2020年臨床檢驗(yàn)中心PCR實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序概要

****醫(yī)院

臨床檢驗(yàn)中心

臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室

管理程序

標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）

起草人：

批準(zhǔn)人：

生效日期：年月日

目錄

臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置..............................................3

臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部管理規(guī)章.......................................11

臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室人員管理、配置及培訓(xùn)...............................15

臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施和環(huán)境.......................................18

臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室清潔制度規(guī)章.......................................19

臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備管理規(guī)章...................................21

Roche480n實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀操作規(guī)程、維護(hù)方法、校準(zhǔn)（SOP-1）未修改26

Finnpipette可調(diào)式移液器的使用與維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作（SOP-2）......................35

Finnpipette可調(diào)式移液器校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)管理程序（SOP-3）..........................39

溫度計(jì)及濕溫度計(jì)的校正標(biāo)準(zhǔn)管理程序（SOP-4）...............................40

離心機(jī)使用與維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-5）.....................................41

超凈工作臺(tái)使用與維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-6）.................................45

恒溫水浴箱使用、維護(hù)與校正（SOP-7）.....................................46

旋渦振蕩器使用與維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-8）..............................49

冰箱的使用與維護(hù)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-9）..................................50

可移動(dòng)紫外燈標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-10）......................................52

儀器故障時(shí)標(biāo)記、放置標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-11）.............................53

儀器設(shè)備發(fā)生故障時(shí)的應(yīng)急處理程序（SOP-12）............................54

臨床標(biāo)本的收集管理標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-13）................................57

檢驗(yàn)標(biāo)本的驗(yàn)收和保存標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-14）.............................58

樣本編號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-15）...............................................................................63

PCR標(biāo)本管理標(biāo)準(zhǔn)操作程序（S0P-16）....................................................................65

標(biāo)本前處理標(biāo)準(zhǔn)操作程序（S0P-17）..........................................................................67

核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（S0P-18）..................................................68

乙型肝炎病毒基因擴(kuò)增檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序（S0P-19）............................................70

基因擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-20）.................................................75

實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性判斷標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-21）........................................................78

室內(nèi)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-22）.........................................................................79

實(shí)驗(yàn)室試劑耗材購(gòu)買、驗(yàn)收和貯存的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-23）............................85

試劑質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-24）..............................................................................91

實(shí)驗(yàn)室耗材質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-25）..................................................................94

手套使用及左右手分開的原則（SOP-26）..................................................................97

實(shí)驗(yàn)室化學(xué)試劑貯存使用、廢棄物處理及生物防護(hù)（SOP-27）..............................98

抱怨的處理程序（SOP-28）........................................................................................101

實(shí)驗(yàn)室記錄管理規(guī)章標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-29）........................................................105

檢驗(yàn)報(bào)告單管理標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-30）................................................................108

實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面擺放順序程序（SOP-31）........................................................................112

實(shí)驗(yàn)室常用溶液配置標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP-32）........................................................113

學(xué)海無涯

臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置

1目的：依照實(shí)驗(yàn)室設(shè)置規(guī)范實(shí)現(xiàn)核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室配置合理，以保證

實(shí)驗(yàn)工作健康有序及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性

2范圍：臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室及相關(guān)工作人員，并明確各項(xiàng)規(guī)章制度

3操作人：****

4實(shí)驗(yàn)室設(shè)置規(guī)章：

4.1依據(jù)：

本實(shí)驗(yàn)室按《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法》（衛(wèi)醫(yī)發(fā)[XXXX]10

號(hào)）中臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室的條件進(jìn)行設(shè)

置，并嚴(yán)格按照《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》（衛(wèi)檢字XXXX第8

號(hào)）的要求開展臨床基因擴(kuò)增工作（擬開展基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目見附表1）

4.2實(shí)驗(yàn)室設(shè)置：

4.2.1實(shí)驗(yàn)室主要由試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)（PCR-I）、標(biāo)本制備區(qū)（PCR-II）、PCR

擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)（PCRTII）三個(gè)工作室組成。這三區(qū)各自獨(dú)立，每個(gè)區(qū)設(shè)有

緩沖間。其布局見實(shí)驗(yàn)室平面圖（見附圖1）。

4.2.2設(shè)立各區(qū)的門牌，分別是：“試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)（PCR-I）”、“標(biāo)本制備

區(qū)（PCR-H）”、“PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)（PCRTH）”，并在各區(qū)門上貼有“非

本室工作人員不得進(jìn)入”標(biāo)記。

4.2.3建立實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理，并放在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的明顯位置（如置于緩沖區(qū)的

墻上；內(nèi)務(wù)管理應(yīng)有進(jìn)入實(shí)驗(yàn)的工作流程、進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的要求、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)

備及清潔等）。

4.2.4三個(gè)工作區(qū)各配備專用的設(shè)備、儀器、輔助設(shè)施、耗材、清潔用品、辦

公用品、專用工作服，并有明顯的區(qū)分標(biāo)識(shí)：試劑準(zhǔn)備區(qū)一藍(lán)色，標(biāo)本制備

區(qū)一紫色，PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)一黑色。各區(qū)的實(shí)驗(yàn)物品不得混用（實(shí)驗(yàn)

室主要設(shè)備一覽表見表3）。

4.2.5進(jìn)入各區(qū)的工作流程為：試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)一標(biāo)本制備區(qū)一PCR擴(kuò)增及產(chǎn)

物分析區(qū)。

4.2.6進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須更換有本室標(biāo)識(shí)的工作服及清潔鞋套，工作人員離開某

一工作區(qū)時(shí)，該區(qū)物品不得帶出本區(qū)（包括工作服等）。

4.3各區(qū)實(shí)驗(yàn)設(shè)備及用品配置：

4.3.1試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)：

****醫(yī)院臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室--

學(xué)海無涯

冰箱（2?8c和-15C）、可調(diào)式移液器（覆蓋0.5~1000ul）、紫外消毒

車、固定紫外線燈，混勻器，專用工作服，一次性用品（手套、帶濾心的吸

頭、鞋套、吸水紙、耐高壓處理的離心管），專用實(shí)驗(yàn)記錄本及記號(hào)筆等。

4.3.2標(biāo)本制備區(qū)：

冰箱（2?8℃和-15℃）、臺(tái)式高速離心機(jī)、水浴鍋、凈化工作臺(tái)、混勻

器、可調(diào)式移液器（覆蓋1?lOOOul）、紫外消毒車、固定紫外線燈，專用工

作服，一次性用品（手套、帶濾心的吸頭、鞋套、吸水紙、耐高壓處理的離

心管），專用實(shí)驗(yàn)記錄本及記號(hào)筆等。

4.3.3PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)：

Line-Gene全自動(dòng)熒光定量PCR核酸擴(kuò)增儀、紫外消毒車、固定紫外線

燈，專用工作服，一次性用品（手套、鞋套、吸水紙等），專用實(shí)驗(yàn)記錄本及

記號(hào)筆等。

4.4實(shí)驗(yàn)室人員設(shè)置：

實(shí)驗(yàn)室人員配置：我院PCR實(shí)驗(yàn)室配備有3名工作人員，其中1人具檢

驗(yàn)師職稱，2人具主管檢驗(yàn)師職稱。已全部經(jīng)過安徽省臨床檢驗(yàn)中心培訓(xùn)，

并取得培訓(xùn)合格證（實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表見表2）。

起草人批準(zhǔn)人生效日期

年月日

****醫(yī)院臨床彝1擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室--

學(xué)海無涯

附表1擬開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目一覽表

項(xiàng)目方法備注

HBVDNAPCR熒光實(shí)時(shí)擴(kuò)增Line-Gene擴(kuò)增儀

****醫(yī)院臨床基朝擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室--

學(xué)海無涯

表2臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作人員一覽表

一

備

性

序年學(xué)所學(xué)畢業(yè)從事本培訓(xùn)合

注

別

號(hào)姓名職務(wù)職稱

齡歷專業(yè)時(shí)間專業(yè)時(shí)間格證號(hào)

