胃癌耐藥細胞株SGC7901ADR S100A6基因轉(zhuǎn)染的研究的開題報告

胃癌耐藥細胞株SGC7901ADRS100A6基因轉(zhuǎn)染的研究的開題報告一、研究背景及意義胃癌是一種常見的惡性腫瘤，全球每年新發(fā)胃癌患者達到100萬，其中中國是胃癌的高發(fā)區(qū)之一，其患病率和死亡率均居世界前列。治療胃癌的主要方法是手術(shù)切除、化學(xué)藥物治療、放射治療等。然而，由于胃癌多發(fā)生在老年人身上，加之該腫瘤常常在患者身體狀況較差時才能及早發(fā)現(xiàn)，很多患者不能耐受手術(shù)治療，只能接受藥物治療。但是，藥物治療后會出現(xiàn)耐藥性，導(dǎo)致治療失敗。因此，研究胃癌藥物耐藥的分子機制對于擴大治療選擇、提高治療成功率具有重要意義。S100A6基因是一種小分子的膠原蛋白家族成員，主要分布在細胞核、細胞質(zhì)等部位，參與了多種細胞生命活動，如細胞增殖、分化、凋亡、信號傳導(dǎo)等。在腫瘤細胞中，S100A6基因過表達，可以促進腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移，而且與藥物耐藥性密切相關(guān)。已有研究表明，在胃癌細胞株中，S100A6基因的表達也較高。因此，本研究的目的是通過將S100A6基因轉(zhuǎn)染到胃癌耐藥細胞株SGC7901ADR中，探討S100A6基因在胃癌耐藥中的作用機制，為胃癌藥物耐藥性研究提供新的思路。二、研究方法1.胃癌耐藥細胞株的培養(yǎng)及藥物敏感性檢測選取胃癌藥物耐藥細胞株SGC7901ADR進行研究，采用MTT法檢測不同濃度的藥物對該細胞株的抑制率，以評估細胞對藥物的敏感性；采用CCK-8法檢測不同時間點細胞生長情況，建立胃癌藥物耐藥模型。2.重組質(zhì)粒的構(gòu)建在S100A6基因的CDS區(qū)引入限制酶切位點，PCR擴增并純化，將PCR產(chǎn)物與載體pEGFP-C1進行酶切，然后將片段并聯(lián)后變性作用驗證并測序確定突變的正確性。3.質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染采用基因轉(zhuǎn)染試劑（如Lipofectamine2000），將構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到SGC7901ADR細胞中，以達到穩(wěn)定表達的目的。4.基因表達的檢測采用實時熒光定量PCR和Westernblotting檢測S100A6基因在細胞中的表達，以及檢測胃癌細胞的相關(guān)信號通路與耐藥性的變化。5.對SGC7901ADR轉(zhuǎn)染S100A6基因的細胞進行化療藥物的敏感性和細胞增殖情況的檢測對轉(zhuǎn)染S100A6基因的SGC7901ADR細胞做不同化療藥物的藥敏試驗，以同時測定細胞增殖情況和藥物敏感性，以評估S100A6基因在胃癌耐藥中的作用。三、研究預(yù)期結(jié)果本研究通過將S100A6基因轉(zhuǎn)染到胃癌耐藥細胞株SGC7901ADR中，將探討S100A6基因在胃癌藥物耐藥性中的作用機制。預(yù)計研究結(jié)果將有以下幾個方面的發(fā)現(xiàn)：1.S100A6基因在胃癌耐藥細胞株SGC7901ADR中的表達得到穩(wěn)定和顯著上調(diào)。2.S100A6基因參與了胃癌耐藥性的形成。3.S100A6基因可能通過激活相關(guān)信號通路等途徑參與胃癌異質(zhì)性和進程的調(diào)節(jié)。4.通過調(diào)控S100A6基因的表達，可逆轉(zhuǎn)SGC7901