發(fā)酵工程實(shí)驗(yàn)報(bào)告

發(fā)酵工程試驗(yàn)報(bào)告年級(jí) 專業(yè)姓名 學(xué)號(hào)試驗(yàn)題目 微生物工程試驗(yàn)〔一組〕一、試驗(yàn)?zāi)康膵故彀盐諢o(wú)菌操作技術(shù)，了解生物發(fā)酵過(guò)程中種子的擴(kuò)培過(guò)程；把握小型發(fā)酵罐管路消毒、空消、實(shí)消、菌種培育等技術(shù)；學(xué)習(xí)把握小型發(fā)酵罐接種、取樣操作系統(tǒng)；學(xué)習(xí)使用糖度儀，把握血球計(jì)數(shù)板法；的相關(guān)曲線。二、試驗(yàn)原理pH樣測(cè)定，包括對(duì)菌體進(jìn)展計(jì)數(shù)、測(cè)定不同時(shí)期的干重以及糖度的變化。80℃下烘干肯定時(shí)間后的10-20%。1-5105℃或100℃下烘干，或承受紅外線烘干，也可在80℃或40℃下真空枯燥，枯燥后稱重。血球計(jì)數(shù)板法，血球計(jì)數(shù)板是一種有特別構(gòu)造刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四條溝和兩條嵴，中心有一短橫溝和兩個(gè)平臺(tái)，兩嵴的表比兩平臺(tái)0.1mm0.1mm4001微生物生長(zhǎng)曲線，是以微生物數(shù)量(活細(xì)菌個(gè)數(shù)或細(xì)菌重量)為縱坐標(biāo)，培育時(shí)間為橫坐標(biāo)畫得的曲線。一般說(shuō)，微生物(細(xì)菌)重量的變化比個(gè)數(shù)的段(對(duì)數(shù)生長(zhǎng)階段)、生長(zhǎng)率下降階段及內(nèi)源呼吸階段。三、試驗(yàn)材料及器材菌種酵母菌〔saccharomyces〕藥品蛋白胨、葡萄糖NH4Cl、酵母浸粉、蒸餾水、種子液、無(wú)菌蒸餾水、泡敵培育基儀器設(shè)備1624三角燒瓶；小試管；酒精棉球假設(shè)干；工業(yè)用酒精一瓶；離心機(jī)1臺(tái)；振613玻璃棒12；50ml6；500ml6；100ml6666612；4四、試驗(yàn)步驟(一)菌種的擴(kuò)培菌種的活化〔已預(yù)備〕〔1〕180rpm，28℃，48h。種子擴(kuò)培100ml〔作一、二級(jí)種子瓶，115℃，30min3180rpm，30℃，24h。5%的接種量接種于二級(jí)種子液中〔10，180rpm，28℃，24h。500ml，滅菌，待用。槍頭〔大、小都要〕(二)發(fā)酵罐的構(gòu)造與滅菌和酵母菌上罐發(fā)酵空氣過(guò)濾器及管路的消毒：蒸汽經(jīng)空氣過(guò)濾器及以后的空氣管道進(jìn)入發(fā)0.10～0.11MPa〔0.12MPa，。到時(shí)間后，關(guān)閉蒸汽閥。將空氣經(jīng)流量計(jì)進(jìn)入空氣過(guò)濾器〔0.4VVM20min。〔微開(kāi)。翻開(kāi)上部蒸汽閥，使蒸汽通過(guò)進(jìn)氣管進(jìn)入發(fā)酵罐；對(duì)發(fā)酵罐進(jìn)展空消。0.11～0.12MPa80℃以下時(shí)，才能排盡發(fā)酵罐內(nèi)的冷凝水，隨即關(guān)閉冷凝水閥。調(diào)整進(jìn)氣管和排氣口，使罐壓保持在0.03～0.05MPa2.5L1.5ml〔0.03~0.035%。擰緊加料口螺母。實(shí)消〔必需將安全防護(hù)罩裝上〕150rpm罐，連續(xù)升溫。95～100上部的蒸汽閥及排氣閥，使壓力保持在0.1～0.11MPa20min10min當(dāng)溫度降至發(fā)酵80℃后，慢速〔150rpm〕開(kāi)啟攪拌機(jī)，加速降溫。0.03~0.05MPa28℃。取樣方法：翻開(kāi)排氣閥，用蒸汽消毒20～30min。關(guān)閉蒸汽閥，放出少量料液。關(guān)閉閥門，再用蒸汽消毒。接種、取樣在接種口四周圍上酒精棉球，點(diǎn)燃，無(wú)菌操作接入種子液。0.03~0.05MPa，28150rpm。48h6出料發(fā)酵罐的清洗(三)酵母生長(zhǎng)代謝中生物基質(zhì)的測(cè)定生長(zhǎng)曲線的測(cè)定〔4000r/min,10min〕收集菌weight，CDW〕與時(shí)間的曲線圖。血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。繪制細(xì)胞個(gè)數(shù)與時(shí)間的曲線圖?；|(zhì)代謝與菌體生長(zhǎng)的關(guān)系〔4000r/min,10min〕后，取0.5ml上清液用糖度計(jì)測(cè)殘?zhí)?。繪制糖消耗曲線，即糖濃度對(duì)時(shí)間的變化曲線。五、試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理(一)本組〔一組〕試驗(yàn)數(shù)據(jù)組別 0.0h1糖度值15.5h24.1h39.2h48.5h1 2.21.90.90.40.32 2.11.81.20.50.53 2.21.51.00.60.24 2.21.61.10.80.3平均值 2.1751.71.050.5750.325表2 酵母菌干重〔g/ml〕組別0.0h15.5h24.1h39.2h48.5h10.0030.0210.0310.0260.02620.0030.0170.0170.0250.02430.0040.0190.0400.0240.02440.0020.0300.0290.0250.024平均值0.0030.021750.0290.0250.02453血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)〔個(gè)〕組別0.0h15.5h24.1h 39.2h48.5h15.3×1062.0×1077.8×107 1.2×1088.5×10726.1×1062.8×1075.2×107 9.5×1079.0×10735.9×1062.2×1077.3×107 7.0×1078.5×10745.5×1062.6×1076.5×107 8.0×1078.0×10755.7×1062.4×1076.7×107 9.1×1078.5×107平均值5.3×1062.0×1077.8×107 1.2×1088.5×107(二比照組〔二組〕試驗(yàn)數(shù)據(jù)表1糖度測(cè)量12

