




版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
關(guān)于乙肝病毒的檢測HBV的三種形態(tài)1,HepatitisBvirion(Daneparticle)2,secretedfilament3,secretedsphere6第2頁,共26頁,2024年2月25日,星期天乙型肝炎病毒HBVHBV是嗜肝脫氧核糖核酸病毒科的哺乳動物屬的一員。HBV陽性的血清中有三種病毒顆粒.1.大球形顆粒,完整的HBV顆粒直徑為42nm,又名Dane顆粒,分為包膜與核心的兩部分,外衣殼及包膜含有表面抗原,衣殼內(nèi)為核心結(jié)構(gòu),有核心抗原,核心抗原下面藏有e抗原。第3頁,共26頁,2024年2月25日,星期天2.小球形顆粒,陽性血清中最多的顆粒,主要為表面抗原,不含核酸及DNA成分,為不完整的HBV.3.管形顆粒,實際上是一串小球形顆粒聚合在一起的,也含有表面抗原.第4頁,共26頁,2024年2月25日,星期天5生物化學檢測1HBV血清標志物的檢測2HBV分子生物學診斷3HBV臨床藥物療效檢測4HBV感染的實驗室檢查第5頁,共26頁,2024年2月25日,星期天1.乙型肝炎的生物化學檢測主要指標:ALT,AST,ASTm,血清白蛋白,血清膽紅素,膽堿酯酶,甲胎蛋白,凝血酶原時間(PT)及部分凝血因子;6第6頁,共26頁,2024年2月25日,星期天方法學ELISA:靈敏性高,成本低,適用于普通病人篩查;膠體金免疫層析法(金標法):簡便易行,可用于急診病人快速檢測;化學發(fā)光法定量檢測:價格昂貴,可用于HBVMs為臨界值的病人的確證;可間接反映宿主HBV的復制水平,在評價抗病毒治療的病毒學應(yīng)答、療效和判斷預(yù)后方面有重要意義。新增檢測指標Pre–S1、Pre–S2及其相應(yīng)抗體對乙肝兩對半認識72.HBV血清標志物檢測第7頁,共26頁,2024年2月25日,星期天8Pre–S1檢測的臨床價值前S1蛋白主要存在于Dane顆粒和管型顆粒上,在HBV感染宿主細胞過程及在病毒復制和刺激機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)中起重要作用;前S1抗原與HBeAg之間有高度相關(guān)性,并可區(qū)別因變異種及其他原因造成的乙肝病毒e抗原(HBeAg)假陰性,可作為HBeAg假陰性補充,從而準確反映患者體內(nèi)病毒復制情況;可作為HBV感染及復制的標注,與其它血清標志物聯(lián)合檢測,相互補充。Back第8頁,共26頁,2024年2月25日,星期天乙型肝炎的兩對半1.乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和表面抗體(HBsAb),
2.e抗原(HBeAg)和e抗體(HBeAb),
3.核心抗原(HBcAg)和核心抗體(HBcAb)
這三對乙肝病毒的抗原和抗體。由于HBcAg主要存在于受感染的肝細胞及乙肝病毒顆粒的核心內(nèi),一般血清中較難檢測到,只有用特殊的方法處理后才能查到,所以通常只能檢測到HBcAb,也就是說這第三對通常只能檢測到半對,所以稱之為"兩對半"。"兩對半"是乙肝病毒最常用的血清學標記。
第9頁,共26頁,2024年2月25日,星期天乙肝五項的32種組合第10頁,共26頁,2024年2月25日,星期天第11頁,共26頁,2024年2月25日,星期天第12頁,共26頁,2024年2月25日,星期天13大三陽小三陽vs第13頁,共26頁,2024年2月25日,星期天14HBVDNA定量檢測病毒復制水平最可靠,最直接的證據(jù),與傳染性和疾病進展密切相關(guān);主要用于HBV感染的判斷,治療適應(yīng)癥的選擇及抗病毒療效的判斷。HBV基因分型基因分型的必要性;基因分型的主要方法;HBV耐藥突變的檢測3.HBV分子生物學診斷第14頁,共26頁,2024年2月25日,星期天病毒基因突變疾病進展臨床表現(xiàn)對干擾素應(yīng)答耐藥變異生化學改善HBeAg血清學轉(zhuǎn)換HBVDNA清除急性乙型肝炎慢性乙型肝炎肝硬化(LC)肝細胞癌(HCC)15HBV基因型/基因亞型第15頁,共26頁,2024年2月25日,星期天分型方法優(yōu)缺點序列測定法最直接,最可信,是HBV基因分型的金標準,但繁瑣費時而且價格昂貴,混合型檢測能力差,不適于大樣本檢測。聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性分析法(PCR-RFLP)較測序法簡便,適于大樣本檢測,但由于需要進行酶切,所以操作仍較為繁瑣,成本較高,并存在酶切不徹底等問題。pre-S2單克隆抗體酶聯(lián)免疫測定(mAbsEIA法)簡單、快速,已商品化,適于大樣本檢測,但檢測費用較高并不能有效鑒別有些混合型感染和HBsAg低表達及某些表位表達不充分的標本。