中

1XXX//OC主管檢驗(yàn)82.742200XXXX**

專

中

2XXX//專8主管檢驗(yàn)81.744XXXXOOO**

中

3XXX//f檢驗(yàn)師檢驗(yàn)95.731XXXXOOO**

專

****醫(yī)院臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室--

學(xué)海無涯

表3臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備一覽表

接

放

接

受

儀

器

置

收

序

備

人

設(shè)備

地

狀

號(hào)生產(chǎn)廠家儀器型號(hào)儀器序號(hào)接收日期啟用日期

名

簽

稱

點(diǎn)

態(tài)注

字

試

劑

紫

外

江陰市光

準(zhǔn)

線

消全

1電儀器有ZXCI類B型XXXX-4-18XXXX-5-9

備

毒

車-新

限公司區(qū)

試

劑

美菱XX美菱

全準(zhǔn)

2電冰股份有限BCD-10962417XXXX-4-19XXXX-4-19

新備

箱公司區(qū)

試

劑

調(diào)

可

上海雷勃全

移

準(zhǔn)

式

3分析儀器4500120Y55777XXXX-4-19新XXXX-5-9

液

備

有限公司區(qū)

試

劑

可調(diào)上海雷勃

準(zhǔn)

式

移全

4分析儀器4500020Y50041XXXX-4-19XXXX-5-9

液

備

器

，新

有限公司區(qū)

試

劑

可調(diào)上海雷勃

全準(zhǔn)

5式移分析儀器4500100Y45849XXXX-4-19XXXX-5-9

新備

液器有限公司區(qū)

試

劑

調(diào)

可

上海雷勃全

移

準(zhǔn)

式

6分析儀器4500090Y56734XXXX-4-19新XXXX-5-9

備

液

有限公司區(qū)

試

劑

調(diào)

湘儀天平準(zhǔn)

7TG328XXXX-5-8撥XXXX-5-8

儀器廠備

天平區(qū)

樣

菌

無

本

化

凈

浙江大學(xué)全

準(zhǔn)

作

新

8工凈化設(shè)備GEM-SHGEM-SH-01XXXX-4-16XXXX-5-9

備

臺(tái)

廠區(qū)

樣

本

紫外江陰市光

消

準(zhǔn)

線電儀器有全

9一ZXCI類B型XXXX-4-18XXXX-5-9

毒

備

車限公司械新

r區(qū)

****醫(yī)院臨床鰥1擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室--

學(xué)海無涯

接

放

接

受

儀

器

置

收

備

人

序設(shè)備

地

生產(chǎn)廠"家儀器型號(hào)儀器序號(hào)接收日期狀啟用日期

名

簽

稱

點(diǎn)

號(hào)態(tài)注

字

樣

本

高

速

上海安亭全

心

準(zhǔn)

離

10科學(xué)儀器TGL-16B17XXXX-3-1新XXXX-3-19

備

機(jī)

r區(qū)

樣

本

美

菱XX美菱

冰

準(zhǔn)

電全

11股份有限BCD-10962422XXXX-4-19XXXX-4-19

備

箱新

公司區(qū)

樣

用

三

本

熱

電

上海躍進(jìn)

溫

準(zhǔn)

恒全

12S.HH.W21.42001006XXXX-2-15XXXX-3-30

浴醫(yī)療器械

備

水新

區(qū)

箱r

樣

本

微型

上海醫(yī)科全

勻

準(zhǔn)

混

13大學(xué)儀器XW-80AQ/DAALCo-XXXXXXXX-2-15新XXXX-3-30

器

備

廠區(qū)

樣

本

調(diào)

可上海雷勃

移

準(zhǔn)

式全

14分析儀器4500020Y50040XXXX-4-19XXXX-5-9

梃

新備

有限公司區(qū)

