白芍標準湯劑的化學成分鑒定及其質量傳遞規(guī)律研究

白芍標準湯劑的化學成分鑒定及其質量傳遞規(guī)律研究摘要目的：系統(tǒng)研究白芍水煎液的化學物質基礎，建立同時適用于白芍飲片及其標準煎液的多指標含量測定方法，結合轉移率指標揭示兩者之間的質量傳遞規(guī)律。方法：采用高效液相色譜-四級桿/靜電場軌道阱高分辨質譜（UHPLC-Q-OrbitrapHRMS）對白芍標準湯劑的化學成分進行鑒別，根據(jù)化合物的質譜信息，將其與標準品、標準譜圖庫及文獻內容比對，標準譜圖庫可以與參考文獻進行比對,以達到對藥物的化學信息進行更迅速、精確地鑒定。采用高效液相色譜-二極管陣列檢查方法（UPLC-PDA）建立白芍藥材及其標準湯劑的含量測定方法，測定三批白芍飲片及其標準湯劑中芍藥苷、芍藥內酯苷的質量轉移規(guī)律。結果：鑒定了白芍標準湯劑中的33個化學成分，建立了同時測定芍藥苷和芍藥內酯苷的UPLC含量測定方法，可同時適用于白芍飲片其標準湯劑的檢測。芍藥苷從白芍飲片到白芍標準煎液的轉移率為70.70%～80.33%，芍藥內酯苷從白芍飲片到白芍標準煎液的轉移率為11.65%～24.67%。結論：本研究通過液質聯(lián)用技術鑒定了白芍標準煎液的化學物質基礎，建立了適用于白芍飲片及其標準湯劑中含有的芍藥苷和芍藥內酯苷的含量測定方法，明確了二者之間的質量傳遞規(guī)律，為含白芍標準煎液制劑的全程質量控制和質量評價方法的建立提供參考。關鍵詞白芍；液質聯(lián)用；質量傳遞規(guī)律；標準煎液StudyonchemicalcompositionidentificationandqualitytransferlawofpaeonialactiflorastandarddecoctionAbstractObjective:Tosystematicallystudythechemicalbasisofpaeonialactifloradecoction,establishamulti-indexcontentdeterminationmethodsuitableforpaeonialactifloradecoctionanditsstandarddecoction,andrevealthemasstransferlawbetweenthembycombiningthetransferrateandtheextractionrate.Methods:UHPLC-Q-OrbitrapHRMSwasusedtosystematicallyidentifythechemicalconstituentsofpaeonialactifloradecoction.AccordingtotheMS1andMS/MSinformationofthecompounds,andcomparedwiththestandard,standardspectrallibraryandreferences,thechemicalinformationofthedrugwasquicklyandaccuratelyidentified.UPLC-PDAwasusedtoestablishthecontentdeterminationmethodofpaeonialactifloradecoctionpiecesandpaeonialactiflorastandarddecoction,andthemasstransferrulesofpaeoniflorinandalbiflorininthreebatchesofpaeonialactifloradecoctionpiecesandtheirstandarddecoctionweredetermined.Results:33chemicalconstituentsinthestandarddecoctionofpaeonialactifloraweresystematicallyidentified,andaUPLCmethodforsimultaneousdeterminationofpaeoniflorinandalbiflorinwasestablished,whichcouldbeappliedtothedetectionofpaeonialactifloradecoctionanditsstandarddecoction.Thetransferrateofpaeoniflorinfrompaeonialactifloradecoctionpiecestopaeonialactiflorastandarddecoctionwas70.70%-80.33%,andthetransferrateofalbiflorinfrompaeonialactifloradecoctionpiecestopaeonialactiflorastandarddecoctionwas11.65%-24.67%.Conclusion:Inthisstudy,thechemicalbasisofthestandarddecoctionofpaeonialactiflorawasidentifiedbyliquidchromatography-massspectrometry,andthecontentdeterminationmethodsofpaeoniflorinandalbiflorinsuitableforpaeonialactifloradecoctionpiecesandtheirstandarddecoctionswereestablished.Thequalitytransferlawbetweenthetwowasclarified,whichprovidedareferencefortheestablishmentofthewholequalitycontrolandqualityevaluationmethodofthestandarddecoctionofpaeonialactiflora.KeywordspaeonialactifloraUPLC-MSqualitytransferlawstandarddecoction

