創(chuàng)新型實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目結(jié)題材料

IL-13受體2融合蛋白在腫瘤靶向治療中的研究進(jìn)展，中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào)(已投稿，正IL-13對A549細(xì)胞IL-13R2表達(dá)及增殖和遷移的影響，南昌大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版（已用負(fù)責(zé)人 （公章 負(fù)責(zé)人 （公章 項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)使用年月日年月日年月日總計(jì)經(jīng)費(fèi)：0.58其中撥款： 萬其中自籌： 萬 項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)使用年月日年月日年月日總計(jì)經(jīng)費(fèi)：0.58其中撥款： 萬其中自籌： 萬 12RNA提取試劑，ELISA試劑盒等3資料4試驗(yàn)5協(xié)作6 編號南昌大學(xué)國家大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)研究報(bào)告IL-13R-mAb-綠膿桿菌外毒素A融合蛋項(xiàng)目名稱及編：■國家級：■編號南昌大學(xué)國家大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)研究報(bào)告IL-13R-mAb-綠膿桿菌外毒素A融合蛋項(xiàng)目名稱及編：■國家級：■項(xiàng)目類別□：□學(xué)院名稱第二臨床醫(yī)學(xué)院：項(xiàng)目組員：指導(dǎo)教師：資助金額5800：20126月20156起止年月：教務(wù)二〇一五年六月摘要目的IL-13對摘要目的IL-13對人肺腺癌細(xì)胞（A549）IL-13R2表達(dá)及增殖、遷移的影響，并構(gòu)建基因重組IL-13R2單克隆抗體-綠膿桿菌外毒素A融合蛋白表達(dá)載體及觀察其體外對腫瘤細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。方法實(shí)驗(yàn)分IL-13濃度組：0、10、20、50、100μg/L(IL13的刺激濃度)和時(shí)間組：12、24、48h(IL-13(20μg/L的刺激時(shí)間)。通qRT-PCRIL-13R2mRNA的表達(dá)，ELISA檢測各實(shí)驗(yàn)組分泌型IL-13R2(sIL-13R2)的表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)檢測胞膜型IL-13R2和胞內(nèi)型IL-13R2的表達(dá)，以評價(jià)不同劑量IL-13IL-13在不同時(shí)間條件下對人肺腺癌A549IL-13R2IL-13R2單克隆抗體基因與綠膿桿菌外毒素A基因；再將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿果1.IL-13A549qRT-PCRWesternblot、流式細(xì)胞術(shù)、MTT、Transwell和細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測發(fā)現(xiàn)A549IL-13R2IL-13在較低濃度（10、20ng/ml）A549IL-13R2的表達(dá)水平，而對增殖和遷移無顯著影響；在較高濃度（50、100ng/ml）時(shí)對IL-13R2的上調(diào)作量依賴性，sIL-13R2水平無明顯改變、mIL-13R2表達(dá)略有增加、胞內(nèi)型IL-13R2水平明顯下調(diào)。2.成功構(gòu)建IL-13R2單克隆抗體-綠膿桿菌外毒素A融0.05IL-13對人肺腺癌A549IL-13R2表達(dá)水平及增殖、遷移的影響具有“雙相IL-13R2IL-13sIL-13R2可作為肺腺癌早期的診斷及復(fù)發(fā)的監(jiān)測指標(biāo)；通過基因重組技術(shù)構(gòu)IL-13R2單克隆抗體-綠膿桿菌外毒素A[關(guān)鍵詞 IL-13；肺腺癌；A549；IL-13R2；sIL-13R2；mIL-AimHerein,weAimHerein,weaimtodemonstratetheeffectofIL-13R2expression,cellproliferationandmigrationofhumanlungadenocarcinomacellline(A549)afterIL-13stimulation.MethodsTheexperimentwasdividedintoIL-13groups:0,10,20,50,100μg/L(concentrationofIL-13)andtimegroups:12,24,48h(20μg/LIL-13stimulationtime).TheexpressionofIL-13R2mRNAofeachexperimentalgroupwasdetectedbyqRT-PCRtechnique,theexpressionofsecretedIL-13R2(sIL-13R2)intheexperimentalgroupswastestedbyELISA,theexpressionofmembranetypeIL-13R2andintracellularIL-13R2wasdetectedbyflowcytometry.TheexpressionofIL-13R2wasevaluatedindifferentdosesofIL-13andindifferenttimeconditionsonhumanlungadenocarcinomacelllineA549.ResultTheqRT-PCR,Westernblot,Wefoundthat:1）IL-13R2couldexpressinA549cells;2)IL-13upregulatedIL-13R2expressionatlowerconcentrations(10,20ng/ml)butdidn’tchangethecellproliferationandmigrationofA549;highIL-13concentrations(50,100ng/ml)couldnotupregulationtheexpressionofIL-13R2,whilesignificantlypromotedcellproliferationandmigrationofA549.3)Comparedwiththecontrolgroup,threekindsofIL-13R2phenotypesdisplayeddifferentadjustmentafterIL-13stimulation:A.Lowconcentrations(IL-13:10,20ng/ml)ofIL-13couldsignificantlyupregulatesIL-13R2,mIL-13R2andintracellularIL-13R2expressioninvarieddegrees;B.Highconcentrations(IL-13:50,100ng/ml)ofIL-13couldn’tchangethelevelofoverallIL-13R2andsIL-13R2,butupregulatedmIL-13R2expressionwhileintracellularIL-13R2levelsweresignificantlyreduced.ConclusionTheseresultssuggestedthattherewere"bipolarity"and"difference"inIL-13R2expression,cellproliferationandmigrationinhumanlungadenocarcinomaA549cellsafterIL-13stimulation;IL-13R2couldinhibittheeffectofIL-13inA549cells；IL-13R2canactasanindicatorearlydiagnosisandrecurrencemonitoringinhumanlungadenocarcinoma;GenerecombinationtechnologybasedIL-13R2monoclonalantibody-pseudomonasaeruginosaexotoxinAfusionproteincanbeusedformoleculartargetedtherapyinpatientswithlungIL-13;Lungadenocarcinoma;A549;IL-13R2;sIL-13R2;[KeyIL-13主要是由活化的II型輔助性T細(xì)IL-13主要是由活化的II型輔助性T細(xì)胞分泌的多效性細(xì)胞因子IL-13受體包括IL-13R1和IL-13R2，IL-13R1單獨(dú)IL-1313受體復(fù)合物，并激活Janus蛋白激酶/信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活I(lǐng)L-13R2為特異性的靶向受體來探索腫瘤治療新方法。本研人肺腺癌細(xì)胞A549為實(shí)qRT-PCR技術(shù)IL-13各度組(IL-13的刺激濃度)和各時(shí)間組：(IL-13(20μg/L的刺激時(shí)間)IL-13R2mRNA的表達(dá)，ELISA檢測各實(shí)驗(yàn)組IL-13R2(sIL-的表達(dá)，以評價(jià)IL-13以及IL-13在不同時(shí)間條件下對腺癌細(xì)胞IL-13R2表達(dá)的影響，并根據(jù)其三種亞型所具有的不A融合蛋白”靶向藥物體系，從而探討IL-13R2在抗腫瘤治療目錄摘 序 第目錄摘 序 第1章導(dǎo) 研究內(nèi) 研究方 第3章材料和方 材 主要試 3.2實(shí)驗(yàn)方 細(xì)胞培 總RNA定量與質(zhì)量鑒 RNA逆轉(zhuǎn) qRT- ELISA檢測可溶型IL-13R2含 流式細(xì)胞術(shù)檢測胞膜以及胞內(nèi)IL-13R2的表達(dá) IL-13R2單克隆抗體-A化3.2.12基因重組IL-13R2單克隆抗體-綠膿桿菌外毒素A融合蛋白抗腫瘤體外效 3.