樣

本

可調(diào)

上海雷勃全

準(zhǔn)

移

式

15分析儀器4500100Y45850XXXX-4-19新XXXX-5-9

備

由

液

器

有限公司區(qū)

樣

本

可

調(diào)

上海雷勃全

準(zhǔn)

式

移

16分析儀器4500090Y56733XXXX-4-19新XXXX-5-9

備

液

器Y

有限公司區(qū)

樣

本

調(diào)

可上海雷勃

移

準(zhǔn)

式全

17分析儀器4500050F59968XXXX-4-19XXXX-5-9

備

梃新

有限公司區(qū)

K

杭州JahePCR

全

Thermo-擴(kuò)

18FGD-33ABYQ6079-244XXXX-4-16新XXXX-5-9

Magnetic增

儀

有限公司區(qū)

R

江陰市光PC

紫外擴(kuò)

電儀器有全

19線消ZXCI類B型XXXX-4-19XXXX-5-9增

限公司械新區(qū)

毒車

廠

****醫(yī)院臨床鄲I擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室--

學(xué)海無涯

圖1基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室平面圖

****醫(yī)院臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室

****醫(yī)院臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室--

學(xué)海無涯

臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部管理規(guī)章

1目的：依照實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范實(shí)現(xiàn)全面質(zhì)量管理，實(shí)現(xiàn)核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

室有專人負(fù)責(zé)，以保證實(shí)驗(yàn)工作健康有序及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性

2范圍：臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室及相關(guān)工作人員，并明確了各項(xiàng)規(guī)章制度

3操作人：**

4規(guī)章：

4.1實(shí)驗(yàn)室內(nèi)務(wù)管理規(guī)章：

4.1.1標(biāo)本的接收設(shè)在三個(gè)區(qū)以外的區(qū)域（與生化專用標(biāo)本接收區(qū)合用），在標(biāo)

本接收時(shí)同時(shí)進(jìn)行以下記錄：在標(biāo)本與化驗(yàn)單上同時(shí)進(jìn)行標(biāo)本的唯一性編

號(hào)，在標(biāo)本接收登記本上記錄患者的姓名、年齡，標(biāo)本接收日期，標(biāo)本的特

性、狀態(tài)，接收者簽名。經(jīng)驗(yàn)收合格后接收的標(biāo)本直接運(yùn)送至標(biāo)本制備區(qū)。

4.1.2實(shí)驗(yàn)過程中須嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)的工作流程：試劑準(zhǔn)備區(qū)一標(biāo)本制備區(qū)一擴(kuò)

增及產(chǎn)物分析區(qū)的唯一流向制度。

4.1.3開啟實(shí)驗(yàn)區(qū)前逐一打開設(shè)在緩沖區(qū)外墻上的紫外線燈開關(guān)（控制實(shí)驗(yàn)區(qū)

的固定紫外燈），照射30分鐘。

4.1.4工作開始前，在緩沖區(qū)換好本實(shí)驗(yàn)區(qū)工作衣，戴上一次性口罩、帽子，

套上一次鞋套，關(guān)閉紫外燈。打開緩沖的排風(fēng)裝置，開啟實(shí)驗(yàn)區(qū)門鎖，工作

時(shí)反鎖隔離門。

4.1.5進(jìn)行測(cè)定前的準(zhǔn)備和工作記錄（實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備和工作記錄見表4）：

a）記錄冰箱溫度、紫外線消毒時(shí)間；

b）消毒液、清潔液、75%酒精配制；

c）查看加樣器、擴(kuò)增儀、離心機(jī)、滅菌的吸頭等是否在有效期限內(nèi)；

d）校正水浴鍋溫度；

e）試劑準(zhǔn)備：試劑是否在有效期范圍內(nèi)，根據(jù)標(biāo)本量確定準(zhǔn)備模板的數(shù)量及

陰陽性對(duì)照數(shù)量；

4.1.6實(shí)驗(yàn)過程的記錄（見S0P文件）。

4.1.7檢測(cè)結(jié)果的記錄（見SOP文件）。

4.1.8實(shí)驗(yàn)完成后實(shí)驗(yàn)室清潔消毒處理及記錄：實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、加樣器、離心機(jī)、

