探究活動(dòng)：培養(yǎng)基的配置

3/4探究活動(dòng)：培養(yǎng)基的配置1、學(xué)生用活動(dòng)器材：材料：牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、氯化鈉、NaOH、清水用具：天平、牛角勺、量筒、滴管、玻璃棒、250ml燒杯、50ml燒杯、三角架、石棉網(wǎng)、酒精燈、火柴、PH試紙、錐形瓶、平板培養(yǎng)皿、試管、棉塞、線繩、報(bào)紙、電爐子、高壓滅菌鍋2、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方牛肉膏0.3g蛋白胨1gNaCL0.5g瓊脂2gpH7.0～7.5水100ml3、配制培養(yǎng)基的過(guò)程稱量→溶化→調(diào)節(jié)pH值→過(guò)濾→分裝→塞棉塞和包扎→滅菌。①稱量：按照培養(yǎng)基配方，準(zhǔn)確稱取各成分放入大燒杯中。技能：a.天平的使用：左物右碼b.一般藥品的稱量：各墊一張大小相同的紙c.腐蝕性、粘稠藥品的稱量：用燒杯等玻璃器皿稱量，先稱空容器的質(zhì)量②溶化：將培養(yǎng)基各種成分按配方稱量好后，分別放入燒杯中，加入100ml水，在酒精燈上加熱攪拌至完全溶化后再放瓊脂。技能：a.攪拌：玻璃棒按一個(gè)方向順序攪拌，不能碰觸燒杯內(nèi)壁。b.有些原料不易溶解，如牛肉膏等，可先在小燒杯中加水少許，加熱溶解后倒入大燒杯中，但總水量要控制在100ml。c.瓊脂的溶化：其余成分全部溶化后再放瓊脂。在瓊脂溶化過(guò)程中要不斷攪拌，并控制火力，防止培養(yǎng)基溢出或燒焦。d.培養(yǎng)基完全溶化后要補(bǔ)足水分。③調(diào)酸堿度（pH值）：先用pH試紙進(jìn)行測(cè)量。如果偏酸或偏堿，可用10％HCI和10％NaOH調(diào)整pH值至所需范圍。技能：a.PH值的測(cè)定：用潔凈干燥的玻璃棒蘸取少量，在試紙一端點(diǎn)一下既可。b.調(diào)PH值時(shí)，要逐滴滴入NaOH溶液，邊滴邊攪拌，并隨時(shí)用PH試紙測(cè)量。④過(guò)濾：培養(yǎng)基中如有些成分沒(méi)完全溶解，常需過(guò)濾。常用濾紙、紗布（疊成6層）或紗布間加脫脂棉花過(guò)濾。加瓊脂的培養(yǎng)基要趁熱過(guò)濾。⑤分裝：固體培養(yǎng)基都要趁熱分裝，各容器的量如下：錐形瓶：一般不超過(guò)1/2；試管：一般裝管高的1/5或1/4；倒平板一般是用時(shí)再倒。技能：分裝時(shí)應(yīng)避免培養(yǎng)基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞而引起污染。⑥塞棉塞和包扎：分裝后試管口及瓶口都要塞好棉塞。做棉塞用普通棉花，其形狀、大小、松緊與管口和瓶口要吻合，棉塞1/3露于管外，2/3塞進(jìn)管內(nèi)。棉塞的制作和塞入的正確方法見(jiàn)圖4-7。棉塞塞好后，外包厚紙（牛皮紙一層或用舊報(bào)紙二層），用繩捆扎。包扎的作用是避免滅菌時(shí)冷凝水淋濕棉塞，并防止接種前培養(yǎng)基的水分散失或污染雜菌。⑦滅菌：經(jīng)過(guò)分裝、包扎的培養(yǎng)基應(yīng)立即進(jìn)行滅菌。一般采用高壓蒸汽滅菌時(shí)，在15磅/英寸2蒸汽壓、121℃技能：a.打開(kāi)滅菌鍋蓋，向鍋內(nèi)加入適量水。b.將制備好的培養(yǎng)基和需要滅菌的其它用品，一起放入高壓滅菌鍋中（裝有培養(yǎng)基和水的注意要立著放穩(wěn)）。不要放得太擠，以免影響蒸汽流通。c.蓋好鍋蓋，采用對(duì)角形式均勻擰緊蓋上的螺旋，使鍋密閉。打開(kāi)放氣閥，開(kāi)始加熱。d.當(dāng)鍋內(nèi)產(chǎn)生蒸汽后，放氣閥開(kāi)始有熱氣排出，自開(kāi)始產(chǎn)生熱氣后約3分鐘（鍋內(nèi)冷空氣已排盡），再關(guān)閉放氣閥。此時(shí)鍋內(nèi)溫度隨蒸汽壓力增高而上升。待壓力上升到15磅/英寸2，溫度達(dá)到120～121℃e.停止加熱，待壓力下降至零時(shí)，打開(kāi)放氣閥，排出殘留蒸汽，打開(kāi)鍋蓋，取出滅菌物品。注意：滅菌過(guò)程中，一定注意排凈鍋內(nèi)的冷空氣，冷空氣排不凈時(shí)，鍋內(nèi)溫度達(dá)不到滅菌溫度，會(huì)影響滅菌效果；操作時(shí)，必須嚴(yán)格按操作規(guī)程操作，否則容易發(fā)生意外事故，應(yīng)在教師指導(dǎo)下操作。⑧倒平板和擺斜面：制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基須趁培養(yǎng)基未凝固時(shí)進(jìn)行。4、制作斜面培養(yǎng)基。在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上放1支長(zhǎng)0.5-1米左右的木條，厚度為1厘米左右。將試管頭部枕在木條上，使管內(nèi)培養(yǎng)基自然傾斜，凝固后即成斜面培養(yǎng)基。5、制作平板培養(yǎng)基。將剛剛滅過(guò)菌的盛有培養(yǎng)基的錐形瓶和培養(yǎng)皿放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，點(diǎn)燃酒精燈，右手托起錐形瓶瓶底，左手拔下棉塞，將瓶口在酒精燈上稍加灼燒，左手打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋，右手迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，每皿約倒入10