滅菌制劑與無(wú)菌制劑

關(guān)于滅菌制劑與無(wú)菌制劑教學(xué)內(nèi)容

第一節(jié)概述

第二節(jié)滅菌制劑與無(wú)菌制劑的相關(guān)技術(shù)和理論

第三節(jié)注射劑

第四節(jié)輸液

第五節(jié)注射用無(wú)菌粉末

第六節(jié)眼用制劑第2頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天第一節(jié)概述一、滅菌制劑與無(wú)菌制劑的定義和類(lèi)型滅菌制劑：指采用某一物理、化學(xué)方法殺滅或除去所有活的微生物的一類(lèi)藥物制劑。無(wú)菌制劑：采用某一無(wú)菌操作方法或技術(shù)制備的不含任何活的微生物的一類(lèi)藥物制劑。第3頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天

3、滅菌制劑和無(wú)菌制劑的分類(lèi)注射用制劑：注射劑、輸液、注射粉針等；眼用制劑：滴眼劑、眼用膜劑、軟膏劑、凝膠劑等；植入型制劑：植入片等；局部用外用制劑：潰瘍、燒傷及外傷用溶液、軟膏劑、氣霧劑等。手術(shù)用制劑：止血海綿劑和骨蠟等。第4頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、滅菌制劑與無(wú)菌制劑的質(zhì)量要求無(wú)菌無(wú)熱原靜脈注射、脊椎腔注射、一次用量超過(guò)5ml的注射劑可見(jiàn)異物和不溶性微粒，應(yīng)符合藥典規(guī)定。安全性非水溶劑和附加劑，須經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)無(wú)刺激性和毒性滲透壓等滲和等張pH與血液和組織相近穩(wěn)定性物理、化學(xué)和生物穩(wěn)定性降壓物質(zhì)須符合規(guī)定第5頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天第二節(jié)滅菌制劑與無(wú)菌制劑

的相關(guān)技術(shù)和理論一、水處理技術(shù)概述制藥用水包括：飲用水、純化水、注射用水及注射用水各種水的來(lái)源和質(zhì)量要求原水不能直接用于制藥飲用水用于藥材的漂洗、制藥用具的粗洗純化水用作配制普通制劑的溶劑或試驗(yàn)用水、滅菌或非滅菌制劑所用藥材的提取溶劑、非滅菌制劑用器具的精洗。注射用水又稱(chēng)重蒸餾水滅菌注射用水無(wú)菌五熱原。可直接用于臨床。第6頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天三、原水處理技術(shù)初濾和精濾石英砂濾、活性炭濾器及細(xì)過(guò)濾器而成的過(guò)濾器。電滲析法常用于原水處理。除去帶電荷的某些離子或雜質(zhì)，對(duì)不帶電荷的物質(zhì)除去能力差。常用于離子交換前的水處理。第7頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天依據(jù)：在電場(chǎng)作用下離子定向遷移及交換膜的選擇性透過(guò)當(dāng)原水含鹽量高達(dá)3000mg/L時(shí)，不宜采用離子交換法制備純化水，但電滲析法仍適用。它不用酸堿處理，較離子交換法經(jīng)濟(jì)。電滲析法常用于原水預(yù)處理，供離子交換法使用，以減輕離子交換樹(shù)脂的負(fù)擔(dān)。陰極陽(yáng)離子膜淡水區(qū)陰離子膜陽(yáng)極濃水區(qū)+——+++————++濃水區(qū)第8頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天

③反滲透法什么是反滲透？反滲透的結(jié)果是使水從濃溶液中分離出來(lái)有機(jī)物的排除率與其分子量有關(guān)，分子量大于300的化合物幾乎全部除盡，故可除去熱原。

除去有機(jī)物微粒、膠體物質(zhì)和微生物的原理，一般認(rèn)為是機(jī)械過(guò)篩作用。耗能低、水質(zhì)好、設(shè)備使用語(yǔ)保養(yǎng)方便第9頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天離子交換法：利用陽(yáng)、陰離子樹(shù)脂可以除去絕大部分陽(yáng)、陰離子，對(duì)熱原、細(xì)菌也有一定的清除作用。優(yōu)點(diǎn)：水質(zhì)化學(xué)純度高，所需設(shè)備簡(jiǎn)單，耗能小，成本低。對(duì)熱原、細(xì)菌也有一定的去除作用。缺點(diǎn)：除熱原效果不可靠，樹(shù)脂需定期更換或再生。離子交換法制得的離子交換水主要供蒸餾法制備注射用水使用，也可用于洗瓶，但不得用來(lái)配制注射液。陽(yáng)離子交換樹(shù)脂：氫型：RSO3-H+鈉型（穩(wěn)定）Na+

