(biāo)本的采集、固定于保存、結(jié)果判斷。思政-素質(zhì)目標(biāo)責(zé)任心、質(zhì)控、生物安全意識(shí)、臨床免疫學(xué)思維教學(xué)目標(biāo)目錄概述一免疫組化技術(shù)基本知識(shí)二酶免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)三熒光免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)四親和組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)五其他免疫組織化檢驗(yàn)技術(shù)六

利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理，先用熒光素標(biāo)記已知抗體并以此作為探針，檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后，即會(huì)發(fā)出一定波長的熒光，進(jìn)而對(duì)組織中的某種抗原進(jìn)行定性、定位和定量分析。熒光免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)四一、標(biāo)本制作

常見的臨床標(biāo)本材料主要有組織、細(xì)胞和細(xì)菌三大類，按不同標(biāo)本性質(zhì)可制作涂片、印片或組織切片等。（一）載玻片和蓋玻片的處理載玻片和蓋玻片要厚薄均勻、潔凈及透光性好

（二）制片1．組織切片組織材料可制備成冰凍切片或石蠟切片。

2．印片組織材料也可制成印片。3．涂片細(xì)胞或細(xì)菌要制成涂片，涂片應(yīng)薄且均勻。（三）標(biāo)本的固定主要目的是：

1.防止細(xì)胞或切片從玻片上脫落

2.去除妨礙抗原抗體結(jié)合的類脂

3.便于保存。除活細(xì)胞外，其他標(biāo)本應(yīng)在染色前以適當(dāng)?shù)姆绞焦潭ā?/p>

（四）標(biāo)本片的保存固定好的標(biāo)本片應(yīng)盡快熒光染色檢查，如需保存，置-20℃下低溫干燥保存。二、熒光抗體標(biāo)記及染色熒光抗體是熒光免疫技術(shù)的關(guān)鍵試劑，是將熒光素與特異性抗體通過共價(jià)鍵的方式結(jié)合而成。其制備過程通常包括抗體的標(biāo)記、純化和鑒定三步。在已固定的標(biāo)本上滴加經(jīng)適當(dāng)稀釋的熒光抗體，置于帶蓋的濕盒內(nèi)，37℃溫育30min。檢測(cè)不耐熱抗原以4℃過夜為宜。溫育后充分洗滌、干燥、鏡檢。三、臨床應(yīng)用

1.在自身免疫性疾病中的應(yīng)用

2.各種病原微生物的快速檢查和鑒定

3.寄生蟲感染的診斷

4.白細(xì)胞