分子探針雜交法簡單、快速,對混合型檢測非常敏感,已商品化,適于大樣本檢測,但檢測費用較高而且靈敏度和特異度還有待提高。型特異性引物PCR法簡單、快速,成本低,具有較高的靈敏度,適于流行病學研究和臨床大樣本檢測。但特異度還有待提高。常用HBV基因分型方法比較16第16頁,共26頁,2024年2月25日,星期天客觀看待乙肝DNA1.乙肝病毒DNA定量往往被描述成為判斷乙肝傳染性大小、病情嚴重程度以及治療效果的“金指標”,其實這些認識都是片面的。乙肝病毒DNA定量檢測為了解乙肝病毒在體內(nèi)的變化增添了新的手段,彌補了以往乙肝病毒“兩對半”檢測的不足,只要抽血化驗檢測乙肝病毒DNA呈陽性,無論其他乙肝病毒檢測結(jié)果如何,都說明患者體內(nèi)存在復制狀態(tài)的乙肝病毒,血液具有一定傳染性,這對于評估治療效果和了解病情變化有一定幫助。但是目前乙肝病毒DNA檢測尚處于研究階段,并非完美無缺第17頁,共26頁,2024年2月25日,星期天乙肝病毒DNA定量不能說明病情輕重乙肝病毒DNA定量數(shù)值只能說明游離在血液中病毒的含量,病毒多少、含量高低與病情嚴重程度沒有直接關(guān)系。乙肝病情嚴重程度必須通過檢測肝功系列指標確定,這些指標包括:轉(zhuǎn)氨酶、膽堿酯酶、膽紅素、白蛋白、凝血酶原活動度、轉(zhuǎn)肽酶、蛋白電泳等等,凝血酶原活動度、白蛋白、膽堿酯酶數(shù)值越低,說明病情越嚴重。病毒定量數(shù)值高低與病情無直接關(guān)系。相反,絕大多數(shù)無癥狀乙肝病毒攜帶者,尤其是少年兒童患者,乙肝病毒DNA檢測都為陽性,乙肝病毒處于高復制狀態(tài),而他們的病情十分輕微,肝穿結(jié)果顯示,他們的肝組織僅為輕度的非特異性炎癥改變;而大多數(shù)肝硬化或肝癌患者的乙肝病毒DNA檢測多為陰性,而病情卻十分嚴重。乙肝病毒本身不引起肝細胞病變,感染的肝細胞仍然是長壽的,半衰期6~12個月或更長。乙肝病情輕重決于很多因素,例如患者的免疫狀態(tài)、遺傳因素、病毒的變異等,病毒數(shù)量多少不是病情演變的決定因素。第18頁,共26頁,2024年2月25日,星期天4.HBV臨床藥物治療監(jiān)測乙肝病毒的耐藥性檢測,是精準治療乙肝的關(guān)鍵!!目前由于治療不夠規(guī)范,造成我國目前超過95%的乙肝患者發(fā)生耐藥、病毒變異、病毒耐藥,變異檢測勢在必行!19第19頁,共26頁,2024年2月25日,星期天乙肝五項檢測的影響因素1.樣本采集與處理的影響
1.1標本嚴溶血及混有紅細胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈,殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣的活性,催化底物顯色造成假陽性,嚴重溶血標本禁用。
1.2塑料試管能吸附抗原物質(zhì),樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。最好使用一次性玻璃試管或真空管采血管;并使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會增加OD值,可能與高濃度肝素具有強大的負電荷能吸附酶標記物不易洗脫有關(guān);EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性。
1.3標本凝固不全,正常血液采集后1/2~2h開始凝固,18~24h血塊完全收縮。在工作中,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結(jié)果;因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,或標本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當?shù)拇倌齽?/p>
第20頁,共26頁,2024年2月25日,星期天2、試劑的影響
2.1乙肝兩對半試劑廠家較多;不同廠家出產(chǎn)的試劑靈敏度與特異性存在一定的差別,有資料顯示,不同廠家試劑的特異性和敏感性分別為89.4%—99.3%,78~89%存在較大差異。有的廠家酶標板孔間A值差大于15%;標記酶的活性及顯色液的穩(wěn)定比較差。使用質(zhì)劣的試劑必然導致結(jié)果的假陽性或假陰性。因此。選擇高質(zhì)量的試劑是保證結(jié)果準確的關(guān)鍵之一。
2.2不同方法學的檢測試劑,會使兩對半結(jié)果出現(xiàn)一些不同。例如:在實際工作中常用ELISA檢測HBsAg結(jié)果為陰性,而電化學發(fā)光檢測為陽性。除方法學的靈敏度外;還存在使用單抗或多克隆抗體試劑的差別。單抗對變異抗原或亞型乙肝標志物檢測存在差異,建議試劑廠家對劑的制備應(yīng)該考慮亞型及型濃度的問題。
第21頁,共26頁,2024年2月25日,星期天3、操作技術(shù)的影響
