蛋白質(zhì)變性與沉淀

關(guān)于蛋白質(zhì)變性與沉淀一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握蛋白質(zhì)變性與沉淀的原理及各種沉淀方法；

2.熟悉刻度吸量管的正確使用；

3.了解蛋白質(zhì)變性與沉淀兩者的關(guān)系。第2頁,共19頁，2024年2月25日，星期天二、實(shí)驗(yàn)原理

（一）蛋白質(zhì)沉淀原理蛋白質(zhì)溶于水形成穩(wěn)定的膠體溶液，維持蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素：

1.蛋白質(zhì)顆粒表面的水化膜；

2.蛋白質(zhì)顆粒表面的電荷。去除上述穩(wěn)定因素可使蛋白質(zhì)沉淀析出。第3頁,共19頁，2024年2月25日，星期天

蛋白質(zhì)沉淀析出常用的方法有等電點(diǎn)法、鹽析法、重金屬離子沉淀法、有機(jī)酸試劑沉淀法、有機(jī)溶劑沉淀法等。第4頁,共19頁，2024年2月25日，星期天（二）蛋白質(zhì)變性原理

蛋白質(zhì)受某些物理或化學(xué)因素的影響，空間結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，生物活性喪失。稱為蛋白質(zhì)變性。蛋白質(zhì)變性，分可逆；不可逆。第5頁,共19頁，2024年2月25日，星期天三、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑1.儀器試管、刻度吸量管、洗耳球等。2.試劑

5％蛋白質(zhì)溶液、

2.5％蛋白質(zhì)溶液、10％ZnSO4溶液、

o.1mol/LNaOH、1％三氯醋酸、無水乙醇、NaCl（固體）第6頁,共19頁，2024年2月25日，星期天四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及操作步驟1.重金屬鹽及有機(jī)酸類沉淀蛋白質(zhì)2.乙醇沉淀蛋白質(zhì)（一）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（二）操作步驟第7頁,共19頁，2024年2月25日，星期天1.重金屬鹽及有機(jī)酸類沉淀蛋白質(zhì)1）實(shí)驗(yàn)原理COO-NH3+POH-H+重金屬離子M+酸根X-COO-NH2PCOOHNH3+PCOO-M+NH2PCOOHNH3+X-PpH>pIpH<pIpI兩性離子負(fù)電荷正電荷鹽↓鹽↓第8頁,共19頁，2024年2月25日，星期天2）操作步驟試劑（滴）試管1試管2試管35%蛋白質(zhì)溶液2D2D2D0.1mol/LNaOH2D——10%ZnSO420D—20D1%三氯醋酸—20D—現(xiàn)象3）觀察、記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，并解釋之。第9頁,共19頁，2024年2月25日，星期天結(jié)構(gòu)記錄試劑（滴）試管1試管2試管35%蛋白質(zhì)溶液2D2D2D0.1mol/LNaOH2D——10%ZnSO420D—20D1%三氯醋酸—20D—現(xiàn)象

沉淀

沉淀

澄清第10頁,共19頁，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象分析

試管1中加入堿，其pH>pI，蛋白質(zhì)分子帶負(fù)電荷，與Zn2+結(jié)合生成不溶于水的鹽沉淀。試管2中加入酸，其pH<pI，蛋白質(zhì)分子帶正電荷，與三氯醋酸根結(jié)合生成不溶于水的鹽沉淀。試管3中只加有蛋白液和ZnSO4

蛋白質(zhì)分子因帶較少的正、負(fù)電荷，與Zn2+不反應(yīng)。第11頁,共19頁，2024年2月25日，星期天2.乙醇沉淀蛋白質(zhì)1）實(shí)驗(yàn)原理

乙醇溶解于水，破壞蛋白質(zhì)分子的水化膜，加入少量中性鹽抑制蛋白質(zhì)的解離，使電荷減少，沉淀更完全。第12頁,共19頁，2024年2月25日，星期天2）操作步驟試劑（mL）試管1試管22.5%蛋白質(zhì)溶液0.5mL0.5mL結(jié)晶NaCl—數(shù)粒（適量）無水乙醇1mL1mL現(xiàn)象3）觀察、記錄實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象，并解釋之。第13頁,共19頁，2024年2月25日，星期天結(jié)果記錄試劑試管1試管22.5%蛋白質(zhì)溶液0.5mL0.5mL結(jié)晶NaCl—數(shù)粒（適量）無水乙醇1mL1mL現(xiàn)象

沉淀沉淀充分第14頁,共19頁，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象分析

試管1中加入無水乙醇，破壞蛋白質(zhì)分子表面的水化膜，使蛋白質(zhì)沉淀。試管2中加入無水乙醇和少量的氯化鈉，不但破壞蛋白質(zhì)分子表面的水化膜，同時(shí)蛋白質(zhì)分子表面的電荷減少，沉淀更充分。第15頁,共19頁，2024年2月25日，星期天

五、注意事項(xiàng)

1.試劑瓶滴管不能交叉使用，否則污染試劑。

2.刻度吸量管不能交叉使用，否則污染試劑，影響反應(yīng)現(xiàn)象。

3.做完實(shí)驗(yàn)把把試劑按原樣擺放，試管和刻度吸量管沖洗干凈，桌面擦干凈，登記簽名。

4.值日生聽老師安排，認(rèn)真打掃，經(jīng)老師批準(zhǔn)才能離開實(shí)驗(yàn)室。第16頁,共19頁，2024年2月25日，星期天

六、思考題

1.臨床搶救重金屬中毒患者，為什么用雞蛋清或牛奶？

2.蛋白液中加入適量乙醇，為什么會(huì)產(chǎn)生沉淀？

3.蛋白液在堿性條件下加入ZnSO4，為什么會(huì)產(chǎn)生沉淀？

4.蛋白液中加入三氯醋酸

，為什么會(huì)產(chǎn)生沉淀？第17頁,共19頁，2024年2月25日，星期天

下次實(shí)驗(yàn)：

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