臨床微生物學檢驗技術

臨床微生物學檢驗技術

一、微生物的分類：原核細胞型、真核細胞型、非細胞型微生物。

二、原核細胞型微生物

1.特點：（1）只有原始核物質(zhì)（DNA）;（2）不具有膜界定的細胞核，也無核仁；③遺

傳物質(zhì)為環(huán)狀裸露的雙股DNAo

2.例子：細菌、支原體、衣原體、立克次體、螺旋體和放線菌。

三、真核細胞型微生物

1.特點：（1）細胞核分化程度高；（2）有核膜和核仁，通過有絲分裂進行繁殖；（3）胞

漿內(nèi)有多種完整的細胞器。

2.例子：真菌、海藻。

四、非細胞型微生物

1.特點：無產(chǎn)生能量的酶系統(tǒng)，只能在活細胞內(nèi)生長繁殖。

2.例子：病毒。

第一章

一、不染色標本的檢查

1.檢測：不染色標本一般用于觀察細菌的動力及運動情況，但不能清楚地看到細菌的形

態(tài)及結(jié)構(gòu)特征。有動力的細菌在鏡下呈活潑有方向性的運動，有明顯位移；無動力的細

菌則在原位顫動，呈不規(guī)則的布朗運動。常用的方法有壓滴法和懸滴法，以普通光學顯

微鏡觀察，日用暗視野顯微鏡，效果更好。

2.初步鑒定：在臨床上，有時通過不染色標本的動力檢查可對某些病原菌作出初步鑒定。

如疑似霍亂患者，可取米沿樣便，制成壓滴或懸滴標本，高倍鏡或暗視野下觀察細菌動

力，若見穿梭樣運動的細菌，則同法再制備一標本片并加入O1群霍亂弧菌抗血清，若

細菌的活躍運動現(xiàn)象消失，稱之為制動試驗陽性，可初步推斷為“疑似O1群霍亂弧菌”。

另外螺旋體由于不易著色并有特征性的形態(tài)特點，亦可用不染色標本作暗視野顯微鏡觀

察。

二、穿刺接種法

1.用于半固體培養(yǎng)基或雙糖鐵、明膠等具有高層的培養(yǎng)基接種，以保存菌種或觀察細菌

的動力和生化反應。

2.方法：用接種針挑取細菌純培養(yǎng)物，于半固體培養(yǎng)基的中心處向下垂直穿刺接種，直

至試管底部上方5mm左右（不能穿至試管底），接種后的接種針沿原穿刺線退出;或在雙

糖鐵瓊脂斜面中心穿刺，沿原路退出，并用接種針在斜面劃曲線。

三、氧化酶試驗

⑴原理:氧化酶也稱細胞色素氧化酶，是細胞色素呼吸酶系統(tǒng)的終末呼吸酶。具有氧化酶

的細菌首先氧化細胞色素C,然后氧化型細胞色素C再使對苯二胺氧化，生成有顏色的

醍類化合物。使用鹽酸甲基對苯一胺時，產(chǎn)物早紫紅色:使用鹽酸四甲基對苯二肢時,

產(chǎn)物呈藍色。

⑵試劑：1%鹽酸二甲基對苯二胺或1%鹽酸四甲基對苯二胺。

⑶應用:主要用于腸桿菌科和非發(fā)酵菌的鑒定，前者名為陰性，弧菌科、非發(fā)酵菌多。

為陽性。此外奈瑟菌屬、莫拉菌屬也星陽性。

四、過氧化氫酶（觸酶）試驗

⑴原理:有些細菌具有過氧化氫酶，可把過氧化氫分解成水和新生態(tài)氧，進而形成分。

子氧出現(xiàn)氣泡。

⑵試劑:3%過氧化氫溶液。

⑶應用:主要用于革蘭陽性球菌的初步鑒定。葡萄球菌屬和微球菌屬觸酶試驗阻性，鏈

球菌屬觸酶試驗陰性。金氏桿菌屬細菌的觸酶試驗也陰性。

五、凝固酶試驗

⑴原理:葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶。一是結(jié)合在細胞壁上的結(jié)合凝固酶，使血漿中的

纖維蛋白原變成纖維蛋白而附著于細菌表面，發(fā)生凝集，玻片法可檢測結(jié)合凝固酶。另

一種是分泌至菌體外的游離凝固酶，類似凝血酶原物質(zhì)，可被血漿中的協(xié)同因子激活變

成凝血酶樣物質(zhì)，使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白。從而導致血漿凝固，游離凝固酶可用試

管法檢出。

⑵試劑:免血漿。

⑶應用:作為鑒定葡萄球菌致病性的重要指標。金黃色葡萄球菌產(chǎn)生凝固酶，使血漿凝

固。而表皮及腐生葡萄球菌的凝固酶則陰性。

六、克氏雙糖鐵或三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基試臉

（1）原理:雙糖鐵（或三糖鐵）培養(yǎng)基是以酚紅做指示劑，含有葡萄糖和乳糖（蔗糖），其

中葡萄糖含量僅為乳糖（蔗糖）十分之的固體培養(yǎng)基。能發(fā)酵乳糖（和蔗糖）或同時發(fā)酵葡

萄糖的細菌產(chǎn)酸量較大，使KIA（或TSI）的斜面和底層均呈黃色；只能發(fā)酵葡萄糖，面

不發(fā)酵乳糖(和蔗糖)的細菌，產(chǎn)酸量較少，在最初培養(yǎng)的8~10小時也可使深層和斜面

均呈黃色，連續(xù)培養(yǎng)18~24小時后，斜面部分的酸由于揮發(fā)、氧化和被細菌降解氨基

酸所產(chǎn)生的胺類中和，斜面部分又恢復紅色。底層由于處于缺氧狀態(tài)，細菌分解氨基酸

產(chǎn)生的酸一時不被氧化，依然呈黃色；如果發(fā)酵糖類產(chǎn)生氣體，可在培養(yǎng)基中出現(xiàn)氣泡

或氣體沖破瓊脂的裂隙；有些細菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸，產(chǎn)生的H2s在酸性條

件下遇鉛或鐵離子形成硫化鉛或硫化亞鐵，在底層形成黑色的沉淀物。

⑵培養(yǎng)基：KIA或TSI瓊脂培養(yǎng)基。

⑶應用:主要用于腸桿菌科細菌的初步鑒定。

第二章

一、真菌的檢驗方法包括：標本直接鏡檢、染色鏡檢、分離培養(yǎng)、生化反應及免疫學試

驗等。

二、直接鏡檢處理標本所用溶液

LKOH溶液：由于KOH溶液可促進角質(zhì)蛋白的溶解，所以本液適于致密、不透明標本

的檢查，如毛發(fā)、指甲及鱗屑等。根據(jù)標本的質(zhì)地不同，可選用不同的濃度，如皮屑可

用10%,毛發(fā)可用20%,必要時可在10%的KOH溶液中加入終濃度為40%的二甲基亞

碉，以進一步促進角質(zhì)的溶解。若標本需較長時間保存，可在10%的KOH溶液中加入

10%甘油，使一般標本保存數(shù)周至數(shù)月。

2.生理鹽水:若觀察真菌的出芽現(xiàn)象，可用生理鹽水代替KOH溶液。將標本置于載玻片

上，加生理鹽水和蓋玻片，在蓋玻片四周用凡士林封固，防止水分蒸發(fā)，35℃培養(yǎng)3~4

小時后觀察出芽現(xiàn)象。此外，膿汁、尿及糞便等標本，可滴加少量生理鹽水后直接鏡檢。

3.水合氯醛一苯酚一乳酸封固液:將水合氯醛20g,純苯酚10g,純?nèi)樗?0ml,混合后

加溫溶解即可。此液消化力較強，只限于不透明標本的檢查。

三、分離培養(yǎng)

