ESI濃度型液相檢測器使用綜述

ESI的性質(zhì)ESI通常為濃度型檢測器

ESI的性質(zhì)ESI通常為濃度型檢測器12.1mmi.d.柱，流動相流速400mL/min,分流對信號的影響2.1mmi.d.柱，流動相流速400mL/min,分流2

對于上述表觀濃度型現(xiàn)象的解釋有兩種假設(shè)。第一種是隨著流速的降低，離子化效率增加，但是，隨著流速的降低，進入噴霧器的質(zhì)量流速也比例地降低，因此，信號保持恒定。

對于上述表觀濃度型現(xiàn)象的解釋有兩種假設(shè)。第一種是隨著流速3

ESI的濃度響應(yīng)說明：內(nèi)徑較細的色譜柱具較高的絕對靈敏度對于一定量的樣品，較低的流速意味著較長的信號采集時間柱后分流不導致明顯的信號丟失ESI的濃度響應(yīng)說明：4分流器的好處

可同時收集經(jīng)色譜純化的樣品

可同時使用與質(zhì)譜儀平行的另一檢測器

以較低的流速通過離子源以增加離子化效率

因為只有一小部分樣品進入離子源，因而有利于保持質(zhì)譜儀清潔

分流器的好處可同時收集經(jīng)色譜純化的樣品5靈敏度及線性范圍靈敏度及線性范圍6

ESI/MS的靈敏度取決于：柱內(nèi)徑、流速和溶劑組成待測成分的化學性質(zhì)，尤其是其表面活性，因為ESI的機制假定為一種表面離子化技術(shù)，具表面活性的化合物（例如去污劑）用ESI時具最高的響應(yīng)。這些化合物也是對其它表面活性較弱的分子的最有效的離子化抑制劑，因為它們占據(jù)了液滴表面

ESI/MS的靈敏度取決于：7分子能在溶液中生成離子也很重要，酸性化合物主要檢測其負離子，堿性化合物檢測其正離子。分子可通過多種途徑取得電荷，如加合物（adduct）的形成（M+NH4+，M+K+，M+Na+，M+Ac-等）及在噴霧器的金屬/液體表面氧化/還原。

分子能在溶液中生成離子也很重要，酸性化合物主要檢測其負離子，8ESI/MS的線性范圍約103至104，取決于樣品的性質(zhì)和溶液中的其它帶電物質(zhì)。當樣品濃度約10-5moL/L時，樣品離子信號達到上限，這是由于離子競爭有限的微滴表面電之故。繼續(xù)增加溶液中的樣品濃度，不能使處樣品離子在表面中繼續(xù)增加。為了進一步擴大線性范圍，主要是要設(shè)法降低檢測限。

ESI/MS的線性范圍約103至1049從LC轉(zhuǎn)換至LC/MS

從LC轉(zhuǎn)換至LC/MS10將現(xiàn)有的HPLC方法用于LC/MS時應(yīng)注意：

硫酸鹽、磷酸鹽和硼酸鹽等非揮發(fā)性緩沖劑,需用揮發(fā)性緩沖劑，如醋酸銨、甲酸銨、醋酸、三氟乙酸（TFA）、七氟丁酸（HFBA）、氨水氫氧化四丁基銨（TBAH）等代替。注意離子強度是個重要參數(shù)。

將現(xiàn)有的HPLC方法用于LC/MS時應(yīng)注意：硫酸鹽、磷酸鹽11pH值，當用揮發(fā)性酸、堿，如甲酸、乙酸、TFA和氨水等代替時，通常應(yīng)保持不變。離子對試劑，應(yīng)采用揮發(fā)性的，如HFBA，TBAH。但是，更換離子對試劑后，很難達到相同的保留時間。分子量較大的離子對試劑干擾較大。

pH值，當用揮發(fā)性酸、堿，如甲酸、乙酸、TFA和氨水等代替時12有機溶劑，大多數(shù)LC用的溶劑，尤其是反相色譜流動相，與LC/MS相匹配。非極性溶劑只能用于APCI。大多數(shù)色譜柱與LC/MS相匹配，但離子交換柱因用非揮發(fā)性流動相添加劑及高離子強度可能產(chǎn)生困難。疏水相互作用色譜需用鹽濃度梯度洗脫生物分子，非揮發(fā)性鹽與ESI/MS不相匹配。有機溶劑，大多數(shù)LC用的溶劑，尤其是反相色譜流動相，與LC/13柱后修飾：

