JJF 2023-2023 黃曲霉毒素快速檢測儀校準(zhǔn)規(guī)范

中華人民共和國國家計(jì)量技術(shù)規(guī)范JJF2023—2023黃曲霉毒素快速檢測儀校準(zhǔn)規(guī)范CalibrationSpecificationforRapidAflatoxinAnalyzers2023-03-15發(fā)布2023-09-15實(shí)施國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布JJF2023—2023一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一黃曲霉毒素快速檢測一一一一一一一一一一一一一一一一儀校準(zhǔn)規(guī)范JJF2023—2023CalibrationSpecificationforRapidAflatoxinAnalyzers歸口單位:全國物理化學(xué)計(jì)量技術(shù)委員會主要起草單位:中國計(jì)量科學(xué)研究院參加起草單位:北京市計(jì)量檢測科學(xué)研究院國家糧食和物資儲備局科學(xué)研究院本規(guī)范委托全國物理化學(xué)計(jì)量技術(shù)委員會負(fù)責(zé)解釋JJF2023—2023本規(guī)范主要起草人:馬康(中國計(jì)量科學(xué)研究院)趙海波(北京市計(jì)量檢測科學(xué)研究院)參加起草人:張宜文(北京市計(jì)量檢測科學(xué)研究院)王松雪(國家糧食和物資儲備局科學(xué)研究院)JJF2023—2023Ⅰ引言 (Ⅱ)1范圍 (1)2引用文件 (1)3術(shù)語 (1)4概述 (1)5計(jì)量特性 (2)5.1濃度示值誤差 (2)5.2測量重復(fù)性 (2)5.3檢出限 (2)6校準(zhǔn)條件 (2)6.1環(huán)境條件 (2)6.2測量標(biāo)準(zhǔn)及其他設(shè)備 (2)7校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法 (2)7.1校準(zhǔn)前準(zhǔn)備工作 (2)7.2濃度示值誤差 (3)7.3測量重復(fù)性 (3)7.4檢出限 (3)8校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá) (3)9復(fù)校時(shí)間間隔 (4)附錄A系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備及使用方法 (5)附錄B校準(zhǔn)原始記錄參考格式 (6)附錄C校準(zhǔn)證書內(nèi)頁參考格式 (8)附錄D儀器示值誤差測量不確定度評定示例 (9)JJF2023—2023Ⅱ本規(guī)范依據(jù)JJF1071—2010《國家計(jì)量校準(zhǔn)規(guī)范編寫規(guī)則》、JJF1001—2011《通用計(jì)量術(shù)語及定義》、JJF1059.1—2012《測量不確定度評定與表示》的相關(guān)規(guī)定編寫。本規(guī)范主要參考了GB2761—2017《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素限量》中黃曲霉毒素的限量要求;LS/T6402—2017《糧油檢驗(yàn)設(shè)備和方法標(biāo)準(zhǔn)適用性驗(yàn)證及結(jié)果評價(jià)一般原則》。本規(guī)范為首次發(fā)布。JJF2023—20231黃曲霉毒素快速檢測儀校準(zhǔn)規(guī)范1范圍本規(guī)范適用于基于酶聯(lián)免疫或免疫層析(膠體金/熒光)原理定量檢測黃曲霉毒素快速檢測儀的校準(zhǔn)。2引用文件本規(guī)范引用了下列文件:GB2761—2017食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素限量LS/T6402—2017糧油檢驗(yàn)設(shè)備和方法標(biāo)準(zhǔn)適用性驗(yàn)證及結(jié)果評價(jià)一般原則凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本規(guī)范;凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本規(guī)范。3術(shù)語下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1酶聯(lián)免疫分析法enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA采用間接競爭酶標(biāo)原理,將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。3.2膠體金免疫層析法colloidalgoldimmunochromatographyassay采用競爭抑制免疫層析的原理,樣本在層析過程中與膠體金標(biāo)記的特異性單克隆抗體結(jié)合,進(jìn)行免疫層析的定性和定量檢測方法。4概述黃曲霉毒素快速檢測儀(以下簡稱檢測儀)主要用于測定糧食、飼料、中藥、乳制品等中的黃曲霉毒素含量。其檢測原理分為兩種:一是ELISA法,樣本中的黃曲霉毒素與酶標(biāo)板上的黃曲霉抗原競爭黃曲霉毒素的抗體,用底物顯色后,樣本所對應(yīng)微孔的吸光度減小,吸光度值與樣本中的黃曲霉毒素含量呈負(fù)相關(guān);二是免疫層析(膠體金/熒光)法,樣品中的黃曲霉毒素在層析的過程中與膠體金/熒光標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合,從而抑制抗體和硝酸纖維素膜檢測線上的黃曲霉毒素偶聯(lián)物的結(jié)合,使得檢測線顯色或熒光強(qiáng)度降低,顯色或熒光強(qiáng)度與樣本中的黃曲霉毒素含量相關(guān)。