(―)基本條件

1.常用工具除常用的平血、試管及培養(yǎng)箱外.還需制作接種針、接種環(huán)和接種鉤。2.培

養(yǎng)基真菌的營養(yǎng)要求不高，在一般細菌培養(yǎng)基上即可生長。最適pH4.06.0。在不同的

培養(yǎng)基上真菌省落形態(tài)變化很大，一般以在沙保弱培養(yǎng)基(Sabouraudmedium)上的

生長現(xiàn)象來描述真菌菌落的形態(tài)。

通常根據(jù)真菌對營養(yǎng)要求的差異及培養(yǎng)目的不同而選擇不同的培養(yǎng)基。最常用的培養(yǎng)基

見表2-2o

?2-2常用JI■培養(yǎng)?及用途

沙保四培養(yǎng)不我侑的南妮培柞

放線曲制-如雷素瓊版網(wǎng)俱的常加培養(yǎng)

K米粉聚山梨脫40瓊脂蛻察n倒彩的母菌的即腰他r

“錚如他的豺瓊心觀察n曲著落色豪,用F整別

尿素瓊脂用生化反應’金別真的（紅色茄赭和石青樣胤曲）

心肺浸液岫6?融血瓊脂深部雙前培養(yǎng)

（二）培養(yǎng)方法

真菌培養(yǎng)方法有多種，根據(jù)需要選用合適的方法。

1.試管培養(yǎng)法是實驗室中最常用的一種方法，一般用于菌種傳代接種與保存。在大

管徑試管中裝入培養(yǎng)基，制成斜面，將標本接種其中。此方法使用方便、不易污染，但

展示面積不夠，不能完全顯示菌落的全部。

2.大培養(yǎng)法用培養(yǎng)皿或大型培養(yǎng)瓶裝入培養(yǎng)基，接種標本。培養(yǎng)后菌落較大，易于

觀察。該法容易污染，對球抱子菌、組織胞漿菌等傳染性強的真菌培養(yǎng)不適合。

3.小培養(yǎng)法又稱微量培養(yǎng)法，是觀察真菌結(jié)構(gòu)及生長發(fā)育的有效方法。小培養(yǎng)方法

多種多樣，主要如下：

⑴玻片培養(yǎng):①取無菌"V"形玻璃棒放入無菌平皿內(nèi)。②取無菌載玻片放在玻璃棒上。

③制備1c肝馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）于載玻片上。④于瓊脂塊的每一側(cè)用接種針接種

待檢菌。⑤取燒灼后的蓋玻片蓋在瓊脂塊上。平皿內(nèi)放少許無菌蒸僧水，加蓋，于

25~28（培養(yǎng)（白假絲酵母菌培養(yǎng)24-48小時，而皮膚癬真菌培養(yǎng)1~7天）。⑥培養(yǎng)后,

棄瓊脂塊于消毒液中，滴加乳酸酚棉藍染液（LPCB）于載玻片上，再將取下的蓋玻片置于

載玻片上染色鏡檢。

⑵小型蓋片直接培養(yǎng)法:按常規(guī)方法接種標本在試管或平板中。取無菌llmmx11mm

大小的蓋玻片，加蓋1層薄培養(yǎng)基。將此蓋玻片有培養(yǎng)基的面朝向接種處插入瓊脂，在

適當環(huán)境培養(yǎng)后，肉眼可見有菌生長時取出蓋玻片，有菌面朝下直接覆蓋在加有封固液

的載玻片上，顯微鏡下觀察。

⑶瓊脂方塊培養(yǎng)法:在無菌平皿中放入無菌的U型或V型玻璃棒（或其他支持物），加適

量無菌水或含水棉球。取1片無菌載玻片放于玻璃棒上，從平板培養(yǎng)基上取4~5mm

厚、8mmx8mm大小的瓊脂塊置于載玻片上。在瓊脂塊的四周接種標本，然后加蓋無

菌蓋玻片。在適宜環(huán)境中培養(yǎng)，肉眼發(fā)現(xiàn)有菌生長時提起蓋破片，移去瓊脂塊，將蓋玻

片直接放在載玻片上，顯微鏡觀察。

（三）生長現(xiàn)象

真菌生長后主要觀察菌落的以下方面：

1.生長速度菌落在7~10天內(nèi)出現(xiàn)者，為快速生長；3周只有少許生長者為慢速生長。

菌落生長的快慢與菌種、培養(yǎng)條件有關。

2.菌落大小以“mm”或“cm”記錄菌落直徑。菌落大小與菌種、生長速度、培養(yǎng)環(huán)