陰離子交換樹(shù)脂：氫氧型：RN+(CH3)3OH-氯型（穩(wěn)定）：Cl-陽(yáng)床脫氣塔（CO2）陰床

混合床第10頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天

大型離子設(shè)備圖第11頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天1.蒸餾法制備注射有水最經(jīng)典的方法。（1）蒸餾水器種類(lèi)：塔式和亭式蒸餾水器、多效蒸餾水器和氣壓式蒸餾水器。構(gòu)成：蒸發(fā)鍋（塔）、隔沫裝置和冷凝器缺點(diǎn)：耗能高，

效率低。

基本被淘汰。四、注射用水的制備技術(shù)第12頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天

②多效蒸餾水機(jī)特點(diǎn)：耗能低、產(chǎn)量高、質(zhì)量?jī)?yōu)。③氣壓式蒸餾水器它是以輸入部分外界能量而將低溫?zé)崮苻D(zhuǎn)化為高溫?zé)崮艿脑韥?lái)生產(chǎn)蒸餾水。第13頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.反滲透法(reverseosmosis)

一般情況下，一級(jí)反滲透裝置能除去一價(jià)離子90-95%，二價(jià)離子98-99%，同時(shí)能除去微生物和病毒，但除去氯離子的能力達(dá)不到藥典要求；二級(jí)反滲透裝置能徹底除去氯離子。第14頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天

3、綜合法制備注射用水自來(lái)水

砂濾過(guò)器活性碳過(guò)濾器細(xì)濾過(guò)器電滲析裝置（或反滲透裝置）陽(yáng)離子樹(shù)脂床脫氣塔陰離子樹(shù)脂床混合樹(shù)脂床蒸餾水機(jī)熱貯水器80C注射用水第15頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天4.注射用水的收集保存2009年GMP規(guī)定采用70℃保溫循環(huán)。注射用水的貯藏和輸送系統(tǒng)的清潔：80℃以上的注射用水在系統(tǒng)中循環(huán)0.5h以上，并同時(shí)開(kāi)啟各用水點(diǎn)及排放閥門(mén)3次以上，每次15s，一周一次。5.注射用水的檢查第16頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天二、液體的過(guò)濾技術(shù)（一）過(guò)濾是利用過(guò)濾介質(zhì)截留液體中混懸的固體顆粒而達(dá)到固液分離的操作。（二）過(guò)濾機(jī)制與影響因素過(guò)濾機(jī)制介質(zhì)過(guò)濾和濾餅過(guò)濾介質(zhì)過(guò)濾過(guò)濾作用：依靠截介質(zhì)的攔截作用過(guò)濾方式：表面過(guò)濾→顆粒被截留在介質(zhì)表面上

深層過(guò)濾→顆粒被截留在介質(zhì)孔道內(nèi)第17頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天濾餅過(guò)濾過(guò)濾時(shí)，固體粒子聚集在過(guò)濾介質(zhì)表面形成濾餅。濾餅：起攔截作用過(guò)濾介質(zhì)：支撐濾餅的作用目標(biāo)物：濾餅層或?yàn)V液第18頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天影響過(guò)濾的因素過(guò)濾速度：?jiǎn)挝粫r(shí)間通過(guò)單位面積的濾液量。V=Pπr4t/8

L影響濾速（v＝V/t）的因素：P↑，v↑；r↓，v↓；

↑，v↓；L↑，v↓增加濾速的方法：介質(zhì)上方加壓或介質(zhì)下方減壓；升溫；預(yù)濾；使雜質(zhì)顆粒變粗等。第19頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天（三）過(guò)濾器和過(guò)濾裝置根據(jù)所施加的外加力分為重力過(guò)濾器、真空過(guò)濾器、壓力過(guò)濾器根據(jù)操作方式分為間歇和連續(xù)過(guò)濾器根據(jù)過(guò)濾介質(zhì)分為砂濾棒、垂熔玻璃、微孔濾膜、板框過(guò)濾器等。①砂濾棒(硅藻土濾棒和多孔素瓷濾棒)特點(diǎn)：適于低粘度藥液；價(jià)廉易得，但易脫砂，對(duì)藥液的吸附性強(qiáng)，難清洗，適用于大生產(chǎn)中的脫炭。第20頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天②垂熔玻璃濾器(垂熔玻璃漏斗、濾器和濾棒)

使用完畢用水抽洗，并以1%-2%硝酸鈉硫酸液浸泡處理。

③微孔濾膜過(guò)濾器理化性質(zhì)：熱穩(wěn)定性和化學(xué)性能穩(wěn)定。膜材質(zhì)：：醋酸纖維濾膜、硝酸纖維濾膜、聚酰胺濾膜、聚四氟乙烯濾膜等用途：注射劑精濾和除菌過(guò)濾優(yōu)點(diǎn)：孔徑小，截留能力強(qiáng)；孔徑大小均勻，不易泄漏；濾速快；濾膜無(wú)介質(zhì)的遷移；無(wú)交叉污染。缺點(diǎn)：易堵塞，有些濾膜化學(xué)性質(zhì)不理想。規(guī)格：孔徑0.220.450.8μm應(yīng)用：一般注射液的過(guò)濾：0.65~0.8μm

