腫瘤標(biāo)志物篩選策略與新腫瘤標(biāo)志物

腫瘤標(biāo)志物篩選策略與新腫瘤標(biāo)志物腫瘤標(biāo)志物

腫瘤細(xì)胞所產(chǎn)生或分泌的某種蛋白質(zhì)或其它物質(zhì)，與腫瘤的存在和發(fā)展密切關(guān)系。

可用于腫瘤的篩查、診斷、治療療效監(jiān)測(cè)和預(yù)后判斷。常見(jiàn)分類法:

蛋白類糖蛋白類酶類激素類核酸類第2頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天

腫瘤特異性抗原(tumorspecificantigen,TSA)

僅存在于某種腫瘤細(xì)胞表面，而不存在于相應(yīng)正常組織細(xì)胞或其它腫瘤細(xì)胞表面的抗原。

腫瘤相關(guān)性抗原(tumor-associatedantigen,TAA)

腫瘤細(xì)胞和正常組織細(xì)胞都表達(dá)的抗原物質(zhì)，只是其含量在細(xì)胞癌變時(shí)明顯升高，僅表現(xiàn)為量的變化，無(wú)嚴(yán)格腫瘤特異性，如胚胎抗原，分化抗原等。第3頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天理想的腫瘤標(biāo)志物1.靈敏度高：可以用于腫瘤早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷2.特異性好：腫瘤為陽(yáng)性，而非腫瘤時(shí)為陰性3.能對(duì)腫瘤進(jìn)行定位：具有器官特異性4.與疾病的嚴(yán)重程度：腫瘤大小，分期有關(guān)5.監(jiān)測(cè)腫瘤的療效6.監(jiān)測(cè)腫瘤的復(fù)發(fā)7.預(yù)測(cè)腫瘤的預(yù)后第4頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天理想是美好的，道路是曲折的理想狀態(tài)實(shí)際狀態(tài)第5頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天腫瘤太狡猾腫瘤細(xì)胞異質(zhì)性大腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程復(fù)雜多基因多因素參與理想腫瘤標(biāo)志物任重而道遠(yuǎn)！第6頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天腫瘤標(biāo)志物的篩選和研發(fā)策略第7頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天腫瘤標(biāo)志物的篩選和研發(fā)策略美國(guó)國(guó)立癌癥研究員制定的五個(gè)階段一、臨床前探索性研究二、臨床方法檢測(cè)已有疾病三、縱向回顧性分析研究四、前瞻性篩查研究五、控癌研究第8頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、臨床前探索性研究

尋找新的腫瘤標(biāo)志物研究標(biāo)本1.腫瘤組織與非腫瘤組織2.腫瘤細(xì)胞株與正常細(xì)胞株研究使用的方法技術(shù)1.組織芯片2.基因芯片3.蛋白質(zhì)差異表達(dá)比較4.單克隆抗體技術(shù)第9頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天一、臨床前探索性研究

尋找新的腫瘤標(biāo)志物研究標(biāo)本1.腫瘤組織與非腫瘤組織2.腫瘤細(xì)胞株與正常細(xì)胞株研究使用的方法技術(shù)1.組織芯片2.基因芯片3.蛋白質(zhì)差異表達(dá)比較4.單克隆抗體技術(shù)差異比較第10頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天組織芯片

是生物芯片技術(shù)的一個(gè)重要分支，是將許多不同個(gè)體組織標(biāo)本以規(guī)則陣列方式排布于同一載玻片上，進(jìn)行同一指標(biāo)的原位組織學(xué)研究。第11頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天①選取所需蠟塊,常規(guī)切片做HE染色,顯微鏡下確定目標(biāo)區(qū)并做定位標(biāo)記。1組織芯片制備過(guò)程第12頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天②采用組織芯片儀在受體蠟塊上打孔,并精確排成微孔陣列。③在做標(biāo)記的蠟塊上鉆取組織柱,按設(shè)計(jì)方案移到受體蠟塊上。第13頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天④把設(shè)計(jì)好的蠟塊放入溫箱,根據(jù)蠟質(zhì),調(diào)定溫箱溫度,在半融狀態(tài)下取出,室溫冷卻,放入4℃冰箱中備用。⑤借助特定切片輔助系統(tǒng)—粘著包被帶卷片系統(tǒng),

對(duì)組織芯片蠟塊連續(xù)切片。切片厚度2～3μm,

一般可切片50～100張。第14頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天第15頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天

各種不同低、中、高密度組織芯片1,2是低密度組織芯片（組織點(diǎn)<200）。3,4,5,6是中密度組織芯片(組織點(diǎn)200-600)。7,8是高密度組織芯片(組織點(diǎn)>600)第16頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天基因芯片

基因芯片的測(cè)序原理是雜交測(cè)序方法，即通過(guò)與一組已知序列的核酸探針雜交進(jìn)行核酸序列測(cè)定的方法，在一塊基片表面固定了序列已知的核苷酸的探針。第17頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天DNA芯片第18頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天6400點(diǎn)的基因芯片（面積12X14mm)第19頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天蛋白質(zhì)差異表達(dá)比較