境及培養(yǎng)時間長短有關。

3.表面形態(tài)菌落表面可為平滑、凸起或凹陷、皺褶等，有的菌落表面可出現(xiàn)溝紋，如

腦回狀、放射狀或同心圓狀。

4.菌落性質(zhì)可分為酵母型、醇母樣型和絲狀菌落。酵母型菌落外觀光滑、質(zhì)地柔軟、

呈乳酪樣，與細菌菌落相似，如隱球菌。酵母樣型菌落與酵母型菌落相似，但形成假菌

絲，伸入培養(yǎng)基中，如假絲酵母菌。絲狀菌落是多細胞真菌的菌落形態(tài)，呈棉絮狀、絨

毛狀或粉末狀。根據(jù)菌種、菌落形態(tài)可鑒別菌落的性質(zhì)。

5.菌落顏色隨菌種不同可表現(xiàn)不同的菌落顏色。絲狀菌落的表面和底層顏色不同。

6.菌落邊緣有些菌種整齊如刀切，有些呈羽毛狀，隨菌種不同而異。

7.菌落底部有些菌落會陷入瓊脂中，有時培養(yǎng)基甚至開裂。

四、藥物敏感試驗

真菌感染病例越來越多?？拐婢幬锟捎卸喾N選擇，而致病性真菌容易出現(xiàn)耐藥，

抗真菌藥物敏感試驗顯得日趨重要，并成為指導臨床醫(yī)師用藥的重要手段之一。

（一）臨床常用抗真菌藥物

抗真菌藥物可按以下方法分類。

1.根據(jù)化學結(jié)構(gòu)分類①多烯類抗生素，如兩性霉素B、制霉菌素、曲古霉素等:②吐

咯類，包括酮康嚶、伊曲康哇、氟康嚶、伏立康嘎、克霉嘎、益康哇等；③其他類，如

氟胞喀嚏。

2.根據(jù)作用機制分類①作用于真菌細胞膜，如兩性霉素B、制霉菌素、氟康嚏、伊曲

康嚶、伏立康哇、酮康建及克霉嚶等:②作用于真菌細胞壁，如尼可霉素Z,卡泊芬凈及

普拉米星等:③作用于真菌核酸干擾真菌DNA合成，如5-氟胞喀咤（S-FC）等；④其他：

大蒜新素及冰醋酸等。

（二）抗真菌藥物敏感試驗方法

抗真菌藥物敏感試驗的設計和操作如同抗細菌藥物敏感試驗，目的為：①提供兩種

以上有相當活性的、敏感的抗真菌藥物；②檢測體內(nèi)藥物活性，預測治療效果；③監(jiān)控

耐藥性菌株的發(fā)生；④預期抗真菌藥物的治療效能和抗真菌藥物新藥研發(fā)。

五、墨汁染色鏡檢方法與對象

用于檢查有莢膜的真菌，如新生隱球菌（Crptococcusneoformans）先將優(yōu)質(zhì)

墨汁（如印度墨汁，無顆?；螂s質(zhì)）滴于載玻片上，再滴上待檢標本，二者混合，加蓋玻

片鏡檢。采用墨汁染色后，背景染成黑色，菌體不著色，在黑色背景下可鏡檢到透亮菌

體和寬厚莢膜，又稱墨汁負染色。

第三章

一、病毒的培養(yǎng)

病毒是嚴格細胞內(nèi)寄生的微生物，必須以活細胞進行培養(yǎng)，故應根據(jù)病毒種類選擇

相應的細胞、雞胚或敏感動物進行病毒的培養(yǎng)與鑒定。在做烈性病毒性傳染病標本培養(yǎng)

時，必領在生物安全實驗室內(nèi)，嚴格遵循無菌操作和生物安全防護原則。

（一）細胞培養(yǎng)

