細胞原代培養(yǎng)與傳代

關(guān)于細胞原代培養(yǎng)與傳代細胞培養(yǎng)定義定義：

模擬機體內(nèi)生理條件，將細胞從機體中取出，在人工條件下使其生存、生長、繁殖和傳代，進行細胞生命過程、細胞癌變、細胞工程等問題的研究。優(yōu)點：1．活細胞：同時、大量、均一性、重復(fù)性；2．可控制：各種物理、化學(xué)、生物等因素可調(diào)控；3．研究方法多樣：倒置、熒光、電子、激光共焦顯微鏡、流式細胞術(shù)、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記；4．應(yīng)用廣：不同物種、不同年齡、不同組織、正?；虍惓＃[瘤）；缺點：人工所模擬的條件與體內(nèi)實際情況仍不完全相同；當(dāng)細胞被置于體外培養(yǎng)后，生活在缺乏動態(tài)平衡的環(huán)境中，時間久了，必然發(fā)生變化。

第2頁,共63頁，2024年2月25日，星期天細胞培養(yǎng)的基本概念

傳代：細胞在培養(yǎng)器皿中生長一定時間后，被分開接種到新的培養(yǎng)器皿中。

原代培養(yǎng)取自體內(nèi)新鮮組織并置于體外條件下生長的細胞在傳代之前稱為原代培養(yǎng)。

第3頁,共63頁，2024年2月25日，星期天接觸抑制（Contactinhibition）細胞相互接觸時，將停止增長；細胞停留在細胞周期的G0期；轉(zhuǎn)化的細胞卻可以繼續(xù)生長導(dǎo)致細胞重疊堆積生長。第4頁,共63頁，2024年2月25日，星期天體外培養(yǎng)的細胞增殖能力不是無限的，傳代次數(shù)有一定的界限，稱為“Hayflick極限”。傳代次數(shù)與物種壽命有關(guān)：小鼠壽命3年，傳代12次；龜壽命200年，傳代140次。傳代次數(shù)與個體年齡成反比：人胚胎，40-60代；幼年，20-40代；成年，10-30代；早老病兒童，2-10代。

細胞傳代次數(shù)（PassageNumber）第5頁,共63頁，2024年2月25日，星期天

原代培養(yǎng)

（primary

culture）從動物機體取出的進行培養(yǎng)的細胞群。生長緩慢，繁殖一定的代數(shù)后（一般10代以內(nèi)）停止生長。

克?。╟lone）亦稱無性繁殖系或無性系。對細胞來說，克隆是指由同一個祖先細胞通過有絲分裂產(chǎn)生的遺傳性狀一致的細胞群。

細胞系（cell

line）從腫瘤組織培養(yǎng)建立的細胞群或培養(yǎng)過程中發(fā)生突變或轉(zhuǎn)化的細胞，在培養(yǎng)條件下可無限繁殖

細胞株（cell

strain）從原代培養(yǎng)細胞群中篩選出的具有特定性質(zhì)或標(biāo)志的細胞群，能夠繁殖50代左右，在培養(yǎng)過程中其特征始終保持。原代培養(yǎng)與細胞系第6頁,共63頁，2024年2月25日，星期天原代培養(yǎng)細胞的生命歸宿原代培養(yǎng)期傳代期衰退期第7頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第8頁,共63頁，2024年2月25日，星期天

TheAmericanTypeCultureCollection(ATCC)TheEuropeanCollectionofAnimalCellCulture(ECACC)NationalInstituteofHealth(NIH),USANationalCancerInstitute(NCI),USA細胞系資源第9頁,共63頁，2024年2月25日，星期天有限細胞系，無限細胞系

細胞系

cellline細胞株

cellstrain

第10頁,共63頁，2024年2月25日，星期天培養(yǎng)細胞的特性

培養(yǎng)細胞的生長方式貼附生長：必須貼附于支持物表面才能生長。見于各種實體瘤細胞懸浮生長：于懸浮狀態(tài)下即可生長，不需要貼附于支持物表面。見于各種造血系統(tǒng)腫瘤細胞第11頁,共63頁，2024年2月25日，星期天