目錄1前言 .1.1鞣質類化學成分鑒定鞣質類結構大多數(shù)由沒食子酸或其衍生物與葡萄糖結合而成，沒食子酸碎片[Gallicacid-H]-可用于此類成分的靶向識別（見圖2）。在保留時間為6.43min下，準分子離子峰m/z169.013[M-H]-在負離子模式下，脫去-CO2后形成特征碎片m/z125，再脫去-H2O形成m/z107-等碎片峰，根據(jù)元素組成分析，該化合物分子式C7H6O5，相對分子質量理論值為169.0143，實測值為169.013，據(jù)此推測該化合物為沒食子酸。常見的中藥如菝葜、白蘞、半夏、赤芍、牡丹皮、木瓜、山茱萸都含有該成分。圖2單寧化合物可能的裂解規(guī)律4.1.2單萜苷類化學成分鑒定單萜苷結構通常由苯甲酸基、α-蒎烯基和葡萄糖基三部分構成，在HCD裂解過程中通常斷裂三個部分直接相連的化學鍵。以芍藥苷為例，其分子離子峰m/z479.1559[M-H]-，裂解過程逐步產生苯甲酸[C7H5O4-]和α-蒎烯[C9H9O3-]的特征碎片（見圖3）。圖3單萜苷類化合物可能的裂解規(guī)律4.2白芍質量傳遞規(guī)律研究4.2.1方法學考察4.2.2專屬性試驗測得樣品色譜圖（見圖4）。檢測空白溶液時，未發(fā)現(xiàn)與對照品及白芍藥材中芍藥苷、芍藥內酯苷成分保留時間相同的色譜峰，表明空白溶液對這兩種待測成分均沒有干擾，說明該方法的專屬性良好。

1:芍藥內酯苷；2：芍藥苷A:空白50%乙醇；B:混標溶液；C：白芍飲片供試品；D:白芍標準煎液供試品圖4白芍指紋圖譜4.2.3線性關系考察根據(jù)線性回歸方程（見圖5）和相關系數(shù)（見表5）可以得知，芍藥苷和芍藥內酯苷在實驗條件下表現(xiàn)出良好的線性關系。指標成分線性關系R2線性范圍芍藥苷y=13948x+551660.99906.563μg/ml~210.000μg/ml芍藥內酯苷y=10145x+433800.99913.344μg/ml~107.000μg/ml表5芍藥苷、芍藥內酯苷的線性關系及線性范圍（b）（a）（μV*s（b）（a）（μV*s）（μV*s）（μg/ml）（μg/ml）圖5芍藥苷（a）、芍藥內酯苷（b）的線性關系

4.2.4精密度考察對于同一供試品溶液進行連續(xù)進樣6次，在實驗條件下，芍藥苷和芍藥內酯苷的峰面積RSD分別為0.15%和0.14%，表明儀器具有良好的精密性（見表6）。表6精密度考察指標成分芍藥內酯苷芍藥苷111833651503121182185157523118679516216411859651642251183605145676118549516164RSD0.15%0.14%4.2.5重復性考察同一樣品，制備6份供試品溶液，測定其中的芍藥苷、芍藥內酯苷含量。結果顯示，供試品中芍藥苷、芍藥內酯苷含量的RSD（n=6）分別為0.74%、0.55%，表明供試品溶液制備方法重復性良好（詳見表7）。表7重復性考察指標成分芍藥內酯苷芍藥苷111833651503121188695198213119295512713411721251863651173895138986119058514052RSD0.74%0.55%