病毒與細胞間關系有嚴格的選擇性，有的病毒可在多種細胞中增殖，有的細胞適用

于名種病毒增殖，這取決于細胞對病毒的敏感性。

用于培養(yǎng)病毒的細胞有原代細胞、二倍體細胞和傳代細胞系細胞培養(yǎng)。

（二）雞胚培養(yǎng)和動物接種

1.雞胚培養(yǎng)具有廣泛易感性，收獲物中富含病毒，結(jié)果易判斷，條件易控制，且

來源充足，操作簡單，適于病毒分離、疫苗生產(chǎn)、抗原大量制備、抗病毒藥物研究等。

流感病毒、皰疹病毒?痘病毒等均可用雞胚分離。一般采用9~12日齡雞胚，按病毒種類

選擇接種部位：①羊膜腔接種：用于從臨床材料（如患者咽漱液）初次分離流感病毒等，

這種接種途徑在羊水和尿囊液中均可收獲病毒；②絨毛尿囊膜接種：用于痘病毒和單純

皰疹病毒的分離，這些病毒在絨毛尿囊膜上可形成肉眼可見的斑點狀或痘皰狀病灶，感

染性病毒顆粒的數(shù)目可以通過產(chǎn)生的斑或痘數(shù)目來計算，因此該方法還可用于抗病毒血

清滴定試驗，即在有抗體存在的情況下，痘皰形成受到抑制；③尿囊腔接種：用于流感

病毒、腮腺炎病毒和新城疫病毒的分離和傳代培養(yǎng)，病毒可在內(nèi)皮細胞中復制，復制的

病毒被釋放到尿囊液中，因此，尿囊液可收獲大量病毒；④卵黃囊接種：用于某些嗜神

經(jīng)病毒培養(yǎng)。病毒主要在卵黃囊的內(nèi)皮細胞生長，可分離流行性乙型腦炎病毒。

2.動物接種動物接種是病毒分離最早使用的方法，現(xiàn)逐漸被細胞培養(yǎng)所代替，但

在某些病毒仍用此方法。常用動物為豚鼠、家兔、猴、小白鼠和大白鼠等。動物的選擇

應考慮其對病毒的易感性、動物的健康狀況、大小、性別和品系等。接種部位亦隨病毒

種類而異，可有腦內(nèi)、鼻內(nèi)、皮內(nèi)、皮下、腹腔、靜脈接種等。如用出生24?48小時

內(nèi)的乳鼠分離柯薩奇病毒，用小鼠腦內(nèi)接種流行性乙型腦炎病毒、登革熱病毒和出血熱

病毒。接種后，每日觀察和記錄動物發(fā)病情況，若動物瀕臨死亡則在死亡前取病變組織

繼續(xù)傳代與鑒定。

二、病毒的鑒定

1.病毒測定的方法：50%組織細胞感染量測定、紅細胞凝集試驗、空斑形成試驗、中和

試驗。

2.細胞病變：病毒在敏感細胞內(nèi)增殖時可引起特有的細胞改變，稱細胞病變效應（CPE）,

用光學顯微鏡即可觀察到，可作為病毒增殖的指標。常見的病變有:①細胞圓縮、分散、

溶解，系腸道病毒、鼻病毒、披膜病毒、痘病毒等感染所致；②細胞融合成多核巨細胞,

系皰疹病毒、副黏病毒、RSV感染跡象；③細胞腫脹、顆粒增多、病變細胞聚集成葡萄

串狀，提示腺病毒感染；④形成包涵體?？袢《竞虲MV可致細胞質(zhì)或核內(nèi)出現(xiàn)嗜酸

性或嗜堿性包涵體。經(jīng)驗豐富的實驗人員可通過CPE的特征判斷病毒的種類，甚至初

步分型。

第四章

一、抗菌藥物種類

青霉素類、頭胞菌素類、其他B-內(nèi)酰胺類（單環(huán)類、頭抱素類、碳青霉烯類、克拉維酸、

舒巴坦、他嚏巴坦、復合制劑）。

二、MIC（最小抑菌濃度）概念及原理

稀釋法所測得的某抗菌藥物能抑制待測菌肉眼可見生長的最低藥物濃度稱為最低抑菌

濃度。用途:是體外藥敏試驗衡量細菌對抗菌藥物的敏感指標。

三、FIC（部分抑菌濃度）

FIC指數(shù)=A藥聯(lián)合時的MIC/A藥單測時MIC+B藥聯(lián)合時的MIC/B藥單測MIC。判

斷標準：FIC指數(shù)＜0.5為協(xié)同作用；0.51為相加作用；1~2為無關作用；＞2為拮抗作

用。

第五章

一、院內(nèi)感染的定義

醫(yī)院內(nèi)感染(nosocomialifctionenND),又稱醫(yī)院獲得性感染。

1.廣義：是指任何人員在醫(yī)院活動明間遭受病原體侵襲而引起的任何診斷明確的感染或

疾病。

2.俠義：是指住院病人入院時不存在，且未處于潛伏期，而在住院期間遭受病原體侵裝

引起的任何診斷明確的感染或疾病，不論受感染者在醫(yī)院期間或是出院以后出現(xiàn)癥狀。

二、院內(nèi)感染的分類

1.外源性感染：稱為交叉感染，指患者被醫(yī)院內(nèi)存在的各種病原微生物侵襲而發(fā)生的感

染。主要包括人與人接觸的直接感染，以及通過物品、醫(yī)院環(huán)境與人接觸的間接感染。

2.內(nèi)源性感染：又稱為自身感染，是指患者被自身固有的病原微生物侵襲而發(fā)生的感染。

在正常情況下患者對此類病原微生物有免疫，但在自身免疫力下降時即可導致感染。例

如，晚期再生障礙性貧血、晚期白血病、晚期癌癥等患者發(fā)生的感染，均屬此類。

3.母嬰感染：指在分娩過程中胎兒經(jīng)過產(chǎn)道所發(fā)生的感染，如B群鏈球菌感染，為醫(yī)院

內(nèi)感染。經(jīng)胎盤、母嬰血液傳播的胎兒感染，如先天性梅毒、艾滋病和乙型肝炎等皆屬

院外感染。

第六章

一、質(zhì)控途徑

1.檢驗前質(zhì)量保證：檢驗前過程，又叫分析前階段，是按時間順序自醫(yī)生申請至分析檢

驗啟動的過程，包括檢驗申請、患者準備和識別、原始樣品采集、運送和實驗室內(nèi)傳遞。

2.檢驗中質(zhì)量保證：微生物學檢驗結(jié)果的準確性除依賴于標本的質(zhì)量、相關的臨床資料

外，還與人員、設備、試劑耗材及檢驗過程等因素有關。實驗室應制定相應標準化操作

規(guī)程，監(jiān)控這些因素，及時發(fā)現(xiàn)錯誤并采取糾正措施，以保證檢驗結(jié)果的質(zhì)量。

二、培養(yǎng)基質(zhì)量保證

實驗室使用的培養(yǎng)基都應具有：①良好的外觀，即表面平滑.水分適宜、無污染.顏

色和厚度適當；②明確的標識，包括生產(chǎn)日期(批號)、保質(zhì)期、配方、質(zhì)量控制和貯存

條件等信息；③每批號產(chǎn)品應進行無菌試驗和性能驗證，如生長試驗.生長抑制試驗和

生化反應等。

1.無菌試驗新配制的培養(yǎng)基要按批號抽取定數(shù)量的樣品作無菌試驗。對于滅菌后傾注的

固體培養(yǎng)基，抽樣后放培養(yǎng)箱培養(yǎng)24~48小時:滅菌后經(jīng)無菌操作分裝的液體培養(yǎng)基要

全部放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時;對于有些無需高壓滅菌、只需煮沸消毒的選擇性培養(yǎng)基

要取部分瓊脂，放入無菌肉湯管培養(yǎng)24小時:上述試驗證實無細菌生長時才算合格。若

有細菌生長，說明培養(yǎng)基制備過程中已受雜菌污染，除尋找原因外，不應再使用，同時

做好記錄。

2.細菌生長試驗所有的培養(yǎng)基在使用前除了做無菌試驗外還必須做細菌生長試驗以確

定培養(yǎng)基性能是否符合要求。用已知的標準菌株按照CLSI推薦的方法做質(zhì)控，質(zhì)控所

需的標準菌株分兩種:種是已知的可在某種培養(yǎng)基上生長并產(chǎn)生陽性反應的菌株:另一

種是用已知的不能在某種培養(yǎng)基上生長或產(chǎn)生明性生化反應的菌株。實驗室常用培券

基、生化反應培養(yǎng)基及試驗所用的質(zhì)控菌株和預期結(jié)果。

一、實驗室生物安全防護

是指在實驗室環(huán)境下處理和保存生物危險因子的過程中采用的一系列防護措施，包

括一級防護(隔離)和級防護(屏障)，其目的是確保實驗室工作人員不受實驗對象侵染

及周圍環(huán)境不受污染。一級防護即安全設備個體防護裝置和措施；二級防護即實驗室

的特殊設計和建設要求。

二、實驗室生物安全防護水平

根據(jù)所操作生物因子的危害程度和采取的防護措施以及實驗室設計建筑構(gòu)造、防護

設施設備以及操作程序，將實驗室生物安全防護水平(biosafetylevelBSL)分為四級。

一級防護水平最低，四級防護水平最高。分別以BSL-l.BSL-2、BSL-3和BSL-4表示實驗

室的相應生物安全防護水平。①級生物安全水平(BSL-1)和二級生物安全水平(BSL-2)實

驗室均屬基礎實驗室，分別處理危險度1級微生物和危險度2級微生物；②三級生物安

全水平(BSL-3)實驗室屬防護實驗室，為特殊的診斷、研究實驗室，處理危險度3級微生

物；③四級生物安全水平(BSL-4)實驗室屬最高防護實驗室，供危險病原體研究，處理危險

度4級微生物。隨著實驗室生物安全等級的升高，對實驗室的生物安全設計與設施、安

全設備和操作規(guī)程的要求更為嚴格。

三、感染性廢棄物的處理

感染性廢棄物指丟棄的感染性或潛在感染性物品。廢棄物處理首要原則是所有感染

性材料必須在實驗室內(nèi)通過高壓滅菌或消毒等方式清除污染后運出實驗室。其目的是對

參與丟棄者、公眾和環(huán)境不造成危害或潛在危害。所有不再需要的樣本、培養(yǎng)物和其他

生物性材料應置于專門設計的、專用的和有標記的用于處置危險廢棄物的容器內(nèi)，廢棄

物容器的充滿量不能超過其設計的容量。

有害氣體、氣溶膠、污水和廢液應經(jīng)適當?shù)臒o害化處理后排放，應符合國家相關的

要求。所有廢棄物容器的顏色和危害標志均應符合通用標準。廢棄物的清運及交接均應

嚴格的記錄，記錄應妥善保管。

一、葡萄球菌藥敏試驗藥物的選擇

[”「喇名稱/

阿奇加索或克拉霉素或紅霉素、克林毒素、茶哇西林?、頭飽西J.存存素、復方磺胺甲

嗯哇片

B制頭抱洛林〔達托毒素’、利奈咪胺、多西環(huán)靛、米諾庫索、四環(huán)素、萬占毒素.、利

C組氯霉索、環(huán)丙沙星或左氧■氟沙星或觸氟沙星、笑西沙星、慶大毒素I

U組洛美沙星、諾氟沙星、帙喃海因、磺胺異嘿哇、甲射節(jié)咤

沱：A細：l'f選藥物及常規(guī)試驗報告的藥物：B組:-MA組平行作藥敷試驗,但應選擇性報一的藥物:C.林代性或

外充件為物：U組(“泌尿道”)：為某些僅用于或酋選治疔泌氏道盛染的抗生素：h：頭抱洛林僅對金黃色地的原曲包括前

「，：”；林金此色他的球曲(MRSA)”僅用于MIC試驗,紙片擴散法不可恨

二、鏈球菌

1.草綠色鏈球菌偶爾引發(fā)亞急性細菌性心內(nèi)膜炎。是人體口腔、消化道和女性生殖

道的正常菌群，通常不致病。

2.0溶血性鏈球菌的鑒定

(1)桿菌肽敏感試驗：為A群鏈球菌的篩選試驗。A群鏈球菌對0.04U桿菌肽藥

敏紙片幾乎全部敏感，臨床分離的菌株中有5%~15%非A群鏈球菌(B、C、G群鏈球菌

等)也敏感，而其他群鏈球菌大多為耐藥。利用本試驗可將A群鏈球菌與其他性狀相近

的細菌鑒別開，如豬鏈球菌、海豚鏈球菌等PYR陽性的B溶血性細菌及A群小菌落B溶

血性鏈球菌(米勒鏈球菌)。

(2)V-P試驗：可鑒別A、CsG群B溶血的大、小兩種不同菌落。

(3)CAMP試驗：為無乳鏈球菌的初步鑒定試驗。無乳鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因