二維電泳蛋白質(zhì)比較研究的質(zhì)譜相關(guān)技術(shù)SELDI蛋白質(zhì)芯片技術(shù)第20頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天1.Expressionproteomics(表達(dá)蛋白組學(xué))ThestudyofglobalchangesinproteinexpressionProteomics2.Cell-mapproteomics（細(xì)胞圖譜蛋白組學(xué)）Thesystematicstudyofprotein-proteininteractionsthroughtheisolationofproteincomplexes蛋白質(zhì)差異表達(dá)比較

第21頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天

雙向凝膠電泳是利用不同蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì)的差異，把復(fù)雜蛋白混合物中的蛋白質(zhì)在二維平面上展開(kāi)。第一向等電聚焦:等電點(diǎn)第二向SDS：分子量二維電泳第22頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天第23頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天蛋白質(zhì)比較研究的質(zhì)譜相關(guān)技術(shù)

基質(zhì)輔助激光解吸電離技術(shù)MALDI

(Matrix-assistedlaserdesorption/ionization)電噴霧電離質(zhì)譜術(shù)

ESI（Electrosprayionisation

）第24頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天

單克隆抗體技術(shù)的核心是用骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)特定抗源免疫刺激的B淋巴細(xì)胞融合得到雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞既能象骨髓瘤細(xì)胞那樣在體外無(wú)限增殖，又具有B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體的能力。單克隆抗體技術(shù)第25頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天第26頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天單克隆抗體技術(shù)1.使用腫瘤細(xì)胞免疫動(dòng)物后，得到的雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體，反過(guò)來(lái)尋找抗原。2.在腫瘤細(xì)胞中驗(yàn)證第27頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天新腫瘤標(biāo)志物

1.HE42.GP733.Her-24.Pepsinogen5.S1006.PRO-GRP第28頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天HE4屬于乳清酸性4-二硫化中心（WFDC）蛋白家族.HE4首先在附睪遠(yuǎn)端的上皮中被發(fā)現(xiàn)，并且最初認(rèn)為它是一種與精子成熟相關(guān)的蛋白酶抑制劑。一分泌型HE4已經(jīng)在卵巢癌患者的血清中檢測(cè)到有高水平表達(dá)。第29頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天GP73GP73是存在于高爾基體的一種跨膜蛋白。2000年Kladney研究表明，在正常的人體肝組織中，GP73主要由膽管上皮細(xì)胞表達(dá)，而肝細(xì)胞表達(dá)很少甚至不表達(dá)。肝細(xì)胞受到病毒感染后可引起GP73的表達(dá)上調(diào)。2005年Block等發(fā)現(xiàn)，在肝癌患者血清中GP73水平顯著升高。在一項(xiàng)研究中，與肝硬化患者相比，144例肝癌患者的血清GP73水平顯著升高。GP73診斷肝癌的敏感性為69%，特異性為75%。第30頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天人類表皮生長(zhǎng)因子受體2-Her2Her2基因,即c-erbB-2基因，定位于染色體17q12-21.32上,編碼相對(duì)分子質(zhì)量為185000的跨膜受體樣蛋白，具有酪氨酸激酶活性Her2陽(yáng)性(過(guò)表達(dá)或擴(kuò)增)的乳腺癌，其臨床特點(diǎn)和生物學(xué)行為有特殊表現(xiàn)，治療模式也與其他類型的乳腺癌有很大的區(qū)別，目前已有針對(duì)該基因失活的藥物赫賽?。℉erceptin）臨床意義：是重要的乳腺癌預(yù)后判斷因子用于指導(dǎo)赫賽汀治療選擇化療方案以及療效評(píng)價(jià)第31頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天胃蛋白酶原-pepsinogen

胃蛋白酶原是由胃粘膜分泌的胃蛋白酶前體PGI僅存在于胃底和胃體部粘膜的主細(xì)胞、頸粘液細(xì)胞，而PGII則分布于全胃及十二指腸的Burnner腺細(xì)胞，均可在血清與尿液中測(cè)出胃癌患者PGI的含量及PGI/PGII比值均明顯降低，測(cè)定PGI水平與PGI/PGII比值可作為胃癌診斷的一個(gè)輔助指標(biāo)PGI與胃酸的分泌存在平行關(guān)系。PGI水平和PGI/PGII的比值能夠反映胃粘膜的功能狀態(tài)，并且與胃粘膜萎縮的范圍及嚴(yán)重程度顯著相關(guān)。鑒于中、重度萎縮性胃炎與腸型胃癌的發(fā)生關(guān)系密切，PGI或PGI/PGII比值明顯降低預(yù)示患腸型胃癌的危險(xiǎn)因素增加第32頁(yè),共33頁(yè)，2024年2月25日，星期天S100

S100蛋白分子量為10.5KD的鈣結(jié)合蛋白S100A1和S100B是最先發(fā)現(xiàn)的成員。由中樞神經(jīng)系