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處 第4章結(jié) 4.1IL-13R2表 瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA的完整 溶解曲 IL-13對A549細(xì)胞IL-13Ra2表達(dá)水平的影 IL-13對A549細(xì)胞sIL-13R2表達(dá)的影 IL-13對A549細(xì)胞mIL-13R2表達(dá)的影 IL-13對A549細(xì)胞胞內(nèi)型IL-13R2表達(dá)的影 IL-13對A549細(xì)胞增殖和遷移的影 IL-13R2單克隆抗體-AA549第5章討 1IL-13主要是由活化的II1IL-13主要是由活化的II型輔助T細(xì)胞分泌的多效性細(xì)胞因子,IL-13受4R形成異源二聚體后卻可形成高親和力的IL-13受體復(fù)合物，并激活Janus蛋白激酶/信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子(JAK/STAT)信號通路發(fā)揮功能[1-2]。IL-13R2已證實(shí)三者的相對比例不受總體水平的影響，且細(xì)胞膜表面與細(xì)胞內(nèi)的13R2之間可以相互循環(huán)。一般情況下IL-主要存在于細(xì)胞內(nèi)，但在IFN-?面，或以可溶性形式分泌至細(xì)胞外。IL-IL-IL-13R1更易IL-13結(jié)合，所以它能13R1IL-13JAK/STAT通路介導(dǎo)的纖維化過程,又由于胞漿尾很短而被視為“誘餌受體”[5-6]。但自從Fichtner-Feigl在《自然》雜志上報(bào)道IL-13可通過IL-13R2介導(dǎo)的信號通路參與轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforminggrowthfactorβ，TGF-β）的產(chǎn)生和組織纖維化[3]，越來越多的科學(xué)研究開始探索IL-13R2的信號功能，研究發(fā)現(xiàn)IL-13R2有著比僅作為“誘餌受體”更為復(fù)雜的IL-13R2在正常細(xì)胞不表達(dá)或者僅有低表達(dá)，而在腫瘤細(xì)胞有高表達(dá)[7]IL13R2為特異性的靶向受體來嗽、痰血、低熱、胸痛、氣悶等，所以很容易忽略，預(yù)后和遠(yuǎn)期生存率均不理X線、細(xì)胞學(xué)檢查、支氣管鏡檢查及剖胸等,但都有其應(yīng)用[19，20]1997年單克隆抗體Rituxin綠膿桿菌外毒素 aeruginosaexotoxinA）是由假單胞菌毒素分子DomainIa（結(jié)構(gòu)域Ia）作為受體識別功能域可與哺乳動物細(xì)胞膜受LPR（低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白）結(jié)合，一方面直接發(fā)揮毒性作用，另一方針對IL-13Ra2在腫瘤組織中的分子標(biāo)記特點(diǎn)，以及目前以IL-13為靶向分(1)首先對IL-13Ra2在肺癌發(fā)生及進(jìn)展中的作用與分子機(jī)制進(jìn)行研究。以人肺腺50、100μg/L(IL13的刺激濃度)和各時(shí)間組：12、24、48h(IL-13(20μg/L的刺激時(shí)間A549細(xì)胞總IL-13R2mRNA的表達(dá)，ELISA檢測各實(shí)驗(yàn)組分泌型IL-13R2(sIL-13R2)的表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)檢測胞膜IL-13R2和胞內(nèi)型IL-13R213R2表達(dá)的影響，探討IL-13對肺腺癌A549IL-13R2的表達(dá)水平及細(xì)毒素“IL-13Ra2-monoclonalAb-綠膿桿菌外毒素A融合蛋白”靶向藥物體系，2章研究內(nèi)容及過研究2章研究內(nèi)容及過研究.2研究方案2.2.2qRT-PCRIL-13R2mRNAI型膠原蛋白mRNA2.2.3ELISA檢測各實(shí)驗(yàn)組分泌型IL-13R2(sIL-13R2)的表達(dá)IL-13R2IL-13R2IL-13R2單克隆抗體-A融合蛋白構(gòu)建及其體外2.3技術(shù)路線qRT-PCR、ELISA、流式細(xì)胞檢測、MTT、Transwell、細(xì)胞劃痕實(shí)基因重組IL-13R2單克隆抗體-綠膿桿菌外毒素A融合蛋白表達(dá)載體構(gòu)建與離純化IL-13Ra2monoclonalAbIL-13Ra2monoclonalAbPAGE電泳、WB基因IL-13R單克隆抗體-綠膿桿菌外毒素融合蛋白抗腫瘤體內(nèi)外效MTTIL-13Ra2monoclonal材料和方法33.1材料3.1.1主要試劑（1）細(xì)胞美國Hyclone公司美國Peprotech白酶-Cell（2）逆轉(zhuǎn)qPCRTotalRNA材料和方法33.1材料3.1.1主要試劑（1）細(xì)胞美國Hyclone公司美國Peprotech白酶-Cell（2）逆轉(zhuǎn)qPCRTotalRNAPrimeScriptSYBR（3）ELISA（4）流式細(xì)胞（4）Westernblot檢測Bradford法蛋白定量試劑盒一抗兔抗IL-13R2IgG二抗羊抗兔IgG-美國Abcam公司（5）特異性引物列GenBankReverseSequence（5’-3）IL-NMβ-NM3.1.2主要實(shí)驗(yàn)儀器PRISM7500Real-TimeBIO-RADMylyderPCR3.1.2主要實(shí)驗(yàn)儀器PRISM7500Real-TimeBIO-RADMylyderPCRDP73顯微鏡成像系統(tǒng)SW-CJ-2FD超凈工作臺Allegra-6R美國Bio-Rad公司Bio-Rad公司MLS-3020高壓滅菌鍋BS400S電子天平-80冰DYY-III-8B芬蘭Labststems公司美國BD公司儀3.2實(shí)驗(yàn)方法3.2.1主要試劑配制方法1DMEM（Dulbecco‘smodifiedEagle‘smedium）高糖基80mL入無菌的分液瓶中，加入20mL滅菌過濾的胎牛血清以及0.1mL青鏈霉素混合濃縮液（全培100μg/mL，用酸/氫氧化鈉溶液滴定調(diào)整pH值到7.2，搖勻并密封4℃保存。用完后再次配制新PBS11L4℃8g；Na2HPO43.48g;KCl0.2g；K2HPO40.2g34、IL-13溶液5無核酸酶水：1mLDEPC999mL37℃密封過夜，電泳緩沖液1×TBE：將無核酸酶水：1mLDEPC999mL37℃密封過夜，電泳緩沖液1×TBE：將20mL電泳緩沖液（5×TBE）加入80mL核酸酶水即配成電泳緩沖液（1×TBE1LTBE1Tris54g、27.5mL及0.01molEDTA。瓊脂糖凝膠：1.2g瓊脂糖融于100mL1×TBE，微波加熱3min后，冷卻至60℃以下，5μLEB（10mg/mL。使用前將所有的試劑盒標(biāo)本緩慢均衡至室溫（18-25標(biāo)準(zhǔn)品：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0.5ml，蓋好后室溫靜止約10min，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為20ng/ml,5ng/ml,2.5ng/ml,1.25ng/ml,O.625ng/ml,0.312ng/ml,（0ng/ml）3)檢測稀A及檢測B：用6ml蒸餾水或去離子水將6ml濃度4)檢測A及檢測A及B在使用前少A或B1：100稀釋，充分混勻，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次試驗(yàn)所需的總濃洗滌580ml蒸餾水或去離子水將20ml濃洗滌液稀釋至600ml，進(jìn)行30倍稀釋。TMB3.2.21吸管輕輕吹打至細(xì)胞完全從瓶壁脫落，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管，8002培養(yǎng)瓶細(xì)胞生長密度約75％時(shí)將細(xì)胞傳代接種于六孔板，各組細(xì)胞孔數(shù)為六PBS，2培養(yǎng)瓶細(xì)胞生長密度約75％時(shí)將細(xì)胞傳代接種于六孔板，各組細(xì)胞孔數(shù)為六PBS，各孔加入新鮮的不完全培養(yǎng)基（不含血清）2ml，饑餓12-24h，棄培養(yǎng)310、2050100ng/mlIL-13A54920ng/mlIL-13A5491224、48h3.2.3總RNA定量與質(zhì)量離心管頭等用配制好水浸泡過高溫高壓消毒烘干備用TotalRNAKitIIRNA，離心5min，棄上清。1mlRNA-SolvReagent2-1.5ml上放置10min。300μLRNAWashBufferI（試劑C）至吸附柱，按上述條件離心，棄濾液。將已配制好的DNase消化液（試劑B）轉(zhuǎn)移至吸附柱膜的中央，室溫下靜置15分鐘。400μLRNAWashBufferI（9.500μLRNAWashBufferII（D）洗滌吸附柱，按上述條件離心，去除濾液。11000/min柱3min，甩干吸附柱內(nèi)基質(zhì)以除去乙醇。9.500μLRNAWashBufferII（D）洗滌吸附柱，按上述條件離心，去除濾液。11000/min柱3min，甩干吸附柱內(nèi)基質(zhì)以除去乙醇。度值來檢測RNA的質(zhì)量。并按以下公式計(jì)算RNA純度和濃度。1.6,說明RNA3.2.4RNA逆轉(zhuǎn)錄225×PrimeScriptRTMasterTotal42RNaseFree14PCR155（保存3.2.5qRT-PCR13PCR3Real-timeQuantitativePCRSYBRPremixExTaq（2×）PCRForwardPrimer（10μM）PCRReversePrimer（10μM）13PCR3Real-timeQuantitativePCRSYBRPremixExTaq（2×）PCRForwardPrimer（10μM）PCRReversePrimer（10μM）ROXReferenceDyeII（50×）cDNA模板dH2O（滅菌蒸餾水10.00.40.40.42.06.820.02、將配置好的PCR反應(yīng)液放入ABIPRISM7500Real-TimePCRPCR 402)3.2.6Western胰酶消化法消化、重懸細(xì)胞，PBS33μlPMSF300μl裂解液提取蛋白，低溫高速離心后取上清液先進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳；半干轉(zhuǎn)3.2.7ELISA檢測可溶型IL-13R2含量1.7上覆膜，372每孔加檢測溶液A100ul，酶標(biāo)板加上覆膜，371小時(shí)35.