子，可促進金黃色葡萄球菌的溶血能力，兩菌交界處出現(xiàn)協(xié)同溶血作用為陽性。

三、奈瑟菌的檢測

1.檢出部位

(1)腦膜炎奈瑟菌：菌血癥期取血液，有出血點或淤斑者取淤斑滲出液，出現(xiàn)腦膜刺

激癥狀時取腦脊液，上呼吸道感染、帶菌者取鼻咽分泌物等。

(2)淋病奈瑟菌：用無菌拭子伸入陰道后穹隆或?qū)m頸內(nèi)1cm處，停留10?15秒，蘸

取陰道、宮頸分泌物。采集尿道分泌物時，應棄去前段膿性分泌物，留取后段作為標本。

直腸肛拭標本應棄去第一根污染拭子，用第二根拭子蘸取分泌物。結(jié)膜炎的新生患兒應

取眼結(jié)膜分泌物。

(3)卡他莫拉菌：中耳炎、鼻竇炎患者穿刺抽取標本，呼吸道感染者采集合格痰標本

或支氣管灌洗液。

2.標本的顯微鏡檢查

(1)腦膜炎奈瑟菌：腦脊液直接或離心后取沉淀物涂片，皮膚瘀點取滲出液涂片，革

蘭染色鏡檢。如在白細胞內(nèi)、外見革蘭陰性雙球菌，可報告"檢出革蘭陰性雙球菌，疑

似腦膜炎奈瑟菌”，有助于流行性腦脊髓膜炎的早期診斷。

(2)淋病奈瑟菌：膿性分泌物涂片，革蘭染色鏡檢。在男性尿道分泌物、新生兒眼結(jié)

膜分泌物標本中見中性粒細胞內(nèi)、外較多的革蘭陰性雙球菌時，可報告"檢出革蘭陰性

雙球菌，疑似淋病奈瑟菌”。女性陰道、直腸有許多正常菌群寄居，當女性宮頸或直腸

拭子標本涂片，見胞內(nèi)、胞外大量革蘭陰性雙球菌時，必須用培養(yǎng)結(jié)果加以證實。

(3)卡他莫拉菌：痰標本涂片，革蘭染色鏡檢，見多個中性粒細胞、柱狀上皮細胞及

大量直徑為0.5?1.5um的革蘭陰性雙球菌，應懷疑卡他莫拉菌感染。

3.分離培養(yǎng)

(1)腦膜炎奈瑟菌：血液或腦脊液標本先經(jīng)血清肉湯培養(yǎng)基增菌后，再接種巧克力色

瓊

脂平板或血瓊脂平板，5%CO2培養(yǎng)。18~24h觀察。

(2)淋病奈瑟菌：細菌培養(yǎng)仍是目前世界衛(wèi)生組織推薦的篩選淋病患者唯一可靠的方

法。標本應接種于預溫的巧克力色瓊脂平板，5%~7%CO2培養(yǎng)。為提高陽性率，常采

用含有萬古霉素、多黏菌素及制霉菌素等多種抗菌藥物的選擇性培養(yǎng)基(MTM、ML)O

(3)卡他莫拉菌：痰標本接種普通瓊脂平板或血瓊脂平板、巧克力色瓊脂平板，35℃

培養(yǎng)。

4.鑒定

(1)奈瑟菌為革蘭陰性雙球菌，腎形或咖啡狀，常位于中性粒細胞內(nèi)外。初次分離需

要5%~7%CO2,在巧克力色瓊脂平板上，腦膜炎奈瑟菌形成圓形凸起、透明的露珠狀

菌落；淋病奈瑟菌形成圓形凸起、灰白色菌落。氧化酶試驗和觸酶試驗均陽性。腦膜炎

奈瑟菌分解葡萄糖、麥芽糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，分型血清可確定血清型別；淋病奈瑟菌只分

解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，其他糖類陰性。淋病奈瑟菌目前常采用核酸雜交技術或核酸擴

增技術進行快速診斷和流行病學調(diào)查，也可做協(xié)同凝集試驗、直接免疫熒光試驗。

(2)卡他莫拉菌為革蘭陰性雙球菌，在血瓊脂平板上形成圓凸、光滑、灰白色的菌落。

繼續(xù)培養(yǎng)則菌落干燥、堅硬，可隨接種環(huán)推動而在培養(yǎng)基上移動。氧化酶試驗和觸酶試

驗陽性，不分解糖類，還原硝酸鹽，DNA酶陽性。三丁酸甘油酯水解試驗可鑒別卡他

莫拉菌和奈瑟菌，卡他莫拉菌含丁酸脂酶，能水解4-甲基傘形酮丁酸鹽形成4-甲基傘

形酮，在紫外線下呈現(xiàn)藍色熒光即為陽性；奈瑟菌無此酶，三丁酸甘油醋水解試驗陰性。

5.藥敏實驗的藥物選擇

一、生物學特性

為革蘭陰性桿狀細菌，菌體大小(0.3~1.0)umx(l~6)um,無牙胞，除志賀菌屬和

克雷伯菌屬外，多數(shù)腸桿菌科細菌有鞭毛，能運動，少數(shù)菌屬細菌有莢膜或包膜，有致

病性的菌株多數(shù)有菌毛。

培養(yǎng)特性為需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基，如血瓊脂平板(BAP)

和麥康凱瓊脂平板(MAC)上容易生長，大部分菌屬在35℃生長良好。

腸桿菌科細菌主要有三種抗原，分別為菌體(O)抗原、鞭毛(H)抗原和表面抗原(如

Vi抗原、K抗原)。。抗原存在于細胞壁脂多糖層，是細菌細胞壁的成分，具有種屬特

異性，耐熱，加熱100℃不被破壞。其化學成分是脂多糖，脂多糖分子是一個以核心多

糖為中心的三層結(jié)構(gòu)，其內(nèi)側(cè)是脂類A,為內(nèi)毒素的毒性成分；外側(cè)是由重復的低聚糖

組成的特異多糖，決定?？乖奶禺愋?。H抗原存在于鞭毛蛋白，是不耐熱的蛋白質(zhì)

