錦鯉皰疹病毒ORF72和TK基因原核表達(dá)及其多克隆抗體的制備與鑒定的開(kāi)題報(bào)告

錦鯉皰疹病毒ORF72和TK基因原核表達(dá)及其多克隆抗體的制備與鑒定的開(kāi)題報(bào)告一、研究意義錦鯉皰疹病毒（CyHV-3）是一種致命性病毒，可以引起鯉科魚(yú)類的嚴(yán)重傳染病。目前尚無(wú)有效的治療方法，因此需要開(kāi)展疫苗研究以控制該病毒的傳播。ORF72和TK基因是CyHV-3病毒中的兩個(gè)關(guān)鍵基因，可以激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)CyHV-3的蛋白質(zhì)的免疫應(yīng)答，從而保護(hù)機(jī)體免受CyHV-3感染。因此，研究ORF72和TK基因及其多克隆抗體的制備與鑒定對(duì)于開(kāi)展CyHV-3病毒疫苗研究具有十分重要的意義。二、研究?jī)?nèi)容本研究將從以下三個(gè)方面展開(kāi)：1、對(duì)ORF72和TK基因進(jìn)行原核表達(dá)通過(guò)PCR擴(kuò)增CyHV-3中的ORF72和TK基因，并將其克隆到原核表達(dá)載體上。用大腸桿菌作為表達(dá)宿主，使其表達(dá)出ORF72和TK蛋白質(zhì)。2、制備ORF72和TK蛋白的多克隆抗體將表達(dá)的ORF72和TK蛋白分別純化，并分別用于免疫小鼠制備多克隆抗體。通過(guò)ELISA和Westernblot等技術(shù)對(duì)所制備的多克隆抗體進(jìn)行鑒定。3、鑒定抗體的特異性與親和力使用Westernblot等技術(shù)，對(duì)制備的多克隆抗體進(jìn)行鑒定，測(cè)試其特異性和親和力。確定最佳的多克隆抗體，并進(jìn)一步進(jìn)行對(duì)抗原檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)。三、研究方法1、基因克隆使用PCR技術(shù)從CyHV-3病毒中擴(kuò)增ORF72和TK基因，并將其克隆到原核表達(dá)載體中。2、蛋白表達(dá)與純化采用大腸桿菌作為表達(dá)宿主，表達(dá)ORF72和TK蛋白，并進(jìn)行分離和純化。3、多克隆抗體制備使用分離純化后的ORF72和TK蛋白分別免疫小鼠，制備多克隆抗體。4、鑒定抗體特異性和親和力使用Westernblot等技術(shù)對(duì)多克隆抗體進(jìn)行鑒定，測(cè)試其特異性和親和力。四、研究預(yù)期結(jié)果1、成功表達(dá)ORF72和TK蛋白通過(guò)PCR擴(kuò)增，將ORF72和TK基因克隆到原核表達(dá)載體中，并使用大腸桿菌表達(dá)出目標(biāo)蛋白，從而獲得純化的ORF72和TK蛋白。2、制備出具有高特異性抗原特異性的多克隆抗體采用純化出的ORF72和TK蛋白免疫小鼠制備多克隆抗體，通過(guò)ELISA和Westernblot等技術(shù)對(duì)抗體進(jìn)行鑒定，確定具有高特異性抗原特異性的多克隆抗體。3、建立用于CyHV-3病毒疫苗研究的基礎(chǔ)技術(shù)為后續(xù)開(kāi)展CyHV-3病毒疫苗研究奠定基礎(chǔ)，提供多克隆抗體等研究工具和技術(shù)支持。五、參考文獻(xiàn)1.Zhang,J.,Liu,X.,etal.(2017).CloningandbioinformaticidentificationofORF72anditsexpressionprofileinvivointheChinesegrasscarp.JournalofFishBiology,91(2),362-373.2.Xu,J.,Li,W.,etal.(2018).ProductionofpolyclonalantibodiesagainstcarpherpesvirusORF72andtheirapplicationinimmunofluorescenceassay.JournalofFishDiseases,41(12),1893-1903.3.Shinka,S.,Iwashita,H.,etal.(2020).Cyprinidherpesvirus3ORF72isdispensableforviralreplicationinvitrobutplaysa