每孔加檢測溶液B100ul，加上覆膜，3730min5的前5的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色后3-4孔梯度不明顯時(shí)終止。50ul450nm波長條件下吸光度值(3個(gè)復(fù)孔取平均值)。CurveExept軟件輔助建立標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算各樣本OD值對應(yīng)的sIL-13R2含量流式細(xì)胞術(shù)檢測胞膜以及胞內(nèi)IL-13R2的表達(dá)量2mlPBS，用吸管輕輕吹打成細(xì)胞懸液，洗滌，800各管分別加入PBS200ul1ul（1ug/ul）30min2ul15min,2mlPBS，用吸管輕輕吹打成細(xì)胞懸液，800轉(zhuǎn)/minTriton0.05100ul5min.各組加入PBS2ml800轉(zhuǎn)/min5min，棄上清。各管分別加入PBS200ul，輕輕吹打至細(xì)胞重懸2ul15min,3.2.9CO23724h5g/L570nm波長在酶聯(lián)免疫檢測儀上以空白孔（操作同實(shí)驗(yàn)組）A值（53次3.2.10細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)24200μm無菌槍頭在每個(gè)長滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶單1~2道痕，PBS洗去脫落的細(xì)胞后換無血清培養(yǎng)基據(jù)悉培養(yǎng)；在顯微鏡下觀察劃痕修復(fù)的過程，并分別取0h、24h、48h72h拍照記錄，比3.2.11基因IL-13R2單克隆抗體-綠膿桿菌外毒素A融合蛋白表達(dá)載體構(gòu)建與分離純化1）RT-PCR法擴(kuò)增IL-Ab基因片段，TA克隆法實(shí)現(xiàn)與質(zhì)粒限制性內(nèi)切酶酶切圖譜分析重組質(zhì)粒，DNA測序保證重組質(zhì)粒IL-13R2monoclonalAb插入片段的正確性；IL-13R2monoclonalAb毒素A（商品化產(chǎn)品）的質(zhì)粒DNA，純化后將兩者的片段連入質(zhì)粒載體即構(gòu)建成融工程菌標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)后收集菌液并進(jìn)行破菌處理以獲取“IL-13R2單克隆抗3.2.12基因重組IL-13R2單克隆抗體-綠膿桿菌外毒素A融合蛋白抗腫瘤體外效應(yīng)96（105/ml）后加入無血清培養(yǎng)基與系列稀釋的“IL-13R2monoclonalAbA3.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。各指標(biāo)間的比較采用Dunnett-t檢驗(yàn)。4章結(jié)果4.1IL-13R2表達(dá)4.1.14章結(jié)果4.1IL-13R2表達(dá)4.1.1瓊脂糖凝膠電泳RNA的完整性1所示，18S，28S兩條帶清晰且無明顯彌散帶，28S：18S亮度接2：1RNA結(jié)構(gòu)完整沒有降解?？俁NA的純度鑒定結(jié)果顯示，總RNA260nm/280nm1.85-2.1之間；260nm的吸光度均大于0.1RNA中的蛋白質(zhì)、DNA、酚類殘留較低，RNAPCRFig1.RNAanalysisbyagargel4.1.2溶解曲線2所示，為2對引物合成的特異性產(chǎn)物的溶解曲線負(fù)一次微分，2組特2Fig.2Thedissolution IL-13A549細(xì)胞IL-13Ra2表達(dá)水平的影響3AA549IL-13R2；IL-13在低濃度（IL-10、20ng/ml）IL-13R2mRNA10、20ng/ml）IL-13R2mRNA條件下，對13：100ng/ml50ng/ml組3BFig.3EffectofIL-132stimulatedbyIL-13inA5494.2IL-13A549細(xì)胞sIL-13R2表達(dá)的影響如圖4，未受IL-13刺激且血清饑24h后的肺腺癌 細(xì)胞培養(yǎng)上清液和20ng/ml濃度時(shí)，對sIL- 