抗原，加熱60℃,30分鐘即被破壞，鞭毛蛋白多肽鏈上的氨基酸序列和空間構(gòu)型決定

H抗原的特異性。表面抗原是包繞在O抗原外側(cè)的不耐熱的多糖抗原，由黏液或莢膜

多糖的結(jié)構(gòu)決定表面抗原的特異性，其在不同菌屬中有不同的名稱。?？乖虷抗原

是腸桿菌科血清學分群和分型的依據(jù)。表面抗原存在時可干擾O抗原與相應抗體之間

的反應，加熱100℃,30分鐘處理能消除其干擾。

腸桿菌科細菌不形成芽胞，所以對理化因素的抵抗力不強，不耐干燥，加熱60℃、

30分鐘即被殺死；對一般化學消毒劑如漂白粉、酚、甲醛和戊二醛等均敏感，但能耐

受低溫和膽鹽，并在一定程度上能抵抗如亞甲藍、伊紅等物質(zhì)的抑菌作用，此特性已

被用于制作腸道選擇性培養(yǎng)基。

二、志賀菌屬

1.采集、分離培養(yǎng)、鑒定

＞瞑檢驗標本為糞便、月「拭等，志賀菌在力大腸埃希菌及其他細菌繁殖大槃鬻:

■木中，往往數(shù)小時即死亡,所有標本應及時接種或采集黏液膿血便作床邊接種'如小莊

.種,可的甘油保存液或卜-布,運送培推基內(nèi)送精.健康體檢者可用肛拭取樣。

＜三）分海培養(yǎng)和鑒定

力我培養(yǎng)分曲坤東用可選用MAC和SS,亦可用對志‘a(chǎn)’菌分離效果較好的木糖-賴

如論-假鹽:（XLD）培界樁.

2.鑒定

⑴出Ot：取川如?菌落（MAC上無色不透明：SS上不透明或透明：EMB上無色或

不透明的吃坨色:XLD!」'匕色的菌落），經(jīng)生化反應、血消學試驗等進?步鑒定到屬和種。

志賀函的柒木t化反應特征為:TS1A產(chǎn)酸,枸梭酸鹽陰性，服前陰性,動力陰性,V-P試驗

陰性.

⑵最終鑒定：陽作全面生化反應和血清學試驗，各的群（種）問的鑒定依據(jù)為痢疾志

賀曲甘正初陰性.宋內(nèi)志賀菌ONPG和鳥氨酸脫瘦酶均陽性。偶爾出現(xiàn)生化鑒定為志賀菌

但與抗志虎的血消不凝集的現(xiàn)象，可制成菌懸液置100匕水浴加熱15?30分鐘并電：復凝集

試驗?此種菌株仃可能是（EIEC）,需注意進行鑒別，各菌群的生化鑒別見衣9-10,

表9-10志賀菌屬種間的生化反應鑒別特征

生化試驗群痢疾志賀甫

_AB群福氏志賀菌C群鮑氏志賀苗D群宋內(nèi)志賀函

號啤

4550250

D■甘露力

0959799

牛乳管件常

3011090

胃氣酸脫就前

00298

注I在中數(shù)字為H，現(xiàn)田”反應的仃分率

志賀隋儂9大腸埃疥他的鑒別：忐例的屬無動力，賴氣酸脫陵的陽性，發(fā)酹糖產(chǎn)酸.

般不產(chǎn)氣,分解黏多助，在筋垓松和枸楮垓鹽瓊脂1：產(chǎn)融,見&9-11.

志賀曲屬9傷塞沙門前鑒別：傷寒沙門謂住KIAI.的特性,點做的相似,鑒別特點是

傷底沙門菌破化氣和動力陽恨能9沙門由內(nèi)廣血清凝如Aj不%志賀的屬因「血清'成集"

志加函屬叮類志賀鄰單胞曲鑒別；川川動力和輒化前試驗加以鑒別，志訛菌;《均］陰

性，而類志賀鄰單胞菌為陽性?

三、沙門菌屬

1.標本的采集、分離培養(yǎng)

（二）標本采集

—病的類型、病情和病程的不同可分別采集不同的標本，如可采集血液、骨髓、尿

傷寒病原學檢測原則上于發(fā)病第1周內(nèi),在患者寒戰(zhàn)或高熱高峰前后,并盡

"八.—菌藥物之前及早采集血液標本.必要時可同時或短時間間隔從不同部位（如

，:必發(fā)病第2、3周取糞便做培養(yǎng)，第3周也可取尿液培養(yǎng),全病程均可作骨髓培養(yǎng)。

,「學診斷應在病程的不同時期分別采集2?3份標本。

（三）分離培養(yǎng)和鑒定

L分離培養(yǎng)常規(guī)的順道選擇鑒別培養(yǎng)基能仃效地分離沙門菌?，常用腸道選擇培養(yǎng)基

MAC,SS號此夕卜，在暴發(fā)流行或篩選帶菌者時,在糞便中沙門菌菌量較少的情況"

”/在初次分離時加用亞硒酸鹽或GN（Gramnegative）增菌肉湯。

2.鑒定

⑴生化鑒定:挑選疑為沙門菌的可疑菌落（SS上不透明或透明、無色或中央為黑色的菌

落；MAC上較小、無色透明；EMB上無色或不透明琥珀色；XLD上呈紅色或中央為黑

色的菌落）。將可疑菌落進一步利用生化反應、血清學試驗等鑒定到屬和種。初步反應

疑為沙門菌的菌株，須經(jīng)全面生化反應證實和血清學分型后才能發(fā)出報告。沙門菌的基

本生化反應特征有：乳糖陰性，TSIA為產(chǎn)堿/產(chǎn)酸或產(chǎn)堿/產(chǎn)酸產(chǎn)氣，H2s陽性，版酶陰

性，吧口朵陰性，動力陽性，V-P陰性，鳥氨酸脫竣酶陽性。凡臨床分離菌乳糖陽性、口引

除陽性或服酶陽性者均不考慮為沙門菌。

⑵血清學分型：用抗血清對所分離菌種的菌體按O抗原、Vi抗原、第一相和第二相H

抗原的順序進行凝集試驗。95%以上的沙門菌臨床分離株都屬于A至F群，故可先用

A-F多價O抗血清對沙門菌分離株進行分群。多價抗血清凝集之后再用分別代表每個

O血清群的單價因子血清定群。O分群后再用H因子血清檢查第一相和第二相H抗原,

綜合O、H及Vi因子血清的檢查結(jié)果。

四、腸桿菌科的藥敏試驗

表9*5常見腸桿前科細菌的固有耐，

,哌替1代頭抱頭霉素.......四陜，，

"々”波拉卡菌藪頭類:頭抱黑環(huán)喃望落

..抗便藥物

一\

2拉維酸巴坦"西抱幽琳'西J、頭抱映辛素妥黏菌素

林一林林頭抱嚏吩抱替坦類因新困旅

產(chǎn)氣腸桿菌RRRRRR

陰溝腸桿菌RRRRRR

弗勞地枸蟒酸桿角RRRRRR

肺炎克雷伯菌RR

摩根摩根菌RRRRRRR

普通變形桿菌RRRRRR

奇異變形桿菌對疥毒素類和頭胞菌素類不存在固有耐藥RR口

潘氏變形桿的RRRRRR

喬氏普羅威登斯曲RRRRRR

斯氏普羅威登斯前RRRRRR

黏質(zhì)沙甫胸RRRRR

RRR

小腸結(jié)腸炎耶爾森菌RRRR

五、變形桿菌屬

jz.j^/xz.T?rur

莪9-16變形桿的」8（履及杷iM

產(chǎn)制.