除菌過(guò)濾0.22μm第21頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天其他過(guò)濾器如超濾裝置、鈦濾器、多孔聚乙烯燒管過(guò)濾器等。在注射液生產(chǎn)中，一般采用二級(jí)過(guò)濾：

預(yù)濾(砂濾棒、垂熔玻璃漏斗、板框式壓濾機(jī)或預(yù)濾膜)→精濾(濾膜)。第22頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天板框式壓濾機(jī)(多用于注射劑預(yù)濾)面積大，截留量多，可用于粘性大、濾餅可壓縮的各種物料的過(guò)濾，特別適用于含少量微粒的待濾液，在注射劑生產(chǎn)中多用于預(yù)濾，缺點(diǎn)是裝配和清洗麻煩，容易滴漏。第23頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天（四）常見(jiàn)的過(guò)濾方式高位靜壓過(guò)濾適用于生產(chǎn)量不大、缺乏加壓或減壓設(shè)備的情況。壓力穩(wěn)定濾速慢減壓過(guò)濾過(guò)濾介質(zhì)下部減壓的操作，稱(chēng)抽濾加壓過(guò)濾壓力穩(wěn)定、濾速快、質(zhì)量好、產(chǎn)量高，多用于藥廠(chǎng)大量生產(chǎn)。第24頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天1.熱原熱原（pyrogens）：注射后能引起人體特殊致熱反應(yīng)的物質(zhì)，是微生物產(chǎn)生的一種內(nèi)毒素。

產(chǎn)生來(lái)源：大多數(shù)細(xì)菌（革蘭氏陰性桿菌致熱能力最強(qiáng)）、霉菌、病毒。

組成：熱原=內(nèi)毒素（endotoxin）=脂多糖(lipopolysaccharide)、磷脂、蛋白質(zhì)

致熱反應(yīng)：產(chǎn)生發(fā)冷、寒戰(zhàn)、體溫升高、惡心嘔吐等不良反應(yīng)，有時(shí)體溫可升至40℃，嚴(yán)重者出現(xiàn)昏迷、虛脫，甚至有生命危險(xiǎn)。三、熱原的去除技術(shù)第25頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.熱原的性質(zhì)(1)耐熱性

60℃1h無(wú)影響，100℃不降解，180℃3～4h、200℃60min、250℃30-45min或650℃1min可使熱原徹底破壞。在通常注射劑的熱壓滅菌中不易被破壞。(2)濾過(guò)性體積1～5nm之間，一般濾器均不可通過(guò)，但活性炭可以吸附熱原。(3)吸附性多孔性活性炭可吸附熱原(4)水溶性磷脂結(jié)構(gòu)上連接有多糖，熱原可溶。(5)不揮發(fā)性熱原本身不揮發(fā)，但在蒸餾時(shí)，可隨水蒸汽霧滴帶入蒸餾水。（6）其它能被強(qiáng)酸強(qiáng)堿、強(qiáng)氧化劑、某些表面活性劑、超聲波破壞。第26頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天3.熱原的主要污染途徑(1)注射用水：是熱原污染的主要來(lái)源(蒸餾器結(jié)構(gòu)不合理，操作不當(dāng)，注射用水貯藏時(shí)間過(guò)長(zhǎng)都會(huì)污染熱原。)；(2)原輔料,如葡萄糖因貯存年久包裝損壞致污染熱原。(3)由于室內(nèi)衛(wèi)生條件差，操作時(shí)間長(zhǎng)，裝置不密閉，均增加污染細(xì)菌的機(jī)會(huì)，而可能產(chǎn)生熱原；(4)從容器、用具、管道和裝置等帶入，因此在生產(chǎn)中對(duì)這些容器用具等物要認(rèn)真處理，合格后方能使用。(5)有時(shí)輸液本身不含熱原，但仍發(fā)現(xiàn)熱原反應(yīng)。這往往是由于輸液器具(如輸液吊瓶、膠皮管等)污染所致。第27頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天4.熱原的去除方法1.高溫法：根據(jù)熱原的熱不穩(wěn)定性。對(duì)于注射用的針筒或其他玻璃器皿，在洗滌干燥后，于250℃加熱30分鐘以上，可以破壞熱原2.酸堿法：玻璃容器、用具還可用重鉻酸鉀硫酸清潔液或稀氫氧化鈉處理，可將熱原破壞3.吸附法：常用的吸附劑有活性炭，活性炭對(duì)熱原有較強(qiáng)的吸附作用，同時(shí)有助濾脫色作用，故在注射劑中使用較廣。常用量0.1%～0.5%;還可用活性炭與白陶土合用除去熱原4.蒸餾法利用熱原的不揮發(fā)性。第28頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天5.離子交換法：可靠性不強(qiáng)。國(guó)內(nèi)有用#301弱堿性陰離子交換樹(shù)脂10%與#122弱酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂8%成功地除去丙種胎盤(pán)球蛋白注射液中的熱原.6.凝膠過(guò)濾法：國(guó)內(nèi)有用二乙氨基乙基葡聚糖凝膠(分子篩)制備無(wú)熱原去離子水7.反滲透法：通過(guò)三醋酸纖維膜除去熱原.我國(guó)該技術(shù)還不成熟，只能用于原水處理。8.超濾法；3.0～15nm超濾膜。9.其他方法如二次以上濕熱滅菌，或適當(dāng)提高滅菌溫度和時(shí)間，以及微波等。第29頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天四、滲透壓調(diào)節(jié)技術(shù)