的表可以檢測到sIL-13R2；IL-sIL-13R2表達(dá)水平的影響沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義Fig.4ExpressionofsIL-13R2stimulatedbyIL-13inA5494.3IL-13A549細(xì)胞mIL-13R2表達(dá)的影響5，正常情況下肺腺癌A549細(xì)胞膜表面有mIL-13R21310μg/L濃度時(shí)可以上調(diào)mIL-13R220μg/LsIL-13R2表達(dá)的影響有所差異的是，sIL-13R2表達(dá)的影響有所差異的是，IL-1350ng/ml100ng/ml濃度mIL-13R2的表達(dá)量與未受刺激前相比，有輕度上調(diào)但不顯著（IL-100ng/ml組Fig.5ExpressionofmIL-13R2treatedbyIL-13inA549cellsweretreatedwith0、10、20、50、100ng/mlIL-13for24hourscontrolandgrouptodetecttheexpressionofmIL-4.4IL-13A549細(xì)胞胞內(nèi)型IL-13R2表達(dá)的影響IL-13R2IL-13＞Fig.6ExpressionofintracellularIL-13R2Fig.6ExpressionofintracellularIL-13R2treatedbyIL-13inA549cellsweretreatedwith0、10、20、50、100ng/mlIL-13for24hourscontrolandexperimentalFig.7TheexpressionratioofcellmembraneandintracellularIL-astimulationA549withconcentrationsofIL-13for24Fig.8ExpressionratioofcellmembraneandintracellularIL-13R2toA549cellswith20ng/mlIL-13afterdifferent4.5IL-13A549細(xì)胞增殖和遷移的影響9A9BIL-13在低濃度時(shí)（10ng/ml20ng/ml）A549的增殖和遷移沒有影響，而在高濃度（50ng/ml100ng/ml）時(shí)具有顯Fig.9CellproliferationandmigrationofA549stimulatedbyIL-Fig.9CellproliferationandmigrationofA549stimulatedbyIL-comparedwith0ng/mlgroup,comparedwith0ng/mlgroup.C：CellmigrationofA549stimulatedbyIL-13differentconcentrationswasobservedbycellscratchtestunderphase-contrastmicroscopyattheindicatedpoints(0h,24h,48hand4.6基因重組IL-13R2單克隆抗體-綠膿桿菌外毒素A融合蛋白對細(xì)胞增殖的10，與空白對照相比，基因重組IL-13R2單克隆抗體-綠膿菌外毒素A融合蛋白組A5490*10-10-1310- 10-10-10基因重組IL-13R2單克隆抗體-綠膿桿菌外毒素A融合蛋白對A549作用（*** 5章討論（15%Th1/Th2免疫平衡的角度對非小細(xì)胞性肺癌（尤其是肺腺癌）5章討論（15%Th1/Th2免疫平衡的角度對非小細(xì)胞性肺癌（尤其是肺腺癌）IL-13對細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)有賴與其兩種受體IL-13R1和IL-13R2的相互、胞內(nèi)型分子的能力，IL-13R2曾一度被認(rèn)為只是以誘騙受體（Decoyreceptor）IL-13（IL-13R1）的作用。但近年來在對卵巢癌、潰瘍性結(jié)腸炎-IL-13R2在本研究中我們發(fā)（1）IL-13R2可在肺腺癌細(xì)胞A549中表達(dá)。整體水平，還是sIL-13Ra2、mIL-13Ra2以及胞內(nèi)型IL-13Ra2的表達(dá)均有不同水平無明顯改變、mIL-13Ra2IL-13Ra2基于以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們認(rèn)為：IL-13對A549水平無明顯改變、mIL-13Ra2IL-13Ra2基于以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們認(rèn)為：IL-13對A549IL-13R2似“負(fù)反饋”的方式限制自身對肺腺癌A549的影響；而在較高濃度（第二相）在肺腺癌A549IL-13R2IL-132IL-13IL-13R2IL-1350、100ng/ml改變sIL-13R2水平，而僅調(diào)節(jié)胞內(nèi)型IL-13R2（作為“IL-13R2庫”）轉(zhuǎn)移313R2單克隆抗體-綠膿桿菌外毒素A綜上所述，我們在本課題中測定了肺腺癌A549IL-13IL-13R2的表達(dá)水平以及細(xì)胞增殖和遷移的影響，并分析了13R2IL-13R2[參考文獻(xiàn)JoshiBH,HogaboamC,Dover[參考文獻(xiàn)JoshiBH,HogaboamC,DoverP,etal.Roleofinterleukin-13incancer,pulmonaryfibrosis,andotherT(H)2-typediseases[J].VitamHorm,2006,74:479-504.