菌種IND

HSUREODC^㈣金D一阿拉一1111r

麥芽糖?訪伯糖的海麗

泮通變形桿的射

奇異變形桿陷

?豪氏變形桿菌

潘氏變形杵菌V

斯氏牌羅威登斯帝V

產(chǎn)整泮羅威登斯菌

亨氏普羅威登斯帝V

濟氏外羅威段斯曲

伶氏濟羅威登斯曲

摩根摩根曲摩根亞種

摩根摩根帝西佰尼亞種

注：+.90%的的株陽性：-：＜10%的端株陽性：V：11%89%的蔭株陽性：IND：嘟紙：ODC：嗎軟酸脫網(wǎng)MhURE：

W/W:a：帶有指示劑的培養(yǎng)基中含1%孰b：可能會有不同的發(fā)型：C：叫生物肝可能陽性：&-噂生物群可能陰性

第十章

一、霍亂弧菌的采集及運送

霍亂是烈性傳染病，凡在流行季節(jié)和地區(qū)有腹瀉癥狀的患者均應快速準確作出病原

學診斷。在發(fā)病早期，盡量在使用抗菌藥物之前采集標本?？扇』颊摺懊诐撍睒颖?，

亦可采取嘔吐物或尸體腸內(nèi)容物，在腹瀉的急性期也可采取肛拭子，標本應避免接觸消

毒液。采取的標本最好就地接種堿性蛋白月東水增菌，不能及時接種者（轉(zhuǎn)運時間超過1

小時）可用棉簽挑取標本或?qū)⒏厥米又苯硬迦肟?布（Cary-Blair）運送培養(yǎng)基中，而甘油鹽

水緩沖液不適合弧菌的運送（因甘油對弧菌有毒性）。送檢標本裝在密封、不易破碎的容

器中置室溫由專人輸送。

二、標本的直接檢查

1.涂片染色鏡檢：取標本直接涂片2張。干后用甲醇或乙醇固定，復紅染色。油鏡觀察

有無革蘭陰性直或微彎曲的桿菌。

2.動力和制動試驗：直接取“米淚水”樣便，制成懸滴（或壓滴）標本后，在暗視野或相

差顯微鏡下直接觀察有無呈特征性快速流星樣運動的細菌。同法重新制備另一標本涂

片，在懸液中加入1滴不含防腐劑的霍亂多價診斷血清（效價＞1：64）?？梢娮畛醭士焖?/p>

流星樣運動的細菌停止運動并發(fā)生凝集，則為制動試驗陽性?？沙醪酵贫ù嬖诨魜y弧菌。

3.快速診斷:通過直接熒光抗體染色和抗群或。139群抗原的單克隆抗體凝集試驗，

能夠快速診斷霍亂弧菌感染。

4.霍亂毒素的測定：糞便標本中霍亂毒素（CT）可采用ELISA法檢測，或采用商品化的膠

乳凝集試驗測定，有較高的靈敏度和特異性。

三、分離培養(yǎng)和鑒定

將標本直接接種于堿性蛋白陳水（pH8.4）,或?qū)⑦\送培養(yǎng)基的表層接種于堿性蛋古

稱水中，35℃5~8小時后，轉(zhuǎn)種硫代硫酸鹽一枸檬酸鹽一膽鹽一蔗糖（TCBS）瓊脂、4

號瓊脂或慶大霉素瓊脂平板，35℃18~24小時觀察菌落形態(tài)。在TCBS瓊脂上形成黃色

菌落（分解蔗糖產(chǎn)酸）,4號瓊脂或慶大霉素瓊脂平板上星灰黑色中心的菌落（還原培養(yǎng)基

中的硅離子為灰黑色的金屬瑞），均為可疑菌落。應使用O1群和0139群霍亂弧菌多價

和單價抗血清進行凝集。結(jié)合菌落特征和菌體形態(tài)，作出初步報告。

四、區(qū)別

V-P試驗-

多都薄素B敏感試驗+

八組噬赭體裂解+

V組噬曲體裂解

五、神奈川試驗陽性現(xiàn)象

從腹瀉患者體內(nèi)分離的副溶血弧菌菌株95%以上在我萋（wagatsuma）瓊脂（人血

瓊脂）土產(chǎn)生B溶血現(xiàn)象。在血瓊脂平板上不溶血或只產(chǎn)生a溶血。

第十一章

一、分離培養(yǎng)和鑒定

喻和鑒F-w和大腸彎曲菌的松必能否檢；田”的的大鍬足選擇性培

.\察一箸墨黑拭子等標本可直接接種于密曲循選擇鳴

,分離培方

養(yǎng)星的篩迭念:培養(yǎng)條件的f附液標本先接種「你氏肉湯培捽居，355

如：改良的Skirrow-s培養(yǎng)基、Cam?；BA所需代濃度為5%-10%；最佳氣體環(huán)

菌后轉(zhuǎn)種分離培卷基，微需乳環(huán)境培（瑞；腸彎溫嬴生長溫度為423?般培養(yǎng)72

境為含5%。,”然普涅常黑曲菌篇黑72小時到7天后觀察菌

小時后觀察菌落；胎兒彎曲菌最適生長溫度是37°'投”介

落；故臨床標本需要分別置于37*0和42C中培養(yǎng)'以防漏檢。

彎曲菌有特別的菌落特征，如菌落細小，可表現(xiàn)為粉紅灰色、灰u或四火a偵卦液

樣外觀，有些菌落沿接種線有拖尾樣外觀。依據(jù)使用的培養(yǎng)基不同，式他類型的菌落也經(jīng)

常觀察到。

2,鑒定彎曲菌屬的細菌均不分解糖類，不能在3.5%NaCl條件卜生長，不能在空氣

環(huán)境中培養(yǎng)，具體生理生化特征見表11」。鑒定要點如下：

（I）革蘭染色陰性；菌體彎曲或呈S形、海鷗展翅形;氧化酶和觸醯陽性;不同菌生長

溫度（37C、42C）試驗結(jié)果不同。

（2）在形態(tài)、培養(yǎng)等條件符合的基礎上，凡馬尿酸鹽水解試驗陽性、在42C條件下生

長、氧化施陽性且與鏡檢形態(tài)相符者，即可報告為空腸彎曲菌空腸亞種。

（3）醋酸"引噪水解試驗：空腸和大腸彎曲菌為陽性，胎兒彎曲菌為陰性。

（4）通?？漳c彎曲菌對蔡咤酸敏感、對頭飽嚷吩耐藥，而胎兒彎曲菌對蔡碇酸耐藥'對

頭抱嚷吩敏感。但近年出現(xiàn)了對蔡咤酸耐藥的空腸彎曲菌。

二、螺旋菌屬

幽門螺旋桿菌

幽門螺桿菌為人類胃部疾病的重要致病菌之，其感染在世界范圍內(nèi)流行，全球感染

率達50%,其中發(fā)展中國家感染率高達80%?90%以上，近年雙秒國人既感也定舁f喋

珈.達到60%以上。幽門螺桿菌感染率存在明顯的地區(qū)差異，與經(jīng)濟條件、堡度及就

［的瓦業(yè)有關發(fā)展為胃炎、1陰兩麗森胃鱉.