超凈工作臺(tái)、振蕩器、擴(kuò)增儀、實(shí)驗(yàn)室空間、實(shí)驗(yàn)室地面等（詳見實(shí)驗(yàn)室清潔

制度）。

4.1.9工作結(jié)束，內(nèi)務(wù)整理完畢，關(guān)閉排風(fēng)裝置及實(shí)驗(yàn)區(qū)，加鎖。

4.1.10唯一流向制度同樣運(yùn)用于實(shí)驗(yàn)室物流管理及內(nèi)務(wù)管理。

****醫(yī)院臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室--

學(xué)海無涯

4.2質(zhì)量控制規(guī)章：

4.2.1制定各種SOP文件并嚴(yán)格執(zhí)行。

4.2.2參加室間質(zhì)評(píng)。

4.2.3開展室內(nèi)質(zhì)控工作。

4.3人員行為規(guī)章：

4.3.1要有強(qiáng)烈的時(shí)間觀念，按時(shí)上下班，不遲到、早退。

4.3.2實(shí)驗(yàn)室人員須保持儀表整潔。

4.3.3嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范，不得隨意更改操作步驟。

4.3.4實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員必須嚴(yán)格按照PCR實(shí)驗(yàn)室操作程序進(jìn)行，包括實(shí)驗(yàn)室擦

洗、臺(tái)面消毒，離心管、吸頭的無菌滅活準(zhǔn)備，儀器使用和廢棄物的處理等。

4.3.5進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作人員必須遵守實(shí)驗(yàn)室唯一流向制度，無必要盡量減少進(jìn)入

實(shí)驗(yàn)室的次數(shù)。

4.3.6實(shí)驗(yàn)室內(nèi)嚴(yán)禁飲食、吸煙。

4.3.7非本室工作人員未經(jīng)允許不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。

4.3.8語言有禮貌、舉止講文明，對(duì)待來訪病人或電話應(yīng)和藹禮貌，解釋明確耐

心，不得推脫或生硬回絕。

4.3.9晚上下班要關(guān)門、窗，檢查空調(diào)和儀器的電源是否關(guān)閉。

4.4儀器管理規(guī)章：

4.4.1實(shí)驗(yàn)人員必須熟悉儀器性能方允許操作，嚴(yán)格遵守操作規(guī)程。

4.4.2所有儀器（如PCR擴(kuò)增儀）須有專人負(fù)責(zé)，有使用維修記錄。

4.4.3儀器使用前必須檢查是否完好，一旦發(fā)現(xiàn)問題，及時(shí)向負(fù)責(zé)人反映，不

得擅自拆裝。

4.4.4注意保持儀器衛(wèi)生整潔，嚴(yán)禁在室內(nèi)抽煙，吃零食，非儀器操作員應(yīng)盡

量少入。

4.4.5每天了解儀器運(yùn)轉(zhuǎn)情況，負(fù)責(zé)儀器的整潔，安全，檢查電源，水龍頭。

4.4.6定期校正和維護(hù)PCR儀、離心機(jī)、水浴箱、冰箱等儀器、設(shè)備，并建立

儀器質(zhì)量認(rèn)證檔案。

4.5試劑管理規(guī)章：

4.5.1實(shí)驗(yàn)室根據(jù)需要，定期提交試劑申購(gòu)單，并做到及時(shí)盤存清點(diǎn)，入庫(kù)做

到心中有數(shù)。

4.5.2所購(gòu)試劑一律按試劑和耗材的SOP進(jìn)行，并做到來源渠道正規(guī)，質(zhì)量保

證。

4.5.3實(shí)驗(yàn)室對(duì)試劑庫(kù)存