StroberW,KitaniA,Fichtner-FeiglS,etal.ThesignalingfunctionoftheIL-13Ralpha2receptorinthedevelopmentofgastrointestinalfibrosisandcancersurveillance[J].CurrMolMed,2009,9(6):740-750.Fichtner-FeiglS,StroberW,KawakamiK,etal.IL-13signalingthroughthe13alpha2receptorisinvolvedininductionofTGF-beta1productionandFibrosis[J].NatMed,2006,12(1):99-106.FormentiniA,ProkopchukO,Str?terJ.Interleukin-13exertsautocrinegrowth-promotingeffectsonhumanpancreaticcancer,anditsexpressioncorrelatewithapropensityforlymphnodemetastases[J].IntJColorectalDis,2009，24:57–67.WilsonMS,RamalingamTR,RivollierA,etal.ColitisandintestinalinflammationinIL10-/-miceresultsfromIL-13Ralpha2-mediatedattenuationofIL-13activity.Gastroenterology2011,140(1):254-264.HeckerM,ZaslonaZ,KwapiszewskaG,etal.DysregulationoftheIL-13receptorsystem:anovelpathomechanisminpulmonaryarterialhypertension.AmJRespirCritCareMed2010,182(6):805-818.DavidM,FordD,BertoglioJ,etal.InductionoftheIL-13receptor-chainbyIL-4andIL-13inhumankeratinocytes:InvolvementofSTAT6,ERKandp38MAPKPathways[J].Oncogene,2001,20(46):6660-6668.陳孝平，汪建平.第八版外科學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社AndrewsAL,NasirT,BucchieriF,etal.IL-13receptoralpha2:aregulatorofIL-13andIL-4signaltransductioninprimaryhumanfibroblasts[J].JAllergyClinNguyenV,ConyersJM,ZhuD,GiboDM,HantganRR,LarsonSM,eta1.Anovelliganddeliverysystemtonon-invasivelyvisualizeandtherapeuticallyexploittheIL-13R2tumor-restrictedbiomarker[J].2012,14(10):1239-1253.WuAHandLowWC.Molecularcloningandidentificationofthehumaninterleukin13alpha2receptor(IL-13R2)promoter[J].NeuroOncol,2003,DainesMO,TabataY,WalkerBA,etal.LevelofexpressionofIL-13Ralpha 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)醫(yī)學(xué)部病理生理學(xué)教研室副教授，醫(yī)學(xué)博士，學(xué)技術(shù)進(jìn)步三等獎和江西省高?？萍汲晒泉劇Ｔ笇?dǎo)2010年南昌大學(xué)大學(xué)STAT6磷酸化對細(xì)胞周期和抑癌基因PTEN熊麗霞,女，40歲，南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)部病理生理學(xué)教研室副教授，醫(yī)學(xué)博士，學(xué)技術(shù)進(jìn)步三等獎和江西省高?？萍汲晒泉?。曾指導(dǎo)2010年南昌大學(xué)大學(xué)STAT6磷酸化對細(xì)胞周期和抑癌基因PTEN細(xì)胞IL-13R2表達(dá)和膠原蛋白合成的影響》及2010年國家大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)IL-13介導(dǎo)IL-13R2調(diào)控心臟纖維化TGF-β表達(dá)與膠原蛋白生成的分子機(jī)制研究，項(xiàng)目編81200069，國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目，2013112IL-13IKKNFκB對成纖維細(xì)胞自噬Caveolin-1的調(diào)控及其在乳腺癌發(fā)責(zé)人，2