3.1加樣吸嘴的潔凈與否和吸量的準確性,直接影響檢測結(jié)果。由于吸嘴構(gòu)造特殊,導致清洗困難,加大了交叉污染的機會。建議用一次性吸嘴。加樣器也要經(jīng)常清洗,定期校準。
3.2溫浴影響,96孔酶標板結(jié)構(gòu)特別;易產(chǎn)生邊緣效應(yīng),抗原抗體結(jié)合及酶促反應(yīng)對溫度有嚴格要求,酶標板周圍與內(nèi)部孔升降溫速率不同,造成周邊與內(nèi)部孔結(jié)果差異;干浴與水浴存在明顯的差異,盡可能使用水浴,并要求固相板放入水中,減少受熱不均,貼密封膜,防止污物浸入。
3.3冼滌是ELISA操作的重要環(huán)節(jié),手冼條件一致性較差,對結(jié)果影響較大,半自動與全自動冼板機使用不當也會影響結(jié)果,血清中殘留的的纖維蛋白絲或洗滌液析出的結(jié)晶易使洗板機針小孔全阻塞或半阻塞狀態(tài),造成未結(jié)合標記酶洗脫不徹底,導致“花板”造成假陽性或假陰性;所以操作洗板機過程中要不時觀察洗板機針孔內(nèi)洗液的通暢狀況,及時糾正,洗板機不用時應(yīng)用去離子水清冼幾遍。
3.4肉眼判斷結(jié)果時,顯色淺不易觀察,影響結(jié)果的準確性,必須使用酶標儀檢測,以保結(jié)果一致性。
第22頁,共26頁,2024年2月25日,星期天4、HooK效應(yīng)影響
鉤狀效應(yīng)即HOOK效應(yīng),是指由于抗原抗體比例不合適而導致假陰性的現(xiàn)象,其中抗體過量叫做前帶效應(yīng);抗原過量叫做后帶效應(yīng)。
隨著ELISA一步法的應(yīng)用,一些標本中抗原含量過高,產(chǎn)生HooK效應(yīng)。影響檢測結(jié)果,采用同步稀釋測定或使用線性范圍高的兩對半定量法可以減HooK反應(yīng)的發(fā)生。
第23頁,共26頁,2024年2月25日,星期天5、干擾物質(zhì)的影響
有人認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質(zhì),可以不同程度影響檢測結(jié)果;常見的干擾物質(zhì)有:類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫(yī)源性誘導的抗鼠Ig抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)和其它物質(zhì)等。如RF因子可與標記二抗的FC段法結(jié)合造成假陽性,補體從C1q活化,使一抗和酶標二抗的抗體分子發(fā)生變構(gòu),F(xiàn)c的C1q分子結(jié)合點暴露出來,則補體C1q可將二者連接起來造成假陽性,采用56℃30分鐘滅活補體可降低假陽性率,高濃度的AFP(如孕婦),在儲存過程中可能形成二聚體會導致本底過深影響檢測結(jié)果。
第24頁,共26頁,2024年2月25日,星期天6、藥物的影響
6.1、高效價的乙肝免疫球蛋白會與HBsAg形成復合物,影響HBsAg的檢出,所以一些HBsAg陽性患者注射乙肝免疫球蛋白后,HBsAg檢測會呈陰性反應(yīng),導致乙肝兩對半少見模式的出現(xiàn),如我們常遇到乙肝大三陽的孕婦,為阻斷乙肝母嬰垂直傳播時,在孕第8、9、10月常規(guī)注射乙肝免疫球蛋白,不僅影響孕婦HBsAg的檢出;而且其所生產(chǎn)的生新兒也常出現(xiàn)HBsAg陰性,HBeAg陽性和HBcAb陽性等少見模式、可能是乙肝免疫球蛋白屬IgG抗體能通過胎盤進入胎兒體內(nèi)與胎兒
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- GB/T 26879-2025糧油儲藏平房倉隔熱技術(shù)規(guī)范
- 勞動合同參考模板
- 優(yōu)化保獎服務(wù)合作合同書2025
- 12 我們小點兒聲 第一課時(教學設(shè)計)-2024-2025學年統(tǒng)編版道德與法治二年級上冊
- 課程計劃和教學計劃
- 標準電工合同模板大全
- 市政道路工程合同范本
- 有限責任公司組建合同:出資與權(quán)益分配
- 7 扇形統(tǒng)計圖 第二課時(教學設(shè)計)-2024-2025學年六年級上冊數(shù)學人教版
- 采購合同協(xié)議書合同范本
- 衰老細胞代謝重編程-洞察分析
- 化工開停車培訓
- 貨物學 課件1.1貨物的基本概念與內(nèi)涵
- (2024年)中國傳統(tǒng)文化介紹課件
- 糖尿病患者飲食指導課件
- 人工智能數(shù)據(jù)標注百億產(chǎn)業(yè)詳細介紹
- 2024年10月自考02160流體力學試題及答案含評分參考
- 滬科版八年級物理知識點總結(jié)
- 2024員工質(zhì)量意識培訓
- 孫權(quán)勸學(原卷版)-2024年中考語文之文言文對比閱讀
- 失業(yè)保險待遇申領(lǐng)表
評論
0/150
提交評論