每代貼附生長細胞的生長過程游離期貼壁期潛伏期對數(shù)生長期停止期（平臺期）第12頁,共63頁，2024年2月25日，星期天游離期：細胞接種后在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)．也稱懸浮期。此時細胞質(zhì)回縮，胞體呈圓球形。10分鐘一4小時第13頁,共63頁，2024年2月25日，星期天貼壁期：細胞附著于底物上，游離期結(jié)束。細胞株平均在10分鐘一4小時貼壁。底物：膠原、玻璃、塑料、其它細胞等血清中有促使細胞貼壁的冷析球蛋白和纖粘素、膠原等糖蛋白（生長基質(zhì)），這些帶正電荷的糖蛋白的促貼壁因子先吸附于底物上，懸浮細胞再與吸附有促貼壁因子的附著。進口塑料培養(yǎng)瓶涂有生長基質(zhì)（化學(xué)合成的功能基團）第14頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第15頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第16頁,共63頁，2024年2月25日，星期天潛伏期此時細胞有生長話動，而無細胞分裂。細胞株潛伏期一般為6～24小時。第17頁,共63頁，2024年2月25日，星期天對數(shù)生長期：細胞數(shù)隨時間變化成倍增長，活力最佳，最適合進行實驗研究。第18頁,共63頁，2024年2月25日，星期天停止期（平臺期）：細胞長滿瓶壁后，細胞雖有活力但不再分裂機制：接觸抑制、密度依賴性第19頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第20頁,共63頁，2024年2月25日，星期天二、細胞培養(yǎng)基本要求常用儀器設(shè)備培養(yǎng)器皿培養(yǎng)基血清其他細胞培養(yǎng)試劑第21頁,共63頁，2024年2月25日，星期天培養(yǎng)細胞生長的條件1細胞的營養(yǎng)需要2細胞的生存環(huán)境溫度:37℃O2CO2:5%CO2+H2O←→H2CO3←→H++HCO3-pH:7.2-7.4

滲透壓

3無污染

4無毒第22頁,共63頁，2024年2月25日，星期天常用儀器設(shè)備

超凈工作臺，壓力蒸汽消毒器，電熱干燥箱，濾器，酸缸CO2培養(yǎng)箱倒置顯微鏡酶標(biāo)儀、微孔板震蕩器液氮罐自動雙重純水蒸餾器，純水儀耗材：培養(yǎng)瓶，吸管，電動吸引器，培養(yǎng)板，凍存管第23頁,共63頁，2024年2月25日，星期天壓力蒸汽消毒器：濕熱消毒，用途廣電熱干燥箱：干熱消毒（160℃，2小時）。主要用干玻璃器皿消毒濾器：過濾除菌：大多數(shù)培養(yǎng)用液，如人工合成培養(yǎng)基、血清、酶液等均采用濾過法除菌超凈工作臺：為細胞操作提供無菌環(huán)境紫外燈：紫外線消毒。主要用于培養(yǎng)室空氣、操作臺、塑料培養(yǎng)皿和培養(yǎng)板等表面消毒

第24頁,共63頁，2024年2月25日，星期天

超凈臺

超凈工作臺的工作原理是利用鼓風(fēng)機驅(qū)動空氣遁過高效濾器除去空氣中的塵埃顆粒，使空氣得到凈化。凈化空氣徐徐通過工作臺面，使工作臺內(nèi)構(gòu)成無菌環(huán)境。

第25頁,共63頁，2024年2月25日，星期天濾器第26頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第27頁,共63頁，2024年2月25日，星期天CO2培養(yǎng)箱CO2培養(yǎng)箱設(shè)定的條件為37℃，5％CO2

。使用CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)細胞時應(yīng)注意的問題：①用螺旋口瓶培養(yǎng)細胞時，需將瓶蓋微松，以保證通氣。②保持培養(yǎng)箱內(nèi)空氣干凈。定期消毒（90℃，14h)。③箱內(nèi)火菌蒸餾水3000毫升蒸餾水槽中以保持箱內(nèi)濕度，避兔培養(yǎng)液蒸發(fā)。第28頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第29頁,共63頁，2024年2月25日，星期天自動雙重純水蒸餾器純水儀第30頁,共63頁，2024年2月25日，星期天酶標(biāo)儀微孔板震蕩器第31頁,共63頁，2024年2月25日，星期天CultureflaskCulturePlate

培養(yǎng)器皿第32頁,共63頁，2024年2月25日，星期天

浸泡（自來水）、刷洗（洗衣粉）、酸泡（24小時）、流水沖洗、蒸溜水浸泡和沖洗、50℃烘干常用玻璃器皿清洗第33頁,共63頁，2024年2月25日，星期天

清潔液的配制第34頁,共63頁，2024年2月25日，星期天細胞培養(yǎng)基干粉培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基干粉培養(yǎng)基需使用者自己配制并滅菌，其優(yōu)點是價格便宜。缺點是配制過程繁瑣，質(zhì)量不易控制液體培養(yǎng)基是由專業(yè)廠家按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)?；a(chǎn)，不僅質(zhì)量得到保證，而且使用十分方便常用的培養(yǎng)基種類RPMI-1640（標(biāo)準(zhǔn)型）、DMEM-高糖（標(biāo)準(zhǔn)型）、DMEM-低糖（標(biāo)準(zhǔn)型）、McCoys5A、M199、F12等第35頁,共63頁，2024年2月25日，星期天培養(yǎng)基的選擇沒有一定的標(biāo)準(zhǔn)，有幾點建議可供參考：