調(diào)節(jié)pH值以優(yōu)化正或負離子檢測；

添加異丙醇以利于含水溶劑的去溶劑化和稀釋緩沖鹽以達到ESI/MS正常工作可接受的程度；

添加醋酸鈉（約50

mol/L）以使缺乏或只有弱質(zhì)子化位點的樣品陽離子化（M+Na+）；

柱后修飾：調(diào)節(jié)pH值以優(yōu)化正或負離子檢測；14用“TFAFix”改善靈敏度；用“TFAFix”改善靈敏度；增加流速，以達到穩(wěn)定的噴霧。如填充毛細管柱色譜或毛細管電泳，常需柱后添加適當溶劑（補足液流）以利工作；柱后分流，降低流速，這常在采用直徑較大的色譜柱，流速較高時使用。柱后衍生化，以提高質(zhì)譜響應(yīng)。用“TFAFix”改善靈敏度；用“TFAFix”改善靈敏15TFAFix可在柱后添加丙酸或乙酸（20%酸，80%異丙醇，流速0.1mL/min）。由于沸點（bp）的差別：bp丙酸>乙酸>三氟乙酸

在ESI溶劑蒸發(fā)過程中，TFA為沸點較高而離子對作用弱的丙酸或乙酸所取代，因而易于生成[M+H]+，得到較強的質(zhì)譜信號。

TFAFix可在柱后添加丙酸或乙酸（20%16CE/ESI/MS

CE/ESI/MS17CE/MS，在某種意義上，是近于理想的聯(lián)用技術(shù)：CE分離分析離子基本上基于其質(zhì)荷比及其在溶液中的不同淌度，而MS分離或分析離子基于其在氣相中的質(zhì)荷比的差異。但是，這兩種方法是在兩種完全不同的環(huán)境中研究離子的運動，CE采用中等電導的液體系統(tǒng)，而MS采用高真空條件。

CE/MS，在某種意義上，是近于理想的聯(lián)18與LC/MS接口相比較，有其不同的要求，例如：CE流速很低，緩沖系統(tǒng)具中等電導，分析毛細管兩端均需保持電接觸以確定CE電場梯度，溶質(zhì)區(qū)帶的毛細管外展寬必須減低至最小以保持高分離效能等。

與LC/MS接口相比較，有其不同的要求，例如：C19CE/ESI/MS的同軸夾套液流接口（A）及液體匯合接口（B）

CE/ESI/MS的同軸夾套液流接口（A）及液體匯合接口（B20在夾套液流接口中的夾套液體通常為甲醇、甲氧基甲醇、乙腈并含10~20%甲酸、乙酸或水，在CE毛細管（約140~180

mo.d.）和熔融二氧化硅或不銹鋼毛細管（約250

mi.d.）間流過。

對于ESI正離子操作方式，+2~5kV的電壓加在夾套液體上，夾套液體的流速為2~5

L/min。

在夾套液流接口中的夾套液體通常為甲醇、甲氧基甲醇、21液體匯合接口中，毛細管末端的電接觸可由貯槽液體建立（插入一電極），貯槽液環(huán)繞著分析毛細管和傳輸毛細管。兩毛細管之間的間隙調(diào)整至10~20

m,以兼顧既要有足夠的補足液體吸入傳輸毛細管，又要避免被分析成分擴散入貯槽導致?lián)p失。補足液體流是由重力驅(qū)動及高速霧化氣流產(chǎn)生的吸力的綜合作用產(chǎn)生的。

液體匯合接口中，毛細管末端的電接觸可由貯槽液體建22ESI離子流取決于溶液的電導，通常為0.1~0.3

A，只有約20~200pA的總離子流通過質(zhì)量分析器并被檢測。為防止毛細管末端的放電暈需用電子清掃劑（electronscavenger），最常用的是六氟化硫（50~200mL/min），除了抑制電暈放電外，還可增加負離子ESI的穩(wěn)定性。

ESI離子流取決于溶液的電導，通常為023CE分離有關(guān)問題

CE分離有關(guān)問題24緩沖液的濃度應(yīng)盡可能低并采用揮發(fā)性緩沖鹽，同時，其它非揮發(fā)的帶電成分的濃度也應(yīng)盡量低。與待測成分相互作用較強的緩沖劑將明顯降低檢測靈敏度，這是由于形成加合物的緣故。表面活性劑，如十二烷基磺酸鈉（SDS），在正