第_1994年世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(gòu)將其麗F類致癌原7—

三、標本的直接檢查

1.直接顯微鏡檢查①將活檢組織切碎并研磨均勻，涂片或懸滴，置相差或暗視野顯微鏡

下觀察，幽門螺桿菌呈典型的“投鏢樣”運動;②直接涂片染色鏡檢:將活檢黏膜組織在

玻片上涂抹后，經(jīng)革蘭染色或單染色后鏡檢，如發(fā)現(xiàn)典型形態(tài)的細菌即可診斷。③組織

切片染色鏡檢:組織塊固定、切片經(jīng)Warthin-Starry（W-S）銀染色、吉姆薩染色后鏡檢，

以W-S銀染效果最好;④免疫組化:可檢出胃黏膜組織切片中的完整菌體、破碎菌體或抗

原成分:⑤間接免疫熒光法（1舊。

2.快速胭酶試驗將研碎的活檢組織放入裝有尿素培養(yǎng)基的瓶內(nèi)，35℃培養(yǎng)2小時，幽門

螺桿菌產(chǎn)生的高活性胭酶可將尿素分解，使培養(yǎng)基由黃色變?yōu)榧t色。幽門螺桿菌的版酶

活性也可以通過3c或14c（數(shù)字在左上角）標記尿素呼吸試驗進行檢測。

3.核酸檢測采用PCR法檢測幽廣］螺桿菌核酸。

4.糞便標本抗原檢測采用酶聯(lián)免疫吸附試驗直接檢測糞便標本中的抗原。適用于不能

進行13c或14c（數(shù)字在左上角）標記尿素呼吸試驗或胃鏡檢查的患者。

第十二章

一、非發(fā)酵菌的概念

非發(fā)酵菌是一大群需氧或兼性厭氧、無芽抱、不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡

萄糖的格蘭

陰性桿菌或球桿菌。

二、非發(fā)酵菌的特點及鑒定

___________表12-1常見非發(fā)酵菌的初步分群鱉定\

''________________色東悔的葡格動力叼1晚試臉

0/-5_

淡員色兔黃綠色一O+

他克戒爾但曲闔黃色、紫色、棕色+o

三、假單胞菌

①臨床意義:

■曹假單胞最交種毒力因子，包括黏附菽內(nèi)膜策茂藐贏前覆

:綠儼蒜m票襲管類等'在細菌的侵入、擴散和感染中發(fā)零重要作用.臨床|-?

上著露黑鬻￡和創(chuàng)面感染'呼吸道感染、泌尿道感染及敗血癥等。重度感染可

；，」"警；*綬抵抗力卜降人群中，如燒傷，長期臥床者，呼吸機使用者，應用廣譜

，兒::"二、，腫瘤藥物及免疫抑制劑等藥物而產(chǎn)兒囊松紅維化患者,艾滋

BTTVEfTj

’內(nèi)和Z5患者等。對于燒傷患者的傷口感染,應特別注意防范膿毒癥的發(fā)生,以降低感染

后的死亡率。

除銅綠假單胞菌外，其他假單胞菌導致感染的情況不多見。但需要注意熒光假單胞菌

的⑶-流感染,特別是近期輸注過血液制品后出現(xiàn)的血流感染，因該菌能在4C生長，勺血液

制品的污染關系密切。

②分離培養(yǎng)及鑒定:

③分類:惡臭、熒光、斯氏、淺黃假單胞菌，銅綠假單胞菌，產(chǎn)堿假胞菌。

第十三章

嗜血桿菌

①培養(yǎng)條件:需氧或兼性厭氧，5%?10%二氧化碳可促進生長

（=）分離培養(yǎng)和鑒定

②衛(wèi)星現(xiàn)象:當流感嗜血桿菌與金黃色葡萄球菌其同培養(yǎng)于血瓊脂平板時，由于金黃色

葡萄球菌能合成V因子并釋放于培養(yǎng)基中，在金黃色葡萄球菌菌落周圍的流感嗜血桿菌

菌落較大，遠離者則較小，此現(xiàn)象稱為"衛(wèi)星現(xiàn)象’

③鑒別實驗

第十四章

1.異染顆粒概念:染色時，白喉棒狀桿菌菌體的一端或兩端有濃染的顆粒，菌體著色不均

勻，稱為異染顆粒。

2.白喉棒狀桿菌標本采集:用無菌長棉拭子，從疑為假膜的邊緣采集分泌物，未見假膜者

或帶菌者可采集鼻咽部或扁桃體黏膜上的分泌物。如做培養(yǎng)，應在使用抗菌藥物前采集

標本。如不能立即送檢，應將標本浸于無菌生理鹽水或15%甘油鹽水中保存。標本應采

集雙份。

3.串珠實驗概念:將待檢菌接種于含青霉素0.05~0.5U/ml的培養(yǎng)基上，35℃培養(yǎng)6小時

后，炭疽芽胞桿菌可發(fā)生形態(tài)變化，顯微鏡下可見大而均勻的圓球狀菌體，成串珠樣排

列，為串珠試驗陽性，類炭疽桿菌無此現(xiàn)象。

4.直接濕片鏡檢:取陰道分泌物加一滴或數(shù)滴生理鹽水混合涂片，在顯微鏡高倍鏡下觀

察，BV患者可見大量陰道上皮細胞，少量膿細胞及無數(shù)成簇的小桿菌群集或吸附于上

皮細胞表面，致使細胞邊緣晦暗，呈鋸齒形，即為線索細胞。

第十五章

j:兼性厭氧菌。

3.鑒定試驗根據(jù)菌體形態(tài)、柒色反應、第落性狀以及時某些抗生素的敏感性可作出

人菌的初步鑒定，最后鑒定必須依很生.化反應或檢測厭氧菌的終末代謝產(chǎn)物“

（1）形態(tài)與染色：厭氧菌的染色性常受到培養(yǎng)基種類和培養(yǎng)時間的影響，如梭菌風.人

府屬和消化鏈球菌屬的某些細菌,在革蘭染色時常由陽性染成陰性，不易判斷為避免!

誤，可在革蘭染色的同時用拉絲試驗協(xié)助判斷。

（2）菌落性狀：包括菌落的形狀、大小、色素