建立某種細胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細胞首選的培養(yǎng)基?？梢圆殚唴⒖嘉墨I，或在購買細胞株時咨詢。其它實驗室慣用的培養(yǎng)基不妨一試，許多培養(yǎng)基可以適合多種細胞。用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)目的細胞，觀察其生長狀態(tài)，可以用生長曲線、集落形成率等指標(biāo)判斷，根據(jù)實驗結(jié)果選擇最佳培養(yǎng)基，這是最客觀的方法，但比較繁瑣。

第36頁,共63頁，2024年2月25日，星期天血清使用注意事項血清必須貯存于–20～-70℃，若存放于4℃，請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶，可將40～45ml分裝于無菌50ml離心管中，由于血清結(jié)凍時體積會增加約10%，必須預(yù)留此膨脹體積之空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。

血清解凍步驟(逐步解凍法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天，至室溫下全溶后再分裝。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。熱滅活（heat-inactivation）是指56℃,30分鐘加熱已完全解凍之血清。此熱處理之目的是使血清中之補體成份(complement)去活化。除非必須，一般不建議作此熱處理，因為會造成沉淀物之顯著增多，且會影響血清之品質(zhì)。

勿將血清置于37℃太久，若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會因此受到破壞，而影響血清之品質(zhì)第37頁,共63頁，2024年2月25日，星期天凝絮物：發(fā)生之原因有許多種，但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein)變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin)造成，這些凝絮沉淀物不會影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沉淀物，可用離心3000rpm,5min去除，或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沉淀物，因為會阻塞過濾膜。

顯微鏡下觀察之“小黑點”：通常經(jīng)過熱處理之血清，沉淀物的形成會顯著的增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”，常會誤認為血清遭受污染，而將血清放在37℃中欲培養(yǎng)此“微生物“，但在37℃環(huán)境下，又會使此沉淀物增多，更會誤認為微生物之增殖，但以培養(yǎng)細菌之培養(yǎng)基檢測，又沒有污染。一般而言，此小黑點應(yīng)不會影響細胞之生長，但若懷疑此血清之品質(zhì)，應(yīng)立即停用，更換另一批號的血清。

血清沉淀物

第38頁,共63頁，2024年2月25日，星期天如何避免沉淀物的產(chǎn)生?

解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。

解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。

請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。

血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。第39頁,共63頁，2024年2月25日，星期天谷氨酰胺谷氨酰胺在細胞代謝過程中起重要作用，合成培養(yǎng)基中都要添加，由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定容易降解，4℃下放置7天即可分解約50%，所以都是在使用前添加配制好的培養(yǎng)液（含谷氨酰胺）在4℃放置2周以上時，要重新加入原來量的谷氨酰胺，故需單獨配制谷氨酰胺，以便臨時加入培養(yǎng)液內(nèi)使用終濃度為1-4mM一般配制為100倍濃縮液，即濃度為200mM（29.22g/L）配制方法為：谷氨酰胺2.922g溶于三蒸水加至100ml即配成200mM的溶液，充分?jǐn)嚢枞芙夂螅☉?yīng)加溫30℃），過濾除菌，分裝小瓶，-20℃保存，使用時可向100ml培養(yǎng)液中加入0.5-2ml谷氨酰胺濃縮液，終濃度為1-4mM第40頁,共63頁，2024年2月25日，星期天酚紅大多數(shù)培養(yǎng)液中使用酚紅作為pH指示紅色表示中性pH黃色代表酸性pH紫色表示堿性pH在一些特殊培養(yǎng)液中不含酚紅因為已有一些研究表明：酚紅能模擬類固醇激素（尤其是雌激素）樣作用第41頁,共63頁，2024年2月25日，星期天水：新鮮配置的三蒸水或去離子水平衡鹽溶液：無Ca2+、Mg2+的緩沖液