檢測儀由光路系統(tǒng)、圖像傳感器或光電傳感器、試劑包(酶聯(lián)免疫試劑盒或免疫層析試紙條/卡)、信號處理系統(tǒng)和數(shù)據(jù)顯示系統(tǒng)組成,其結(jié)構(gòu)如圖1所示。JJF2023—20232圖1黃曲霉毒素快速檢測儀的結(jié)構(gòu)示意圖5計(jì)量特性5.1濃度示值誤差不超過±20%。5.2測量重復(fù)性5.3檢出限不大于2μg/L。注:本技術(shù)指標(biāo)僅作為參考,不作為合格性判定。6校準(zhǔn)條件6.1環(huán)境條件6.1.1環(huán)境溫度:(15~30)℃。6.1.2相對濕度:10%~80%。6.1.3供電電源:(220±22)V,(50±1)Hz。6.1.4應(yīng)無粉塵、振動及電磁場干擾。6.2測量標(biāo)準(zhǔn)及其他設(shè)備6.2.1標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用國家有證黃曲霉毒素B1溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),其相對擴(kuò)展不確定度應(yīng)不大于5%6.2.2容量瓶和移液器容量瓶符合A級要求,移液器檢定合格6.2.2容量瓶和移液器容量瓶符合A級要求,移液器檢定合格。6.2.3甲醇色譜級。7校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法校準(zhǔn)項(xiàng)目可根據(jù)被校儀器的預(yù)期用途選擇使用。7.1校準(zhǔn)前準(zhǔn)備工作根據(jù)使用說明書,檢查檢測儀功能及試劑包是否正常。使用試劑包進(jìn)行檢測時(shí),按說明書要求升至室溫或在恒溫孵育器中恒溫JJF2023—20233溶液。7.2濃度示值誤差依據(jù)使用說明書,將配制濃度為5.0μg/L、10.0μg/L和20.0μg/L的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液用試劑包進(jìn)行處理。將處理后的樣本放入被校檢測儀中,讀取儀器的濃度示值,每個濃度重復(fù)試驗(yàn)7次,按公式(1)計(jì)算檢測儀各濃度校準(zhǔn)點(diǎn)的示值誤差。 Δc×100%(1)式中:Δc—濃度示值誤差;ci—7次測量結(jié)果的平均值,μg/L;cs—標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度值,μg/L。7.3測量重復(fù)性測量重復(fù)性:采用7.2中濃度為5.0μg/L黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液的7次測量數(shù)據(jù),按照公式(2)計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差sr,即為檢測儀的測量重復(fù)性。 sr=ci-1c)2×100%(2)式中:sr—相對標(biāo)準(zhǔn)偏差;ci—檢測儀各次的測量值,μg/L;c—標(biāo)準(zhǔn)溶液7次測量結(jié)果的平均值,μg/L;7.4檢出限n—測量次數(shù),n=7.4檢出限用被校檢測儀連續(xù)測量空白樣品(如甲醇)10次,計(jì)算測量結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差,按公式(3)計(jì)算檢測儀的檢出限。LOD=c0+3s(3)式中:LOD—檢出限,μg/L;c0—空白樣品10次測量結(jié)果的平均值,μg/L;s—10次測量結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差,μg/L。8校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá)校準(zhǔn)結(jié)果應(yīng)在證書中反映。校準(zhǔn)證書內(nèi)頁格式見附錄C,校準(zhǔn)證書應(yīng)至少應(yīng)包含以下信息:a)標(biāo)題:“校準(zhǔn)證書”;b)實(shí)驗(yàn)室名稱和地址;c)進(jìn)行校準(zhǔn)的地點(diǎn)(如果與實(shí)驗(yàn)室地址不同);d)證書的唯一性標(biāo)識(如編號),每頁及總頁數(shù)的標(biāo)識;JJF2023—20234e)客戶的名稱和地址;f)被校對象的描述和明確標(biāo)識;g)進(jìn)行校準(zhǔn)的日期,如果與校準(zhǔn)結(jié)果的有效性和應(yīng)用有關(guān)時(shí),應(yīng)說明被校對象的接收日期;h)校準(zhǔn)所依據(jù)的技術(shù)規(guī)范的標(biāo)識,包括名稱及代號;i)本次校準(zhǔn)所用測量標(biāo)準(zhǔn)的溯源性及有效性說明;j)校準(zhǔn)環(huán)境的描述;k)校準(zhǔn)結(jié)果及其測量不確定度的說明;l)對校準(zhǔn)規(guī)范的偏離的說明;m)校準(zhǔn)證書或校準(zhǔn)報(bào)告簽發(fā)人的簽名、職務(wù)或等效標(biāo)識;n)校準(zhǔn)結(jié)果僅對被校對象有效的聲明;o)未經(jīng)實(shí)驗(yàn)室書面批準(zhǔn),不得部分復(fù)制證書的說明。9復(fù)校時(shí)間間隔由于復(fù)校時(shí)間時(shí)隔的長短是由儀器的使用情況、使用者、儀器本身質(zhì)量等因素所決定的,因此檢測儀的復(fù)校時(shí)間間隔由送校單位根據(jù)使用情況確定,建議不超過1年。當(dāng)檢測儀更換了配件及修理后,或?qū)ζ錂z測數(shù)據(jù)有懷疑時(shí),應(yīng)及時(shí)校準(zhǔn)。