1.等滲與等張的概念

(1)等滲溶液(isoosmoticsolution)：系指與血漿滲透壓相等的溶液，屬于物理化學(xué)概念。注入機(jī)體內(nèi)的液體一般要求等滲，否則易產(chǎn)生刺激性或溶血等。

低滲溶液——紅細(xì)胞破裂，溶血現(xiàn)象高滲溶液——紅細(xì)胞萎縮肌內(nèi)注射可耐受0.5～3個(gè)等滲度的溶液，靜脈輸液要求等滲，脊髓腔內(nèi)注射必須調(diào)節(jié)至等滲。

第30頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天

(2)等張溶液(isotonicsolution)：系指滲透壓與紅細(xì)胞膜張力相等的溶液，屬于生物學(xué)概念。在等張溶液中既不會(huì)發(fā)生紅細(xì)胞體積改變，更不會(huì)發(fā)生溶血。等滲溶液不一定等張，等張溶液不一定等滲。在新產(chǎn)品的試制中，即使所配的溶液為等滲溶液，為了安全用藥，亦應(yīng)進(jìn)行溶血試驗(yàn)，必要時(shí)加入氯化鈉、葡萄糖等調(diào)節(jié)成等張溶液。

第31頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天2.滲透壓的調(diào)節(jié)方法常用的滲透壓調(diào)節(jié)方法：冰點(diǎn)降低數(shù)據(jù)法和氯化鈉等滲當(dāng)量法。(1)冰點(diǎn)降低數(shù)據(jù)法

一般情況下，血漿冰點(diǎn)值為-0.52℃，根據(jù)物理化學(xué)原理，任何溶液的冰點(diǎn)降到-0.52℃，即與血漿等滲。

W=(0.52-a)/b

式中，W為配制等滲溶液需加入等滲調(diào)節(jié)劑的百分含量；

a為藥物溶液的冰點(diǎn)下降度數(shù)；

b為用以調(diào)節(jié)的等滲劑1%溶液的冰點(diǎn)下降度數(shù)。第32頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天例1配制2%的鹽酸普魯卡因溶液100ml，用氯化鈉調(diào)節(jié)等滲，求所需氯化鈉的加入量。

查表可知，2%的鹽酸普魯卡因溶液的冰點(diǎn)下降度數(shù)a=0.12×2=0.24℃；1%氯化鈉溶液的冰點(diǎn)下降度數(shù)b=0.58℃，代入上式得：

W=(0.52-0.24)/0.58=0.48%

即配制2%的鹽酸普魯卡因溶液100ml，需加入氯化鈉0.48g調(diào)節(jié)等滲。第33頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天例3下列處方欲制成等滲溶液需加多少NaCl?氯霉素20gNaCl適量注射用水加至1000ml(已知：1%（g/ml）氯霉素水溶液的冰點(diǎn)下降值為0.06℃)第34頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天例4配制2％鹽酸普魯卡因溶液500ml,用氯化鈉調(diào)節(jié)等滲，求所需氯化鈉的加入量。（已知1％普魯卡因溶液的冰點(diǎn)下降度為0.12℃）第35頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天例5配制含2％鹽酸普魯卡因和1％利多卡因溶液500ml,用氯化鈉調(diào)節(jié)等滲，求所需氯化鈉的加入量。（已知1％普魯卡因溶液的冰點(diǎn)下降度為0.12℃，1％利多卡因溶液的冰點(diǎn)下降度為0.15℃）第36頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天