PBS：NaCl8.0gKCl0.2gNa2HPO4.H2O1.56gKH2PO40.20

加水至1000ml

細胞培養(yǎng)用液的配制第42頁,共63頁，2024年2月25日，星期天抗菌素的使用：在培養(yǎng)液配制后，培養(yǎng)液內(nèi)常加適量抗菌素，以抑制可能存在的細菌的生長。通常是青霉素和鏈霉素聯(lián)合使用。培養(yǎng)基內(nèi)青霉素、鏈霉素最終使用濃度為每毫升100單位。慶大霉素：每毫升100單位——方便、廣譜、穩(wěn)定第43頁,共63頁，2024年2月25日，星期天完全培養(yǎng)基的組成基礎(chǔ)培養(yǎng)基80％一95％血清5％一20％碳酸氫鈉2.0g/L青、鏈霉素各100單位／毫升第44頁,共63頁，2024年2月25日，星期天培養(yǎng)基的配制RPMI-1640培養(yǎng)粉1袋碳酸氫鈉2.0g

青、鏈霉素各100單位／毫升

加三蒸水至1000ml,過濾除菌。

調(diào)節(jié)pH值至7.2

加血清（終濃度10％）

第45頁,共63頁，2024年2月25日，星期天細胞消化液分離組織和分散細胞常用的有胰蛋白酶和乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)兩種溶液，單獨或混合使用胰蛋白酶溶液主要作用：使細胞間的蛋白質(zhì)水解，使細胞相互離散消化細胞時，加入一些血清或含血清的培養(yǎng)液，能終止消化作用EDTA·4Na溶液一種化學(xué)螯合劑，對細胞有一定的離散作用，而且毒性小，價格低廉，使用方便常用工作液濃度為0.02%。

注意：使用EDTA處理細胞后，要用平衡鹽液沖洗干凈，因殘留的EDTA會影響細胞生長第46頁,共63頁，2024年2月25日，星期天三、細胞培養(yǎng)基本技術(shù)細胞原代培養(yǎng)細胞換液與傳代細胞凍存與復(fù)蘇第47頁,共63頁，2024年2月25日，星期天鼠胎組織細胞原代培養(yǎng)取材：用頸椎脫位法使孕鼠迅速死亡。把整個孕鼠浸入盛有75％乙醇的燒杯中數(shù)秒鐘消毒，取出后放在大平皿中攜入超凈臺。用消過毒的剪刀在軀干中部環(huán)行剪開皮膚，剖腹取出子宮置于無菌平皿中。用消過毒的剪刀剪開子宮，取出鼠胎，剪去頭、爪，以平衡鹽溶液洗去血污切割：用平衡鹽溶液將取出的組織塊清洗三次，然后用眼科手術(shù)剪刀仔細將組織反復(fù)剪碎，直到成1mm3左右的小塊，再用平衡鹽溶液清洗，洗到組織塊發(fā)白為止。靜置數(shù)分鐘，使組織塊自然沉淀到管底，棄去上清消化、接種培養(yǎng)：加入0.25％胰蛋白酶消化液（5-10倍量），與組織塊混勻。置37℃水浴，觀察消化情況（每隔幾分鐘搖動一下試管），靜止，吸去上清，加入5～10ml細胞培養(yǎng)液，用吸管吹打混勻，移入二個培養(yǎng)瓶中，置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)第48頁,共63頁，2024年2月25日，星期天第49頁,共63頁，2024年2月25日，星期天換液：全量換液和半量換液換液時機的選擇：培養(yǎng)液pH值：細胞生長旺盛，代謝產(chǎn)生酸性物質(zhì)積累增多，pH值下降，營養(yǎng)液酸化變黃，。細胞狀態(tài)細胞換液第50頁,共63頁，2024年2月25日，星期天細胞傳代原代細胞傳代以便獲得穩(wěn)定的細胞株細胞系傳代以得到大量的同種細胞，并維持細胞種的延續(xù)接觸抑制營養(yǎng)枯竭將培養(yǎng)的細胞從培養(yǎng)器皿中消化下來，以1:2或l:3以上的比率轉(zhuǎn)移到另外的器皿中進行培養(yǎng)，即為傳代培養(yǎng)細胞“一代”指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細胞世代或倍增不同，在一代中，細胞培增3～6次第51頁,共63頁，2024年2月25日，星期天細胞傳代方法