JJF2023—20235附錄A系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備及使用方法使用國家有證黃曲霉毒素B1溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稀釋配制的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,建議現(xiàn)用現(xiàn)配。A.1配制用移液器準(zhǔn)確移取表A.1所示不同體積的國家有證黃曲霉毒素B1溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[如GBW(E)100302,1.96μg/mL],至10mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度并搖勻,即可得到不同濃度黃曲霉毒素B1系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,如表A.1所示。表A.1黃曲霉毒素B1系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液序號取1.96μg/mL有證溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)體積/μL最終定容體積mL配制標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度值μg/L125105.02511010.031021020.0A.2標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)移液體積的計(jì)算配制一定體積的黃曲霉毒素B1系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,所移取的國家有證黃曲霉毒素B1溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的體積Vi按式(A.1)計(jì)算:(A.1)Vi=(A.1)式中:Vi—移取的國家有證黃曲霉毒素B1溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的體積,μL;cs,i—配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度值,μg/L;V—配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液定容體積,mL;c—國家有證黃曲霉毒素B1溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度,μg/mL。JJF2023—20236附錄B校準(zhǔn)原始記錄參考格式記錄編號:證書編號:委托單位單位地址校準(zhǔn)地點(diǎn)儀器型號生產(chǎn)廠家儀器編號儀器量程試劑包測量范圍試劑包批次校準(zhǔn)日期校準(zhǔn)依據(jù)環(huán)境溫度相對濕度校準(zhǔn)員核驗(yàn)員校準(zhǔn)用測量標(biāo)準(zhǔn)及其他設(shè)備1.校準(zhǔn)前準(zhǔn)備工作2.濃度示值誤差是否就緒(是:否:)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度μg/L儀器示值/(μg/L)平均值/(μg/L)示值誤差/%相對不確定度(k=2)5.010.0JJF2023—20237表(續(xù))標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度μg/L儀器示值/(μg/L)平均值/(μg/L)示值誤差/%相對不確定度(k=2)20.0測量重復(fù)性平均值μg/L標(biāo)準(zhǔn)偏差/(μg/L)相對標(biāo)準(zhǔn)偏差%3.檢出限次數(shù)12345空白樣品測量值/(μg/L)次數(shù)678910空白樣品測量值/(μg/L)平均值/(μg/L)標(biāo)準(zhǔn)偏差/(μg/L)檢出限/(μg/L)濃度示值誤差的測量不確定度:JJF2023—20238附錄C校準(zhǔn)證書內(nèi)頁參考格式1.濃度示值誤差標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度μg/L測量平均值μg/L示值誤差/%擴(kuò)展不確定度(k=2)5.010.020.02.測量重復(fù)性/%3.檢出限/(μg/L)JJF2023—20239附錄D儀器示值誤差測量不確定度評定示例D.1校準(zhǔn)條件D.1.1環(huán)境條件:22℃,相對濕度40%。D.1.2校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì):黃曲霉毒素B1溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)[GBW(E)100302],標(biāo)稱值為D.1.3被校準(zhǔn)設(shè)備:黃曲霉毒素快速檢測儀。1.96μg/mL,U=0.09μg/D.1.3被校準(zhǔn)設(shè)備:黃曲霉毒素快速檢測儀。D.2測量方法及測量模型按照附錄A配制濃度為5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,使用檢測儀分別測量相應(yīng)濃度點(diǎn)的示值誤差。測量時(shí)應(yīng)參照儀器說明書,采用配套試劑并孵育或恒溫至相應(yīng)溫度。每個標(biāo)準(zhǔn)溶液測定7次,按公式(D.1)分別計(jì)算儀器各濃度校準(zhǔn)點(diǎn)的示值誤差。D.2.1測量模型示值誤差的計(jì)算公式為: Δc×100%式中:Δc—濃度示值誤差;ci—7次測量結(jié)果的平均值,μg/L;cs—標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度值,μg/L。