0.0h1.9%2.1%

14.5h1.20%1.8%

22.5h1.0%1.2%

37.6h0.8%0.8%

46.3h0.5%0.6%32.0%1.5%0.9%0.7%0.2%42.0%1.6%0.9%0.9%0.3%平均值2.0%1.2%1.0%0.8%0.4%表1酵母菌干重〔g/ml〕次數(shù)\時(shí)間0.0h14.5h22.5h37.6h46.3h11x10-31.9x10-24.3x10-29.4x10-28.1x10-225x10-31.6x10-24.2x10-29.2x10-28.5x10-233x10-32.3x10-21.9x10-21.3x10-11.14x10-1平均值3x10-31.93x10-2 3.47x10-2 1.05x10-13血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)〔個(gè)〕9.33x10-2次數(shù)\時(shí)間0.0h14.5h22.5h37.6h46.3h116334106214284352213281069190553431447210371997675平均值1737810561776.67548總數(shù)〔個(gè)/ml〕4.25x1069.45x1072.64x1084.442x1081.37x108發(fā)酵過(guò)程糖度含量3%發(fā)酵過(guò)程糖度含量3%3%2%2%一組二組1%1%0%0h14.5h22.5h37.6h46.3h1%圖1干重變化干重變化0.040.030.02二組一組0.0100h14.5h22.5h37.6h46.3h0.01圖2測(cè)酵母菌干重所得生長(zhǎng)曲線血球計(jì)數(shù)板變化曲線血球計(jì)數(shù)板變化曲線98.587.5二組一組76.560h14.5h22.5h37.6h46.3h圖3血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)變化曲線(四本組數(shù)據(jù)變化曲線糖度值變化曲線糖度值變化曲線2.52% 1.5度糖10.500510152025時(shí)間/h30354045504發(fā)酵液糖度值變化曲線酵母菌干重變化曲線酵母菌干重變化曲線0.0300.025/0.0200.0150.0100.