HPLC法測(cè)定血脂靈膠囊中大黃素的含量

HPLC法測(cè)定血脂靈膠囊中大黃素的含量

摘要：目的為血脂靈膠囊質(zhì)量控制提供新的方法。方法：選用C18柱，流動(dòng)相為甲醇：0.1%磷酸溶劑（85：15），檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。結(jié)果：大黃素（C15H10O5）對(duì)照品在0.0565—0.1695μg范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系，平均回收率為97.69%，RSD為1.64%。結(jié)論：方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確，可作為血脂靈膠囊質(zhì)量控制方法。關(guān)鍵詞：血脂靈膠囊大黃素高效液相色譜法。1、儀器與試藥1.1、儀器高效液相色譜儀（日本島津公司）：LC-10AT泵，SPD-10A紫外檢測(cè)器，CTO-10S柱溫箱，HW色譜工作站。1.2、藥品：血脂靈膠囊：由蕪湖市博英制藥有限公司生產(chǎn)的中試產(chǎn)品，規(guī)格每粒裝0.45g；批號(hào)0908120908130908141.3、大黃素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110756-200110，供含量測(cè)定用）；實(shí)驗(yàn)中所用的試劑均為色譜純或分析純。2、方法與結(jié)果2.1、色譜條件參照2005年版藥典“血脂靈片”[含量測(cè)定]項(xiàng)下的色譜條件確定；色譜柱：Shim-packVP-ODSC18柱（150×4.6mm，5μg）；流動(dòng)相：甲醇：0.1%磷酸溶液（85：15）；流速：0.8ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm，柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μl。2.2、系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)2.2.1、理論塔板數(shù)（N）取大黃素對(duì)照品溶液適量，注入液相色譜儀，測(cè)定，結(jié)果大黃素對(duì)照品N=7228，因此，將理論塔板數(shù)暫定為3000。2.2.2、分離度（R）取供試品溶液適量，注入液相色譜儀，測(cè)定，結(jié)果大黃素的分離度R=5.0，符合《中國(guó)藥典》2005年版一部規(guī)定。2.2.3、拖尾因子（T）利用分離度測(cè)定的圖譜，大黃素T=1.03（0.95<T<1.05）。符合《中國(guó)藥典》2005年版一部規(guī)定。2.3、線性范圍的考察分別精密吸取大黃素對(duì)照品溶液（11.3μg/ml）5.0、7.5、10.0、12.5、15.0μl，依次注入液相色譜儀，按上述色譜條件，分別進(jìn)行分析，測(cè)定其峰面積值，并以對(duì)照品量（X）為橫坐標(biāo)，峰面積值（Y）為縱坐標(biāo)，得大黃素回歸方程：Y=2509642X-4639（r=0.9999，n=5）。結(jié)果表明：大黃素對(duì)照品在0.0565～0.1695μg范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系，結(jié)果見(jiàn)表1。表1大黃素的線性范圍2.4、精密度試驗(yàn)精密吸取大黃素對(duì)照品溶液20μl，連續(xù)進(jìn)樣5次測(cè)定峰面積值，計(jì)算RSD=0.56%，結(jié)果見(jiàn)表2。表2大黃素的精密度試驗(yàn)結(jié)果（n=5）試驗(yàn)證明，本法精密度良好。2.5、穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液，每隔2小時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，結(jié)果表明：供試品溶液在所測(cè)定的10小時(shí)內(nèi)測(cè)得結(jié)果基本一致，大黃素的RSD=0.60%，見(jiàn)表3。表3穩(wěn)定性試驗(yàn)表52.8、試液的制備對(duì)照品溶液的制備精密稱取在105℃干燥至恒重的大黃素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含大黃素5μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。試驗(yàn)表明：供試品溶液至少在10小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。2.6、重復(fù)性試驗(yàn)取批號(hào)為050812的血脂靈膠囊，分別制備6份供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定大黃素的含量，結(jié)果見(jiàn)表4表4重復(fù)性試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)表明：本法重現(xiàn)性良好。2.7、回收率試驗(yàn)取已知大黃素含量（0.24mg/粒）的樣品（批號(hào)：050812）6份，每份約0.25g，分別精密加入大黃素對(duì)照品溶液（0.1445mg/ml）1ml，按上述供試品溶液的制備方法進(jìn)行制備，測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表5。2.8、試液的制備對(duì)照品溶液的制備精密稱取在105℃干燥至恒重的大黃素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含大黃素5μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。供試品溶液的制備取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.45g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，加熱回流1小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液5ml，置具塞燒瓶中，蒸干，加2.5mol/L硫酸溶液10ml和三氯甲烷20ml，加熱回流2小時(shí)，分別取三氯甲烷液，水層用三氯甲烷振搖提取，合并三氯甲烷液，用水10ml洗滌取三氯甲烷液，置水浴上蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，取續(xù)液，作為供試品溶液。陰性對(duì)照品溶液的制備按處方組成，提取制何首烏、決明子外的其余藥材，按制備工藝要求，制成不含制何首烏、決明子的顆粒，按供試品溶液制備項(xiàng)下的方法，制成陰性對(duì)照品溶液。3、討論血脂靈膠囊，為血脂靈片改變劑型而成，其處方與血脂靈片相同，生產(chǎn)工藝為質(zhì)的改變，一粒膠囊相當(dāng)于一片片劑（所含生物量為2g）其[用法用量]與血脂靈片相同，參照2005年版中國(guó)藥典一部，血脂靈片[含量測(cè)定]項(xiàng)的含量限度的規(guī)定