4.2.6穩(wěn)定性考察供試品溶液室溫存放30小時后，供試品中芍藥苷、芍藥內酯苷含量峰面積的RSD分別為0.61%、0.43%，表明供試品溶液在24小時內具有較好的穩(wěn)定性。（見表8）表8穩(wěn)定性考察指標成分芍藥內酯苷芍藥苷0h1183365150314h11908251240410h11895151497918h11811151487624h11770951724630h117176510962RSD0.61%0.43%4.2.7中間精密度考察 3位不同實驗人員分別制備5份供試品溶液，芍藥苷、芍藥內酯苷的峰面積RSD分別為0.69%和0.47%，小于3%,說明方法中間精密度好（見表9）。表9中間精密度考察指標成分芍藥內酯苷芍藥苷111833651503121176975137433119117510035411775651822451177925173496117792516113711863251704081184195154439119235509881101186445145671111909351374312117602519924131192835150311411944851436115118087516267RSD0.68%0.47%4.2.8加樣回收率考察芍藥苷、芍藥內酯苷的加樣回收率在99.81%～103.26%，RSD分別為3.42%，1.57%，結果表明本研究所建立的分析方法準確性良好（見表10）。表10加樣回收率考察名稱比例樣品量（μg）加標量（μg）實際測得量（μg）回收率平均回收率芍藥內酯苷1:17.397.3914.98102.76%98.20%1:17.397.3914.5897.33%1:17.397.3914.6197.70%1:1.27.398.86816.0296.80%1:1.27.398.86816.1398.22%1:1.27.398.86816.2599.92%1:0.87.395.91213.58103.75%1:0.87.395.91212.9395.01%1:0.87.395.91213.40101.35%芍藥苷1:132.9732.9765.94100.01%98.38%1:132.9732.9765.8899.82%1:132.9732.9765.4798.58%1:1.232.9739.56471.2195.99%1:1.232.9739.56473.44102.74%1:1.232.9739.56473.00101.40%1:0.832.9726.37659.44100.28%1:0.832.9726.37658.1296.29%1:0.832.9726.37659.1399.35%4.2.2白芍質量傳遞結果將所得各自芍藥苷及芍藥內酯苷色譜峰面積代入線性方程即得質量傳遞結果（見表11）。芍藥內酯苷質量分數(shù)轉移率芍藥苷質量分數(shù)轉移率白芍粗粉白芍標準煎液白芍粗粉→白芍水煎液白芍粗粉白芍標準煎液白芍粗粉→白芍水煎液浙江磐安白芍1.406%0.185%13.13%1.166%0.824%70.70%安徽亳州白芍0.953%0.161%24.67%2.487%1.866%75.01%四川中江白芍1.527%0.178%11.65%1.198%0.962%80.33%表11白芍質量傳遞結果5結論本次研究以芍藥苷、芍藥內酯苷兩個化學成分作為指標成分，是基于化學成分特有性而決定，白芍作為毛茛科芍藥屬植物，芍藥苷類為該屬植物最為主要的單萜苷類化合物，芍藥苷是芍藥屬植物的特征性成分之一，具有重要的化學分類學意義，它是芍藥屬從毛茛科中獨立出來成為一個獨立科和獨立屬的重要證據(jù)之一；是基于化學成分有效性而決定，其有效性主要從藥性和藥效兩方面入手，白芍性苦、酸，微寒，歸肝、脾經(jīng)，苦寒藥物主要以生物堿及苷類成分為物質基礎，其中白芍所含有的白芍苷類，是其苦寒性味的來源，白芍所含有的芍藥總苷類是其具有保肝以及止痛等作用的物質基礎，這與傳統(tǒng)藥效認為白芍具有柔肝止痛功能相同；是基于化學成分可測性而決定，2020年版的《中國藥典》明確規(guī)定了芍藥苷的測量方法及限度要求，綜上所述，白芍單萜類化合物與白芍的藥效密切相關，因此作為主要的藥效物質基礎，可被選為指標成分。本次研究以芍藥苷和芍藥內酯苷為指標成分，建立了一種專屬性的測定方法，這為白芍的質量評價標準的建立提供了科學依據(jù)。本次研究采用UPLC的方法對3批來自不同地區(qū)的白芍藥材及其標準湯劑進行含量測定，并計算其各自的芍藥苷、芍藥內酯苷的質量轉移規(guī)律。在此之前，首先建立指標成分含量測定的方法，確定其色譜條件，對照品及供試品溶劑的選擇與溶液制備的方法，再進行方法學的考察，確定方法的可行性，在確定了方法具有良好的專屬性、穩(wěn)定性等的基礎上，構建了白芍的指紋圖譜，標定了2個共有峰，指認為芍藥苷和芍藥內酯苷，并根據(jù)其共有峰相對峰面積差異，開展指標成分轉移率指標參數(shù)的計算。結果表明，芍藥苷的轉移率為70.70%～80.33%，芍藥內酯苷的轉移率為11.65%～24.67%，由于芍藥內酯苷酯鍵存在，使得其在水中溶解度降低，轉移率比芍藥苷的低。此次研究中使用超高效液相色譜-二極管陣列檢查方法(UPLC-PDA)對白芍樣品進行全波長的掃描，UPLC-PDA是一種高效液相色譜技術，能夠同時分離、定量、鑒定物質。PDA檢測器是一種分光光度計，它可以進行快速而準確的多波長分析，大大提高了分析樣品的效率和準確性。在UPLC-PDA檢測過程中，樣品通過色譜柱進行分離，通過PDA檢測器檢測每個樣品組分在不同波長下的光譜。檢測器可在各種波長下進行化合物檢測，從而生成一個光譜圖。這個光譜圖可以用于定性和定量分析，因為每個化合物的光譜圖是唯一的。通過比較白芍樣品的光譜圖與標準樣品或者數(shù)據(jù)庫中的光譜圖，可以確定樣品中的化合物種類和含量，并且在傳統(tǒng)的HPLC中等的檢測靈敏度進一步改善。綜合比較下，230nm處光譜的基線能更穩(wěn)定，色譜峰數(shù)目更多，吸收強度更均勻。因此，選擇230nm作為檢測波長。

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