根據(jù)細胞生長的恃點，傳代方法有3種。1.懸浮生長細胞傳代離心法傳代：離心（1000轉(zhuǎn)/分）去上清，沉淀物加新培養(yǎng)液后再混勻傳代。直接傳代法：懸浮細胞沉淀在瓶壁時，將上清培養(yǎng)液去除1/2一2/3，然后用吸管直接吹打形成細胞懸液再傳代。2半懸浮生長細胞傳代（Hela細胞）此類細胞部分呈現(xiàn)貼壁生長現(xiàn)象，但貼壁不牢，可用直接吹打法使細胞從瓶壁脫落下來，進行傳代。3貼壁生長細胞傳代采用酶消化法傳代。常用的消化液有0.25％的胰蛋白酶液。第52頁,共63頁，2024年2月25日，星期天貼壁生長細胞傳代方法：1.吸光培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液2.加入1-2ml0.25％的胰蛋白酶液(以消化液能覆蓋整個瓶底為準(zhǔn)）靜置2-10min（顯微鏡下動態(tài)監(jiān)測）。3.吸去胰蛋白酶液，加入培養(yǎng)液。4.用吸管吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液，反復(fù)吹打瓶壁細胞，形成細胞懸液。5.加適量新鮮培養(yǎng)液于接種了細胞懸液的新培養(yǎng)瓶內(nèi)。6.將后者放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。第53頁,共63頁，2024年2月25日，星期天細胞凍存和復(fù)蘇細胞低溫冷凍貯存是細胞室的常規(guī)工作。細胞凍存與細胞傳代保存相比可以減少入力、經(jīng)費，減少污染，減少細胞生物學(xué)特性變化。第54頁,共63頁，2024年2月25日，星期天

凍存和復(fù)蘇的原則：慢凍快融當(dāng)細胞冷到零度以下，可以產(chǎn)生以下變化：細胞器脫水，細胞中可溶性物質(zhì)濃度升高，并在細胞內(nèi)形成冰晶。

如果緩慢冷凍，可使細胞逐步脫水，細胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶；相反．結(jié)晶就大，大結(jié)晶會造成細胞膜、細胞器的損傷和破裂。復(fù)蘇過程應(yīng)快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重結(jié)晶。第55頁,共63頁，2024年2月25日，星期天細胞凍存冷凍保存要點冷凍過程要緩慢：4℃30－60分鐘→-20℃30分鐘→-80℃16－18小時（或過夜）→液氮長期保存或使用程序降溫盒，每秒下降1℃凍存細胞必須處在對數(shù)生長期，活力大于90％，無微生物污染。細胞濃度控制在：5x106－2x107/ml。常用細胞冷凍保存液5%或10％DMSO＋完全培養(yǎng)液10％甘油＋完全培養(yǎng)液第56頁,共63頁，2024年2月25日，星期天低溫保護劑的應(yīng)用在細胞凍存時加入低溫保護劑，能大大提高凍存效果。常用的低溫保護劑是DMSO，它是一種滲透性保護劑，可迅速透入細胞，提高胞膜對水的通透性，降低冰點，延緩凍結(jié)過程，能使細胞內(nèi)水分在凍結(jié)前透出細胞外，在胞外形成冰晶，減少胞內(nèi)冰晶，從而減少冰晶對細胞的損傷。第57頁,共63頁，2024年2月25日，星期天細胞凍存方法1預(yù)先配制凍存液：含20%血清培養(yǎng)基10%DMSO2取對數(shù)生長期細胞，經(jīng)胰酶消化后，加入適量凍存液,用吸管吹打制成細胞懸液（1×106～5×106細胞/ml)3加入1ml細胞于凍存管中，密封后標(biāo)記冷凍細胞名稱和冷凍日期。4年后，存活率可達80％一90％。DMSO液用培養(yǎng)液配好，避免因臨時配制產(chǎn)熱而傷害細胞。第58頁,共63頁，2024年2月25日，星期天細胞復(fù)蘇快速解凍凍存細胞從液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，輕輕搖動冷凍管，使其在1分鐘內(nèi)全部融化（不要超過3分鐘）解凍后的細胞可直接接種到含完全生長培養(yǎng)液的細胞培養(yǎng)瓶中直接進行培養(yǎng)，24小時后再用新鮮完全培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液，以去除DMSO如果細胞對冷凍保護劑特別敏感解凍后的細胞應(yīng)先通過離心去除冷凍保護劑，然后再接種到含完全生長培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中第59頁,共63頁，2024年2月25日，星期天收到細胞的處理方式(一)

1.收到細胞株包裹時，請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形，若有請立即通知。細胞株請盡速開始培養(yǎng)，或立即冷凍保存(置于–70°C，隔夜后，移到液氮)。

2.冷凍細胞解凍程序:

2.1.依據(jù)細胞株數(shù)據(jù)單指定之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它指定之成份和比例，制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類，若因?qū)嶒炐枰?，必須有所不同時，務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成，確定細胞適應(yīng)后，方進行所需之實驗。

2.2.FBS(fetalbovineserum,胚牛血清),