D.2.2不確定度的計(jì)算公式靈敏系數(shù)為:c1== c2==-(D.1)(D.2)(D.3)由公式(D.3)可知,儀器示值誤差的不確定度來源于由測量結(jié)果平均值引入的不確定度和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溶液引入的不確定度。各輸入量的不確定度之間彼此不相關(guān),根據(jù)不確定度傳播律可以得到公式(D.4)和公式(D.5)。u(Δc)·ui)2+-2(D.4)uc(Δc)[ur(ci)]2+[ur(cs)]2(D.5)儀器示值誤差的不確定度主要來源于由測量結(jié)果平均值引入的不確定度ur(ci)和由標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度ur（cs,i）,包括:1)黃曲霉毒素溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)認(rèn)定值引入的不確定度ur（cs）;2)溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)稀釋過程中可調(diào)移液器取液體積引入的不確定度JJF2023—202310ur（V1,i）;3)容量瓶定容體積引入的不確定度ur（V2）。由于在(15~30)℃范圍內(nèi),玻璃膨脹系數(shù)較小,所以由溫度引起的容量瓶的體積引入的不確定度可忽略。D.3不確定度分量的評定各不確定度分量來源及描述見表D.1。表D.1不確定度分量來源及描述不確定度分量不確定度來源分量描述ur(ci)測量結(jié)果平均值引入的不確定度測量重復(fù)性引入的不確定度ur（cs,i）標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)認(rèn)定值引入的不確定度ur（cs）移液器移液體積引入的不確定度ur（V1,i）容量瓶定容體積引入的不確定度ur（V2）D.3.1測量結(jié)果平均值引入的不確定度由儀器測量重復(fù)性引入的不確定度見表D.2。表D.2儀器測量結(jié)果的重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)溶液配制ciμg/L測量值/(μg/L)平均值ciμg/Lsr%12345675.05.335.315.225.285.235.285.275.260.7510.011.7411.7211.7111.6811.7711.7011.6211.530.4120.018.2218.2318.3018.3218.3518.2018.3118.430.32儀器測量重復(fù)性引入的不確定度:ur）==0.28%ur）==0.15%ur）==0.12%D.3.2標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度ur（cs,i）標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度ur（cs,i）主要來源于黃曲霉毒素溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)認(rèn)定值的不確定度、移液器移液體積引入的不確定度,以及容量瓶定容體積引入的不確定度。標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度計(jì)算公式為:ur（cs,i）=ur（cs）]2+ur（V1,i）]2+ur（V2）]2(D.6)式中:—有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)認(rèn)定值引入的相對不確定度;ur（V1,i）—移取iμL時(shí),可調(diào)移液器移液體積引入的相對不確定度;—10mL容量瓶定容體積引入的相對不確定度。JJF2023—202311D.3.2.1黃曲霉毒素溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)認(rèn)定值的不確定度由黃曲霉毒素溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書,黃曲霉毒素溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)認(rèn)定值的擴(kuò)展不確定度見表D.3。表D.3標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)值和擴(kuò)展不確定度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)值擴(kuò)展不確定度(k=2)黃曲霉毒素B1溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1.96μg/mL0.09μg/mLur（cs）==2.3%D.3.2.2移液器移液體積引入的相對不確定度配制濃度為5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L3個校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí),(20~200)μL的移液器分別移取了25μL、51μL、102μL的溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。溫度的變化引入的不確定度忽略不計(jì);移液器對應(yīng)移液體積的最大允許誤差分別為±0.8μL、±1.5μL、±2.0μL,按均勻分布,則由移液器移液體積引入的最大的相對不確定度為:ur1(V1)=×100%=1.9%ur2(V1)=×100%=1.7%ur3(V1)=×100%=1.2%D.3.2.3容量瓶定容體積引入的相對不確定度D.3.2.3.1容量瓶校準(zhǔn)對體積影響