【課件】土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)課件高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

探究?實(shí)踐土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)（圖片來(lái)源：作者拍攝）Q1：框線位置經(jīng)過(guò)化糞池污物的堆積后，殘留了很多

尿素，這些尿素會(huì)如何被植物利用？Q2：土壤中含有多少這樣的細(xì)菌，我們?nèi)绾畏蛛x

它們？探究?實(shí)踐實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)——土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)目的： 1.從土壤中分離能利用尿素的細(xì)菌 2.完成菌落的計(jì)數(shù) 3.了解能分解尿素的細(xì)菌在樣品中的占比實(shí)驗(yàn)思路：1.從土壤中分離能利用尿素的細(xì)菌——配制相應(yīng)的選擇培養(yǎng)基資料1絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能夠合成脲酶的微生物才能分解尿素。CO(NH2)2+H2O脲酶2NH3+CO2組分含量KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g瓊脂15.0gH2O定容至1000ml2.菌落的計(jì)數(shù)3.了解能分解尿素的細(xì)菌在樣品中的占比——稀釋涂布分離法——以牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的涂布結(jié)果為對(duì)照組實(shí)驗(yàn)思路：土壤取樣制備菌懸液與涂布平板微生物的培養(yǎng)與觀察配制培養(yǎng)基稀釋操作確定分組涂布操作目的菌株的篩選和鑒定菌落形態(tài)觀察與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)思路：土壤取樣微生物的培養(yǎng)與觀察制備培養(yǎng)基土樣稀釋（制備菌懸液）涂布平板菌落的計(jì)數(shù)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果制備培養(yǎng)基①牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基②以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基土壤取樣①取樣地點(diǎn)：細(xì)菌適宜在酸堿度接近中性的潮濕土壤中生長(zhǎng)。②取樣過(guò)程：鏟去表層土（一般3cm左右）。細(xì)菌絕大部分分布在距地表3～8cm的土壤層。③注意事項(xiàng)：取土樣時(shí)用的鐵鏟和取樣袋，在使用前都需要滅菌，操作完成后一定要洗手。在無(wú)菌條件下，將1g土樣加到有99mL無(wú)菌水的三角瓶中，振蕩10min，即成102倍稀釋的土壤稀釋液。依此法制備103、104、105、106、107倍稀釋的土壤稀釋液。取樣時(shí)，盡量只取懸液。搖勻，放在試管架上。1g土樣99ml無(wú)菌水不同倍數(shù)稀釋液土樣稀釋（制備菌懸液）（圖片來(lái)源：常山一中陳美珍老師）涂布平板（圖片來(lái)源：常山一中陳美珍老師）★注意測(cè)細(xì)菌時(shí)，一般選用104、105、106倍稀釋的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)。在初次實(shí)驗(yàn)中，對(duì)于稀釋的范圍沒(méi)有把握，應(yīng)選擇一個(gè)比較寬的范圍，將103～107倍稀釋的稀釋液分別涂布到平板上培養(yǎng)，以保證能從中選擇出菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。（圖片來(lái)源：百度圖片）涂布平板選擇培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基123456123456123456（圖片來(lái)源：百度圖片）涂布平板Q1：每個(gè)濃度設(shè)置6個(gè)平板，1、2、3、4平板是尿素選擇培養(yǎng)基，

5、6為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。每個(gè)培養(yǎng)基該如何涂布？涂布平板123456同一濃度的土壤稀釋液不進(jìn)行涂布與1、2、3同一濃度的土壤稀釋液Q2：如此涂布設(shè)置的目的是什么？1、2、3作為實(shí)驗(yàn)組，且遵循平行重復(fù)原則。4、5作為對(duì)照組一，若該培養(yǎng)基中無(wú)菌落生長(zhǎng)，則說(shuō)明未被雜菌污染。6作為對(duì)照組二，判斷尿素培養(yǎng)基是否具有選擇作用，若該培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目大于尿素培養(yǎng)基上的數(shù)目，則說(shuō)明尿素培養(yǎng)基具有篩選作用。涂布平板123456同一濃度的土壤稀釋液不進(jìn)行涂布與1、2、3同一濃度的土壤稀釋液①培養(yǎng)條件：細(xì)菌一般在30℃~37℃的溫度下培養(yǎng)1-2天。（圖片來(lái)源：百度圖片）（圖片來(lái)源：常山一中陳美珍老師）微生物的培養(yǎng)與觀察微生物的培養(yǎng)與觀察②觀察：每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。123456菌落的計(jì)數(shù)與實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析以1×105倍稀釋的稀釋液涂布結(jié)果為例：（46個(gè)菌落）（實(shí)驗(yàn)組平均3個(gè)菌落）123456（0個(gè)菌落）案例分析1：兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)。從對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。根據(jù)結(jié)果請(qǐng)你分析，這兩位同學(xué)的做法正確嗎？如果有問(wèn)題，錯(cuò)在哪？如何改進(jìn)？分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果微生物的培養(yǎng)與觀察甲：沒(méi)有重復(fù)實(shí)驗(yàn)（至少涂布3個(gè)平板）

為增加實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性，應(yīng)設(shè)置重復(fù)實(shí)驗(yàn)，在同一稀釋度下至少涂布3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)結(jié)果后計(jì)算平均值（1）甲同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，

統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230。微生物的培養(yǎng)與觀察其中一個(gè)平板計(jì)數(shù)結(jié)果與其他兩個(gè)相差太大。微生物計(jì)數(shù)時(shí)，如果實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)重復(fù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果差別很大的情況，應(yīng)分析實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能的影響因素，找出原因，而不能簡(jiǎn)單地將結(jié)果舍棄后進(jìn)行計(jì)數(shù)。（2）乙同學(xué)在該濃度下涂布了A、B、C三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為20、246、256，該同學(xué)以這三個(gè)平板上菌落數(shù)的平均值174作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果。案例分析2：丙同學(xué)認(rèn)為在尿素培養(yǎng)基中分離出的微生物一定都是能分解尿素的微生物。你認(rèn)為丙同學(xué)的想法正確嗎？如果有不妥，你認(rèn)為它們還可能是哪一類微生物？微生物的培養(yǎng)與觀察不一定，可能某些微生物可以利用能分解尿素的細(xì)菌的代謝物進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖，也可能是某些微生物可以直接利用空氣中的氮?dú)膺M(jìn)行生長(zhǎng)繁殖。微生物的培養(yǎng)與觀察Q：如何進(jìn)一步鑒定出土壤中分解尿素的細(xì)菌？方法：在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑固體培養(yǎng)基上可以觀察菌落周圍出現(xiàn)紅色環(huán)帶呈堿性，遇酚紅指示劑呈紅色。CO(NH2)2+H2O脲酶2NH3+CO2課外拓展

活菌計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)廣泛應(yīng)用于食品衛(wèi)生、水源污染度的檢驗(yàn)