(2)氯化鈉等滲當(dāng)量法

系指與1g藥物呈等滲的氯化鈉質(zhì)量。

例配制2%的鹽酸麻黃堿溶液200ml，欲使其等滲，求需加入的氯化鈉或葡萄糖的量。

查表可知，1g鹽酸麻黃堿的氯化鈉等滲當(dāng)量0.28；無(wú)水葡萄糖的氯化鈉等滲當(dāng)量0.18，則：

氯化鈉的量=（0.9-0.28×2）×200/100=0.68g

葡萄糖的量=0.68/0.18=3.78g,

或=(5%/0.9%)×0.68=3.78g

即配制2%的的鹽酸麻黃堿溶液200ml，需加入氯化鈉0.68g或無(wú)水葡萄糖3.78g調(diào)節(jié)等滲。第37頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天例1已知1％普魯卡因溶液的氯化鈉等滲當(dāng)量為0.18，配制2％普魯卡因溶液500ml,需加入多少克氯化鈉？（1g鹽酸普魯卡因=0.18gNaCl，0.9%NaCl=血漿滲透壓）

w=(0.92*0.18)*500/100=(0.90.36)*5

第38頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天基本概念：

滅菌與無(wú)菌制劑：主要是指直接注入體內(nèi)或直接接觸創(chuàng)傷面、粘膜等的一類(lèi)制劑。

滅菌(sterilization)：應(yīng)用物理或化學(xué)等方法殺滅或除去所有致病和非致病微生物繁殖體和芽孢的手段。無(wú)菌(sterility)：指在任一指定的物體、介質(zhì)或環(huán)境中，不得存在任何活的微生物。五、滅菌與無(wú)菌技術(shù)第39頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天無(wú)菌操作法(aseptictechnique)：指在整個(gè)操作過(guò)程中利用或控制一定的條件，使產(chǎn)品避免被微生物污染的一種操作方法或技術(shù)。

防腐(antisepsis)：用物理或化學(xué)方法抑制微生物的生長(zhǎng)與繁殖的手段，亦稱(chēng)抑菌。對(duì)微生物的生長(zhǎng)與繁殖具有抑制作用的物質(zhì)稱(chēng)防腐劑或抑菌劑。消毒(disinfection)：用物理或化學(xué)方法殺滅或除去病原微生物的手段。對(duì)病原微生物具有殺滅或除去作用的物質(zhì)消毒劑。第40頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天熱力滅菌法包括干熱和濕熱滅菌法。

1）、干熱滅菌法（熟悉）

火焰滅菌法：指用火焰直接灼燒滅菌的方法。適用范圍：此法滅菌迅速、可靠、簡(jiǎn)便，適用于耐火焰材質(zhì)(如金屬、玻璃及瓷器等)的物品與用具，不適合于藥物的滅菌。（一）物理滅菌法第41頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天干熱空氣滅菌法：指用高溫干熱空氣滅菌的方法。(1)干熱滅菌條件：一般規(guī)定為160-170℃，2-4h；170-180℃，1h以上或250℃滅菌45min（從滅菌物品全達(dá)到特定溫度后開(kāi)始計(jì)時(shí)）。(2)適用范圍：耐高溫的玻璃和金屬制品以及不允許濕氣穿透的油脂類(lèi)(如油性軟膏基質(zhì)、注射用油等)和耐高溫的粉末化學(xué)藥品等的滅菌。(3)缺點(diǎn)：在干燥狀態(tài)下，熱穿透力弱，溫度不易均勻，由于滅菌溫度過(guò)高，不適用橡膠、塑料及大部分藥品。

第42頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天2）、濕熱滅菌法定義：指用在高溫高濕環(huán)境中滅菌的方法。如，利用飽和蒸汽、沸水或流通蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。優(yōu)點(diǎn)：由于蒸氣比熱大，穿透力強(qiáng)，容易使蛋白變性，同時(shí)還有滅菌效率高，操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，濕熱滅菌法是應(yīng)用最廣泛的一種滅菌方法。類(lèi)別：包括熱壓滅菌法、流通蒸氣滅菌法、煮沸滅菌法和低溫間歇滅菌等方法，根據(jù)藥品性質(zhì)進(jìn)行選用合適的方法。第43頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天（1）熱壓滅菌法（掌握）

定義：指用高壓飽和水蒸汽加熱殺滅微生物的方法。本法一般公認(rèn)為最可靠的濕熱滅菌法。滅菌條件：熱壓滅菌所需的溫度及與溫度相當(dāng)?shù)膲毫皶r(shí)間如下:

1)116℃，1.7atm(67kPa，7.1kg/cm2)，40min；2)121℃，2.0atm(97kPa，11kg/cm2)，30min；3)126℃，2.4atm(139kPa，14.1kg/cm2)，15min。

適用范圍：耐高溫和耐高壓蒸氣的所有藥物制劑、玻璃和金屬容器、瓷器、橡皮塞、濾膜過(guò)濾器等。第44頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天（2）流通蒸氣滅菌法定義：指在常壓下，采用100℃流通蒸氣加熱殺滅微生物的方法。滅菌條件：常壓下（1.0atm），100℃流通蒸氣，時(shí)間30-60min。

