GB-T生物產(chǎn)品降解氨基甲酸酯類農(nóng)藥功效評價技術(shù)規(guī)范征求意見稿

ICS07.080

A21

中華人民共和國國家標準

GB/TXXXXX—201X

生物產(chǎn)品降解氨基甲酸酯類農(nóng)藥功效評價

技術(shù)規(guī)范

Technicalspecificationforefficacyevaluationof

Carbamatepesticidebiodegradation

（征求意見稿）

201X-XX-XX發(fā)布201X-XX-XX實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

中國國家標準1化管理委員會

GB/T××××—201×

GB/T××××—201×

生物產(chǎn)品降解氨基甲酸酯類農(nóng)藥功效評價技術(shù)規(guī)范

1范圍

本標準規(guī)定了生物產(chǎn)品降解氨基甲酸酯類農(nóng)藥的功效評價原理、試劑與材料、儀器設備與器具、分

析步驟和結(jié)果分析。

本標準適用于微生物和酶生物產(chǎn)品降解氨基甲酸酯類農(nóng)藥的效果評價。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T15818培養(yǎng)基配置方法

NY/T761-2008降解產(chǎn)物氨基甲酸酯農(nóng)藥的提取方法

GB23200.90-2016氨基甲酸酯農(nóng)藥的液相色譜-質(zhì)譜測定方法

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文本。

3.1

生物產(chǎn)品biologicproducts

利用生物技術(shù)獲得的微生物和酶產(chǎn)品。

3.2

氨基甲酸酯類農(nóng)藥carbamatepesticides

為氨基甲酸的N-甲基取代酯類。

3.3

降解效果degradationeffect

生物產(chǎn)品降解能力。

4原理

1

GB/T××××—201×

生物產(chǎn)品對氨基甲酸酯類農(nóng)藥降解處理后，經(jīng)液液萃取，濃縮、定容后，采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用

技術(shù)檢測，外標法定量。計算生物制品對氨基甲酸酯類農(nóng)藥的降解效率。

5儀器和設備

5.1恒溫振蕩器：震動0-300r/min；溫控范圍，室溫-100℃。

5.2分光光度計：波長330nm-800nm。

5.3pH計：精度0.01。

5.4高速冷凍離心機：g。

5.5分析天平：精度0.0001g。

6試劑和材料

除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為符合GB/T6682中規(guī)定的一級水。

6.1氨基甲酸酯類農(nóng)藥

氨基甲酸酯類農(nóng)藥純度≥99％。

6.2基礎液體培養(yǎng)基

按照GB/T15818中方法配制。

6.30.01mol/L磷酸鹽緩沖液，pH8.0

分別配制0.2mol/L的Na2HPO4和0.2mol/L的NaH2PO4，量取Na2HPO461mL,NaH2PO439mL,用3

mol/L的稀鹽酸和1mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH備用。

7分析步驟

7.1試驗設計

不同類型生物產(chǎn)品降解氨基甲酸酯類農(nóng)藥效果試驗設計應符合表1要求。

表1.生物產(chǎn)品降解有機磷類農(nóng)藥效果試驗設計

產(chǎn)品種類

項目

微生物產(chǎn)品酶產(chǎn)品

1.供測樣品

處理設計2.失活樣品

3.空白對照

2

GB/T××××—201×

雜環(huán)甲基氨基甲酸酯類：克百威；

萘基氨基甲酸酯類：西維因；

氨基甲酸酯類農(nóng)藥選擇

苯基氨基甲酸酯類：葉蟬散；

氨基甲酸肟酯類：涕滅威；

將有氨基甲酸酯類農(nóng)藥標準物質(zhì)用甲醇配制成100mg/L的儲

農(nóng)藥處理

備溶液，4℃冷藏保存?zhèn)溆?/p>

重復次數(shù)不少于3次

降解反應條件按正交試驗結(jié)果確定

7.2供試微生物產(chǎn)品試驗實施

7.2.1培養(yǎng)基制備

選擇基礎培養(yǎng)基，或根據(jù)微生物特殊生長需要對培養(yǎng)基進行改良。

7.2.2供試樣品處理

塊狀固體產(chǎn)品應進行研磨處理。

7.2.3失活樣品處理

取供試的固體或液體微生物樣品進行121oC，30min殺菌處理。

7.2.4最佳反應體系確定

設計正交試驗，影響因素宜選取微生物添加量、反應溫度、反應轉(zhuǎn)速、反應時間、底物濃度等，確

定最佳反應體系條件。

7.2.5降解試驗

取250mL三角瓶9個，空白樣3個，供試樣品瓶3個，失活樣品瓶3個。按照最佳反應體系確定

的底物濃度，制備底物溶液，滅菌后備用。然后根據(jù)微生物添加量，制備成反應體系為100mL的培養(yǎng)

液，在最佳反應體系條件下進行降解反應。

7.3供測酶試驗實施

7.3.1供試樣品處理

固體酶產(chǎn)品應進行研磨處理，稱取一定質(zhì)量的供測固體酶粉，采用不同pH的磷酸鹽緩沖液按要求稀

釋為不同濃度（g/mL）備用；若供測樣品為液體，用不同pH的磷酸鹽緩沖液按要求稀釋為不同濃度（mL/mL）

備用。

7.3.2失活樣品處理

取供試的固體或液體酶樣品在100oC環(huán)境下進行30min的去酶活處理。

7.3.3最佳反應條件確定

設計正交實驗，影響因素宜選擇酶濃度、底物濃度、反應溫度、反應時間、pH值等，確定最佳反

3

GB/T××××—201×

應體系條件。

7.3.4降解試驗

取25mL離心管9個，空白樣3個，供試樣品瓶3個，失活樣品瓶3個。按照最佳反應體系確定

的微生物添加量、底物濃度，制備成反應體系為10mL的反應液，在最佳反應體系條件下進行降解反

應。

7.4濃度測定

反應液按照NY/T761要求進行處理，然后按照GB23200.90要求進行測定。

8結(jié)果分析

8.1結(jié)果計算

降解率按照式（1）計算：

..............................(1)

(?????)???????(?????)

?=??×100%

式中：

R——降解率（%）；

Xi——底物原始濃度（mg/L）；

Xa——為供試樣品降解反應終點底物濃度（mg/L）；

Xb——為失活樣品降解反應終點底物濃度（mg/L）；

Xc——為空白樣品降解反應終點底物濃度（mg/L）。

以平行樣的平均值為最終的降解率值，計算結(jié)果保留到小數(shù)點后兩位。

8.2結(jié)果判定

以降解率的大小評價被測試生物產(chǎn)品的降解功效：降解率大于等于80%，小于100%時，降解效果為

好；降解率大于等于60%，小于80%時，降解效果為良好；降解率大于等于40%，小于60%時，降解效果為

較好；降