適用范圍：用于消毒及不耐高熱制劑的滅菌。

缺點(diǎn)：不能保證殺滅所有的芽孢，如破傷風(fēng)等厭氣性菌的芽孢，是非可靠的滅菌法。一般作為不耐熱無(wú)菌產(chǎn)品的輔助滅菌手段。

制備過(guò)程中要盡可能避免污染，這點(diǎn)必須充分注意。目前我國(guó)藥廠(chǎng)生產(chǎn)注射劑，特別是1-2ml注射劑及不耐高熱的品種，可考慮采用這種滅菌法。第45頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天（3）煮沸滅菌法定義：指將待滅菌物置沸水中加熱滅菌的方法。滅菌條件：沸水，時(shí)間30-60min。適用范圍：常用于安瓿、注射器、注射針頭等器皿的消毒。缺點(diǎn)：此法滅菌效果差，必要時(shí)加入抑菌劑，如三氯叔丁醇、甲酚等。第46頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天（4）低溫間歇滅菌法定義：指將待滅菌物置60-80℃的水或流通蒸汽中加熱60min，殺滅微生物繁殖體后，在室溫條件下放置24h，讓待滅菌物中的芽孢發(fā)育成繁殖體，再次加熱滅菌、放置，反復(fù)多次，直至殺滅所有芽孢。適用范圍：適合于不耐高溫、熱敏感物料和制劑。缺點(diǎn)：費(fèi)時(shí)、工效低、滅菌效果低。加適量抑菌劑，以增加滅菌效力。應(yīng)用本法滅菌的制劑或藥品，除本身具有抑菌能力者外，須加適量抑菌劑，以增加滅菌效力。第47頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天5）影響濕熱滅菌的因素1)微生物的種類(lèi)和數(shù)量：芽孢＞繁殖體＞衰老體每個(gè)容器的細(xì)菌數(shù)，控制在10個(gè)以?xún)?nèi)為宜；最初菌數(shù)愈少，達(dá)到滅菌時(shí)間愈短。整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程應(yīng)盡可能避免微生物污染，盡可能縮短生產(chǎn)過(guò)程，并力求在灌封后立即菌。2)蒸氣性質(zhì)：蒸氣有飽和、濕飽和、過(guò)熱三種。。。第48頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天3)滅菌時(shí)間與溫度：滅菌溫度增高，化學(xué)反應(yīng)速度增加；滅菌時(shí)間愈長(zhǎng)，起反應(yīng)的藥物愈多。因此，滅菌需要考慮殺死細(xì)菌和保證藥物有效性?xún)蓚€(gè)方面。在能達(dá)到滅菌的前提下，盡可能降低滅菌溫度和縮短滅菌時(shí)間。4)介質(zhì)pH：藥液pH對(duì)細(xì)菌的活性也有影響：一般微生物在中性液中耐熱性最大，在堿性溶液中次之，酸性不利于微生物的發(fā)育。所以，一般在生物堿鹽類(lèi)的注射液，因pH較低，用流通蒸氣滅菌即可。第49頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天定義：指采用過(guò)濾法除去微生物的方法。即藥物溶液通過(guò)無(wú)菌的除菌過(guò)濾器，除去活的或死的微生物而得到不含微生物的濾液。屬于機(jī)械除菌方法。濾膜的材質(zhì)分親水性和疏水性?xún)煞N，根據(jù)過(guò)濾物品的性質(zhì)及過(guò)濾目的來(lái)選材質(zhì)。適用范圍：適于對(duì)熱不穩(wěn)定的藥物溶液、氣體、水等物品的滅菌。2、過(guò)濾除菌第50頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天定義：采用輻射、微波和紫外線(xiàn)殺滅微生物和芽孢的方法。（1）紫外線(xiàn)滅菌法定義：采用紫外線(xiàn)（能量）照射殺滅微生物和芽孢的方法。屬于表面滅菌。滅菌條件：一般用于滅菌的紫外線(xiàn)波長(zhǎng)是200-300nm，滅菌力最強(qiáng)的是波長(zhǎng)為254nm的紫外線(xiàn)。適用范圍：紫外線(xiàn)進(jìn)行直線(xiàn)傳播，其強(qiáng)度與距離平方成比例地減弱，并可被不同的表面反射。適合于照射物表面滅菌、無(wú)菌室空氣及蒸餾水的滅菌；不適合于藥液的滅菌及固體物料深部的滅菌。3、射線(xiàn)滅菌法第51頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天普通玻璃可吸收紫外線(xiàn)，因此安瓿中藥物不能用此法滅菌。紫外線(xiàn)對(duì)人體如照射過(guò)久，能產(chǎn)生結(jié)合膜炎及皮膚燒灼等現(xiàn)象。一般均在操作前開(kāi)啟紫外線(xiàn)燈約半小時(shí)至一小時(shí)，然后進(jìn)行操作。第52頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天（2）微波滅菌法定義：系采用微波(頻率為300MHz-300kMHz)照射產(chǎn)生的熱能殺滅微生物和芽孢的方法。適用范圍：適合于液體和固體物料，對(duì)固體物料具有干燥作用。特點(diǎn)：微波能穿透到介質(zhì)和物料的深部，表里加熱一致，且具有低溫、常壓、高效、快速(2-3min)、低能耗、無(wú)污染、易操作、易維護(hù)，產(chǎn)品保質(zhì)期長(zhǎng)(可延長(zhǎng)1/3以上)等。第53頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天（3）輻射滅菌法

定義：系采用放射性同位素(60Co和137Cs)放射的

射線(xiàn)殺滅微生物和芽孢的方法。適用范圍：適合于熱敏物料和制劑，常用于維生素、抗生素、激素、生物制品、中藥材和中藥制劑、醫(yī)療器械、藥用包裝材料及藥用高分子材料等物質(zhì)的滅菌。特點(diǎn)：不升高產(chǎn)品溫度，穿透力強(qiáng)，滅菌效率高，但設(shè)備貴，有潛在危險(xiǎn)性，對(duì)某些藥物(特別是溶液型)可能產(chǎn)生藥效降低或產(chǎn)生毒性物質(zhì)和發(fā)熱物質(zhì)等。第54頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天定義：是指用化學(xué)藥品直接作用于微生物而將其殺滅的方法，同時(shí)不應(yīng)損害制品的質(zhì)量。殺菌劑：對(duì)微生物具有觸殺作用的化學(xué)藥品。分為氣體殺菌劑和液體殺菌劑。不能殺死芽孢，僅對(duì)繁殖體有效。影響殺菌效果的因素：微生物的種類(lèi)與數(shù)量、物體表面狀況、殺菌劑的性質(zhì)。?；瘜W(xué)殺菌的目的：減少微生物的數(shù)目以控制一定的無(wú)菌狀態(tài)。常用的方法：（1）氣體滅菌法和（2）藥液滅菌法。（二）化學(xué)滅菌法第55頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天(1)氣體滅菌法

定義：指采用氣態(tài)殺菌劑進(jìn)行滅菌的方法。適用范圍：適合環(huán)境消毒以及不耐加熱滅菌的醫(yī)用器具、設(shè)備和設(shè)施等的消毒，粉末注射劑。應(yīng)注意殺菌劑的殘留量和與藥物的相互作用。品種：環(huán)氧乙烷、甲醛、過(guò)氧乙酸等第56頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天1)環(huán)氧乙烷性質(zhì)：沸點(diǎn)10.9℃，室溫下為氣體，水中溶解度為1ml水中可溶195ml(20℃，760mmHg)，易穿透塑料，紙板及固體粉末。暴露于空氣中，環(huán)氧乙烷就可從這些物質(zhì)消散，對(duì)大多數(shù)固體呈惰性。殺菌作用：由于其為烷化劑的性質(zhì)，使菌體蛋白的-COOH、-NH2、-SH、-OH的H，被-CH2-CH2-OH所取代，從而變性失活。第57頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天適用范圍：可用于塑料容器、對(duì)熱敏感的固體藥物、紙或塑料包裝的藥物、橡膠制品、注射筒、注射針頭、衣著敷料及器械等的滅菌。但是，一些塑料、皮革及橡膠與環(huán)氧乙烷有強(qiáng)親和力，故需長(zhǎng)達(dá)12-24h通空氣驅(qū)除。環(huán)氧乙烷具可燃可爆，用時(shí)需用惰性氣體二氧化碳或氟利昂稀釋。環(huán)氧乙烷的吸入毒性較大，與氨相近，但無(wú)氨樣的剌激嗅味，損害皮膚及眼粘膜，可產(chǎn)生水泡或結(jié)膜炎，故應(yīng)用時(shí)要注意。第58頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天2)甲醛

加熱熏蒸甲醛溶液，每立方米空間用40％甲醛溶液30m1，室內(nèi)相對(duì)濕度宜高，以增進(jìn)甲醛氣體滅菌效果。3)丙二醇

丙二醇用于室內(nèi)空氣滅菌具有不揮發(fā)性和無(wú)引火性等特點(diǎn)，滅菌用量為1ml/m3。4)乳酸

滅菌用量為2ml/m3，殺菌力不及甲醛，但對(duì)人無(wú)害。5)過(guò)氧乙酸

過(guò)氧乙酸用于車(chē)間滅菌，效力比相同濃度的甲醛大兩倍半，對(duì)粘膜，眼部無(wú)剌激性，對(duì)木制品、金屬制品、醫(yī)療器械均無(wú)影響。第59頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天(2)藥液滅菌法定義：指采用殺菌劑溶液進(jìn)行滅菌的方法。適用范圍：常應(yīng)用于其他滅菌法的輔助措施，適合于皮膚、無(wú)菌器具和設(shè)備的消毒。常用品種：0.1％-0.2％新潔爾滅溶液、75％乙醇、1％聚維酮碘溶液、酚或煤酚皂溶液等。使用注意：由于化學(xué)殺菌劑常施用于物體表面，也要注意其濃度不要過(guò)高，以防其化學(xué)腐蝕作用。

第60頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天定義：指整個(gè)過(guò)程控制在無(wú)菌條件下進(jìn)行的一種操作方法，該方法在技術(shù)上并非滅菌操作。適用范圍：適用于一些不耐熱藥物的注射劑、眼用制劑、皮試液、海綿劑和創(chuàng)傷制劑的制備。避箘操作：盡量避免微生物污染。（三）無(wú)菌操作法第61頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天(1)無(wú)菌操作室的滅菌無(wú)菌操作室的滅菌采用滅菌和除菌相結(jié)合的方式流動(dòng)空氣：采用過(guò)濾介質(zhì)除菌法靜止環(huán)境空氣：采用氣體和液體滅菌法、紫外線(xiàn)空氣滅菌法。甲醛溶液加熱熏蒸法氣體滅菌法之一紫外線(xiàn)滅菌法用于間歇和連續(xù)操作過(guò)程。液體滅菌法輔助滅菌方法臭氧滅菌法

《GMP驗(yàn)證指南》推薦的方法。特點(diǎn)：1.不增加消毒設(shè)備；2.可使臭氧迅速擴(kuò)散到每個(gè)角落；3.殺滅空氣凈化系統(tǒng)滋生的霉菌；4.滅菌時(shí)間短、操作簡(jiǎn)便、效果好。第62頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天(2)無(wú)菌操作無(wú)菌操作場(chǎng)所：①無(wú)菌操作室②層流潔凈工作臺(tái)③無(wú)菌操作柜無(wú)菌操作室要求達(dá)到100級(jí)空氣凈化的條件。無(wú)菌操作所用的一切用具、材料以及環(huán)境均需按前述滅菌法滅菌。操作人員進(jìn)入操作之前要洗澡并換上已經(jīng)滅菌的工作服和清潔的鞋子，不使頭發(fā)等露出來(lái)，以免造成污染機(jī)會(huì)。第63頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天(3)無(wú)菌檢查藥劑或藥品經(jīng)滅菌或無(wú)菌操作法處理后，需經(jīng)無(wú)菌檢驗(yàn)證實(shí)已無(wú)微生物生存，方能使用。滅菌效果，應(yīng)以殺死芽孢為標(biāo)準(zhǔn)(細(xì)菌的芽孢具有較強(qiáng)的抗熱力，不易殺死)。法定的無(wú)菌檢查法：包括試管接種法和薄膜過(guò)濾法。第64頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天滅菌效力？主要原因：①滅菌溫度多是測(cè)量滅菌器內(nèi)的溫度，不是滅菌物體內(nèi)的溫度；②無(wú)菌檢驗(yàn)方法也在局限性，難以用現(xiàn)行的無(wú)菌檢驗(yàn)法檢出微量的微生物。

（四）滅菌效力的檢查方法和F0值第65頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天

1、D值（單位：時(shí)間）D值：在一定溫度下殺死被滅菌物品中90％微生物所需的滅菌時(shí)間；也可定義為降低微生物一個(gè)十位數(shù)或一個(gè)對(duì)數(shù)值（如log100降低到log10）所需的時(shí)間。殺滅微生物速度-時(shí)間過(guò)程符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)過(guò)程：

dN/dt=-kt，即lgNt=lgN0-kt/2.303

令D=2.303/k＝t/（lgN0-lgNt）

當(dāng)lgN0-lgNt＝lg100-lg10＝1時(shí)，D=t/(lg100-lg10)

D值因待滅微生物的種類(lèi)、藥液的配方及性質(zhì)、用作生物指示劑的微生物種類(lèi)；微生物所接觸的表面的性質(zhì)、滅菌工序（如溫度）等不同而各異。

第66頁(yè),共73頁(yè)，2024年2月25日，星期天

2、Z值（單位溫度）Z值：為D值降低一個(gè)對(duì)數(shù)值所需升高的溫度數(shù)，即滅菌時(shí)間減少到原來(lái)的1/10時(shí)所需升高的溫度或在相同滅菌時(shí)間內(nèi)，殺滅90%的微生物所需要提高的溫度。滅菌溫度升高，速度常數(shù)k值增大，D值減少。

Z=(T2-T1)/(lgD2-lgD1)即D2/D1=10(T2-T1)/Z

當(dāng)lgD2-lgD1＝1時(shí)，即Z＝T2-T1在不同溫度下對(duì)特定的微生物在特定介質(zhì)或環(huán)